Cấu tạo:Kính hiển vi gồm có 4 hệ thống: Hệ thống giá đỡ gồm: Bệ, thân, mâm gắn với vật kính, bàn để tiêu bản hay còn gọi là bản sa trượt, giá đỡ mẫu, kẹp tiêu bản. Hệ thống phóng đại g
Thực hành
Quan sát tế bào hành tím
Cho 1 giọt glycerine (hoặc nước cất) lên lame.
Dùng đầu mũi mác lách nhẹ và bóc lấy một lớp mỏng biểu bì củ hành Đặt lớp biều bì chìm trong một giọt glycerine (hoặc nước cất).
Hình 2 Tế bào biểu bì hành
Với vật kính nhỏ, ta thấy những tế bào biểu bì có hình thoi dài, xếp liền nhau Dịch chuyển tiêu bản, chọn những điểm nào sáng và rõ nhất để quan sát ở vật kính lớn Với vật kính lớn (x40) ta thấy:
- Vách tế bào: dưới kính hiển vi, ta thấy một đường ngăn cách giữa hai tế bào cạnh nhau tạo thành
- Tế bào chất: nằm ở xung quanh nhân và sát màng tế bào
- Không bào: là những khoảng trống trong tế bào chất, rất khó nhận biết vì không bào thường chứa đầy dịch tế bào nên không phân biệt được ranh giới giữa tế bào và tế bào chất.
Quan sát tế bào biểu bì lá lẻ bạn
Cho 1 giọt glycerine (hoặc nước cất lên lame)
Dùng đầu kim mũi mác lách nhẹ và bóc lấy một lớp mỏng biểu bì mặt dưới lá Đặt dưới lớp biểu bì chìm trong một giọt glycerine (hoặc nước cất). Đậy lame, quan sát dưới kính hiển vi.
Hình 3 Tế bào biểu bì lá lẻ bạn
Quan sát kính hiển vi, ta thấy vách ngăn giữa các tế bào rõ, không bào to, các hạt lục lạp và khí khổng của lá.
Trạng thái: Chuyển động đóng mở khí khổng
Quan sát tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae
Nhỏ một giọt nước cất lên lame sạch.
Sử dụng que cấy đã được khử trùng lấy nấm men trong ống nghiệm cho vào giọt nước cất trên lame.
Từ từ đậy lame, tránh tạo ra bọt khí và quan sát dưới kính hiển vi.
Hình 4 Tế bào nấm men
Quan sát kính hiển vi, ta thấy tế bào nấm men có hình cầu.
Quan sát tế bào vi khuẩn Bacillus subtilis
Nhỏ một giọt nước cất lên lame sạch.
Sử dụng que cấy đã được khử trùng lấy vi khuẩn trong ống nghiệm cho vào giọt nước cất trên lame.
Từ từ đậy lame, tránh tạo bọt khí và quan sát dưới kính hiển vi.
Hình 5 Tế bào vi khuẩn Bacillus Subtilis
Quan sát kính hiển vi, ta thấy tế bào nấm men có hình que.
Màu: Đục, trắng mờ hoặc hơi vàng
MỘT SỐ THIẾT BỊ THÔNG DỤNG VÀ THAO TÁC CƠ BẢN TRONG THÍ NGHIỆM
Một số dụng cụ thí nghiệm
Loại ống nghiệm bằng nhựa polyethylene hay polypropylene.
Dùng để chứa những thể tích dung dịch nhỏ.
Thể tích: 0.2 ml; 0.5 ml; 1.5 ml và 2 ml.
Dụng cụ dùng để thu nhận những thể tích nhỏ, cần độ chính xác cao
Chia thành 3 cỡ theo thể tích dung dịch tối đa cho mỗi lần hút:
- Cỡ nhỏ: Thể tớch tối đa: 10àl - 20àl - 50àl
- Cỡ trung bỡnh: Thể tớch tối đa: 100àl - 200àl
- Cỡ rất lớn: Thể tớch tối đa: 5000àl (ớt sử dụng)
Cần rất thận trọng khi hút các dung môi hữu cơ không để gần nguồn nhiệt (đèn cồn), không hấp khử trùng (trừ khi có có chỉ định của hãng sản xuất), tuyệt đối không điều chỉnh thể tích dưới ngưỡng tối thiểu và trên ngưỡng tối đa cho phép.
Các micropipette luôn luôn được sử dụng với các đầu tip Các đầu tip này thường chỉ được sử dụng một lần và cũng gồm 3 loại tương ứng với 3 thể tích đã nêu.
Dùng để đong, hút dung dịch để có độ chính xác cao hơn.
Có nhiều loại pipet thủy tinh: pipet Pasteur, pipet có chia vạch thông thường… được thiết kế phù hợp với các mục đích nghiên cứu khác nhau.
Chủ yếu dùng trong các thí nghiệm chuẩn độ để xác định nồng độ các chất.
Lưu ý: Khóa của buret nên bôi vaselin để không bị rít, tuyệt đối không để có bọt khí khi chuẩn độ (nếu có nên mở khóa cho dung dịch chảy xuống một cốc đặt ở dưới) Khi đọc thể tích dung dịch thì mắt phải nhìn thẳng và buret phải được kẹp thẳng trên giá để tránh sai số.
Một số thiết bị thông dụng
Sử dụng cho các phản ứng cần nhiệt độ ổn định ( phản ứng enzyme, lai…) Gồm một bể nước có nhiệt độ điều chỉnh được đi kèm với bộ phận lắc.
Sử dụng trong các thí nghiệm với hóa chất bay hơi độc như phenol, chloroform.
Sử dụng khi cần thao tác trong điều kiện vô trùng
Trước và sau khi sử dụng phải thanh trùng bên trong tủ bằng đèn tử ngoại (đèn UV) trong ít nhất 15 phút.
Là tủ mát (40ºC) hoặc tủ lạnh sâu (-200ºC)dùng để giữ các sinh phẩm, hóa chất cần giữ nhiệt độ lạnh.
Dùng để phân tách và thu nhận các phân tử khác nhau trong một dung dịch.
- Ly tâm phân đoạn (ly tâm vùng): Phương pháp này cho phép tách các phân tử vật chất dựa vào khối lượng của chúng.
- Ly tâm đẳng tỷ trọng: Phương pháp này tách các phần tử vật chất dựa vào tỷ trọng của chúng Phương pháp này cho hiệu quả phân tách rất cao, các phân đoạn được phân tách rất thuần khiết.
VẬN CHUYỂN NƯỚC QUA MÀNG
Tóm tắt lý thuyết
Về cơ bản thì thành phần cấu tạo nên màng nguyên sinh chất gồm có lipid (lớp đôi phospholipid và cholesteron), protein và một tỉ lệ rất nhỏ carbohydrat Lớp phospholipid bên ngoài màng tế bào chỉ cho phép những phân tử nhoe, có thể hòa tan trong dầu mỡ đi qua Các phân tử lớn, chất điện ly muốn ra, vào tế bào đều cần phải đi qua các kệnh protein thích hợp, chính điều này tạo nên tính thấm chọn lọc của màng nguyên sinh chất – một đặc tính quan trọng của màng, giúp bảo vệ tế bào khỏi mỗi trường xung quanh.
Hình 12 Cấu tạo màng nguyên sinh chất
1 Hiện tượng co nguyên sinh và phản co nguyên sinh.
- Tách lấy tế bào hành tím có màu đỏ đặt lên lame và thêm vào vài giọt nước, đầy lamelle.
- Quan sát dưới kính hiển vi có bội giác nhỏ phần tế bào có màu đỏ đồng đều Tại một phía của lame nhỏ vài giọt KNO 5% và phía đối diện đặt miếng giấy thấm để3 rút nước qua Sau đó nhỏ vài giọt nước cất và đặt giấy thấm ở phía đối diện, lập lại vài lần và ghi nhận kết quả Thực hiện thao tác này vài lần để có kết quả chính xác. 1.2 Kết quả:
Phần tế bào chất phía trong thành tế bào hành tím dần dần co lại, nước trong tế bào chất khuyếch tán ra ngoài và xảy ra hiện tượng co nguyên sinh.
Hình 13 Tế bào khi chưa có KNO 3
Hình 14 Tế bào khi đã nhỏ KNO 5% 3
Hình 15 Tế bào khi cho vài giọt nước cất vào
1.3 Nhận xét kết quả thí nghiệm:
Khi có KNO thì môi trường bên ngoài tế bào sẽ trở nên ưu trương đều này làm3 cho nước trong tế bào chết khuyếch tán ngược ra ngoài môi trường dẫn đến tế bào xảy ra hiện tượng co nguyên sinh, cụ thể là phần tế bào chất trong tế bào hành co lại dạng co nguyên sinh lỏm làm cho phần tế bào chất màu tím mà ta quan sát được dần dần nhỏ lại Khi nhỏ thêm vào lame vài giọt nước cất và thấm nước đi thì nồng độ của KNO3 thấp xuống ( môi trường trở về trạng thái đẳng trương) nên tế bào dần trở lại hình dạng ban đầu.
2 Xác định nồng độ dung dịch đẳng trương dựa trên sự biến đổi kích thước mô.
- Đổ các dung dịch CaCl có nồng độ : 0.02M; 0.08M; 0.15M; 0,03M vào các 2 đĩa petri có nắp đậy và ghi số để tránh nhầm lẫn.
- Cắt khoai tây thành các đoạn theo kích thước dài 3cm, rộng 1cm, dày 0.5cm Mỗi dung dịch ngâm 3 đoạn mẫu Ngâm trong 45 phút.
- Sau khi hoàn thành, lấy các mẫu ra và đo lại kích thước Xác định nồng độ dung dịch đẳng trương.
(M) Độ dài sau ngâm (cm) Độ rộng sau ngâm (cm) Độ dày sau ngâm (cm)
Nồng độ dung dịch đẳng trương với tế bào khoai tây là CaCl 0.08M2
3 Xác định môi trường ưu trương và nhược trương dựa trên sự thay đổi khối lượng.
Cho hai quả trứng vào cốc thủy tinh sau đó thêm vào cốc dung dịch Acetic Acid 5% Để qua 24h, vớt trứng ra và cân lại khối lượng Sau đó cho nước muối vào cốc thủy tinh 1 và cho nước cất cốc thứ 2 Ghi nhận kết quả
Khối lượng trứng ban đầu (g)
Khối lượng trứng sau ngâm Acetic Acid 5% (g)
Khối lượng trứng trong nước muối (g)
Khối lượng trứng trong nước cất (g)
Kết luận: Trứng sau khi ngâm trong nước muối thì bị giảm khối lượng do nồng độ muối làm cho môi trường trở nên ưu trương, nước trong trứng khuếch tán ra ngoài dung dịch môi trường Trứng ngâm trong nước cất thì tăng khối lượng do nước cất là môi trường nhược trương so với trứng đã bị ngâm trong acetic acid nên nước từ bên ngoài môi trường khuếch tán vào trong quả trứng.
THÀNH PHẦN HỮU CƠ CỦA TẾ BÀO EUKARYOTAE
Protid
Là đại phân tử hữu cơ cấu tạo gồm những monomere là các acid amin nối với nhau bằng liên kết peptid
Hiện diện ở cả tế bào chất lẫn trong nhân liên kết với DNA.
Do cấu tạo đặc trưng có thể được nhận biết theo các phản ứng tạo màu khác nhau: Phản ứng xanthoproteic, phản ứng Biuret.
Glucid
Là nhóm hợp chất hữu cơ phổ biến ở Động Thực vật và Vi sinh vật.
Là thành phần cấu tạo nên tế bào của các sinh vật, tùy loại mà chiếm tỷ lệ khác nhau. Dựa vào cấu tạo mà glucid được chia thành 2 loại:
- Glucid đơn giản: Glucose, fructose…
- Glucid phức tạp: gồm 2 loại
+ Oligosaccharid: Lactose, maltose, saccharose, sucrose…
+ Polysaccharid: Tinh bột, cellulose, pectin…
Lipid
Tồn tại ở các dạng khác nhau như triglycerid, phospholipid, glycolipid, steroid, cholesterol Mỗi dạng đóng vai trò khác nhau trong sự sống chung của tế bào.
Thí nghiệm quan sát hạt tinh bột
- Dùng kim mũi giáo cạo nhẹ một lát khoai tây để vào giọt nước trên lame.
- Dùng giấy thấm hút bớt nước, nhỏ 1-2 giọt dung dịch lugol lên mẫu, đậy lamel rồi quan sát dưới kính hiển vi x10, x40.
Quan sát kính hiển vi, ta thấy hạt tinh bột hình oval, khi kết hợp với Iod trong thuốc thử Lugol bị đổi màu.
1.4 Giải thích: Ở tinh bột có các phân tử amilozo dạng xoắn theo kiểu lò xo, mỗi vòng xoắn được giữ vững nhờ có liên kết hidro giữa các nhóm OH.
Thành phần thuốc thử Lugol có chứa I và KI. Ở nhiệt độ thường, mạch phân tử amilozo không phân nhánh và xoắn thành dạng hình trụ Khi tinh bột tác dụng với lugol các phân tử Iod có trong lugol đã len vào, nằm phía trong ống trụ và tạo thành hợp chất bọc có màu xanh tím.
Thí nghiệm quan sát hiện tượng đường khử
Thực hiện 3 loạt ống nghiệm sau :
- Ống 1: 2ml thuốc thử Fehling + 2ml nước cất.
- Ống 2: 2ml thuốc thử Fehling + 2ml dịch lọc giá ( giã 10 cọng giá + 10 ml nước, lọc).
- Ống 3: 2ml thuốc thử Fehling + 2ml dịch lọc hạt đậu xanh ( giã 10 hạt đậu xanh đã ngâm nước 1 giờ + 10 ml nước, lọc). Đặt 3 ống nghiệm vào becher có nước sôi trong 5-10 phút.
- Ống 1: Có màu xanh của Fehling.
- Ống 2: Cây giá gần như kết thúc quá trình nảy mầm, tất cả tinh bột sẽ được phân cắt tạo thành đường đơn để đi vào hô hấp tế bào tạo năng lượng cho cây phát triển Vì vậy mà dịch chiết cây giá chứa chủ yếu là đường glucose, mà glucose là đường có tính khử nên dịch chiết thu được cũng có tính khử mạnh Glucose sẽ khử Cu trong Fehling thành Cu là kết tủa Cu O màu đỏ gạch 2+ + 2
- Ống 3: Trong dịch chiết đậu xanh nảy mầm thì ngoài phản ứng của glucose như trên thì còn có phản ứng màu Biuret giữa protein trong hạt đậu cà Cu(OH) tạo 2 phức màu xanh tím Do có sự pha trộn màu sắc giữa màu đỏ gạch và màu xanh tím nên ống nghiệm 3 có màu xanh đậm như hình.
Thí nghiệm quan sát Cellulose
- Dùng kim mũi giáo cắt một lát mỏng củ cải trắng, đặt lên lame, nhỏ 1 giọt dd Lugol lên mẫu.
- Dùng giấy thấm thấm hết Lugol, đậy lamel lên mẫu Sau đó nhỏ từ mép lamel H2SO4 75% để thấm dần vào mẫu củ cải (10 phút).
- Quan sát dưới kính hiển vi 10x, 40x.
Ban đầu khi cho lugol vào không có hiện tượng gì xảy ra, sau khi cho H2SO4 vào, phần rìa ngoài sau khi tiếp xúc với acid chuyển sang màu tím.
Hình 17 Tế bào cải trắng sau khi nhỏ H 2 SO 4
- Cellulose không có phản ứng đặc trưng với lugol nên ban đầu khi cho lugol vào không có hiện tượng gì xảy ra.
- Nhưng khi cho acid H2SO4 vào, nó thủy phân một phần cellulose tạo những Oligpsaccharide, những phân tử Oligosaccharide này cho mày xanh với Iod (thành phần chính của lugol), một tính chất và cellulose không có được vì dãy dây và thằng của nó quấn tròn một cách chặt chẽ không cho Iod len lõi vào.
Thí nghiệm với Lipid
- Cắt 1 lát mỏng đậu phộng đã tẩm nước, đặt lên giọt Soudan III trên lame.
- 15 phút sau dùng giấy thấm thấm hết Soudan, rửa lại với rượu 20%
- Dùng giấy thấm thấm hết rượu, nhỏ 1 giọt glycerin lên mẫu, đặt lame lên, quan sát dưới kính hiển vi.
Hiện tượng xảy ra: Xuất hiện các giọt dầu màu đỏ cam trên bề mặt.
Hình 18 Lát đậu phộng dưới kính hiển vi
- Đối với đậu phộng, lipid tồn tại ở nhiều dạng khác nhau, đặc biệt là các giọt dầu có trong tế bào ở các mô dự trữ.
- Soudan III tan tốt trong dầu mỡ và định hướng màu trong đó nên dễ dàng hóa tan trong hạt đậu phộng và nhuộm các cấu trúc dầu, mỡ có trong lát cắt.
- Tạo thành những giọt dầu màu cam nổi lên trên bề mặt.
Quan sát sắc tố của mô ớt
Dùng mũi kim giáo tách một lớp mỏng mô ớt (xanh, đỏ) đặt lên lame, nhỏ giọt nước cất lên mẫu, đậy lame, quan sát dưới kính hiển vi x10, x40.
Hình 19 Tế bào ớt đỏ
Hình 20 Tế bào ớt xanh
QUANG HỢP – HÔ HẤP
Quang hợp
Là sự tổng hợp vật chất nhờ ánh sáng, đó là sự khử CO thành các hợp chất hữu cơ và 2 phóng thích Oxygen từ nước Hoạt động này được thực hiện ở thực vật và một vài loài vi khuẩn nhờ năng lượng mặt trời Nhóm sinh vật có khả năng thực hiện hoạt động quang hợp được gọi là sinh vật quang tự dưỡng. Ở thực vật sự quang hợp xảy ra trong diệp lạp Năng lượng mặt trời được thu nhận bởi các sắc tố quang hợp và được dùng để oxi hóa nước, phóng thích oxygen và khử CO 2 thành các hợp chất hữu cơ, chủ yếu là glucid.
Phương trình tổng quát của quang hợp:
Sự tổng hợp các chất hữu cơ xảy ra qua chuỗi các phản ứng, chuỗi phản ứng này được thực hiện trong hai giai đoạn:
- Giai đoạn sáng (giai đoạn cần năng lượng ánh sáng) xảy ra ở màng thylakoid, kết quả là tạo ra các hợp chất cao năng ATP và NADH +
- Giai đoạn tối xảy ra trong stroma (không cần ánh sáng), dùng ATP và NADH để tổng hợp glucid Trong stroma có chứa đầy đủ các enzym cần thiết để tổng hợp đường từ các phân tử CO 2
Hô hấp
Hô hấp ở thực vật là quá trình chuyển đổi năng lượng của tế bào sống trong đó các phân tử carbonhidrat bị phân giải thành CO và nước, đồng thời giải phóng năng 2 lượng, một phần năng lượng được tích lũy trong ATP.
Phương trình tổng quát của hô hấp:
C6H O12 6 + 6O -> 6CO + 6 H O + Năng lượng (nhiệt + ATP) 2 2 2
Năng lượng được thỉa ra ở dạng nhiệt cần thiết duy trì nhiệt độ thuận lợi cho các hoạt động sống của cơ thể.
Năng lượng được tích lũy trong ATP được dùng để vận chuyển vật chất trong cây, sinh trưởng, tổng hợp chất hữu cơ, sửa chữa những hư hại của tế bào….
2.3.1 Phân giải kị khí (đường phân và lên men):
- Xảy ra khi rễ bị ngập úng, hạt bị ngâm vào nước, hay cây ở trong điều kiện thiếu oxi. Diễn ra ở tế bào chất gồm 2 quá trình:
- Đường phân là quá trình phân giải glucose thành acid piruvic và 2 ATP.
- Lên men là acid piruvic lên men tạo thành rượu etylic và CO hoặc tạo thành acid 2 lactic.
2.3.2 Phân giải hiếu khí (đường phân và hô hấp hiếu khí):
- Xảy ra mạnh trong các mô, cơ quan đang hoạt động sinh lý mạnh như: hạt đang nảy mầm, hoa đang nở….
- Hô hấp hiếu khi diễn ra trong chất nền của ti thể gồm 2 quá trình:
+ Chu trình Krebs: Khi có oxi, acid piruvic từ tế bào chất vào ti thể và acid piruvic chuyển hóa theo chu trình Krebs và bị oxi hóa hoàn toàn.
+ Chuỗi truyền electron: Hidro tách ra từ acid piruvic trong chu trình Krebs được chuyển đến chuỗi truyền electron đến oxi và nước tích lũy được 36 ATP.
- Từ một phân tử glucose qua phân giải hiếu khí giải phóng ra 38 ATP và nhiệt lượng. 2.4 Hô hấp sáng:
- Là quá trình hấp thụ oxi và giải phóng CO ngoài sáng, xảy ra đồng thời với quang 2 hợp.
- Hô hấp sáng gây lãng phí sản phẩm quang hợp.
2.5 Quang hệ giữa hô hấp và quang hợp:
Là cả 2 quá trình phụ thuộc lẫn nhau:
- Sản phẩm của quang hợp (C6H12O6+ 6O ) là nguyên liệu của hô hấp và chất oxi2 hóa trong hô hấp.
- Sản phẩm của hô hấp (CO + H O) là nguyên liệu để ổng hợp nên C2 2 6H12O6 và giải phóng oxi trong quang hợp.
Sự cần thiết của ánh sáng trong quang hợp
Lấy 2 nhánh cây thủy sinh có kích thước bằng nhau Đặt mỗi nhánh vào ống nghiệm đã chứa nước có thể tích bằng nhau Một ống nghiệm bọc giấy bạc để tránh ánh sáng chiếu vào và nhỏ vào mỗi ống 5 giọt phenol red ( nhỏ từ từ đợi dung dịch chuyển sang màu vàng rồi mới nhỏ tiếp) Đậy nhẹ nắp trên mỗi ống Đặt 2 ống nghiệm dưới ánh sáng trắng Quan sát sự thay đổi màu sắc của ống nghiệm không bị chắn sáng, khi màu thay đổi hoàn toàn thì lấy ra so sánh màu của 2 ống.
- Ống nhận được ánh sáng: dung dịch phenol red dần dần chuyển sang màu hồng nhạt
- Ống không nhận được ánh sáng: dung dịch phenol red chuyển sang màu vàng.
- Ống nhận được ánh sáng thì cây thủy sinh khi đó cây sẽ sử dụng CO có trong dung dịch môi trường để thực hiện phản ứng2 quang hợp:
6CO2 + 12H O C2 6H12O6 + O + H O 2 2 Ánh sáng, diệp lục tố
Từ đó lượng CO trong dung dịch chứa Phenol red giảm xuống làm cho nồng độ acid 2 giảm, Ph tăng lên Phenol red chuyển sang màu hồng nhạt.
- Ống không nhận được ánh sáng thì cây thủy sinh sẽ sử dụng O có trong dung dịch 2 môi trường để hô hấp tế bào:
C6H O12 6 + 6O2 6CO + 12 H O + Năng lượng (36 or 38 ATP)2 2
Từ đó lượng CO2 trong dung dịch môi trường chứa Phenol red tăng lên làm nồng độ acid tăng, pH giảm Phenol red chuyển sang màu vàng.
Tách sắc tố bằng phương pháp sắc ký trên giấy
Giã 3g lá sạch trong một cối sạch và khô cùng với 5ml cồn, nghiền kỹ và cho tiếp 20 ml acetol rồi nghiền tiếp, để ít phút cho bã lắng xuống rồi lọc qua giấy xếp, dịch lọc hứng ở ống nghiệm sạch và khô Đậy nút kín và quan sát màu của dung dịch dưới ánh sáng truyền suốt và ánh sáng phản xạ
Cắt một mẩu giấy sắc ký 12 x 3 cm, dùng bút chì kẻ nhẹ một đường thẳng theo chiều rộng cách đầu giấy sắc ký 1 cm Dùng ống mao quản chấm sắc tố theo vạch chì từ bên này sang bên kia của tờ giấy sắc ký Sau mỗi lần chấm làm khô bằng mấy sấy hoặc bằng quạt máy, mỗi lần chấm với đường kính vệt chấm < 3mm rồi mới chấm tiếp Sau khi đã chấm hết dọc theo tờ giấy sắc ký, dùng kim chỉ cột lại và cho vào bình chạy sắc ký đã có sẵn dung môi 9 erther dầu hỏa : 1 acetol Đậy kín bình khoảng 15 – 20 phút (vệt chạy sắc ký cách đầu mép trteen của giấy sắc ký khoảng 1 – 1.5 cm) sau đó mang giấy sắc ký ra sấy khô, sắc tố sẽ được tách riêng ra từng loại như sau:
- Diệp lục tố a (chlorophyll a) có màu xanh đậm
- Diệp lục tố b (chlorophyll b) có màu xanh nhạt
- Caroten, xantophyll có màu vàng
Hình 21 Phương pháp sắc ký trên giấy
Khi ngâm giấy sắc ký đã chấm sắc tố lên và ngâm trong dung môi 20 phút thì chúng đã tách riêng được từng loại sắ tố đó là: chlorophyll a, chlorophyll b, carotens và xantophyll.
Chlorophyll b xanh nhạt nằm ở dưới cùng, chlorophylla có màu xanh đậm nằm ở giữa và trên cùng là xantophyll có màu vàng.
Các sắc tố tách nhau và sắp xếp thành các vị trí như trên hình vì:
- Bởi vì tốc độ chạy của các sắc tố là khác nhau.
Rf= Đoạnđường dichuyển của sắc tố Đoạnđường dichuyển của dung môi= 8
3 Xác định cường độ quang hợp của cây
3.1 Thao tác: Để ngược một nhánh rong đã được cắt ngang thân cho vào ống nghiệm và đổ đầy nước sao cho mặt nước cách phần trên cùng của cây rong từ 3 – 4 cm Đặt 2 ngọn đèn điện 100W cách cành rong khoảng 15cm. Đếm số bọt khí thoát ra mặt cắt của cành rong trong 10 phút Tính cường độ quang hợp qua công thức: Cường độ quang hợp = số bọt khí thoát ra / thời gian thực hiện. 3.2 Kết quả:
Số bọt khí thoát ra
(bọt khí) Thời gian ( phút) Cường độ quang hợp
Enzym trong quá trình hô hấp
- Cho vào ống nghiệm thứ I những miếng củ cải mỏng 3 – 4 mm thêm vào dung dịch xanh metilen 0.005% ngập quá những lát củ cải ngập khoảng 1 cm Đổ thêm lớp dầu 4 – 5 mm lên trên mặt chất lỏng.
- Cho vào ống nghiệm thứ II dung dịch xanh metilen.
- Đặt cả hai ống nghiệm trong nước ấm 35 - 40ºC trong 30 phút So sáng hiện tượng giữa hai ống.
Hiện tưởng xảy ra: Vùng sát với miếng củ cải xanh metilen nhạt màu hơn so với xung quanh, ngoài ra củ cải cũng được nhuộm màu.
Acetyl – CoA được dùng trong chu trình krebs để thực hiện hô hấp tế bào Enzym dehydrogenase là enzym xúc tác cho quá trình tạo Acetyl – CoA Sản phẩm của quá trình trên có H , H khi tiếp xúc với xanh methylene sẽ khiến nàu + + xanh nhạt dần, vì vậy những vùng gần củ cải có màu xanh nhạt hơn xung quanh.
Hình 22 Thí nghiệm Dehydrogenase 4.2 Catalase:
- Nghiền 10g khoai tây trong cối Thêm 10ml nước, dùng chày nghiền nát và lọc qua vải lọc Chia đều chất chiết vào 2 ống nghiệm
- Ống 1 để nhiệt độ phòng Ống 2 đặt trong nước nóng 10 phút
- Cho vào mỗi ống nghiệm 2 ml H2O2 1% Quan sát hiện tượng
- Ống 1: Khi nhỏ H2O2 1% có hiện tượng sủi bọt
- Ống 2: Khi nhỏ H2O2 1% không có bọt khí
- Enzyme catalase trong khoai tây có khả năng xúc tác giúp phân hủy H2O2 thành O và H O, bọt khí sủi là O được giải phóng.2 2 2
- Ống nghiệm 2 không có hiện tượng do nhiệt độ đã thay đổi cấu trúc không gian của enzyme khiến nó mất hoạt tính.
Xác định cường độ hô hấp theo phương pháp Bovsen – Jense
- Dùng hai erlen có thể tích bằng nhau, lắc erlen để không khí bên trong và bên ngoài cân bằng và cho vào mỗi erlen 20 ml dung dịch Ba(OH) 0,1N2
- Lấy 4g hạt nảy mầm cho vào túi vải sô và cột lại bằng sợi chỉ dài, sau đó cho vào erlen thứ I và đậy nắp lại, chú ý không cho túi đậu tiếp xúc với dung dịch Ba(OH) 2
- Erlen thứ II cũng tương tự erlen thứ I nhưng khác là hạt nảy mầm đã được đun sôi.
- Tiếp đó đặt cả hai erlen vào chỗ tối nhiệt độ phòng Sau 25 phút kéo túi hạt sát nút erlen và lắc đều hai lọ để Ba(OH) hấp thụ hoàn toàn CO 2 2
- Mở nắp và cho vào mỗi lọ vài giọt phenolphtalein và chuẩn độ bằng H2SO4
Hiện tưởng xảy ra: Ống nghiệm có hạt nảy mầm không được đun sôi xuất hiện kết tủa ở đáy ống nghiệm.