nghiên cứu ảnh hưởng của chế phẩm polyphenol điều chế từ hạt bơ persea american mill đến sự tăng trưởng và miễn dịch trên tôm thẻ chân trắng litopenaeus vannamei

Đe giải quyếtvấn đề này, đề tài nghiên cứu về việc sử dụng chế phẩm polyphenol từ hạt bơ để tăng cường hệ miễn dịch và kháng khuẩn trong nuôi tôm là một bước tiến quantrọng nhằm để đảm b

BỘ CÔNG THƯƠNG

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỔ HÒ CHÍ MINH

LÊ NGỌC QUỲNH TRÂM

Ngành: CÔNG NGHẸ THựC PHẨMMã ngành: 8540101

LUẬN VĂN THẠC sĩ

THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2023

Công trình được hoàn thành tạiTrường Đại học Công nghiệp TP Hồ Chí Minh.Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Phan Thị Anh Đào

PGS TS Nguyễn Thị MinhNguyệt

Luận văn thạc sĩ được bảo vệ tại Hội đồng chấm bảo vệ Luận văn thạc sĩ Trường Đại học Công nghiệp thành phố Hồ Chí Minh ngày 05 tháng 12 năm 2023

Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm:

SINHHỌC VÀTHỰC PHẨM

1 GS TS Trần Đình Thắng - Chủ tịch Hội đồng2 PGS TS Đặng Xuân Cường - Phản biện 1

3 TS Nguyễn Thị Hiền - Phản biện 24 TS Phạm Lê Tấn Quốc - ủy viên

CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNGVIỆN TRƯỞNG VIỆN CÔNG NGHỆ

BỘ CÔNG THƯƠNG CỘNG HÒA XẪHỘI CHỦ NGHĨA VIỆTNAMTRƯỜNG ĐẠIHỌCCÔNG NGHIỆP Độc lập- Tự doHạnh phúc

THÀNHPHỐ HÒ CHÍ MINH

Họ tên học viên: Lê NgọcQuỳnh TrâmNgày, tháng, năm sinh:

Ngành: Công nghệ Thựcphẩm

MSHV:Nơi sinh:

Mã ngành: 8540101

I TÊN ĐÈTÀI:

Nghiên cứu ảnh hưởng của chế phẩm polyphenol điều chế từ hạt bơ (Persea

American Mill.) đến sự tăng trưởng và miễn dịch trên tôm thẻ chân trắng

(Lipopenaeus vannamei').

NHIỆMVỤVÃ NỘI DƯNG:

Đánh giáchất lượng chế phẩm Polyphenol, xây dựng công thức vàsản xuấtthức ănvới chế phẩm Polyphenol Nuôi thử nghiệm tôm được cho ăn với sản phẩm Polyphenol Đánh giá sự tăng trưởng và miễn dịch với vi khuẩn cảm nhiễm Vibrio parahaemolyticus trên tôm nuôi thí nghiệm.

II NGÀYGIAONHIỆM VỤ: Ngày 20 tháng 10năm 2021

III.NGÀY HOÀNTHÀNH NHIỆM VỤ: Ngày 5 tháng 12năm 2023

IV NGƯỜI HƯỚNG DẪNKHOA HỌC: PGS TS. Phan Thị Anh Đào

PGS TS NguyễnThị MinhNguyệt

Tp HồChí Minh, ngày5 tháng12 năm2023

LỜI CẢM ƠN

Trong hành trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn tốt nghiệp với đề tài: Nghiên cứu ảnh hưởng của chế phẩm polyphenol điều chế từ hạt bơ (Persea American

Mill.) đến sự tăng trưởng và miễn dịch trên tôm thẻ chân trắng (Lipopenaeus

vannameiy' tôi xin dành những lời cảm ơn chân thành đến các thầy cô, đồng nghiệp vàngười thân đã ủng hộ và hướng dẫn tôi.

Trước hết, tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS TS Phan Thị Anh Đào và PGS TS Nguyễn Thị Minh Nguyệt - nhữngngười đã trực tiếp hướng dẫn và đồng hành cùng tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn Sự tận tâm và kiến thức sâu rộng cùng với long kiên nhẫn của hai cô giáo đã giúp tôi vượt qua những khó khăn đểhoàn thành luận văn.

Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn đến ThS Phạm Duy Hải, Ks Trần Văn Khanh cùng với các nhằn viên tại Viện Nghiên cứu và Nuôi trồng Thủy sản 2 đã luôn sát cánh và hỗ trợ tôi trong suốt quá trình thực hiện thí nghiệm Sự hỗ trợ và tư vấn từphía họ đã đóng góp quan trọng vào kết quả nghiên cứu của tôi.

Đồngthời, tôi xin trân trọng cảm ơn các Thầy, Cô thuộc Viện Công nghệ Sinh họcvà Thực phẩm trường Đại học Công Nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh trong suốtthời gian qua đã tận tình chỉ bảo, cung cấp kiến thức cần thiết trong suốt thời gian ngồi trên ghế giảng đường Đây sẽ là nền tảng kiến thức để giúp tôi hoàn thành được bài luận văn này.

Dù đã cố gắng hết mình, tôi nhận thức rằng luận văn vẫn có thể còn thiếu sót Tôimong nhận được ý kiến đóng góp và hướng dẫn thêm từ phía các thầy cô để tạo điều kiện choluận văn của tôi được hoàn thiện hơn.

Lời cuối cùng, tôi xin trân trọng cảm ơn.

TÓM TẲT LUẬN VÃN THẠC sĩ

Các bệnh về tôm do vi khuẩn gây ra, đặc biệt là do Vibrio parahaemolyticus gây ra tình trạng tôm chết, ảnh hưởng tiêu cực đến ngành nuôi tôm Kháng sinh được lựa chọn dung để đối phó vói bệnh do vi khuẩn Vibrioparahaemolyticus ngày càng nhiều và liều lượng tăng do hiện tượng kháng thuốc Tình trạng gia tăng khả năng kháng thuốc của vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus đang là một vấn đề nghiêmtrọng, làm cho việc sử dụng kháng sinh để đối phó đang trỏ nên khó khăn Đe giải quyếtvấn đề này, đề tài nghiên cứu về việc sử dụng chế phẩm polyphenol từ hạt bơ để tăng cường hệ miễn dịch và kháng khuẩn trong nuôi tôm là một bước tiến quantrọng nhằm để đảm bảoan toàn thực phẩm và bảo vệ môi trường.

Chế phẩm polyphenol sử dụng cho đề tài được thu nhận từ dự án Nghiên cứu Khoa học cấp Sở Khoa học Công nghệ, có mã số 67/2019/HĐ - QPTKHCN Các chỉ số của chế phẩm này được xác định có tổng hàm lượng polyphenol 28,9g/100g, hàmlượng béo 2,98g/100g, hàm lượng protein 0,33g/100g và hàm lượng tro tổng

l,72g/100g Hoạt tính DPPH-IC50 đạt 24,06 pg/mL Thí nghiệm sử dụng thức ăntuân theo yêu cầu thức ăn hỗn hợp cho tôm thẻ được quy định trong TCVN

Với thí nghiệm bổ sung chế phẩm bổ sung chế phẩm polyphenol ở nồng độ 500 750 - lOOOppm, kết quả của nghiên cứu chỉ ra rằng tỷ lệ sống của tôm thẻ trongnghiên cứu có hiệu quả tươngtự như sản phẩm thươngmại vàso với mẫu đối chưngcao hơn 9 - 10% Trongthí nghiệm nuôi tôm tiếp xúc với vi khuẩn gây bệnh Vibrio

-parahaemoỉyticus, việc bổ sung chế phẩm polyphenol ở nồng độ 750 và lOOOppmgiúp tăng tỷ lệ sống khoảng 20% ở liều lượng 4.68 X 106 CFU/ml Hơn nữa, khi phân tích cấu trúc cơthịt cho thấy kết quả không có sự khác biệt có ý nghĩa thốngkê (p > 0.05), cho thấy chế phẩm polyphenol bổ sung vào thức ăn không tác độngđến cấu trúc thịt tôm và cũng không gây ảnh hưởng đến cảm quan.

Vibrio parahaemolyticus is the reason for the mass mortality of shrimp, negatively affecting the shrimp farming industry Nowadays, Vibrio parahaemoỉyticusisbecoming increasingly resistant to serious antibiotics, therefore selecting antibiotics to treat this bacterial disease is difficult To reduce the use of antibiotics in shrimpfarming, the project studied a polyphenol product extracted from avocado seeds with antibacterial, anti-inflammatory, and antioxidant properties, added to feed to improve survival rate and strengthen the immune system along with growthpromotion for farmed shrimp.

Polyphenol products in the research project were collected from the Scientific Research project atthe Department ofScience and Technology, code 67/2019/HD - QPTKHCN The indices of this preparation are total polyphenol content of28.9g/100g, fat content of2.98g/100g, protein content of0.33g/100g, and total ashcontent of 1.72g/100g DPPH-IC50 activity reached 24.06 pg/mL The feed used in the experiment complies with the technical standards according to TCVN

10325:2014 on mixed feed for white-leg shrimp.

The study results showed that adding polyphenol preparations with concentrations of500 - 750 - lOOOppm improved the survival rate from 9 - 10% compared withthe control sample and had the same effect as the commercial product In the shrimpculture experiment, the addition of 750 and 1000 ppm polyphenol preparationsincreased the survival rate by about 20% when shrimp were infected with V

parahaemolyticus at a dose of 4.68 X 106 CFU/ml Besides, the results of theanalysis of muscle texture did not have a statistically significant difference (p > 0.05), showingthat the addition ofpolyphenol products did not affectthe texture ofshrimp meat, nor did it affect sense evaluation.

LỜI CAM ĐOAN

Tôi cam đoan rằng đây là kết quảnghiên cứu của tôi, nhận được sự giúp đỡ và hỗtrợ đáng quý từ PGS TS Phan Thị Anh Đào và PGS TS Nguyễn Thị Minh Nguyệt Tất cả các kết quả nghiên cứu và những kết luận trong luận văn này đều được thực hiện một cách trung thực và đáng tin cậy Tôi đã tuân thủ quy định vềtrích dẫn và ghi nguồn tài liệu tham khảo một cách chínhxác vàđầy đủ.

Lê Ngọc Quỳnh Trâm

MỤC LỤC

LỜI CẢM ƠN ii

TÓM TẮT LUẬN VĂNTHẠC sĩ iii

1.2 Mục tiêu nghiên cứu 2

1.3 Đối tượngvà phạm vi nghiên cứu 2

1.4 Ý nghĩakhoa học 2

1.5 Y nghĩathực tiễn (mục đíchnghiên cứu) 3

CHƯƠNG 1 NỘI DƯNG NGHIÊNcứu 4

1.1 Tổng quan vật liệu 4

1.1.1 Tổng quan về tôm thẻ chân trắng - Litopenaeus vannamei 4

1.1.2 Một số nghiên cứu sử dụngchế phẩm polyphenol tăng cường đáp ứng miễn dịch ởtôm 5

1.1.3 Tổng quan về Bơ 7

1.1.4 Tiêu chuẩn chấtlượng của bơ sửdụng cho nghiên cứu 15

CHƯƠNG 2 NỘI DUNGVÀ PHƯƠNG PHÁPNGHIÊN cứu 16

2.1 Sản xuấtthức ăn bổ sung chế phẩm polyphenol 16

2.1.1 Nguyên liệu - thiết bị 16

2.1.2 Thời gian vàđịa điểm 17

2.1.3 Bố trí thí nghiệm 17

2.1.4 Phương pháp nghiên cứu 22

2.2 Thử nghiệm vềtăngtrưởng và chấtlượng tôm nuôi ở điều kiện pilot - trong

2.4.1 Thời gian vàđịa điểm 36

2.4.2 Vật liệu nghiên cứu 36

2.4.3 Bố trí thí nghiệm 36

2.4.4 Phương pháp nghiên cứu 39

2.4.5 Phương pháp xử lý số liệu 41

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN cứu 43

3.1 Kết quả chất lượng chế phẩm Polyphenol và thức ăn (TO) 43

3.1.1 Kết quả chất lượng chế phẩm Polyphenol 43

3.1.2 Ket quả phân tích chất lượngthức ăn cơ bản (TO) 45

3.1.3 Kết quả cảm quan và độccấp tínhcủa chế phẩm Polyphenol 45

3.2 Ket quả nuôi thử nghiệm đánh giátăng trưởng trên tôm thẻ chân trắng 46

3.2.1 Kết quả chỉ tiêu môi trường nước nuôi 46

3.2.2 Kết quả tăngtrưởng, hệ số chuyển đổi thức ăn và tỷ lệ sống của tôm sau 60ngày nuôi thí nghiệm 47

3.2.3 Kết quả phân tích, đánh giáchất lượng tôm thí nghiệm saukhi thu hoạch 49

3.3 Kết quả thí nghiệm đáp ứng miễn dịch của tôm thẻ chân trắng 53

3.3.1 Kết quả đo đạc môi trườngnước nuôi 53

3.3.2 Kết quả thí nghiệm xác định giá trị LD50 53

3.3.3 Tỷ lệ chết tích lũy của tôm thẻ chân trắng sau khi cảm nhiễm bằng vi khuẩngây bệnh Vibrioparahaemolyticus 54

3.3.4 Kết quả đáp ứng chỉ tiêu miễn dịch 58

KẾT LUẬN 62

DANH MỤC HÌNH ẢNH

Hình 1.1 Cây bơ 9

Hình 1.2 Quả bơ 9

Hình 1.3 Các loại bơ 11

Hình 2.1 Sơ đồ quy trình sản xuấtthức ăn cho tôm thẻ chân trắng 18

Hình 2.2 Phản ứngcủa gốc tự dovới chấtchống oxy hoá 23

Hình 2.3 Thức ăn cơbản sử dụng cho thínghiệm 26

Hình 2.4 Chế phẩm polyphenol 28

Hình 2.5 Chế phẩm BM 28

Hình 2.6 Hệ thống cácbể nuôi composite 29

Hình 2.7 Các thức ăn của các nghiệm thức đánh giátăng trưởng 30

Hình 2.8 Mau tôm đánh giácảm quan 33

Hình 2.9 Nghiệm thức thức ăn đánh giákhảnăng miễn dịch 37

Hình 2.10 Hệ thống bể nuôi thí nghiệm đánh giámiễn dịch 37

Hình 2.11 Sinh khối vi khuẩn Vibrioparahaemoỉyticus 38

Hình 2.12 Hệ thống nuôi cảm nhiễm vi khuẩn gây bệnh 38

Hình 3.1 Hình ảnh tôm sau 60 ngày nuôi tăng trưởng 48

Hình 3.2 Tỷ lệ sống tích lũy theothời gian (ngày) của tôm nuôi ở các nghiệm thứcđược cảm nhiễm bởi vi khuẩn Vibrioparahaemoỉyticus 55

Hình 3.3 Tôm thẻ chân trắng nhiệm bệnh do Vibrioparahaemolyticus ăn thức ănkhông chứa chế phẩm 57

Hình 3.4 Tôm thẻ chân trắng nhiễm bệnh do Vibrioparahaemolyticus ăn thức ănchứa chế phẩm 57

Hình 3.5 Đồ thị biểu hiện THC của tôm thẻchân trắng theo thời gian 58

Hình 3.6 Đồ thị biếu hiện PO củatôm thẻ chân trắng theothời gian 59Hình 3.7 Đồ thị biểu hiện SOD củatôm thẻ chân trắng theothời gian 60

DANH MỤC BẢNG BIỂU

Bảng 1.1 Phân loại khoa học 4

Bảng 1.2 Phân loại khoa học 8

Bảng 1.3 Hàm lượng các nhóm polyphenol trong quả bơ 14

Bảng 2.1 Côngthức thức ăn cơbản (TO) 22

Bảng 2.2 Hàm lượng dưỡng chất tính theo công thức 22

Bảng 2.3 Tỷ lệ chế phẩm polyphenol trong thức ăn 27

Bảng 2.4 Mô tả các nghiệmthứcthức ăn thí nghiệm 29

Bảng 2.5 Mô tả các nghiệmthức thí nghiệm đánh giákhảnăng miễn dịch 36

Bảng 3.1 Kết quả chất lượng của chế phẩm 43

Bảng 3.2 Kết quả kiểm tra hoạt tính sinh học 44

Bảng 3.3 Hoạt tính kháng khuẩn Vibrioparahaematoỉycus 45

Bảng 3.4 Thành phần dưỡng chấtthức ăn cơbản 45

Bảng 3.5 Kết quả khảo sát độc tính cấp đường uống 46

Bảng 3.6 Thông số cơbản của môi trường nướcnuôi 47

Bảng 3.7 Tăng trưởng, hệ số thức ăn và tỷ lệ sống của tôm nuôi ở các nghiệm thức 48

Bảng 3.8 Kết quả phân tíchtôm sau thu hoạch 49

Bảng3.9 Kết quả phân tíchtôm chín 51

Bảng 3.10 Điểm số đánh giácảm quan tôm nấu chín (màu, mùi vị) và kết quả đo độchắc cơ thịt tôm của các nghiệm thức 52

Bảng 3.11 Thông số các chỉ tiêu môi trườngnước nuôi trong thời gian thí nghiệm 53

Bảng 3.12 Tỷ lệ sống của tôm ở các nghiệm thức của thí nghiệm 54Bảng 3.13 Tỷ lệ sống của tôm nuôi ở cácnghiệm thức tại ngày thứ 45 55Bảng 3.14 Tỷ lệ sống của tôm thẻ ở các nghiệm thức 56

IC50 Half maximal inhibitory concentration

IHHNV Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus

KI Potassium iodide

SPSS Statistical Package forthe Social Sciences

THC Total hemocyte count

ViệnNCNTTS2 Viện Nghiên cứu Nuôi Trồng Thủy sản 2

MỞ ĐẦU

1.1 Đặt vấn đề

Trong cơ cấu kinh tế của Việt Nam,ngành nuôi trồng thuỷ sản chiếm vị trí chủ chôtvà đang phát triển mạnh mẽ Theo dữ liệu từ Tổng cục Thuỷ sản năm 2021, khôngchỉ diện tích nuôi trồng tăng (khoảng 1900 ha, tăng 2,6%) mà sản lượng tôm thẻ chân trắng cũng tăng cao (đạt khoảng 553.000 tấn, tăng 14,3%) [1] Tuy nhiên,ngành nuôi trồng do dịch bệnh gặp không ít khó khăn, gây tổn hại đến kinh tế và cuộc sống của người nuôi trồng Trong số này, xác định được vi khuẩn Vibrio

parahaemoỉyticus là nguyên nhân gây ra các bệnh nguy hiểm cho ngành nuôi tômthẻ chân trắng như bệnh phân trắng, bệnh hoại tử gan tụy cấp tính [2] Đen hiệntại, việc sử dụng kháng sinh để điều trị vẫn là lựa chọn hàng đầu mặc dù dẫn đến hiện tượng kháng thuốc và ảnh hưởng đến môi trường Do đó, các vấn đề liên quan đến việctăng sức đề khángcho tôm rất đượcchú trọng Và sản xuấtthức ăn có chứa các hợp chất có hoạt tính sinh học là vấn đề đang được quan tằm để phát triển nghiên cứu thêm bởi các hiệu quảmà nó mang lại như ức chế vi sinh vật có hại, cảithiện sức đề kháng và giảm tỷ lệ chết cho tôm Tuy nhiên, việc áp dụng thực tếcácsản phẩm này vẫn còn gặp khánhiềuthách thức, chủ yếu là do giá thành cao.

Trong bối cảnh đó, nguồn phế liệu từ lĩnh vực công nghệ thực phẩm mang trongmình tiềm năng lớn và nguồn cung cấp cũng được dự đoán sẽ ngày càng dồi dào.Những nghiên cứu gần đây đã đưa ra những thông tin quan trọng về hạt bơ, chothấy chúng có chứa nhiều hoạt chất có khả năng kháng oxy hóa [3], khả năng ngănngừa ung thư [4], khảnăng kháng khuẩn [5]

Vì vậy, đề tài được thực hiện với mục đích "Nghiên cứu sự ảnh hưởng của chếphẩm polyphenol từ hạt bơ đến sự tăng trưởng và sức đề kháng của tôm thẻ chântrắng", nhằm cải thiện tỷ lệ sống, tăng cường quá trình tăngtrưởng và nâng cao chấtlượng của loài tôm này Kết quả từ nghiên cứu này có thể giúp tăng năng suất trong ngành nuôi trồng và tạo ralợi ích kinh tếcho cộng đồng người nuôi trồng.

1.2Mụctiêu nghiên cứu

Đánh giá chất lượng chế phẩm polyphenol từ hạt bơ được thu nhận từ đề tàiNghiên cứu Khoa học cấp Sở Khoa học Công nghệ, có mã số 67/2019/HĐ - QPTKHCN.Bao gồm đo lường hàm lượng tổng polyphenol, hàm lượng béo, hàm lượng protein,tổng hàm lượng tro và khảnăng kháng oxy hóaDPPH-IC50.

Khảo sát ảnh hưởng của thức ăn chứa chế phẩm polyphenol từ hạt bơ đối với tăng trưởng và chất lượng củatôm thẻ Đánh giá về hiệu quả trong sự thay đổi của quá trình tăngtrưởng, tỷ lệ chết của tôm sau khi tiêu thụ thức ăn bổ sung.

Nghiên cứu ảnh hưởng của thức ăn bổ sung chứa chế phẩm polyphenol từ hạt bơ đến khảnăng miễn dịch đối với vi khuẩn Vibrio parahaematoỉycus. Đánh giá sự đềkhángcủa tôm sau khi tiêu thụ thức ăn bổ sung trong bối cảnh cảm nhiễm.

1.3Đối tượng và phạm vi nghiên cứu

Chế phẩm polyphenol từ hạt bơ được thu nhận từ đề tài Nghiên cứu Khoa học cấp Sở Khoa học Công nghệ, có mã số 67/2019/HĐ - QPTKHCN Tôm được lựa chọnđể phục vụ chonghiên cứu là tôm thẻ PL- 15 Và thứcăn đã được kết hợp với chếphẩm polyphenol được chiết xuất từ hạt bơ.

Trong thành phố Hồ Chí Minh, địa điểm được lựa chọn để tiến hành nghiên cứugồm có: trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật Thành phố Hồ Chí Minh và Viện Nghiên cứu và Nuôi trồng Thủy sản II.

1.4 Y nghĩakhoa học

Cung cấp thêm tài liệu khoa học về hoạt tính sinh học của chế phẩm polyphenolđiều chế từ hạtbơ, và chứng minh khả năng của polyphenol được chiết xuất từ hạtbơ trong việc cải thiện hệ miễn dịch cho tôm thẻ, thúc đẩy quá trình tăng trưởng và nâng cao chất lượng tôm Điều này mang lại lợi ích cho ngành nuôi trồng thủy sản cũng như ngànhcông nghệ thực phẩm.

Í.5 Ý nghĩathực tiễn (mục đích nghiên cứu)

ứng dụng việc sản xuất thức ăn chứa hợp chất sinh học trong nuôi trồng thủy sản nhằm thúc đẩy tỷ lệ sống, thúc đẩy tăng trưởng và chất lượng của tôm thẻ Bằngcách này, có thể mang lại hiệu quả tăng năng suất trong ngành nuôi trồng và nâng cao lợi nhuận cho người nuôi.

CHƯƠNG 1 NỘI DƯNG NGHIÊN cứu

1.1 Tổng quanvật liệu

1.ĩ 1 Tongquan về tôm thẻ chân trắng - Lỉtopenaeus vannamei

Litopenaeus vannamei được biết đến với tên gọi là tôm thẻ chân trắng, thuộc lớpđộng vật giáp xác. Litopenaeus vannamei là loài phổ biến trong ngànhnuôi trồng domanglại lợi nhuận cao với thời gian nuôi ngắn và chịu đựng được sự biến đổi rộng của môi trường về độ mặn, từ 0,5-45%o [6] Bảng 1.1 mô tả phân loại khoa học của

Trong số các bệnh này, hội chứng đượcbiết đến với tên gọi là hội chứng chết sớm (EMS) với biểu hiện tôm bị hoại tử gan tụy, đã bùng phát tại Việt Nam vào khoảng

năm 2010 và tổn thất nghiêm trọng cho ngành nuôi tôm tại vùng đồng bằng sôngCửu Long [9] Các nhà nghiên cứu học tại Đại học Arizona (Hoa Kỳ) đã phát hiệnvi khuẩn Vibrio parahaemoỉyticustạo ra mộtđộc tố làm chức năng của gan tụy tômbị rối loạn và nhanh chóng phá hủy các mô tế bào của tôm Điều này làm tỷ lệ tửvongtăng lên đến 70%, dẫn đến tìnhtrạng tôm chết sớm trong vòng30 ngày [10].Theo số liệu của cục Thú y năm 2020, bệnh do vi khuẩn Vibrio parahaemoỉytìcus

đãxuất hiện tại 18 tỉnh và thành phố trên toàn quốc Diện tích ao nuôi bị ảnh hưởng chiếm 3,12% tổng diện tích ao Vói mục tiêu làm giảm ảnh hưởng của bệnh do vi khuẩn Vibrio, người nuôi tôm cần chọn giống tôm khỏe mạnh, sạch bệnh, và xử lý môi trường nước trước và sau mỗi mùavụ Tuy nhiên, kháng sinh vẫn là phưong ánphổ biến được lựa chọn khi bị phát hiện nhiễm Vibrioparahaemoỉyticus. Sử dụngkháng sinh không kiểm soát liều lượng có thể dẫn đến sự pháttriển của dòng khángkháng sinh, làm tăng nguy cơlây nhiễm bệnh và hiệu quả điều trị bị giảm xuống, cóthể ảnh hưởng đến chất lượng tôm, gây hại cho môi trường, đặc biệt là nước, conngười vàđộng vậtxung quanh.

Đối với cơ chế miễn dịch tự nhiên, miễn dịch tế bào và miễn dịch thể dịch là miễn dịch chủ yếu của tôm thẻ chân trắng Tuy tôm thẻ chân trắng cóthể tự bảo vệ cơthểkhỏi các mầm bệnh, nhưng hệ miễn dịch lại bị suy giảm dưới tác động của môi trường làm chotôm dễ bị bệnh và tử vong với tỷ lệ cao [11] Dựa vào cơ chế miễn dịch tự nhiên của tôm thẻ, gần đây có nhiều nghiên cứu về bổ sung chất polyphenoltự nhiên chứa polyphenols vào thức ăn để tăng hiệu quả miễn dịch trên tôm thẻ, hạn chế kháng sinh sử dụng trong suốt quá trình nuôi Các công trình nghiên cứu vềchiết xuất thực vật như một chất bổ sung cung cấp một giải pháp hữu hiệu trong ngành nuôi trồng thủy sản [12].

ỉ 1.2 Một sổ nghiên cứu sử dụng chephẩm polyphenol tăngcườngđápứng

miên dịchở tôm

Đối với hệ thống miễn dịch tự nhiên ở tôm thẻ, phenoloxidase (PO) đóng vai trò rất quan trọng PO được hoạt hóa bởi lipopolysaccharides (LPS) từ vách tế bào vi sinh vật hay p-l,3-glucans trong nấm [13] Khi mầm bệnh tác động đến tôm thì PO sẽ

được kích hoạt với mục đích làm ngăn cản quá trình lây lan của mầm bệnh Do đó, hoạt động của PO có thể dùng để đánh giáhệthống miễn dịch ởtôm.

Ở nước ngoài có một số đề tài liên quan đến co chế miễn dịch tự nhiên dựa trênhoạt tính của PO,gồm có:

Năm 2015, tại Đại học Kasetsart ở Thái Lan, một nghiên cứu đã tiến hành để khảo sát tác động của việc bổ sungchế phẳm polyphenol từ nho khô vào thức ăn của tômthẻ chân trắng Kết quảnghiên cứu cho thấy việc thêm polyphenol vào thức ăn đãcải thiện sự tăngtrưởng, tỷ lệ sống vàkhảnăng miễn dịch của tôm [14].

Nghiên cứu trong năm 2022 về "Ảnh hưởng của chiết xuất polyphenol tự nhiên từmía (Saccharum officinarum) đối với sự tăng trưởng, tỷ lệ sống và hiệu quảchuyển đổi thức ăn của tôm sú non (Penaeusmonodony' đã chỉ ra rằng việc chiết xuất polyphenol từ cây mía bổ sung vào khẩu phần ăn của tôm sú non có khả năng cải thiện tốcđộ tăngtrưởng và tỷ lệ chuyển đổi thức ăn [15].

Kết quả nghiên cứu mang tên "Chiết xuất giàu flavonoid từ bã mía Agave ỉechuguiỉỉa như một chất bổ sung thức ăn đểngăn ngừa bệnh vibrio ởtôm thẻ chântrắng," được tiến hành vào năm 2023, đã thể hiện cho thấy rằng chiết xuất giàu flavonoid từ bã míadgavể ỉechuguiỉỉa có thể đóng góp đáng kể vào việctăng cườngsức đề kháng của tôm thẻ chân trắng đối với vi khuẩn V parahaemolyticus. Nhữngkết quả nàycung cấptài liệu cho việc sử dụng chiết xuấtthực vật như một lựa chọn thaythế tiềm năng trong ngành nuôi trồng thủy sản để chống lại các bệnh tậttruyềnthống [16].

Trongnước cũng có các nghiên cứu điển hình về chiếtxuất của polyphenol như:Đetài của Hồng MộngHuyền và cộng sự thực hiện vào năm 2018 đã tiến hành cho tôm ăn chế phẩm chiết xuất từ rong mo (Sargassum microcystum) với nồng độ 1%.Kết quả cho thấy khi tiếp xúc với vi khuẩn V.harveyi đã cho tỳ lệ sống tôm cao nhất (80%) Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng các chỉ tiêu về miễn dịch và hoạt động

enzyme PO tăng đáng kể khi sử dụng chế phẩm từ rong mơ, chothấy khảnăng cảithiện sứcđề kháng vàkhảnăng chống chịu bệnh ở tôm [17].

Nghiên cứu về cao chiết thầu dầu năm 2019: Nghiên cứu này đã thêm 1% cao chiếttừ thầu dầu vào khẩu phần ăn của tôm thẻ chân trắng Kết quả sau 14 ngày tiến hành thử nghiệm cảm nhiễm, tỷ lệ sống trong nghiệm thức chứa cao chiết thầu dầu đượcbổ sungcao hơn mẫu đối chứng tới 33.33% [18].

Nghiên cứu năm 2021 về phòng ngừa bệnh chết sớm ở tôm do gan tụy bị hoại tử bởi vi khuẩn V parahaemoỉyticus đã sử dụng chiết xuất từ lá lựu bổ sung vào thứcăn Kếtquả cho thấy ở nghiệm thức với 2% chiết xuất lá lựu giúptôm cải thiện tăng trưởng và phát triển, đồng thời tăng chỉ số huyết học và hoạt động enzyme miễn dịch (PO và SOD) khi so sánh với mẫu đối chứng, ghi nhận tỷ lệ chết giảm khi bịnhiễm V parahaemolyticus [19].

Với mục đích sử dụng những chất chiết từ thực vật có hàm lượng polyphenol caotrong nghiên cứu để mang lại những hiệu quả tích cực trong thực tế, đặc biệt là ngành nuôi trồng Kết quả của những nghiên cứu này đã chỉ ra rằng dịch chiết từthực vật có khả năng cải hiện sức đề kháng, tăng cường chức năng của hệ thốngmiễn dịch.

ỉ 1.3 TongquanveBơ

Các nghiên cứu về việc dịch chiết từ thực vật đã mở ra tiềm năng hứa hẹn Trong ngữ cảnh này, đề tài đã sử dụng chế phẩm điều chế từ hạt bơ với mục tiêu cải thiện tỷ lệ sống, tăng cường chức năng hệ thống miễn dịch của tôm thẻ chân trắng đối vớivi khuẩn Vibrio Kết quả của công trình nghiên cứu này sẽ đóng góp cho sự phát triển tiềm năng của ngành nuôi trồng thủy sản, giúp phòng ngừa bệnh trên tôm và hiệu suất sản xuất đượcnâng cao.

ỉ ỉ.3 ỉ Phân loại khoa học

Bơ (Persea americana Mill.) có nguồn gốc từ Mexico và Trung Mỹ [20], phân bố rộng rãi ở các vùng có khí hậu nhiệt đới Bơ thuộc họ Lauraceae và được phân loại như bảng 1.2:

Trên toàn cầu, có khoảng 500 giống bơ khác nhau, chia thành 3 chủng chính là West Indian, Guatemalan và Mexican [21] Tuy nhiên, có khả năng lai tạo giữaba chủng này [22] Trong số các giống, Fuerte và giống lai Mexico-Guatemala đượctrồngphổ biến nhất Chúng có hìnhdáng quả lê, vỏ nhẵn và màu xanh bóng [23].

Bảng 1.2 Phân loại khoa học

1.1.3.2 Đặc điêm và phân bô sình thái của câybơ

Cây bơ (Persea americana) có những đặc điểm sinh thái và phân bố khá đa dạng,phản ánh sự thích nghi của loài cằy nàytrên trái đất với nhiều môi trường sống khácnhau Một số thông tin về đặc điểm và phân bố sinh thái của cây bơ được mô tảdưới đây.

Đặc điểm sinh thái:

Bơ (Persea americana) thuộc loại thân gỗ, cao khoảng từ 9 đến 20 mét, tùy thuộc vào chủng loại Tùy thuộc vào chủng loại mà lá của cây bơ có những hình dạngkhác nhau [23] Chiều dài lá trung bình từ 10 — 30 cm [24] Hoa bơ nhỏ, mọc thành chùm ở gần ngọn cành [25], có cả nhị và nhụy [26] Quả là thành phần cơbản nhất của một loại cây ăn quả Hình dáng của quả bơ có thể khác nhau tuỳ thuộc vào

giống, thông thường là hìnhbầu dục hoặc hơi tròn, trọng lượng khoảng ỐO — 350gvà chiều dài thường nằm trong khoảng 7 — 30cm [25],

Phân bốsinh thái:

Quả bơ có hàm lượng dinh dưỡng cao và với khả năng thích nghi tốt nên cây bơđược đưa vào trồng khắp nơi trên trái đất, phát triển các vùng nhiệt đới vàcận nhiệt đới Các nước sản xuất bơ lớn bao gồm Mỹ, Mexico, Indonesia, Brazil, Peru vànhiều quốc gia khác.

Ngày nay, có nhiều giống bơ đã được lai tạo từ các giống bơnguyên thủy, và mỗi giống đều có những đặc điểm riêng của chúng Phân biệt giữacác chủng bơ thường dựa vào khả năng thích ứng với điếu kiện môi trường và nguồn gốc khởi nguyêncủa chúng [24].

ĩ 1.3.3 Sản ỉượngbơ

Trái bơ có nguồn gốc từ miền nam Mexico, nhưng gần như hầu hết các vùng có khíhậu cận nhiệt và nhiệt đới đểu phù hợp để trồng cây này [25], Theo dữ liệu củaFAO, Trung Mỹ và Caribe cung cấpgần một nửatổng sản lượng bơthế giới [27],

Năm 2021, dự kiến sản lượng bơ trên toàn cầu khoảng 6.69 triệu tấn, tăng từ 6.62triệutấn năm 2020 Tuy Mexico vẫn là quốc gia đứng đầu với khoảng 2.2 triệu tấn, nhưng có sự gia tăng sản xuất ởmột số quốc gia khác như Hà Lan, Peni [28], vàcũng có sự nổi lên của Philippines, Trung Quốc,Án Độ [29].

Tại Việt Nam, cây bơ xuất hiện lần đầu tiên ởTâyNguyên vào những năm 1940 do Pháp đưavào và sau đó đãlanrộng trên khắp cảnước, tuynhiên tập trung nhiều tại một vài nơi như Đắk Lắk, Lâm Đồng, Bà Rịa - Vũng Tàu, Đồng Nai, Phú Thọ [30] Mặc dù dễ thích nghithổnhưỡng của từng khu vực [25], nhưng kỹ thuật chămsóckếthọp với các yếu tốmôi trường sẽ quyết định năng suất và chất lượng của bơ.Các giống bơSáp, bơ Mỡ, bơ Nước bơ Hass, bơ Booth, bơ 304 làphổ biến ở Việt Nam Theo dữ liệu của Sở Nông nghiệp vàPhát triểnNông thôn tỉnh Đắk Lắk năm 2021, sản lượng bơtại Việt Nam đạt khoảng 15 0 nghìn tấn, tăng 3 2.047 tấn so vóinăm trước, năng suất 157.96 tạ/ ha Khả năng cung cấp bơ có thể đạt 300kg/ngàycủahợp tácxãcho các chợ, cửa hàng, siêu thị trên cả nước.

Các giống bơ khác nhau về một số đặc điểm của quả, cụ thể như: vỏ quả bơSáphơisần, có màu xanh; quả bơ Booth tròn, vỏ dày, bóng, thịt màu vàng tươi; vỏ quả bơ Nước cũng có màu xanh nhưng không sần, thịt có màu hoi vàng và đặc biệt bơ Nước là loại có hàm lượng dầu thấp nhất; riêng quả Bơ Dài 034 không có hạt hoặchạt bé, quả dài từ 25 cm đến 35 cm Hình ảnh của4 giống bơ được thể hiện qua Hình 1.3:

Bơ BoothBơ Sáp

Hình 1.3 Các loại bơ

1.1.3.4 Hoạt tỉnh sinh học của bơ

Quả bơ được đánh giá là nguồn thực phẩm chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinhhọc gồm các chất thuộc nhóm phenolic, acetogenin, phytosterol, carotenoid vàalkaloid [31] Ngoài ra hạt và vỏ bơ cũng chứa nhiều flavonoid, caroten, saponin, tannin, procyanidin [32] Nhiều nghiên cứu đã tập trung vào phân tích hợp chấtcũng như tác dụng điều trị bệnh của hạt và vỏ bơ, bao gồm việc bảo vệ gan, kháng ung thư, và kháng khuẩn Công trình nghiên cứu của Kristanti đã cho thấy khảnăng của các hợpchất chiếtxuất từ hạt bơ trong việc khángviêm và giảm đau [33] Cũng như các nghiên cứu đã chỉ ra ảnh hưởng của polyphenol đối với việc ức chế các gốc oxy hóa [34] Quan trọng nhất, polyphenols còn được dùng làm chất bảoquản [35].

Theo công bố của Huỳnh Ngọc Trung Dung vào nám 2019, việc chiết xuất cao hạtbơ bằng ethanol96% đã thểhiện được khả năngchống oxyhóa vượt trội hơn 11 lần so với vitamin c (là chất đối chứng) Hơn nữa, cao hạt bơ này còn có thế ức chếmạnh mẽ đối với enzym a-glucosidase [36].

Một nghiên cứu khác năm 2019, cótiêu đề "Nghiên cứu về tác động kháng oxyhóavà ức chế enzym Acetylcholinesterase cũng như khả năng quét gốc tự do DPPHcủa

hạt bơ", đã chứng minh rằng hạt bơ có khảnăng kháng oxy hóa mạnh (IC50 là 68,7 ± 0,35 pg/ml), ức chế mạnh enzym Acetylcholinesterase (IC50 là 47,43 ± 0,5 pg/ml) Kết quả này thể hiện tiềm năng của hạt bơ về ngăn ngừa và hỗ trợ điều trịbệnh Alzheimer [37].

Năm 2017, Dennis cùng với cộng sự đã phát hiện ra cao chiết từ hạt bơ bằng dungmôi ethanol có khả năng tiêu diệt vi khuẩn PorphyromonasGingivahs [38] Đây là

tính năng quan trọng và có ảnh hưởng lớn cần nghiên cứu và pháttriển thêm.

Bên cạnh chiết xuấttừ thịt bơ, vỏ và hạt bơ cũng được xác định chứa các hoạt chấtcó khả năng chống oxy hóa mạnh, kháng oxy hóa khử sắt, ức chế enzymetyrosinase Một nghiên cứu năm 2021 về bảo quản lạnh tôm thẻ chân trắng đã sửdụng chiếtxuấttừ phụ phẩm của bơ đểức chế hắctố Kếtquả cho thấy khảnăng ứcchế hắc tố trên tôm có liên quan đến hàm lượng chấttế bàotổng (TPC) và khả năng oxy hóa khử Sự ức chế cũng phụ thuộc vào liều lượng, với mức ức chế từ 73,4 ± 1,0 đến 99,0 ± 0,5% ởnồng độ 100 pg/ml, Ngoài ra, khảnăng khử sắt cũng tăng khi nồng độ tăng, và ức chế enzyme tyrosinase cũng liên quan đến hàm lượng và hoạt tính PO Đây là cơ sở cho việc sử dụng hạt bơ trong việc bảo quản tôm thẻ chằntrắng [39].

Đe tài “Khảo sát các phương pháo chiết tách polyphenol từ hạt bơ và thử nghiệmhoạt tính chống oxy hóa và độc cấptínhcủa chúng” năm 2021 cho thấytrong hạtbơchứa tổng hàm lượng polyphenol cao (khoảng từ 68.95 đến 189.67 mgGAE/g DW,tùy thuộc phương pháp chiết), hoạt tính chống oxy mạnh (IC50 từ 19.24 - 67.48 pg/ ml) và thử nghiệm độc cấp tính với liều lượng cao nhất không gây chết cho chuộtthử nghiệm (Dmax = 21.05g/ kg thể trọng) Điều này có thể chứng minh chiết xuất từ hạt bơ có hoạt tính chống oxy hóa cao, an toàn có thể ứng dụng rộng rãi trongcông nghệthực phẩm, đặc biệt là thực phẩm chức năng [40].

ỉ ỉ 3.5 Thànhphần hóa học của hạt bơ

Trong quảbơ, thành phần hóa được chia thành các nhóm sau: các alkanol (hay còngọi là aliphatic acetogenins) (1 - 17), terpenoid glycoside (18, 19), các dẫn xuất

chứa vòng Furan (20 - 30), flavonoid (31 - 41), và một coumarin (42) [41] Ví dụ: l,2,4-trihydroxyheptadec-16-ene (1) và các hợp chất liên quan 2-8, đượctinh chếtừ hạt bơ có tính kháng nhẹ với epimastigotes và trypomastigotes [23] Ngoài ra, persenones A (14) và B (17), cùng với persin (15) được phát hiện có tác dụng ứcchế tạo superoxide (O2-) vànitric oxide (NO) trong nuôi cấy tế bào, do đó nó còncó tác dụng kháng viêm [23] Bơ còn chứa nhiều acid béo như acid linoleic, oleic, palmitic, stearic, linolenic, capric vàmyristic [42].

Theo mộtloạt nghiên cứu, trong hạtbơ cũng có chứa các các chất hoạt tính sinh họcgồm phenolic, tannin, catechin, procyanidin, flavonol, hydroxybenzoic và hydroxycinnamic acid [43] Jorge cùng cộng sự đã công bố 83 hợp chất hữu cơ cónguồn gốc từ hạt và vỏ lụa hạt bơ Trong số 83 hợp chất hữu cơ này, hợp chấtphenolic chiếm tới 54,2 % (khoảng 45 hợp chất) Những hợp chat polyphenol quantrọng trong hạt và vỏ lụa hạt bơ chủ yếu thuộc các nhóm flavonoid, nhóm catechinvàtannin [44].

Nghiên cứu “Chiết xuất họXPersea americana Mill.: Tìm hiểu những hiểu biết sâusắc về các hoạt động chống oxy hóa và antityrosinase và ảnh hưởng đến việc bảoquản chất lượng của tôm thẻ chân trắng (Litopenausvannamei) trong quá trình bảoquản lạnh” thông qua phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ đãxác định được một loạt các hợp chất hữu cơ có trong hạt bơ, cụ thể gồm: 4-hydroxy-N-metyl- isopropyltryptamin, N,N-Dipropyltryptamine, menatetreno, Moxypraquin, acid 2- hydroxybenzoi, N-Metyl-N-isopropyltryptamine (MiPT), N-etyl-N- isopropyltryptamin (EiPT), N, N-Diisopropyltryptamine (DiPT), Acid 5-0-caffeoylquinic, Acid 4-Hydroxy-3,5-dimethoxybenzoi, Catechin, Acid 3,4-Dihydroxybenzoi, Quercetin-3-O-arabinosyl-glucoside, Aciddihydrocaffeic, acid 3- feruloylquini, Sakuranetin, (Epi)gallocatechi, Đồng phân Procyanidin Trimer A7, salicylamide, Ritrosulfa, Ochratoxin alpha (OT a), Ethylisopropylt-ryptamin, Febuprol [45].

ỉ ỉ 3.6 Nghiên cứuvề polyphenoltrong bơ

Polyphenol nổi bật với khả năng chống oxy hóa có nguồn gốc từ thực vật [46].Polyphenol trở thành các chất bảo vệ tế bào quan trọng chống lại gốc tự do Polyphenol được phân chia dựa trên số vòng phenol, bao gồm các loại sau đây:phenol đon giản và dẫn xuất(C6); acid phenolic và các hợp chất liên quan (C6-C1); acetophenon và acid phenylacetic (C6-C2); acid cinnamic và dan xuấtnhư cinnamyl akdehydes, cinnamyl alcohols (C6-C3); chaicones, aurones, dihydrochalcones(C15); biflavonyls (C30); benzophenones, xanthones, stilbenes (C6-C2-C6); chai con và dihydrochalcon (C6-C3-C6); flavonoid và anthocyanin (Cl 5); quinon(C6, CIO, C14); betacyanin (C18); lignan và tannin [47].

Ở thực vật, vỏ và hạt lànơi phát hiện polyphenol nhiều nhất Trong nghiên cứu củaAna F.Vinha [48], hàm lượng polyphenol của hạt bơ cao hơn so với vỏ và thịt bơ,được thể hiện qua bảng 1.3:

Hạt bơ được xác định có hàm lượng polyphenol cao nhất, cho thấy tính chất chống oxy hóa mạnh mẽ nhất trong bộ phận này vỏ bơ cũng chứa một lượng đáng kểpolyphenol, tuynhiên, hàm lượng này thấp hơn so với hạt bơ Ngoài ra, vỏ bơ cũngcó chứa các chất bảo vệ sinh học, nhưngcó thể ít mạnh hơn so với hạt Trong khi đó, thịt bơ chứa ít polyphenol hơn cả hạt và vỏ, và khả năng chống oxy hóa củaphần nàycũng không mạnh như hạt và vỏ.

Bảng 1.3 Hàm lượng các nhóm polyphenol trong quả bơ

Bộ phận

Hàmlượng (mg GAE/100g DW)

Tổng polyphenol

Tổng

Vỏ679,0 ± 117,044,3 ±3,12,585 ±0,1174,1 ±2,72,13 ± 1,03

Thịt410,2 ±69,021,9 ± 1,00,815 ± 0,2011,2 ± 0,75,36 ± 1,77

Hạt704,0 ± 130,047,9 ± 2,70,966 + 0,1642,6+ 1,14,82 ± 1,42

Đe tài được thực hiện bởi Y-Y Soong (2004) cũng đã phát hiện hàm lượng polyphenol có trong hạt bo khoảng 88,2 ± 0,02 (mg GAE/ 100g DW) mà phần thịtcủa quả bơ chỉ chiếm 1,3 ± 0,0 (mgGAE/ 100g DW) [49].

Tóm lại, hàm lượng polyphenol khác nhau trong thịt bơ, hạtbơ và vỏ bơ thể hiện sựphân bố khác biệt về các chấtbảo vệsinh học trong từng phần củaquả bơ.

Ở Việt Nam, hạt bơ trước đây thường bị coi là phế phẩm của ngành công nghiệp thực phẩm Với những nghiên cứu gần đây đã chỉ những chất hoạt tính sinh học chứatrong hạtbơ có thể được sử dụng vào ngành công nghiệp thực phẩm, thức ănchăn nuôi và mỹ phẩm [50] Tận hạt bơ không chỉ mang lại lợi ích về kinh tế cho các cơ sở sản xuất và chế biến bơ, mà còn hứa hẹn một nguồn nguyên liệu tiềm năng, dồi dàochocác ngànhcông nghiệp liên quan.

ĩ.1.4 Tiêuchuẩn chất lượngcủa bơ sử dụng cho nghiên cứu

Thông qua việc phân tích nguồn cung cấp nguyên liệu hạtbơ trên địa bàn các tỉnhĐăk Lăk và Lâm Đồng, bằng việc so sánh thành phần dinh dưỡng, TPC, hoạt tínhức chế DPPH, xác định sử dụng hạt bơ Đắk Lắk thu mua tại HTX Nông nghiệp Bazan choviệc xây dưng tiêu chuẩn nguyên liệu.

Tiêu chuẩn bột hạt bơ được đáp ứng cho tiêu chuẩn để điều chế phẩm gồm có:độ ẩm: < 10 (%)

- TPC : >10.000 (mgGAE/ 100g DW)- DPPH: < 10 (IC50: Ịig/mL}

CHƯƠNG 2 NỘI DƯNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu

2.1 Sản xuấtthức ăn bổ sung chếphẩm polyphenol

2.1.1 Nguyên liệu - thiết bị

2.ỉ ỉ ỉ Nguyênỉiệu

Chế phẩm Polyphenol thực hiện chonghiên cứu này được thu nhận từ đề tàiNghiên cứu Khoa học cấp Sở Khoa học Công nghệ, mã số 67/2019/HĐ - QPTKHCN Chế phẩm Polyphenol đã được xác định có hàm lượng tổng polyphenol là 2,89mg GAE/

100g DW [45].

Thức ăn co bản (TO) gồm có các nguyên liệu: bột cá, bộtgan mực, bột khô dầu đậunành, bột mì, bột huyết, wheat gluten, bã men bia, dầu cá, soy lecithin, vitaminpremix, rovimix stay - c 35, DL - Methionine, L - Lysine, Mineral premix IAFFD,MCP vàchat chong moc.

Các hóa chat sử dụng cho thí nghiệm được mua ở Xilong Chemical, Trung Quốcgồm: Sodium carbonate (NaoSOQ, Potassium iodide (KI), Iodine (I2), Acid Sulfuric (H2SO4), Hydrogen chloride (HC1), Sodium chloride (NaCl), Sodium carbonate(Na2CO3) và một so hóa chat khác: 2,2-diphenyl-1-picryhydraxyl (DPPH) và Folin- Ciocalteu (FC) mua của Sigma-Aldrich (USA); Acid gallic thuộc hãng Acros (USA); Ethanol 99,5 mua ở Chemsol (Việt Nam).

2.Ỉ 1.2 Dụng cụ và thiếtbị

Các thiết bị được sử dụng để phục vụ cho đề tài gồm có:

- Dụng cụ: Cuvette thủy tinh (Chrom Tech, USA), Micropipette (Winlab, Đức),cân phân tích 4 số (Precisa, Thụy Sỹ).

- Thiếtbị: máy đo quang UV-Vis (Hitachi, Nhật Bản), máy lytâm (Hettich, Đức),tủ lạnh (Hitachi, Nhật Bản).

Ngoài ra còn có thiết bị sấy và nghiền.

2.1.2Thỏigian vàđịa điểm

Đại học Sư phạm Kỹ thuật Thành phố Hồ Chí Minh và Viện Nghiên cứu và Nuôitrồng Thủy sản II tại Thành phố HồChí Minh là hai địa điểm được lựa chọn để thựchiện đề tài.

Việctiến hành thí nghiệm tại những địa điểm này cho phép kết hợp sự chuyên môntrong kỹ thuật phân tích và kỹ thuật nuôi trồng thủy sản để thực hiện các thửnghiệm liên quan đến chế phẩm polyphenol.

2.1.3BỔ trí thí nghiêm

2.1.3.ỉ Kiểm tra chấtlượngcủachếphẩm polyphenol

Chế phẩm polyphenol được thu từ thí nghiệm điều chế chế phẩm polyphenol của đềtài “Nghiên cứu điều chế sản phẩm polyphenol từ hạt bo (Persea americana Mill.) nhằm nâng caohiệu quả nuôi tôm thẻ chân trắng (Litopenaeus vannameiy mang mãsố 67/2019/HĐ - QPTKHCN.

Sau khi thu nhận được chế phẩm, chỉ tiêu chất lượng của chế phẩm polyphenolđược đánh giá quacác chỉ tiêu về thành phần dinh dưỡng, độ ẩm, TPC, DPPH, hoạt tính khángkhuẩn Vibrio parahaematoỉycus, các chỉ tiêu về kim loại nặng và vi sinh, xác định độc tính cấp, đặc tính cảm quan (màu, mùi, vị) trước khi bổ sung vào thức ăn phục vụ thí nghiệm.

2.1.3.2 Sản xuất thứcăn có chứa chế phẩm polyphenoltừ hạtbơ

Công thức thức ăn dựa trên nguyên tắc thỏa mãn các chỉ tiêu về dinh dưỡng phùhợp vói từng giai đoạn trong quá trình quá trình nuôi tôm thẻ chân trắng và có chi phí phù hợp Những yêu cầu về thành phần dinh dưỡng hay các yếu tố không phảidinh dưỡng như các chất xơ, vitamin , tỷ lệ P/DE hoặc DE/P, cân bang acid aminvà acid béo thiết yếu được tínhtoán trên vào hệthống BESTMIX phiên bản 3.33.Tiêu chuẩn để đánh giá mức chất lượng của thức ăn nhằm đảm bảo sự phát triển vàsức đề kháng của tôm trong quá trình nuôi, thí nghiệm tuân theo các tiêu chuẩn về

thức ăn hôn họp sử dụng cho tôm thẻ chân trắng, gồm cố: QCVN 2:2019/BNNPTNTvàTCVN 103 25:2014.

02-31-2 ỉ 3.3Quỵ trìnhsản xuấtthức ăn

Thức ăn sử dụng cho thí nghiệm được sản xuất gồm các công đoạn chính được môtảbằng hình 2.1 sau:

Hình 2.1 Sơđồ quy trình sản xuất thứcăn cho tôm thẻ chân trắngThuyết minh quy trình:

• Nghiền thô

Nguyên liệu nhưbột cá, bã nành, bột đầu vỏ tôm, bột gan mực, bột xương thịt, cám gạo, v.v sau khi tách tạp chất kim loại và sỏi đá, được nghiền riêng lẻ bằng máynghiền búa Kích thước lớn của nguyên liệu giảmxuống dưới 3 mm.

• Cân định lượng

Nguyên liệu sau khi nghiền sơ bộ được cân định lượng theo công thức yêu cầu Cân tự động được sử dụng cho các nguyên liệu chính Mỗi mẻ cân định lượng từ 400 kg- 500 kg.

• Trộn sơ bộ

Các nguyên liệu sau khi cân định lượng được trộn sơ bộ để làm đều và hiệu quả.Thời gian trộn khoảng 4-6 phút Các nguyên liệu dạng bột mịn như bộtmì khôngcần qua máytrộn sơ bộ và nghiền.

• Nghiền siêu mịn

Nguyên liệu qua nghiền siêu mịn để làm mịn hạt vật liệu xuống kích thước dưới 0,25 mm Công đoạn này tạo điều kiện cho việc ép viên dễ dàng, đồng đều Quá trình nghiền chiếm từ 55 - 65% tổngnăng lượngsản xuất.

• Lăn ép tạo viên

Công đoạn này là quá trình định hình viên thức ăn Hỗn hợp bột nóng ẩm bị ép qua khuôn ép bằng áp lực con lăn Thức ăn tạo thành dạng sợi và sau đó được cắt thành viên nhờ dao cố định tại vòng ngoài của khuôn Độ dài viên thức ăn thích hợp là khoảng 1.2- 2.5 lần đườngkính viên.

Để quá trình ép tạo viên làm việc ổn định và viên thức ăn nuôi tôm đạt chất lượng,các thông sốcông nghệ sau cần được kiểm soát một cách ổn định:

Độmịn của bột: Đảm bảo bột đủ mịn đểtránh tắc lỗ khuôn.

Độ ẩm của bột: Độẩm ảnh hưởng đến năng suất và kết cấu của viên thức ăn.

Nhiệt độ của khối bột: Nhiệt độ thấp hoặc cao đều ảnh hưởng đến kết cấu và chấtlượngthức ăn.

Khe hở và áp lực nén giữa con lăn và khuôn ép: Quyết định đến năng suất và kết cấu viên thức ăn

• ủ nhiệt

Viên thức ăn sau khi định hình được ủ nhiệt bằng hoi nước 15-20 phút, ở 85 90°C Để đảm bảo độ bền trong nước, cần có thời gian ủnhiệt cho các chất kết dínhpháthuy tác dụng.

-• Sấykhô và làmnguội

Sau ủ nhiệt, thức ăn viên có độ ẩm 17 - 18% cần được sấy khô xuống 11% để tăng bảo quản và kết dính khi vận chuyển, sấy ởnhiệt độ thích hợp(80 - 90°C)trong 25- 30 phút, sau đó làm nguội đến nhiệt độ thường.

• Cắt mảnh

Thức ăn nhỏ hon 1.4 - 1.5 mm cần phải được cắt thành mảnh nhỏ phù hợp vói tôm.Công đoạn cắt tạo mảnh đồng đều, đúng kích thước, ít tạo bột và có tỷ lệ thu hồicao.

• Sàng phân loại

Loại bỏ các phần thức ăn không đạt yêu cầu về hình dáng, tránh ô nhiễm môi trường khi cho ăn.

• Đónggói và bảo quản

Thức ăn viên nuôi tôm đạt yêu cầu được đóng trong các bao pp mặt trong có trángPE và 1 bao lótbằng túi nhựa hoặc giấy sáp nhằm đảm bảo chất lượng Khối lượng thức ăn cho mỗi bao thông thường là 20 kg Thức ăn loại nhỏ thường được đóngthành các gói nhỏ cỡ 1 - 2 kg trước khi cho vào bao lớn20 kg Phíangoài bao phảighi rõ loại thức ăn với thành phần dinh dưỡng rõ ràng, cách sử dụng, ngày tháng xuất xưởng, hạn sử dụng

Các bao thức ăn sau khi đóng gói xong được bảo quản ở kho Kho phải sạch sẽ,không có chuột bọ và côn trùng pháhoại.

2 ỉ 3.4 Sản xuất thức ăn

Thức ăn cơ bản (TO) phục vụ cho đề tại được sản xuất tại Viện Nghiên cứu Nuôitrồng Thủy sản II Thành phần chính bao gồm protein, lipid, carbohydrate, khoáng,vitamin vàcác phụ gia Chi tiết về các nguyên liệu và hàm lượng dưỡng chất được mô tả trong bảng2.1 và bảng 2.2:

Các loại nguyên liệu đạt các tiêu chuẩn về chỉ tiêu chất lượng, đảm bảo an toàn vệsinh thực phẩm được nêu ra theo các tiêu chuẩn ngành như sau: Bột cá (TCVN

1644:2001); Thức ăn chăn nuôi - cảm quan (TCVN 1532-1993); Khô đậu nành (10TCN 865:2006); Dicanxi phosphat (TCVN 9471:2012); Bột máu (TCVN9472:2012); Bột xương và bột thịt xương (TCVN 9473:2012); Premix vitamin —khoángvi lượng (TCVN 3142-1993, TCVN 3143-1993).

Bảng 2.1 Côngthứcthức ăn cơbản (TO)

STTThành phầnnguyên liệuTỷ lệ phối trộn(%)

-2 ỉ.4Phươngphápnghiêncứu

2.ỉ 4 ỉ Xácđịnh tônghàm lượng Polyphenol

Nguyên tắc: Hàm lượng Polyphenol tổng (TPC) được xác định bằng phương phápFolin-Ciocalteu [51] Các hợp chat polyphenol trong mẫu phản ứng với thuốc thử

Folin-Ciocalteu trong môi trường kiềm, tạo thành các acid heteroply màu xanh datrời, có đỉnh hấp thu ở bước sóng 770nm.

Quy trình thực hiện như sau: Mau cần phân tích được hòa tanvào thuốc thử Folin- Ciocalteu được pha loãng, sau đó thêm sodium carbonate và ủtrong tối ở nhiệt độphòng trong 30 phút Sau đó, đo độ hấp thu quang bằng máy đo quang phổ uv - VIS Thí nghiệm lập lại 3 lần Hàm lượng TPC được tính và biểu diễn dưới dạng mg GAE/g chất khô [49].

2.1.4.2 Xácđịnh hoạt tỉnh ứcchế DPPH

Nguyên tắc: Phương pháp này dựa trên phản ứng với gốc tự do DPPH (2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl) Các gốc DPPHtựdo sẽ nhận electron từ các chấtchống oxy hóa, tạo ra dạng khử DPPH-H, màu của dung dịch từ tím chuyển sang vàngnhạt (đằy là quá trình trung hòa gốc DPPH) Màu dung dịch càng nhạt chứng tỏmẫu có hoạt tínhcàng cao.

Hình 2.2 Phản ứngcủa gốctự do với chất chống oxy hoá

Cách thực hiện: Pha dung dịch mẫu vào ethanol với từng nồng độ khác nhau Sauđó, thêm 1.5 mL dung dịch DPPH (100 pg/ mL trong ethanol) vào và lắc đều đểhỗn hợp ủ trong tối ở nhiệt độ phòng trong 30 phút Sau thời gian này, đo độ hấpthu của mẫu bằng máy đo quang phổ uv - VIS ở bước sóng 519 nm Mỗi thínghiệmđược lặp lại 3 lần để đảm bảo độ chính xác.

Acid galic và vitamin c được sử dụng làm chất đối chứng dương để kiểm tra hoạttính chống oxy hóa với các nồng độ lần lượt là: 1; 2.5; 5; 10 pg/ mL Mau trắngkhông sử dụng thuốc thử DPPH để đo độ hấp thutự do.