Chúng có thể chứa một lượng nhỏ chất lỏng và thường được sử dụng trong các thí nghiệm khoa học.. Đĩa petri – Petri dish Đĩa Petri là một loại thủy tinh hình trụ, nông, được sử dụng trong
TRƯỜNG ĐẠI HỌC TƠN ĐỨC THẮNG Khoa Dược Thí nghiệm Sinh học Đại cương (H01212) BÁO CÁO CUỐI KÌ GVHD: Đỗ Bích Hằng Sinh viên thực hiện: Đinh Nhi – H2300113 Lê Ngọc Hiếu – H2300048 Họ Tên - MSSV Phan Huỳnh Như – H2300127 Họ Tên - MSSV Trương Khánh Linh – H2300080 Họ Tên - MSSV Vưu Nguyễn Giáng My - H2300094 Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 11, năm 2023 Mục lục I TĨM TẮT - GIỚI THIỆU CHUNG .2 II THÍ NGHIỆM MỘT SỐ THIẾT BỊ THƠNG DỤNG VÀ THAO TÁC CƠ III THÍ NGHIỆM KÍNH HIỂN VI QUANG HỌC VÀ CÁCH SỬ DỤNG 11 IV THÍ NGHIỆM QUAN SÁT TẾ BÀO NHÂN SƠ VÀ NHÂN THỰC 15 BẢN TRONG THÍ NGHIỆM SINH HỌC V THÍ NGHIỆM QUAN SÁT Q TRÌNH NGUN PHÂN VÀ GIẢM PHÂN 19 VI THÍ NGHIỆM THÀNH PHẦN HỮU CƠ CỦA TẾ BÀO NHÂN THỰC .22 VII THÍ NGHIỆM VẬN CHUYỂN QUA MÀNG 26 VIII THÍ NGHIỆM TÁCH CHIẾT DNA TỪ TẾ BÀO ĐỘNG VẬT .28 IX THÍ NGHIỆM TÁCH CHIẾT RNA TỒN PHẦN CỦA LÁ 30 X KẾT LUẬN 33 1 Tóm tắt Báo cáo dùng để trình bày kết thí nghiệm kiến thức tiếp thu trình học mơn Thí nghiệm Sinh học Đại cương sinh viên thuộc tiểu nhóm nhóm 505 Giới thiệu chung Nhằm học tốt môn Sinh học Đại cương khoa học tự nhiên nghiên cứu sống thể sống việc nắm bắt lý thuyết việc thực hành phịng thí nghiệm lại mang đến cho ta hội để tiếp xúc, xây dựng kiến thức vững học tập trực tiếp, tập làm quen với thí nghiệm viết báo cáo khoa học Mục đích báo cáo trình bày lại kiến thức mà chúng em thực hành, học tập phòng thí nghiệm Một số thiết bị thao tác thí nghiệm sinh học 3.1 Giới thiệu 3.1.1 Một số dụng cụ phịng thí nghiệm I Ống nghiệm – Test tub Là dụng cụ thủy tinh dùng phịng thí nghiệm để lấy mẫu thử phản ứng hóa học Các ống nghiệm phát triển Nhà Vật lý Hóa học tiếng người Anh “Michael Faraday” (1791-1867) Ống nghiệm gọi ống đun sôi Đây ống mảnh với đáy hình chữ U phần mở Chúng chứa lượng nhỏ chất lỏng thường sử dụng thí nghiệm khoa học Đặc trưng ống nghiệm như: • Dễ dàng an tồn để sử dụng • Chống nóng • Chống hóa chất • Kích thước đồng • Lý tưởng cho việc sử dụng lâm sàng công nghiệp • Thân thiện với môi trường Các loại ống nghiệm: • Ống tái sử dụng ống sử dụng nhiều lần sau khử trùng Ngồi cịn có loại: ▪ Ống thủy tinh – Loại thường sử dụng phịng thí nghiệm để làm nóng, đun sơi thí nghiệm ▪ Ống nuôi cấy – Những ống hầu hết sử dụng để lưu trữ Tế bào nuôi cấy phịng thí nghiệm • Ống nghiệm tái sử dụng chắn chịu nhiệt tốt chúng sản xuất từ Boro 3.3 Glass Chúng sử dụng cho phản ứng hóa học có độ xác cao Chúng tái sử dụng • Ống nghiệm dùng lần – Các ống nghiệm sản xuất hai loại thủy tinh: Boro 5.1 Boro 7.0 Các ống nghiệm dùng lần tiết kiệm xử lý sau sử dụng II Becher – Beakers Beaker dụng cụ làm việc thủy tinh phịng thí nghiệm Chúng có nhiều kích cỡ sử dụng để đo thể tích chất lỏng Beaker khơng đặc biệt xác Một cốc thơng thường có độ xác khoảng 10% ▪ Đáy cốc phẳng giúp dễ dàng đặt bề mặt phẳng bàn thí nghiệm bếp điện ▪ Vịi giúp dễ dàng đổ chất lỏng sang vật chứa khác ▪ Phần mở rộng giúp bạn dễ dàng thêm vật liệu vào cốc Vì vậy, cốc thường sử dụng để trộn chuyển chất lịng III Bình Erlen – Erlenmeyer Flasks Loại bình có cổ hẹp, đáy phẳng Nó tốt cho việc xốy, lưu trữ làm nóng chất lỏng Bình Erlenmeyer có nhiều kích cỡ, có khơng có đánh dấu thể tích Chúng có độ xác khoảng 10% IV Đĩa petri – Petri dish Đĩa Petri loại thủy tinh hình trụ, nơng, sử dụng phịng thí nghiệm để ni cấy vi sinh vật tế bào khác Chiếc đĩa phát minh nhà vi khuẩn học người Đức tên Julius Richard Petri Kể từ phát minh, đĩa Petri trở thành thiết bị phịng thí nghiệm quan trọng V Lam kính (Slide) Lamen (Coverslip) • Lam kính (Slide) Các lam kính hiển vi thường làm vơi soda thủy tinh borosilicat với cạnh mài đánh bóng Một số làm từ nhựa đặc biệt thạch anh nung chảy sử dụng cho kính hiển vi huỳnh quang Các slide kính hiển vi tiêu chuẩn có kích thước khoảng 75 25mm (3 1 in) dày 1mm Các kích thước mục đích đặc biệt có sẵn: ▪ 75 50mm để sử dụng địa chất ▪ 46 27mm cho nghiên cứu thạch học ▪ 48 28mm cho phần mỏng • Lamen (Coverslip) Các che lam kính để dán vào lam kính để bảo quản mẫu vật, làm chậm q trình khơ tránh nhiễm bẩn Bìa mềm có nhiều hình dạng, kích thước độ dày khác nhau; độ dày ảnh hưởng đến độ phân giải cường độ hình ảnh VI Pipette Pipette dụng cụ phịng thí nghiệm sử dụng để đo chuyển lượng nhỏ chất lỏng, với thể tích mililit (mL), microlit (μL) Các loại Pipette: • Pasteur pipettes (unit/mL): ▪ Một pipette làm thủy tinh mỏng có đầu thon nhọn; Một số nhựa; Chúng thường thải bỏ sau sử dụng để ngăn ngừa khả nhiễm bẩn / lây nhiễm chéo chủ yếu ▪ Được sử dụng bạn muốn xử lý dung dịch riêng lẻ, chẳng hạn chuyển môi trường lấy mẫu • Komagome pipettes (unit/mL): ▪ Nó làm thủy tinh nhựa, có phần phình trịn gần đầu thân pipette để phân tán bọt khí chất lỏng đo chất lỏng có bọt cách an toàn Dùng để hút xả chất lỏng Các loại dung tích mL, mL phổ biến • Measuring pipettes (unit/mL): (i.e Serological Pipettes, Mohr Pipettes / Graduated Pipettes) ▪ Pipette thẳng làm thủy tinh nhựa với thể tích tăng dần, đánh dấu dọc theo ống đo chất lỏng xác ▪ Được sử dụng xử lý thuốc thử dịch vi khuẩn có khả gây hại / nguy hiểm • Volumetric pipettes: ▪ Một pipette làm thủy tinh có vạch chia độ ống thủy tinh phía chỗ phình Document continues below Discover more from: Thí nghiệm sinh học đại cương H01212 Đại học Tơn Đức… 9 documents Go to course Giáo trình Thí nghiệm 61 SHDC Thí nghiệm sinh học đại… None Giáo trình Thực hành 67 Vi sinh vật học Phầ… Thí nghiệm sinh học đại… None Hdh - Noth Thí nghiệm sinh học đại… None 2023-11 NỘI QUY KIỂM TRA RÈN… Thí nghiệm sinh học đại… None B2 QLHC D32S biotechnology… Thí nghiệm sinh học đại… None 14-.Thay Vu Tuan 68 Anh Khoa live T Bo… Thí nghiệm sinh học đại… None • Micropipette (Unit/μL): ▪ Pipette đo chất lỏng microlit (μL) với độ xác sử dụng phổ biến thí nghiệm, nghiên cứu phân tích lĩnh vực khoa học đời sống ▪ Cấu tạo micropippette: Gồm phần - Phần cầm tay gồm: Núm đẩy – trục đẩy ( plunger button – plunger ) – Khóa thể tích (volume clock – lưu ý có dịng có núm khóa, có dịng khơng có ), núm thơng thường chỉnh thể tích dung dịch cần hút – chỗ giữ ngón tay ( finger hook) – khu vực hiển thị thể tích ( volume display ) – núm đẩy típ ( tip eject button ) - Phần hút đẩy chất lỏng ( liquid end ) gồm: Lò xo, piston, cần đẩy típ, đệm Oring, ống thơng ▪ Thao tác micropipette: a) Điều chỉnh thể tích - Thể tích đặt cách xoay bánh xe lăn nút ấn b) Lắp đầu côn (tips) - Đẩy phần giữ đầu tips vào đầu tips chuyển động xoắn nhẹ để đảm bảo liên kết chắn kín c) Hút dung dịch - Nhấn nút nhấn đến điểm dừng (nút tương ứng với thể tích chất lỏng đặt) - Giữ pipet thẳng đứng nhúng đầu hút vào chất lỏng Thả nút ấn từ từ nhẹ nhàng (về vị trí cùng) để hút thể tích chất lỏng đặt, sau rút đầu pipet khỏi chất lỏng d) Phân phối dung dịch - Đặt đầu mút vào thành bên bình nhận (theo góc từ 10° đến 40°) - Nhấn nút ấn từ từ nhẹ nhàng đến điểm dừng - Chờ giây, sau nhấn nút nhấn đến điểm dừng thứ hai để đẩy hết chất lỏng cịn sót lại khỏi đầu ống Nhấn nút ấn xuống hoàn toàn (trong tháo pipet) vẽ đầu hút dọc theo bề mặt bên bình - Thả nút ấn nhẹ nhàng Đẩy đầu cách nhấn mạnh vào đầu nút đẩy 3.1.2 Một số nguyên tắc pha hóa chất Chất lượng hóa chất I Là chất lượng dùng cho thí nghiệm sinh học phân tử (molecular biology grade) II Tiết trùng Hóa chất pha với nước cất hai lần khử trùng điều kiện thông thường Đối với số hóa chất khơng thể trùng nhiệt, việc trùng tiến hành với phin lọc có đường kính lỗ lọc 0,2µm 0,45µm Dung dịch mẹ - Stock solution III Các dung dịch thường pha bảo quản dạng đậm đặc (dung dịch mẹ) Dung dịch mẹ pha loãng với nước cất hai lần khử trùng để đạt nồng độ cần lần sử dụng IV Bảo quản Dung dịch pha bảo quản nhiệt độ phịng thí nghiệm, nhiệt đô 40oC nhiệt độ lạnh sâu – 20oC theo khuyến cáo cho loại hóa chất Dung dịch bảo quản – 20oC thường phân thành phân đọan nhỏ (aliquot) Mỗi lần sử dụng cần giải đông phân đoạn 3.1.3 Một số thiết bị thí nghiệm I Cân – Balance Cân phịng thí nghiệm sử dụng để xác định xác khối lượng trọng lượng vật phẩm chất phạm vi trọng lượng cụ thể cho khả đọc cụ thể Khuấy từ Máy khuấy đĩa nóng máy khuấy từ đĩa nóng dụng cụ phịng thí nghiệm thường sử dụng để khuấy làm nóng dung dịch đồng thời II Máy nước cất Máy chưng cất nước phòng thí nghiệm, làm nóng nước thành pha dễ bay tách khỏi tạp chất khơng bay Máy tiệt trùng – Autoclave III Nồi hấp gọi máy tiệt trùng nước thường sử dụng cho ứng dụng y tế công nghiệp IV Bể cách thủy – Water bath Bể cách thủy thiết bị thí nghiệm dùng để ủ mẫu nhiệt độ không đổi thời gian dài Tủ sấy – Oven V Được sử dụng để khử trùng chất thải nguy hiểm sinh học, dụng cụ mổ xẻ môi trường / thuốc thử cho xét nghiệm vô trùng VI Máy lắc ổn định nhiệt – Shaking incubator Tủ ấm lắc thiết kế để ủ đồng thời lắc khuấy mẫu VII Tủ ủ nhiệt – Incubator Tủ ấm thiết bị dùng để ni cấy trì nuôi cấy vi sinh nuôi cấy tế bào Tủ cấy vô trùng – Clean bench VIII Tủ cấy vô trùng bàn làm việc khép kín kiểm sốt để ngăn bụi bẩn khơng khí mơi trường xung quanh bám vào làm ô nhiễm vật dụng làm việc IX Máy ly tâm – Centrifuge Máy ly tâm thiết bị phịng thí nghiệm sử dụng để tách chất lỏng, khí chất lỏng, dựa tỷ trọng 3.2 Quy trình: Thao tác pha lỗng 3.2.1 Mẫu, hóa chất, dụng cụ • Hóa chất ▪ Dung dịch CuSO4 1% 10mL ▪ Nước cất 100mL • Dụng cụ ▪ Ống nghiệm ống ▪ Khay đựng ống nghiệm KÌ ĐẦU KÌ CUỐI (a) Hình (a),(b) Hình ảnh rễ hành kính hiển vi KÌ SAU (b) 20 KÌ TRƯỚC GIỮA 6.4 Thảo luận giải thích kết • Kì đầu : Các NST kép sau nhân đơi kì trung gian dần co xoắn màng nhân nhân tiêu biến, thoi phân bào xuất • Kì : Các NST kép co xoắn cực đại tập trung thành hàng mặt phẳng xích đạo tế bàoổThi phân bào đính vào hai phía NST tâm động • Kì sau : NST tách di chuyển thoi phân bào hai cực tế bào • Kì cuối : Các NST dãn xoắn , màng nhân nhân dần xuất Thoi vô sắc tiêu biến Sau q trình phân chia tế bào chất tạo nên tế bào có số lượng NST giống y hệt tế bào mẹ 21 Thành phần hữu tế bào nhân thực 7.1 Giới thiệu Hầu hết hợp chất hữu thể sống là: carbohydrate, protein, lipid axit nucleic Các tiểu đơn vị đại phân tử nhóm đặc trưng truyền tính chất hoá học khác cho đại phân tử Sử dụng xét nghiệm sinh hoá để xác định hợp chất chưa biết Đối chứng dương chứa biến thử nghiệm, phản ứng dương tính đối chứng âm khơng chứa biến tìm kiếm, chứa dung mơi không phản ứng thử nghiệm, cho biết kết âm tính Sử dụng sắc ký để tách hỗn hợp Hỗn hợp hoà tan chất lỏng di chuyển qua ma trận làm từ vật liệu hạt, giấy, gel chuyển động với tốc độ khác làm chúng tách rời Các chất phân tách cách phân chia chúng pha tĩnh pha động sắc ký giấy Mục đích thí nghiệm: • Thực xét nghiệm định tính để phát diện carbohydrat, protein, • Giải thích tầm quan trọng đối chứng dương tính âm tính xét nghiệm • Sử dụng xét nghiệm sinh hoá để xác định hợp chất chưa biết • Giải thích cách sử dụng sắc ký giấy để tách hợp chất hữu khỏi hỗn hợp • Sử dụng sắc ký giấy để tách hợp chất hữu khỏi hỗn hợp lipid sắc tố quan trọng mặt sinh học sinh hố 7.2 Quy trình 7.2.1 Quy trình 1: Xác định đường khử phản ứng Fehling Bước 1: Lấy mL mẫu cho vào ống nghiệm khô, Nồng độ mẫu thử phải 5% (w/v) Bước 2: Thêm khoảng 2-3 giọt thuốc thử Fehling’s vào ống nghiệm trộn cách xoay ống nghiệm Bước 3: Giữ ống nghiệm bể cách thuỷ khoảng 1-2 phút Bước 4: Quan sát ghi lại xuất màu sắc ống nghiệm 7.2.2 Quy trình 2: Phản ứng Xanthoproteic Bước 1: Lấy ống nghiệm để khay đựng Bước 2: Cho mL dung dịch mẫu vào ống nghiệm 22 Bước 3: Cho mL nitric acid đậm đặc thêm vào ống nghiệm (có thể xuất kết tủa trắng) Bước 4: Dùng kẹp ống nghiệm giữ ống nghiệm đun nhẹ lửa đèn cồn đến dung dịch Bước 5: Để nguội ống nghiệm đến nhiệt độ phòng Bước 6: Cho mL dung dịch NaOH 30% vào ống nghiệm quan sát chuyển màu 7.2.3 Quy trình 3: Phản ứng Sudan III Bước 1: Lấy ống nghiệm để khay đựng Bước 2: Cho mL nước cất vào ống nghiệm Bước 3: Cho mL mẫu vào ống nghiệm Bước 4: Nhỏ 2-3 giọt dung dịch Sudan II vào ống nghiệm, lắc quan sát 7.2.4 Quy trình 4: Sắc ký giấy xác định thành phần sắc tố quang hợp Bước 1: Nhận giấy sắc ký phịng thí nghiệm bạn Xử lý giấy theo cạnh để dầu ngón tay bạn khơng làm bẩn giấy Bước 2: Dùng pipet Pasteur để bôi dải xuất thực vật cách đầu tờ giấy khoảng cm Để khô viết sọc lặp lại 10 lần Bước 3: Cho giấy sắc ký vào ống nghiệm chứa mL dung môi pha động Đặt giấy sắc ký cho đầu dải (nhưng đầu dải dịch chiết thực vật) ngập dung mơi Bạn làm điều cách móc dải giấy ghim cắm vào nút đậy ống Bước 4: Giữ cho cốc đậy kín khơng bị xáo trộn q trình di chuyển dung mơi Bước 5: Lấy dải sắc ký mặt trước dung mơi cách đầu dải vịng cm (tức sau 2-3 phút) Đánh dấu vị trí dung mơi phía trước bút chì đặt dải sang bên để khô Bước 6: Dùng thước để đo khoảng cách từ gốc sắc tố đến trước dung môi từ gốc đến dải sắc tố Tính số Rf cho sắc tố 23 7.3 Kết 7.3.1 Xác định đường khử phản ứng Fehling Ống nghiệm từ trái sang phải: glucose, giá, đậu xanh, tinh bột, nước cất 7.3.2 Phản ứng Xanthoproteic Ống nghiệm từ trái sang phải: dầu thực vật, nước cất, đậu trắng, mật ong, tyrosine, đậu xanh 7.3.3 Phản ứng Sundan III Có lớp chất màu đỏ lên phần ống nghiệm Ống nghiệm chia thành hai phần: phần nước phần hỗn hợp 24 7.3.4 Sắc ký giấy xác định thành phần sắc tố quang hợp Khoảng cách từ vị trí ban đầu đến Carotene (vạch vàng) 2,8cm Khoảng cách từ vị trí ban đầu đến chlorophyl a (vạch xanh lá) 2,5cm Khoảng cách di chuyển từ chấm ban đầu đến pha rộng 2,8 cm 7.4 Thảo luận giải thích kết 7.4.1 Xác định đường khử phản ứng Fehling • Ống nghiệm glucose chuyển sang màu cam ion copper bị khử phức chất • Ống nghiệm chứa giá đậu xanh có lượng đường • Ống nghiệm tinh bột nước cất khơng có tượng xảy khơng phải đường khử không tạo kết tủa chứng tỏ glucose đường khử 7.4.2 Phản ứng Xanthoproteic • Ống nghiệm nước đậu trắng ống nghiệm lòng trắng trứng không đổi màu chứng minh amino acid có chứa nhóm thơm tyrosine tryptophan • Ống nghiệm lòng trắng trứng xuất kết tủa phản ứng với HNO3 7.4.3 Phản ứng Sundan III • Do hỗn hợp sudan III lysochrome bám vào đậu phộng có lipid chuyển thành màu đỏ, dầu thực vật bị Sundan III nhuộm đỏ nhẹ nước nên lên phần 25 Vận chuyển qua màng 8.1 Giới thiệu Tất phân tử hiển thị chuyển động nhiệt ngẫu nhiên, động Một phân tử hồ tan có xu hướng di chuyển xung quanh dung dịch Chuyển động ngẫu nhiên không đổi, chuyển động ròng phân tử từ vùng có nồng độ cao đến vùng có nồng độ thấp tiếp tục phân bố phân tử đồng toàn dung dịch Sự khuếch tán quan trọng hấp thụ oxy trình thở phân phối chất dinh dưỡng muối vào khỏi tế bào Mục đích thí nghiệm: • Xác định hướng tốc độ khuếch tán tương đối phân tử có kích thước khác • Dự đoán chiều hướng tốc độ thẩm thấu vào tế bào bao bọc môi trường • Mơ tả dung dịch nhược trương, ưu trương ảnh hưởng đến thể tích tính • Quan sát ghi nhận tượng co phản co nguyên sinh • Cách xác định nồng độ dung dịch đẳng trương dựa tay đổi kích thước nhược trương, ưu trương, đẳng trương tồn vẹn tế bào máu tế bào thực vật 8.2 Quy trình: Quan sát tượng co nguyên sinh phản co nguyên sinh Bước 1: Dùng kim mũi mác tách lấy lớp tế bào biểu bì hành có màu đỏ đặt lên lame với vài giọt nước, đậy lamelle Bước 2: Xem kính bội giác nhỏ, tất tế bào có màu đỏ đồng Tại phía lamelle ta nhỏ giọt dung dịch KNO3 5% phía đối diện đặt miếng giấy thấm để rút nước Quan sát tượng, ghi nhận kết giải thích Bước 3: Sau đó, phía lamelle, nhỏ vài giọt nước cất phía đối diện đặt miếng giấy thấm để rút nước, lập lại vài lần, quan sát, ghi nhận tượng giải thích 26 8.3 Kết Hình 10 Hình ảnh tế bào co nguyên sinh Hình 11 Hình ảnh tế bào phản co nguyên sinh 8.4 Thảo luận giải thích kết Kết luận: Ta nhận thấy trước nhỏ KNO3 5% tế bào trương nước ngâm nước cất có màu đỏ đồng đều, sau nhỏ KNO3 5% tế bào nước, co lại có màu đỏ khơng đồng đều, chứng minh xảy tượng co chất nguyên sinh tế bào thực vật nước thấm từ tế bào môi trường ưu trương, tế bào chất co lại màng tế bào kéo khỏi thành tế bào Khi nhỏ thêm nước cất vào phía lamelle, tế bào trương nước có màu đỏ đồng đều, chứng minh có tượng phản co nguyên sinh Lúc nước từ mơi trường ngồi (mơi trường nhược trương) vào tế bào, làm tế bào căng nước, màng tế bào sát vào thành tế bào 27 Tách chiết DNA từ tế bào động vật 9.1 Giới thiệu • Tách chiết DNA thao tác thường xuyên quan trọng nhà sinh học phân tử Sau phân lập, DNA trình tự tiểu đơn vị xác định, thao tác thay đổi • Tách chiết DNA cần thiết cho loạt ứng dụng sinh học phân tử định danh loài, tầm soát bệnh di truyền, tầm soát đột biến, xác định tác nhân gây bệnh 9.2 Quy trình Bước 1: Phân hủy mẫu sinh học Dung dịch ly giải Bước 2: Thêm μL Dung dịch Proteinase K trộn máy lắc rung vortex Bước 3: Ủ mẫu Máy lắc nhiệt 55 oC 900 vòng/phút tiếng Bước 4: Sau ủ 55 oC, làm nóng lọ 95 oC Bể cách thủy 10 phút để Proteinase K bị bất hoạt Tách chiết nucleic acid Bước 5: Cho thể tích dung dịch phenol/chloroform/isoamyl alcohol Bước 6: ly tâm ống 14,000 vòng/phút 10 phút Kết tủa DNA Bước 7: Chuyển lớp qua ống eppendorf Bước 8: Kết tủa DNA cách thêm 300 μL isopropanol 100% làm lạnh (được giữ tủ đông -20 oC) Trộn cách lật ống nhiều lần, nhìn thấy kết tủa * Có thể nhìn thấy kết tủa Bước 9: Ly tâm ống 14,000 vòng/phút phút * Nếu dễ dàng nhận thấy lượng lớn DNA cắn sau ly tâm ngắn ( phút ), thời gian ly tâm dài không cần thiết Ngược lại, DNA chưa nhìn thấy dự kiến có lượng nhỏ DNA, tiếp tục ly tâm tối đa 10 phút Bước 10: Loại bỏ phần phía thêm 300 μL ethanol 70% Bước 11: Ly tâm 14,000 vòng/phút phút *Trước tiến hành ly tâm, đảm bảo viên DNA không bị dính vào thành nắp ống Bước 12: Loại bỏ phần phía cách hút micropipette (tốt với đầu lọc) để cắn DNA khô tốt Bước 13: Để khô ống không khí khơng nhìn thấy giọt chất lỏng 28 Bước 14: Hòa tan lại cắn DNA 100 μL dung dịch bù nước ưu tiên (tức dung dịch TE) Bước 15: Ủ 65 oC Thỉnh thoảng nên gõ nhẹ vào đáy lọ Bước 16: Để ống 4oC qua đêm cho hoạt động trở lại hoàn toàn *Tại thời điểm này, lọ chứa dung dịch DNA bảo quản −20oC để bảo quản thời gian dài giữ oC cho trình sử dụng 9.3 Kết Hình 12 Hình ảnh cắn DNA 9.4 Thảo luận giải thích kết • Ta thu kết cắn DNA phân lập từ tế bào động vật 29 10 Tách chiết RNA toàn phần từ 10.1 Giới thiệu • RNA (ribonucleic acid) đại phân tử có tế bào sống nhiều loại vi rút, bao gồm chuỗi đơn dài đơn vị photphat ribose với gốc nitơ adenin, guanin, cytosine uracil, liên kết với đường ribose RNA sử dụng tất bước tổng hợp protein tất tế bào sống mang thông tin di truyền nhiều loại virus • Việc phân lập RNA với chất lượng cao bước quan trọng cần thiết để thực thí nghiệm sinh học phân tử khác 10.2 Quy trình Bước 1: Tạo dung dịch đồng • Cắt nhỏ (0,5g), nghiền mẫu chày cối • Chuyển bột (sử dụng đầu pipet) vào ống eppendorf có chứa 1mL dung dịch TE trộn kỹ • Ly tâm hỗn hợp phút, tốc độ tối đa (tốt 4°C nhiệt độ phịng • Chuyển 500 μl phần phía vào ống eppendorf máy lắc rung được) Bước 2: Phân tách pha • Thêm 500 μl dung dịch TRIzol, lắc mạnh ống tay 15 giây, để nhiệt độ • Ly tâm hỗn hợp với tốc độ 5000 vòng/phút phút (để tránh bị đổ mở nắp) • Thêm 200 μl dung dịch cloroform vào hỗn hợp, lắc kỹ, để nhiệt độ phịng phút • Ly tâm hỗn hợp 10 phút, tốc độ tối đa (tốt 4°C nhiệt độ phịng • Chuyển 500 μl pha nước phía vào ống eppendorf phòng 10 phút được) * Sau ly tâm, hỗn hợp phân tách thành pha phenol-cloroform màu đỏ dưới, pha pha nước phía khơng màu RNA cịn lại pha nước Bước 3: Kết tủa RNA • Thêm 500 μl isopropanol, trộn kỹ, để nhiệt độ phòng ttrong 10 phút 30 • Ly tâm hỗn hợp 20 phút, tốc độ tối đa (tốt 4°C nhiệt độ phòng • Loại bỏ phần phía được) Bước 4: Rửa RNA • Rửa cắn RNA mL ethanol 70% Gõ nhẹ vào ống viên bột rời khỏi đáy • Ly tâm hỗn hợp phút, tốc độ tối đa (tốt 4°C nhiệt độ phịng • Loại bỏ phần dịch phía pipette p1000 • Ly tâm lần phút, tốc độ tối đa • Loại bỏ tất phần phía pipette p100 • Làm khơ viên khơng khí nhiệt độ phịng (Mở nắp ống 1,5 ml, để giá, đậy ống được) ống kim loại) 30 phút Bước 5: Hịa tan RNA • Hồ tan cắn với 40 μl nước cất • Bảo quản RNA tủ lạnh sâu -80°C 10.3 Kết • Thu cắn RNA 10.4 Thảo luận giải thích kết • Thuốc thử TRIzol thuốc thử sử dụng sẵn sử dụng để phân lập RNA từ tế bào mô Việc bổ sung cloroform, sau ly tâm, phân tách dung dịch thành pha nước pha hữu RNA cịn lại pha nước • Sau chuyển pha nước, RNA phục hồi cách kết tủa với isopropyl alcohol Nhưng DNA protein phục hồi cách phân tách sau loại bỏ pha nước Sự kết tủa ethanol cần có DNA từ giai đoạn kết tủa bổ sung với rượu isopropyl cần protein từ pha hữu RNA tổng số chiết xuất thuốc thử TRIzol không bị nhiễm protein DNA RNA sử dụng phân tích Northern blot, dịch mã ống nghiệm, chọn lọc poly (A), xét nghiệm bảo vệ RNase nhân phân tử 31 11 Kết luận Qua thí nghiệm chúng em trực tiếp quan sát tế bào, biết cách sử dụng dụng cụ thí nghiệm học phản ứng thú vị sinh học phản ứng xác định đường khử Fehling ứng dụng việc chuẩn đoán bệnh tiểu đường, 12 Nhận xét giáo viên Nhận xét Điểm Hình thức /2 Nội dung /6 Ý nghĩa /2 Tổng điểm 32 More from: Thí nghiệm sinh học đại cương H01212 Đại học Tôn Đức Thắng 9 documents Go to course Giáo trình Thí nghiệm SHDC 61 Thí nghiệm sinh học đại cương None Giáo trình Thực hành Vi sinh vật 67 học Phần 991022 Thí nghiệm sinh học đại cương None Hdh - Noth Thí nghiệm sinh học đại cương None 2023-11 NỘI QUY KIỂM TRA RÈN LUYỆN THỂ LỰC Thí nghiệm sinh học đại cương None Recommended for you Case Study - Starbucks Philippines - Chapter The flower… Service Marketing 100% (1) jhauhígvcụihơkjkláN√jhvcauigyvhihụ hsuiHỤABHS Service Marketing 100% (1) TFM The contrast of Fast Fashion 85 giants Zara, H M and Uniqlo Service Marketing 100% (1) KNTGreen Cup - HDNSV 26 Tai Chinh Ngan Hang 100% (2)