Báo cáo thí nghiệm sinh học tế bào

Cấu tạo:Kính hiển vi gồm có 4 hệ thống: Hệ thống giá đỡ gồm: Bệ, thân, mâm gắn với vật kính, bàn để tiêu bản hay còn gọi là bản sa trượt, giá đỡ mẫu, kẹp tiêu bản. Hệ thống phóng đại g

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG

Giảng viên hướng dẫn: Th.S Phạm Minh Tân Sinh viên thực hiện:

1 Lữ Thị Anh Thơ – 621011802 Nguyễn Thị Thanh Vy – 621005553 Trương Trung Kiên - 62101128

4 Quan sát tế bào vi khuẩn Bacillus subtilis: 9

Hình 5 Tế bào vi khuẩn Bacillus Subtilis 10

Bài 2: MỘT SỐ THIẾT BỊ THÔNG DỤNG VÀ THAO TÁC CƠ BẢN TRONG THÍ NGHIỆM

1 Hiện tượng co nguyên sinh và phản co nguyên sinh 15

Hình 13 Tế bào khi chưa có KNO3 16

Hình 14 Tế bào khi đã nhỏ KNO 5%3 16

Hình 15 Tế bào khi cho vài giọt nước cất vào 16

2 Xác định nồng độ dung dịch đẳng trương dựa trên sự biến đổi kích thước mô 17

3 Xác định môi trường ưu trương và nhược trương dựa trên sự thay đổi khối lượng 17

Bài 4: THÀNH PHẦN HỮU CƠ CỦA TẾ BÀO EUKARYOTAE 18

2 Thí nghiệm quan sát hiện tượng đường khử: 20

3 Thí nghiệm quan sát Cellulose: 21

Hình 17 Tế bào cải trắng sau khi nhỏ H2SO4 22

4 Thí nghiệm với Lipid 22

Hình 18 Lát đậu phộng dưới kính hiển vi 23

5 Quan sát sắc tố của mô ớt 23

1 Sự cần thiết của ánh sáng trong quang hợp 27

2 Tách sắc tố bằng phương pháp sắc ký trên giấy 28

Hình 21 Phương pháp sắc ký trên giấy 29

Rf =Đoạn đường di chuyển của sắc tốĐoạn đường di chuyển của dung môi=810.8 0.74= 303 Xác định cường độ quang hợp của cây 30

4 Enzym trong quá trình hô hấp 30

Hình 22 Thí nghiệm Dehydrogenase 31

Hình 23 Thí nghiệm catalase 32

5 Xác định cường độ hô hấp theo phương pháp Bovsen – Jense 32

I Tóm tắt lí thuyết:

1 Nguyên tắc:

Kính hiển vi là một dụng cụ quang học dùng để quan sát những vật nhỏ bé Độ phóng đại của kính hiển vi là tích số của độ phóng đại của vật kính và thấu kính.

2 Cấu tạo:

Kính hiển vi gồm có 4 hệ thống:

 Hệ thống giá đỡ gồm: Bệ, thân, mâm gắn với vật kính, bàn để tiêu bản (hay còn gọi là bản sa trượt, giá đỡ mẫu), kẹp tiêu bản.

 Hệ thống phóng đại gồm:

+ Thị kính: là một bộ phận của kính hiển vi mà người ta để mắt và để soi kính, có 2 loại ống đôi và ống đơn Trên thị kính có độ phóng đại x5, x6, x10 hoặc x15 (Bản chất là một thấu kính hội tụ có tiêu cự rất ngắn, dùng để tạo ra ảnh thật của vật cần quan sát).

+ Vật kính: Là một bộ phận của kính hiển vi quay về phía có vật mà người ta muốn quan sát, có 4 độ phóng đại của vật kính: x4, x10, x40, x100 (thường dùng với dầu soi kính) (Bản chất là một thấu kính hội tụ có tiêu cự ngắn, đóng vai trò như kính lúp để quan sát ảnh thật)

 Hệ thống chiếu sáng gồm: + Nguồn sáng (đèn chiếu sáng)

+ Màn chắn được đặt vào trong tụ quang dùng để điều chỉnh lượng ánh sáng đi qua tụ quang.

+ Tụ quang dùng để tập trung những tia ánh sáng và hướng luồng ánh sáng vào tiêu bản cần quan sát Vị trí của tụ quang nằm ở giữa gương và bản để tiêu bản Di chuyển tụ quang lên xuống để điều chỉnh độ chiếu sáng.

 Hệ thống điều chỉnh: + Núm chỉnh tinh (ốc vi cấp) + Núm chỉnh thô (ốc thứ cấp) + Núm điều chỉnh tụ quang lên xuống

+ Núm điều chỉnh độ tập trung ánh sáng của tụ quang + Núm chỉnh độ sáng

+ Núm dịch chuyển bàn sa trượt (trước, sau, trái, phải)

Hình 1 Cấu tạo kính hiển vi

3 Sử dụng

Để bảo vệ kính hiển vi và tiêu bản, khi dùng kính phải thận trọng, vặn ốc phải từ từ, nhẹ nhàng và tiến hành theo thứ tự sau:

 Cắm điện, bật công tắc Nhìn vào thị kính để điều chỉnh nguồn sáng điện chiếu đều ánh sáng đến thị trường.

 Quan sát mẫu vật với thị kính có độ phóng đại nhỏ trước (x4 hoặc x10)  Đặt tiêu bản lên bàn nâng và kẹp vào kẹp tiêu bản để cố định tiêu bản, điều

chỉnh mẫu vật vào đúng tâm nguồn sáng.

 Nhìn xuống tiêu bản (lame), vặn nhẹ ốc thứ cấp đến khi đầu vật kính gần chậm vào lame hay ngừng lại khi kính hiển vi có bộ phận cần an toàn.

 Nhìn vào thị kính và vặn nhẹ ốc thứ cấp lên đến khi thấy rõ hình ảnh mẫu vật (nếu chưa thấy rõ có thể điều chỉnh ốc vi cấp nhẹ nhàng đến khi nhìn thấy rõ)  Muốn xem ở độ phóng đại lớn hơn thì đưa phần muốn xem vào giữa thi trường.

Nhìn vào lame, vặn đầu xoay chuyển đến vật kính lớn hơn (x40) (nếu không đụng vào lame) Điều chỉnh ốc vi cấp đến khi nhìn rõ hình ảnh.

Lưu ý:

 Khi quan sát cần nhấp nháy ốc vi cấp thường xuyên để thấy được đầy dủ các mặt phẳng khác nhau của tiêu bản.

 Ốc vi cấp chuyển động được cả hai chiều Nếu đang vặn mà thấy kẹt thì dừng lại và vặn theo chiều ngược lại Tuyệt đối không dùng sức mạnh để vặn tiếp vì sẽ làm hỏng bộ phận này Có thể nâng hoặ hạ cho phù hợp rồi tiếp tục chỉnh bằng ốc vì cấp.

 Ảnh thấy trong kính hiển vi luôn luôn ngược chiều với vật quan sát Do đó muốn xem đúng chiều cần đặt lame mang tiêu bản ngược lại với chiều muốn quan sát Tương tự có thể thay đổi vị trí của kẹp tiêu bản theo chiều ngược lại với chiều cần quan sát.

 Sử dụng cả hai mắt để quan sát Khi muốn vẽ hình thì mắt trái nhìn vào kính, mắt phải nhìn vào giấy vẽ đặt ở bên phải kính (có thể thực hiện ngược lại nếu thuận tay trái) để có thể vừa quan sát vừa vẽ Không nhắm một mắt khi quan sát.

 Nếu chia vị tró trên thị trường giống như đồng hồ để dễ theo dõi  Sử dụng độ phóng đại càng lớn, nguồn sáng cần càng nhiều.

4 Bảo quản kính hiển vi:

Kính hiển vi phải được bảo quản ở nhiệt độ mát và khô ráo Cần đậy kỹ để tránh bụi bám vào vật kính và thị kính.

II Thực hành

1 Quan sát tế bào hành tím.

1.1 Thao tác:

Cho 1 giọt glycerine (hoặc nước cất) lên lame.

Dùng đầu mũi mác lách nhẹ và bóc lấy một lớp mỏng biểu bì củ hành Đặt lớp biều bì chìm trong một giọt glycerine (hoặc nước cất).

1.2 Kết quả:

Hình 2 Tế bào biểu bì hành

1.3 Nhận xét:

 Hình dạng:

Với vật kính nhỏ, ta thấy những tế bào biểu bì có hình thoi dài, xếp liền nhau Dịch chuyển tiêu bản, chọn những điểm nào sáng và rõ nhất để quan sát ở vật kính lớn

Với vật kính lớn (x40) ta thấy:

- Vách tế bào: dưới kính hiển vi, ta thấy một đường ngăn cách giữa hai tế bào cạnh nhau tạo thành

- Tế bào chất: nằm ở xung quanh nhân và sát màng tế bào

- Không bào: là những khoảng trống trong tế bào chất, rất khó nhận biết vì không bào thường chứa đầy dịch tế bào nên không phân biệt được ranh giới giữa tế bào và tế bào chất.

 Màu: Tím

2 Quan sát tế bào biểu bì lá lẻ bạn.

2.1 Thao tác:

Cho 1 giọt glycerine (hoặc nước cất lên lame)

Dùng đầu kim mũi mác lách nhẹ và bóc lấy một lớp mỏng biểu bì mặt dưới lá Đặt dưới lớp biểu bì chìm trong một giọt glycerine (hoặc nước cất).

Đậy lame, quan sát dưới kính hiển vi.

Nhỏ một giọt nước cất lên lame sạch.

Sử dụng que cấy đã được khử trùng lấy nấm men trong ống nghiệm cho vào giọt nước cất trên lame.

Từ từ đậy lame, tránh tạo ra bọt khí và quan sát dưới kính hiển vi.

Nhỏ một giọt nước cất lên lame sạch.

Sử dụng que cấy đã được khử trùng lấy vi khuẩn trong ống nghiệm cho vào giọt nước cất trên lame.

Từ từ đậy lame, tránh tạo bọt khí và quan sát dưới kính hiển vi.

4.2 Kết quả:

Hình 5 Tế bào vi khuẩn Bacillus Subtilis

4.3 Nhận xét:

 Hình dạng:

Quan sát kính hiển vi, ta thấy tế bào nấm men có hình que.

 Màu: Đục, trắng mờ hoặc hơi vàng

Cần rất thận trọng khi hút các dung môi hữu cơ không để gần nguồn nhiệt (đèn cồn), không hấp khử trùng (trừ khi có có chỉ định của hãng sản xuất), tuyệt đối không điều chỉnh thể tích dưới ngưỡng tối thiểu và trên ngưỡng tối đa cho phép.

Hình 7 Micropipette

Hình 8 Đầu tip

Các micropipette luôn luôn được sử dụng với các đầu tip Các đầu tip này thường chỉ được sử dụng một lần và cũng gồm 3 loại tương ứng với 3 thể tích đã nêu.

3 Pipet:

Dùng để đong, hút dung dịch để có độ chính xác cao hơn.

Có nhiều loại pipet thủy tinh: pipet Pasteur, pipet có chia vạch thông thường… được thiết kế phù hợp với các mục đích nghiên cứu khác nhau.

Hình 9 Pipet

4 Buret:

Chủ yếu dùng trong các thí nghiệm chuẩn độ để xác định nồng độ các chất Lưu ý: Khóa của buret nên bôi vaselin để không bị rít, tuyệt đối không để có bọt khí khi chuẩn độ (nếu có nên mở khóa cho dung dịch chảy xuống một cốc đặt ở dưới) Khi đọc thể tích dung dịch thì mắt phải nhìn thẳng và buret phải được kẹp thẳng trên giá để tránh sai số.

Hình 10 Buret các loại

II Một số thiết bị thông dụng: 1 Máy lắc ổn nhiệt:

Sử dụng cho các phản ứng cần nhiệt độ ổn định ( phản ứng enzyme, lai…) Gồm một bể nước có nhiệt độ điều chỉnh được đi kèm với bộ phận lắc.

2 Tủ hút khí độc:

Sử dụng trong các thí nghiệm với hóa chất bay hơi độc như phenol, chloroform 3 Tủ cấy vô trùng:

Sử dụng khi cần thao tác trong điều kiện vô trùng

Trước và sau khi sử dụng phải thanh trùng bên trong tủ bằng đèn tử ngoại (đèn UV)

- Ly tâm phân đoạn (ly tâm vùng): Phương pháp này cho phép tách các phân tử vật chất dựa vào khối lượng của chúng.

- Ly tâm đẳng tỷ trọng: Phương pháp này tách các phần tử vật chất dựa vào tỷ trọng của chúng Phương pháp này cho hiệu quả phân tách rất cao, các phân đoạn được phân tách rất thuần khiết.

Bài 3: VẬN CHUYỂN NƯỚC QUA MÀNG

I Tóm tắt lý thuyết:

Về cơ bản thì thành phần cấu tạo nên màng nguyên sinh chất gồm có lipid (lớp đôi phospholipid và cholesteron), protein và một tỉ lệ rất nhỏ carbohydrat Lớp

phospholipid bên ngoài màng tế bào chỉ cho phép những phân tử nhoe, có thể hòa tan trong dầu mỡ đi qua Các phân tử lớn, chất điện ly muốn ra, vào tế bào đều cần phải đi qua các kệnh protein thích hợp, chính điều này tạo nên tính thấm chọn lọc của màng nguyên sinh chất – một đặc tính quan trọng của màng, giúp bảo vệ tế bào khỏi mỗi trường xung quanh.

Hình 12 Cấu tạo màng nguyên sinh chất

- Quan sát dưới kính hiển vi có bội giác nhỏ phần tế bào có màu đỏ đồng đều Tại một phía của lame nhỏ vài giọt KNO 5% và phía đối diện đặt miếng giấy thấm để

rút nước qua Sau đó nhỏ vài giọt nước cất và đặt giấy thấm ở phía đối diện, lập lại vài lần và ghi nhận kết quả Thực hiện thao tác này vài lần để có kết quả chính xác 1.2 Kết quả:

Phần tế bào chất phía trong thành tế bào hành tím dần dần co lại, nước trong tế bào chất khuyếch tán ra ngoài và xảy ra hiện tượng co nguyên sinh.

Hình 13 Tế bào khi chưa có KNO3

Hình 14 Tế bào khi đã nhỏ KNO 5% 3

Hình 15 Tế bào khi cho vài giọt nước cất vào

1.3 Nhận xét kết quả thí nghiệm:

Khi có KNO thì môi trường bên ngoài tế bào sẽ trở nên ưu trương đều này làm3

cho nước trong tế bào chết khuyếch tán ngược ra ngoài môi trường dẫn đến tế bào xảy ra hiện tượng co nguyên sinh, cụ thể là phần tế bào chất trong tế bào hành co lại dạng co nguyên sinh lỏm làm cho phần tế bào chất màu tím mà ta quan sát được dần dần nhỏ lại Khi nhỏ thêm vào lame vài giọt nước cất và thấm nước đi thì nồng độ của KNO3 thấp xuống ( môi trường trở về trạng thái đẳng trương) nên tế bào dần trở lại hình dạng ban đầu.

2 Xác định nồng độ dung dịch đẳng trương dựa trên sự biến đổi kích thước mô.

2.1 Thao tác:

- Đổ các dung dịch CaCl có nồng độ : 0.02M; 0.08M; 0.15M; 0,03M vào các 2

đĩa petri có nắp đậy và ghi số để tránh nhầm lẫn.

- Cắt khoai tây thành các đoạn theo kích thước dài 3cm, rộng 1cm, dày 0.5cm Mỗi dung dịch ngâm 3 đoạn mẫu Ngâm trong 45 phút.

- Sau khi hoàn thành, lấy các mẫu ra và đo lại kích thước Xác định nồng độ dung dịch đẳng trương.

Nồng độ dung dịch đẳng trương với tế bào khoai tây là CaCl 0.08M2

3 Xác định môi trường ưu trương và nhược trương dựa trên sự thay đổi khối lượng.

3.1 Thao tác:

Cho hai quả trứng vào cốc thủy tinh sau đó thêm vào cốc dung dịch Acetic Acid 5% Để qua 24h, vớt trứng ra và cân lại khối lượng Sau đó cho nước muối vào cốc thủy tinh 1 và cho nước cất cốc thứ 2 Ghi nhận kết quả

Kết luận: Trứng sau khi ngâm trong nước muối thì bị giảm khối lượng do nồng độ muối làm cho môi trường trở nên ưu trương, nước trong trứng khuếch tán ra ngoài dung dịch môi trường Trứng ngâm trong nước cất thì tăng khối lượng do nước cất là môi trường nhược trương so với trứng đã bị ngâm trong acetic acid nên nước từ bên ngoài môi trường khuếch tán vào trong quả trứng.

Bài 4: THÀNH PHẦN HỮU CƠ CỦA TẾ BÀOEUKARYOTAE

I Tóm tắt lý thuyết:

Tế bào là đơn vị nhỏ nhất của sự sống Trong tế bào gồm có nhân, DNA, các bào quan và các thành phần hữu cơ cần thiết cho sự sống như protid, lipd và glucid.

1 Protid

Là đại phân tử hữu cơ cấu tạo gồm những monomere là các acid amin nối với nhau bằng liên kết peptid

Hiện diện ở cả tế bào chất lẫn trong nhân liên kết với DNA.

Do cấu tạo đặc trưng có thể được nhận biết theo các phản ứng tạo màu khác nhau: Phản ứng xanthoproteic, phản ứng Biuret.

2 Glucid

Là nhóm hợp chất hữu cơ phổ biến ở Động Thực vật và Vi sinh vật.

Là thành phần cấu tạo nên tế bào của các sinh vật, tùy loại mà chiếm tỷ lệ khác nhau Dựa vào cấu tạo mà glucid được chia thành 2 loại:

- Glucid đơn giản: Glucose, fructose… - Glucid phức tạp: gồm 2 loại

+ Oligosaccharid: Lactose, maltose, saccharose, sucrose… + Polysaccharid: Tinh bột, cellulose, pectin…

3 Lipid

Tồn tại ở các dạng khác nhau như triglycerid, phospholipid, glycolipid, steroid, cholesterol Mỗi dạng đóng vai trò khác nhau trong sự sống chung của tế bào.

II Thực hành

1 Thí nghiệm quan sát hạt tinh bột

1.1 Thao tác:

- Dùng kim mũi giáo cạo nhẹ một lát khoai tây để vào giọt nước trên lame - Dùng giấy thấm hút bớt nước, nhỏ 1-2 giọt dung dịch lugol lên mẫu, đậy lamel rồi quan sát dưới kính hiển vi x10, x40.

1.2 Kết quả:

Hình 16 Hạt tinh bột

1.3 Nhận xét:

 Hình dạng:

Quan sát kính hiển vi, ta thấy hạt tinh bột hình oval, khi kết hợp với Iod trong thuốc thử Lugol bị đổi màu.

 Màu: Xanh tím

1.4 Giải thích:

Ở tinh bột có các phân tử amilozo dạng xoắn theo kiểu lò xo, mỗi vòng xoắn được giữ vững nhờ có liên kết hidro giữa các nhóm OH.

Thành phần thuốc thử Lugol có chứa I và KI.

Ở nhiệt độ thường, mạch phân tử amilozo không phân nhánh và xoắn thành dạng hình trụ Khi tinh bột tác dụng với lugol các phân tử Iod có trong lugol đã len vào, nằm phía trong ống trụ và tạo thành hợp chất bọc có màu xanh tím.

.

2 Thí nghiệm quan sát hiện tượng đường khử:

2.1.Thao tác:

Thực hiện 3 loạt ống nghiệm sau :

- Ống 1: 2ml thuốc thử Fehling + 2ml nước cất.

- Ống 2: 2ml thuốc thử Fehling + 2ml dịch lọc giá ( giã 10 cọng giá + 10 ml nước, lọc).

- Ống 3: 2ml thuốc thử Fehling + 2ml dịch lọc hạt đậu xanh ( giã 10 hạt đậu xanh đã ngâm nước 1 giờ + 10 ml nước, lọc).

Đặt 3 ống nghiệm vào becher có nước sôi trong 5-10 phút 2.2 Kết quả

 Hiện tượng xảy ra:

 Giải thích hiện tượng:

- Ống 1: Có màu xanh của Fehling.

- Ống 2: Cây giá gần như kết thúc quá trình nảy mầm, tất cả tinh bột sẽ được phân cắt tạo thành đường đơn để đi vào hô hấp tế bào tạo năng lượng cho cây phát triển Vì vậy mà dịch chiết cây giá chứa chủ yếu là đường glucose, mà glucose là đường có tính khử nên dịch chiết thu được cũng có tính khử mạnh Glucose sẽ khử Cu trong Fehling thành Cu là kết tủa Cu O màu đỏ gạch.2++

- Ống 3: Trong dịch chiết đậu xanh nảy mầm thì ngoài phản ứng của glucose như trên thì còn có phản ứng màu Biuret giữa protein trong hạt đậu cà Cu(OH) tạo 2

phức màu xanh tím Do có sự pha trộn màu sắc giữa màu đỏ gạch và màu xanh tím nên ống nghiệm 3 có màu xanh đậm như hình.

3 Thí nghiệm quan sát Cellulose:

3.1 Thao tác:

- Dùng kim mũi giáo cắt một lát mỏng củ cải trắng, đặt lên lame, nhỏ 1 giọt dd Lugol lên mẫu.

- Dùng giấy thấm thấm hết Lugol, đậy lamel lên mẫu Sau đó nhỏ từ mép lamel H2SO4 75% để thấm dần vào mẫu củ cải (10 phút).

- Quan sát dưới kính hiển vi 10x, 40x 3.2 Kết quả

 Hiện tượng xảy ra:

Ban đầu khi cho lugol vào không có hiện tượng gì xảy ra, sau khi cho H2SO4 vào, phần rìa ngoài sau khi tiếp xúc với acid chuyển sang màu tím.

Hình 17 Tế bào cải trắng sau khi nhỏ H2SO4

 Giải thích hiện tượng:

- Cellulose không có phản ứng đặc trưng với lugol nên ban đầu khi cho lugol vào không có hiện tượng gì xảy ra.