Nghiên cứu tính đa hình của một số gen liên quan đến loãng xương ở nam giới

Tuy nhiên, tỳlệgày xương do loâng xương và ty lệchết trong năm dầu sau gày xương ờ namgiới cao tương đương thậm chi cao honso với nửgiới2.Vi vậyviệc xảc định các yếu tố nguy cơ gây loăng

NGƯYẺNTHỊ HOA

NGHIÊN CỨU TÍNH ĐA HÌNH CỦA MỘT SÓ GEN LIÊN QUAN ĐÉN LOÃNG XƯƠNG Ở NAM GIỚI

Ngành đào tạo : Nội Khoa

LUẬN ÁN TIÉN Sỉ Y HỌC

Ngườihướngdầnkhoahọc:

1 TS NGVYẺN THỊ THANH HƯƠNG

2 PGS.TS TRÀN THỊ MINH HOA

HÀ NỘI-2023

Trong suổt quà trinh thực hiện dề tài này tòi dà nhận dược rầt nhiều Sự giùp dờ cùa Lành dạo cơ quan, các d(m vị Thầy Cô dồng nghiỳp, càc bệnh nhàn, bạn hè và gia dinh thân yêu cua minh

Trước hết tòì Xỉn bày to lòng n i ân sâu sẳc tới TS Nguyễn Thị Thanh /lương và PCS TS Trần Thị Minh Hoa là những người thầy, người hướng dẫn khoa học dã tận tình giúp dở dộng viên tôi n ong suồt quà trình học tập trực tiểp hướng dẫn tòì thưc hiện nghiên cứu, góp ý và sưa chữa luận án TÒI xin bày tõ lòng biềt ơn tài Viện nghiên citu y học Dinh Tiên Hoàng, quỳ Nafosted dà tài trợ nguồn lanh phi vã tụo diều kiện cho tòi trong qtiã n inh nghiên cini và hoàn thành luận ân này

TỎI xin bày tô lòng biết ơn và sự kinh trọng lởi các thầy, cỏ và toàn the cán bộ, nhãn viên Rộ mòn NỘI Tông Hợp Trường Dụt hoc Y Hà Nội dà d(iy dỗ

và giúp dởtói n ong Smit qiưi n inh học rộp và hoàn thành luận (ìn

TỎI Mil chân thành cám ơn toàn thế cân bụ nhân viên khoa Cơ Xương khừp bệnh viện Hữu Nghị nơi tôi công lác dã lạo niọi diều kiện thuận lợi vã tận tình giúp dởtòi trong suổt quá trình học tập và hoàn thiện luận (in

TỎI xin bây to lòng biềt (m và sự kinh trọng dổi vón PGS TS Lê Vàn Dí) chu nhiỹm bộ mỏn Miễn Dịch Sinh Lỵ bệnh dà giúp dờ lỏi trong quà trinh nghiên cữu và hoàn thành luận (in nà)'.

Xin dược gưi lởi cám ơn dền cãc bệnh nhàn cùng gia dinh cua họ dà giũp tòi có dưực các sổ liệu trong luận án này.

Cuối cùng, tòi xin ghi nhớ công ơn sinh thành, dường dục cua bồ mợ tòi cùng sự ung hộ dộng viên cua chồng, hai con dã luôn ớ bẽn tòi là chồ dua vừng chắc dế tòi yén râm hục tập và hoàn thành luận án.

Hà NỘI, ngày 10 tháng OS nâm 2023

Nguyễn TI1Ị Hoa

TòilàNguyềnT11Ị Hoa nghiên cửu sinh khóa 35 Trường Dụi họcYHà

Nội chuyênngànhNộixươngkhớp, xin cam đoan:

1 Dãy lã luậnân do ban thân tôi tnrc tiềpthựchiện dưới sự hướng dần cua

TS NguyềnThị Thanh Hương và PGS.TS Trằn ThịMinhHoa

2 Còng trinh náy không trùng lập với bấtkỳnghiên cửu nào khác dàdượccông bổ tại ViệtNam;

3 Các số liệu vãthông tin trong nghiên cửu là hoàn toàn chinh xác trung

thực vã khách quan, dà được xác nhận vã chắp thuận cua cơ sờ nơi

Dualenergy X-ray Absorptiometry

Fat mass obesityassociated

GenomeWideAssociationstudy:

Nghiên cứu tư<mg quantoànhộ gen

Homocystein

LowDensity Lipoprotein Receptor:

Thụ the lipoprotein trọng lượngphàn tư thắp

LowDensityLipoprotein Receptor related protein 5Loăng xương

Mật dộ xưtmg

Methylene tetrahydro folate reductase

Peak Bone Mass Density mật độ xương dinh

Receptor activeof nuclear factor kappa ligand

Reverse mutation primer

Reverse wild type primer

Single Nuclcotid Polymorphism (Đa hìnhđơnNuclcotid)

Transforming Growth Factor: yếutốtảngtrương

World Health Organization

CHƯƠNG I TÒNG QUAN •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••■•••••••••a 3

I I Đại cương về loàng xương 3

I I I.Dịnh nghĩa loãngxương 3

1.1.2.Dịch tề họcloăngxương nam 3

1.1.3 Chân đoản loãng xương 4

1.2 Cơ che bệnh sinh loảngxươngờnam giói 5

1.3.Đa hình đơn nucleotide 8

1.3.1.Khái niệm về đa hình đơn 8

1.3.2 Các loạiSNPs 10

1.3.3 Vai trò và ứngdụng cua SNPs trong Yhọc 10

1.3.4 Một số phươngphápxácdinhkiêu gen cua da hình dơn nucleotid 11

1.4 Vai tiõ cua gen \mỉFR LRPỹvãFTOđối với loăngxưong vả gày xương 15

1.4.1 Vai trò của gcn nóichungdốivới loảng xương 15

1.4.2 Vai trò cua gcnLRPĨ dối vớiloãng xương 18

1.4.3 Vai trò cua genMTHFRdổi với loãng xương 23

1.4.4 Vai trò cua genFTO dối với loàng xương 27

1.5 Một số nghiên cứu lãmsàng về gen liênquanvới loãngxương và gãy xương ơ namgiới 29

1.5.1 Các nghiêncửutrênthe giới 29

1.5.2 Các nghiêncứuỡViệtNam 35

CHUÔNG 2 DÕI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHẤP NGHIÊN cứu 37

2.1 Địa diêm và then giannghiên cứu 37

2.2 Dồitượngnghiêncứu 37

2.2.1 Nhỏm bệnh 37

2.2.2 Nhóm chúng 38

2.3.2 Cờ mầu và phươngphápchọn mầu 38

2.3.3 Các chi số.biển sổ nghiên cứu vàtiêu chuân đánh giá 40

2.3.4 Phươngtiện nghiên cứu 43

2.3.5 Các bướctiếnhànhnghiền củu 44

2.4 Sơđỗ nghiên cửu 53

2.5 Sai sỗ và cách khổng chếsaisớ 54

2.6 Phươngphápphântích số liệu 54

2.7 Vấn đề đạo đức cua nghiên cứu 56

CHƯƠNG 3 KÉT QVẢ NGHIÊN củv 57

3.1.Đặc diêm chung cua đốitượngnghiêncứu 57

3.2 Dặc điềmđa hình geìt LRP.ỹ Q89R (rs41494349), MTHFRC677T (rsl801133) và/TOrsl 121980 61

3.2.1 Kctquaphântíchcác da hình gen 61

3.2.2 Dặc điểm kiểugen cua 3 đa hình gen LRP5 Q89R (rs41494349) MTHFRC677T(rs 1801133) và FTO rs 1121980 68

3.3 Mốiliênquancúa 3 dahình trên cácgcn nghiên cứu với loàng xương nam giới 75

3.3.1 Mối liên quan giữa đa hinh gen LRP5 Q89R (rs41494349) với loàng xương nam giới 75

3.3.2 Mối liênquangiừa đa hình genMTHFR C677T (rsl801133) với loãng xương ỡ nam giới 77

3.3.3 Môi liênquangiừa da hìnhgenFTO rsl121980 với loàng xương ỡnamgiới 79

3.3.4 Sựkết hợp củacác đa hĩnhgcncua 3 genLRP5Q89R(rs41494349) .\fTHFRC677T (rsl801133) và FTO rsl121980với loãng xương ờnam giới 80

3.4.2 Liên quan giừa các đa hĩnh gen và một sổ yếu tố nguy cơ với

loãng xương 87

CHƯƠNG 4 BÀN LUẬN 91

4.1 Dặc diêm chung cuadốilượngnghiêncứu 91

4.2 Bàn luận về dặc diem các da hĩnh gen LRP5 QS9R HS41494349) MTHFR C677T(rs1801133) và FTO rs 1121980 97

4.2.1 Bàn luận về phân bố tần số alen vàkiểu gen cùa da hình gcn LRPi Q89R rs41494349 98

4.2.2 Bân luận ve phân bồ alen vã kiêu cùa đa hình gen MTHFR C677T(rs 1801133) 101

4.2.3 Ban luận về phánbốalenvàkiêu cua da hìnhgen /Tơ rsl121980 105

1.3 Bàn luận về mỗi hênquan giừa dahình gen và các yếu tồ nguy cơ loàng xươngơnamgiới 108

4.3.1 Mối liài quangiừa đa hìnhgcnLRPĨ QS9R(rs41494349) MHIFR C677T (rslSOl 133) và FĨO rsl 121980 vớiloãngxương ơ namgiỏi trong mô hình kiêm địnhdơn biến 108

4.3.2 Tươngtác gcn vàcác yếu tố nguy cơvới loàng xương trong mô hĩnh kiêm định hồi quy tuyến tínhda biến 117

4.3 Hạn chế cua dể tài 123

KÉT LUẬN 124

KHUYẾN NGHỊ 126 DANH MỤC CÁC CÓNG TRÌNH NGHIÊN cứt 1 DÃ CÔNG BÓ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN

TẢI LIỆU THAM KHÁO

PHI, LỤC

Báng 2.2 Tiêu chuẩn chắn đoán loãng xươngdoWHO đề nghị 42

Bang 2.3 Nhùng mỏ hình di truyềngia dinh cúa 3 SNP nghiên cứu 55

Bang 3.1 Dặc diem về tuổi của nhõm nghiên cúu 57

Bang 3.2 Dặc diêm chiềucao cân nặng và chi số BMI cua nhõmbệnhvà nhỏmchúng 58

Bang 3.3 Dặc diêmtiền sử hút thuốc, uống rượu, nơi sổng và trinh độ học vấn cùa dổi tượng nghiên cứu 59

Bang 3.4 Dặc diêm tiền sư gày xương và mứcđộhoạt động thêlực 60

Bàng 3.5 Dặc điểm MDX theonhóm tuổi 60

Bang 3.6 Phân bốcáckiềugenI.RP5 Q89R (rs41494349) 68

Bàng 3.7 Phân bó da hình gen LRP5 Q89R (rs41494349)theo tinh trạng loãng xương tại vị tri cố xương dùi 69

Bãng 3.8 Phàn bỗ da hình gen LRP5Q89R (rs41494349)theo tinh trạng loàng xươngtại vị tridầutrênxươngđùi 69

Bang 3.9 Phân bốda hình gen LRPỹ Q89R (rs41494349)theo tinh trạng loàng xươngtại vị tricột sống thắt lưng 70

Bang 3.10 Phân bố các kiêu gen \ITHFR C677T (rsl801133) ơ nlióm bệnhvà nliỏin chúng 70

Bang 3.11 Phân bố da hình gen MTHFR C677T (rsl801133) theo tinh trạng loãng xươngtại vị tri cỏ xươngđùi 71

Bang 3.12 Phân bổ đa hĩnh gen yrn/FR C677T (rsl801133) theo tinh trạng loàng xươnglại vị tri dầu trên xương đùi 71

Bàng 3.13 Phân bổ da hình gen MTHFR C677T (rsl801133) theo tinh trụng loãng xương lại vị tri cột sống thắt lưng 72

Bang 3.14 Phân bốcáckicugenFTO ơ nhỏm bệnh và nhỏm chủng 72

Bang 3.15 Phân bố da hình gcn FĨO rsl 121980 theo tinh trạng loãng xương tại vị tri có xương dùi 73

Đàng 3.16 Phàn bỗ da hình gen FTO rsl121980 theo tinh trạng loãng xương tại vị triđầu trên xươngdùi 73

Bang 3.18 Mối hèn quan cua LRP5 Q89R rs41494349 với loãng xương

namgiới trong các mỏ hình di truyền 75

Bang 3.19 Mối liên quan giữa da hình genLRPH Q89R rs41494349 với

loâng xương namgiớitheo từng vị trí 76

Bàng3.20 Mối liênquangiữa đa hĩnhgen MTHFRC677T (rs!801133)

với loăngxươngnamgiới trong mô hỉnh di truyền 77Bang 3.21 Mơi hèn quan giữa đa hình genMTHFR C677T (rslSOl 133)

với loàng xương ớ namgiớitheo từng vị trí 78

Báng 3.22 Mỗi liên quan giừa da hình gen FTO rsl 121980 với loảng

xương ởnam giới 79

Bàng 3.23 Sự kết hợp cáckiêugenơ 3 gcn liênquanden loàng xương ớ

namgiới 80

Bang 3.24 Mối liênquangiũachisốBM1.chiêucao cân nặng với loãng

xương ờ nam giới 81

Bàng 3.25 Mối liên quan giừa hoạt động the lực thói quen hút thuốc,

uổngrượu với loãng xương ỡnam giới 82

Bang 3.26 Mơi liên quan giừa trình độhọc vấn khu Vực sinh sống với

loàng xương ứ nam giới 86

Bàng 3.27 Liênquangiữa da hĩnh 3 gen và cácyelltố nguy cơ với loăng

xương trong mờ hình kiêm định hơi quy tuyên linhda biền 87Bang 3.28 Mỏ hĩnh hồi quy logistic da biến kiêm định mơiliênquangiừa

loãng xương cô xương dùi với 3 da hình gcn và các yểu tố nguy cơ khác 88

Bang 3.29 Mỏ hình hồi quy logistic da biến kiêm định mơi liên quan

giừa loàng xương đầu trên xương đùi với 3 đa hình genvã các

yểu tổ nguycơ khác 89

Báng 3.30 Mò hình hồi quy logistic da biến kiêm định mối liên quan

giữa loãng xươngcột songthat lưng với 3 da hìnhgen vã các

yếu tố nguycơ khác 90

Sơdồ 2.1 Chu kỳ nhiệt cua phán ứng PCR cùa LRP5 Q89R 48

Sơđỗ 2.2 Chu kỳ nhiệt cua phan ứng PCR /Tỡrs] 121980 49

Sơđồ 2.3 Chu kỳ nhiệt cùa phan ứng PCR cua MTHFR C677T 51

Biêu đồ 3.1 Phảnbốtheonhỏm tuối cùa đối lining nghiên cini 58

Biểu dỗ 3.2 Loàngxươngtheo vị tri 61

Biéu đồ 3.3 Sổ vị tri loàng xương 61

Biểu dồ 3.4 Tương quangiừa tuồi và MDX cỗ xươngdùi 83

Biêu đo 3.5 Tương quangiừa tuôi và mật độ xương đau trên xương đùi 84

Biêu dồ 3.6 Tươngquangiữa tuổi và MDX vị trí cột sống thát lưng 85

Biêu đồ 4.1 Ty lộ kiêu gen LRP5Q89R trong một số nghiêncứu 100

Biêu dồ 4.2 Tằn suấtalenGtại một sỗ nơi trên thegiới và Việt Nam 101

Biêu dồ 4.3 Sựphânbốkiêu gen cũa đa hinh MTHFR C677T (rslSOl 133) ớ một sốcộngđồng 103

Biều dồ 4.4 Tầnsuấtalen T cua da hình gen MTHFR C677T 104

Biêu dỗ 4.5 TầnsuấtalenA cua da hĩnhgenFTO rsl 121980 107

Hĩnh 1.2 VịtiigenLRP5 trên nhiễm sảcthê số 11 18

Hình 1.3 Con dường tin hiệup catcnin Wnt 19

Hình1.4 Cấu trúcphàntư protein LRP5 21

Hình 1.5 Vị tn genMTHFRtrên nhiễm sắcthe số 1 23

Hình 1.6 Sơđồquá ninh chuyềnhóacũaMTHFR 24

Hình 1.7 Cơ chề tác dụng cứa Homocystein lênxương 25

Hĩnh 1.8 Vị tú và cấu trúc genFTO trênnhiêmsắcthê 16 27

Hĩnh 2.1 Sơdồquy trinh nghiêncứu 53

Hình 3.1 Hinh ánh điện di sán phàm cấtđoạncùasnp rs41494349gen LRP5 62

Hình 3.2 Ket quagiai trinh tự gcn cua SNPLRP5 Q89R 63

Hĩnh3.3 HÙ111 anh diện di san phàm cắt đoạn cua rsl 121980genFro 64

Hĩnh 3.4: Kct quagiai trinh tựgen cua snpFTO rsl121980 65

Hinh 3.5 Hinh anh điện di cua snp rs241494349 gen MTHFR 66

Hình 3.6 Kcl quagiai trinh tự gen cua snpMTHFR C677T 67

ĐẠT VÁN ĐÈ

Loãng xương (LX) lã bệnh lý do rổi loạn chuyên hóa cúa xương, dặc

tnrng bơi giâmmật độ chất khoáng cua xương và tồn thươngcấu trúc củaxương,hậuqua lá suy giam sức mạnh cua xương và khiến xươngtrớ nén giòn

vàdễ gày1 Trong suốtmột thời gian dài loãng xương dược coi là bệnh đặctrung cua phụnừ mà chưa có nghiên cứu thích dáng trên dốitượngnamgiới

Týlệ loảng xương ơ nam giới giao động từ 8-15% bằng 1/3 so với nừgiới.Tuy nhiên, tỳlệgày xương do loâng xương và ty lệchết trong năm dầu saugày xương ờ namgiới cao tương đương thậm chi cao honso với nửgiới2.Vivậyviệc xảc định các yếu tố nguy cơ gây loăng xương ơnamgiới nham dưa

ra chắn đoánsớm,diềutrị kịp thin là cần thiết đê kiêm soát bệnh loàng xương

nham lâm giám nguycơgãy xương

Loàngxương lã bệnh lý da yểu tổ, ơ nam giới người tathầy có nhiều yểu

tồlàmtảng nguycơ loàng xươngnhư chúng tộc.suy giam hoạt động cùa trục

hóc môn sinh dục dưới dồi - tuyến yên đo tuổi cao giâm hoạtdộngthelire,chề

độ dinh dưỡngkẽm tinh hạng hút thuốc lá.uống rượu vã mac các bệnh lý cóanh hưởngđen chuyên hóa xương Trong dó yểu tồ di truyền chiếm một vị tri

kha quan trụng, theo nhiều nghiên cứu các cập songsinh và pha hệ cho thấy50% 85% sự biếndôi MĐX (Bone Mineral Density Mậtđộxương) là do

gcn quyđịnh* Các nghiên cửu trên the giới dàpháthiệnra nhiêu da hìnhđơn

nucleotid (SNP: Single Nucleotid Polymorphism) cua nhicu gcn liênquan đen

sự thay dôi cua mật dộ xương và gày xương (VDR, LRP5 Q89R LRP5

X và cộng sự4 tiến hành nghiên cứu phân tích gộp 512 nghiên cứu GWAS

trên thểgiới trong vòng 12 năm (trẽn cà dối tmnig namvà nữ) dã phát hiệnđược lông sổ 518 locus ánh hương đềnMĐX và 13 locus anh hường đến gày xương, nhưng chi 20%các da hĩnh gcn trong nghiên cữu giai thích dược cơ che anh hương cùa nó dền MDX vàgãy xương

FTOrsi121980 có liênquan dền sự thay dối cua mậtđộxươngvàgâyxương

ờ nhiều chúng tộc khác nhau Tuy nhiên kết quá không dồng nhất giữa cácchungtộc Trên quầnthe người ViệtNamchí có 1 nghiên cứu cua tácgiáHồPhạm Thục Lanvà cộng sự tiền hành nghiên cứu phân tích 32 SNP cua 29

gen dã timthay mồi liên quan cùa nó vớiloãng xương và gàyxương ớ người

da trắng Kồqua nghiên cứu chothấy chi có 3 SNP:SP7IS2016266 ZBTB40

JS7543680và MBL2/DKK1 rs1373004 làm giam mậtđộxương một cách có ýnghĩa Hiện tại chưacó nghiên cứu não tién hành trên 3 da hình gen LRP5

Q89R (rs41494349) MTHFRC677T(rs1801133)vỡFTO rsl 121980 trên dốitượngnam giới Việt Nam Do vậychúng tòi thực hiện đề tài: “Nghiên cứutinh da hìnhcủa mộtsổ gen liên quan den loãngxươngỡ nam giói ” vớimục tiêu:

1 Xác dịnh (ỉa hình gen Ỉ.RP5 Ọ89R (rs41494349), MTHFR C677T (rsỉ801133) và FTO rsỉ 121980 ờ nam giới loãng xương nguyên phát.

2 Phân tích mồi liên quan gii'ra da hình gen LRP5 Ọ89R (rs41494349), MTHFR C677T (rsl801133), FTO rsl 121980 vói mật dụ xương và một số yểu tổ nguy cơ ớ dổi tượng trên.

CHƯƠNG 1

1.1 Đại cương về loãngxương

1.1.1 Định nghĩa loãng xưưng

Theotồ chức ytéthếgióiWHO(1993) loãng xươngđược định nghĩa là

“mộtbệnh đậc tnmgbới MĐX thấpvã tốn thương vi cầu tnìc cua xương gày

ratáng tinh dềgày cứa xươnghậuqua lã tâng nguy CƯ bị gãy xương*’5 Nám

2000 Viện Y học quốc gia Hoa Kỳ (National Institute of Health)6 đà đưa ra

một định nghĩa khác về loãng xương dựa trên những đồng thuận cao cua các

chuyên gia: loãng xương là mộtrốiloạn cua xương dặc trưng bơi sự giam sức

mạnh cua xương dần den tâng nguy cơ gãy xương, trong dó sức mạnh cùa

xương dược dục trưng bờihai yếu tổ chinh: MĐX vàchấtlượng xương MĐX

được tinh bờiđộ khoáng hỏa cua xương trên một đơn vị thê tích Chất lượng

xương dược đánh giá bới các thông số: cấu trúc cùa xương, chu chuyênxương,dộ khoáng hóa.tôn thương tích lũy.tínhchất cùa cácchất cơ ban cùaxương.Trongdó chu chuyênxương giử một vai trỏ quan trọng

l.ỉ.2 Dịch tễ học loãng xưưng nam

* Trẽn thểgiói: Ty lộ loàngxươngnamkhácnhau tùy theo tùng nghiêncứu dao dộng từ2-16% và tăng dằn theođộ tuồi, tỹ lệ loãngxươngcuanamthường thấp hơn nừ từ 2-4 lần Nghiên cứu NHANES 2005 2006s đượcthựchiện bơi Trung tàmThống kẽ Y teQuốcgiaMỳ trẽn 3.157 người Mỳ trướng

thanh từ50 tuổi trờ lên dược do MĐX tại 2 vịtri cổ xương đũi và toàn bộxươngdùi.kết qua cho thấy49%phụnử lỏn tuổi và30%dân õng lỏn tuổi bị giam MDX Ư cò xươngđùi ly lệ loãngxương ờ phụnữ là 10% và tý lệ loãngxương nam là2% Trong một nghiêncứu khác tại nước này tiến hành ớnamgiớitừ69đen 74 tuồi týlệ loãng xương 10,2%9 ỚThụySĩ tý lệ loãng xương

là 6.3% ơ nam trong độtuồi từ50 - 80 tuồi,ty lộ nãy ơ độ tuồi từ80 - 84 là

I6.6%!O ó mộtsố nước Châu Á tý lộ loãng xương ờ nữ cùng cao hơn namtương tự nhưngườidanang.Nghiên cứu tiếnhànhtrên 7.042 ngườiđộ tuổi tử

20trờ lên ờ 10trưngtâmthuộccác tình khácnhauờ Trung Quốc(2002-2006)

cho kết qua tỳ lệ loẫng xươngờnừ lá 31.2 % và 10,4% ờ namgiới trên 50”

Tại Hồng Kông tylệloàngxươngcột sồng that lưng ỡ namlà7% ớ nừ lã 37%,

ty lệ loâng xương ớ cô xương dùi ờnam lá 6% và ữnừ là 16%*- B OHànQuốc ty lệ loảng xương lã 35.5% ơnừ và 7.5%nam trẽn 50tuổi14

* Tại Việt Nam: Nghiêncứu cua các tác gia ư hai miền Nam Bấc đãchothấyti lộ loãng xương ở cá namvànữtương dương vớimột sỗnướcchâu

Ả vã người da trắng” 16 dặc biệt trẽndồi tượng ngườicao tuồi Theo sổ liệu

cùa NguyenThị Thanh Hươngtại mien Bắc - Việt Nam nghiên cúu trẽn 222

namgiới vã 612 nữ giới khóe mạnh tuổi từ 13-83,tỳlệ loãng xương vị trícốxương dùi ơnamgiới lã9% và nữgiới lã 17%” Nghiên cúu cua tácgia Lẽ Dùng vãcộng sự khaosãt trên 325người cao tuổi tại cần Thơ cho thấy ty lộ loàng xương namgiới trên 60 tuổi chiêm 17.5%r Nghiên cứu cuatác gia Hỗ Phạm Thục Lan vàcộng sự trẽn 357 nam và 870 nừ tuổi tử18-89tại Thành

phóHồ Chi Minhchokếtquatý lộ loãng xương namlà 10% trong khi tỷ lộ

loàng xương nữlã30%16 Nhưvậy có the thảy rangloãng xương thực sự làbệnh phổbiền lại ViệtNam Hơn nữabệnh thường lientricn âm thầm, không

có triệu chửng, phần lớn chi chắn đoán sau khi có biêu hiện gãy xương trên

lâm sàng Do vậy việc xác định sớmcác yếu tố nguy cơ loãng xương dê dự

phònglã vòcùng cần thiết, đặc biệt dối tượng nam giới là nhóm dối tượng

chưa dượcquantàmnghiêncứuthíchdáng

ĩ 1.3 Chan đoàn loãng xương

Hiện nay phươngpháp tot nhắt dê chan đoán loàng xương là do mậtdộkhoángxươngbằng phương pháp hấp thụtia Xnâng lưụng kép (DXA -Dual

energy X-ray Absorptiometry)1819 Mật độ xương là lượngchất khoáng cùa

xương đượcchia cho diệnlích vùng đượckhao sát CụthèmáyDXAước tinh

khối lưọngchất khoáng (bone mineralcontent BMC), tinh diện tich mà khối

chầt khoáng dóđược do.và lấy BMC chia cho diện tich Bơivậy đơn vị dolường MĐX đo bang máy DXA là g/cnr Sau khi đo MDX, đế chắn đoán

loãng xươngngười ta so sành MDX hiện tạivớigiátrị MDX nungbinh cùaquần thê trong độ tuói20-40 (khói lượng xương đinh - KLXĐ) Kết quá cua

so sánh này lã chi sô T(T-score) Chi sô T trong thực tèlà so do lệchchuân(SD-Standard Deviation) cùa MDX hiện tạivới KI.XII

Một ngườidược chân đoán loãng xương nếu chi sổ T nhỏ hơn hoặc bang-2.5 giám mậtđộxương nếu chi so T từ lởn lum -2.5 đen dưới -1.0 và mậtdộxương binh thường nếu chi sổ T là km lum hoặc bang-1.0 Mậtdộxươngdàđượcchứngminh là có liênquandền sức mạnh cùa xương vả là mộtcôngcụ

dự báo tốt nhất nguy cơgàyxương trong tương lai Dođó nguy cơgàyxươngtâng theo cẩp số nhân khi MDX giâm Tố chứcY tế Thế giới khuyên cáo cốxương đùi làvùng giái phàuquan trọng nhất dè chân đoán loàng xương Tuy

nhiên hướng dần cua hiệphội quốc te và một độxương làmsàng(1SCD)vàHội loàng xương Hoa Kỳ (NOF) đưa ra khuyêncáo: chân đoán loàng xương

nên dựa trên phép đo mật độ xương tại ba vị tri là cô xương dũi đầu trênxương dũi và cột sổng thắt lưng Ngoài ra MĐX tại vị tri một phần ba dưới

xương quay có thêđược áp dụng de chân đoánloàng xương nếu3 vị tri trẽnkhôngthêdodược:o

1.2 Cơ chế bệnh sinh loãng xương ờ nam giói

Cơ che sinh bệnh hục cua loãng xươngnam giới rẳtphứctạp có sự tham

gia cua nhiềuyểu tố trong dó phai kê dến các yểu tốchinh sau: Khối lượng

xương dinh (KLXD)dạt dược, quá trinh mất xương sau khi dạtdược KLXD

vã loàng xương thứ phát Ty lộ loăng xương ơnamgiới thườngthấp h<mnừgiớido có sự khác biệt trong ca hai quảtrình: hình thành KI.XD và quá trinhmấtxươngtheo thời gian

* Khối lượng xương dinti(KLXD)hay sự Inning thành cùa hộxương

Khối lượng xương đinh được định nghĩa lã khối lượng xươngtơi đa cua

mỡ xương đạtdược khi kết thúcgiai dơạn trướngthành KLXĐ có mộtvaitrỏrất quan trọng vi nó lá một trong hai yểu tốcơ băn quyết định khối lượng

xương cuatoànbộ khung xương khikếtthúcgiaiđoạn trướng thành Bởi vậy

KLXĐ cùng là một yêu tô anh hưởng đen loãng xương sau này Người cỏ

KLXĐ cao ớ tuối trướng thành sẽ ít nguycơ loãng xươnghơn với ngườicỏ

KLXĐ thấp Trong quá trinh tãng trướng có sự khác biệt khá kin về kích

thước cùa khung xương và KLXĐ ớ haigiới Tốc độhình thành xươngcao ớ

xưngquanhtuổidậythi hếttuổidậy thi khối lượngxương đạt so - 90%sovới khung xương trướng thành'1" Dưới tác động nội tict tố androgen,

hormon tàng trưởng (OH)và yếu tố tàng trương giống insulin (IOF-1) lãmcho kích thướckhung xương ơnamgiới trưởng thành lớnhơn nữgiới,điều

này dà dượcchimeminh quanhiềunghiên cứu'5:4 Theo Lawrence B Riggs nghiên cửu MĐX và diện tích xương ơ 373 nừ và 323 namtuổitừ20-90chokếtqua: Ớtuổi trường thànhnam giói có diệntíchxươnglớnhơn35-42%sovớiphụnữ ' Mật khác nam có KLXĐ cao hơnnữ Kl.XD cố xương dùi nam

cao hơn nữ từ 12% - 14% tùy theo từng nghiên cứu'6 - Ỡ Việt Nam theo

nghiên cứu cua I lỗPhạmThụcLan và cộng sự chothấy KLXĐ cỏ xươngdùi

ơ nam giới Việt Nam (0.85 ±0.13 g/cnr) cao hơn khoang 6%so với nữ(0.80= 0.11 g/cnr) tương tựKLXĐ ơ cột sống that lưng ớ nam (1.05= 0.12

g/cnr) cao hơn khoáng 9% so với nừ(0.96= 0.11 g/cm')16 Ngoài ra sự khác

biệt giữa namvà mì còn ờ cấu trúc xương: ơ namTestosteron lác động kích

thích phát triền be dày cua vó xương, trong khi đóEstrogen ơnữgiới lụi kích

thích quá trinh tạo xương xốp ức che quá trinh tạovoxương vã màng xương:diều này tạo nén sự khác biệt khigiữa cấu trúcvà tinh chịu lục cua killing

xươnggiừanam vã nừ lâmchoxương ờ nữ dề gãyhơn nanr'24 :s

Cácyếutố anh hương đến sự hinh thánh KLXĐ:yếutố di truyền, chế độ

tập luyện, cân nặng, vai trò cua các hormone (GH-hormone tàng trưởng,

hormoneguntinh ), chề độ dinh dường đucalci vàvitaminD,môi trưởng vàcác yếu tố lối sống bao gồm ca thuốc lã.cà phê và uốngrượu là những yếu tố ánh hường đến kích cờ vã một độ xương Trong đó yếu tốquan trọng nhất

trong hình thànhKLXĐ là yếu tố di truyền (chiêm 50- 80% tùy tửng nghiên

cứu)29, yentố di truyền góp phầnquy định kíchthước, cấu trốc cua xươngdặcbiệt ờ tuổi dậy thi Nếu KLXĐcàng cao thi nguy cơ loãng xương sau nãy

- Tốc độ mất xương: Sau khiđạt KLXĐ thi quátrinh mất xương ớ vị

trixương xốp bắt đầu dienra ờ cahaigiới.Tốcdộmất xương trung binh ơ cột

sống that lưng là 0.84%nám ớ nam giới và 1.6%Ưnữ giới tre tu0iw Không

cỏ quá trinh mất xươngồ ạt nhưnữ giớisau mãn kinh má theo tuồi tác nam giới có sự giám nồng độ hormon sinh dục (testosteron) dosuy giam hoạtdộng

cua trục dưới dồi - luyến yên - sinh dục làm mất dần caxương vo và xương

bẽ Nhiều nghiên cửu dã chi ra rang quá trinh mất xương ơ nam giới diễn ra

chậm him nừ sau khidạt KLXĐ quá trìnhmấtxươngdienrarấtchậm ch) đenkhoangtrên 50 tuổi quá trinh mất xương dien ra mạnh mèhơnvàchi thựcsự

Cỏ ý nghĩa sau tuồi 65ỉ0 Tốcđộmất xương cua nữ giớisau khi kétthúc thời

kỳ màn kinh vẫn cao hơnnamgiới Nghiên cứu cua Ilannan và cộngsự tiến

hãnhtheo dỗi toe độmai xương ơ người cao luôi (67- 90) bangdo MĐX sau

4nămchoketqua lốc dộmẩt xương trung binh cua nữ (3.4 -4.8%) cao hơnnam(0.2 - 3.6%) ờ tấtcácác vị trì.Theomột nghiêncửukháctiến hành trên

769 người trên 60 tuôi theo dõi trong vòng 2.5 nãm cho thay tốc độ mất xương ơ cốxương đùi là 0.82% một nãmớnam và 0.96% ơ nif-.

- Quá trình mất xương: Neu như ơ nữ giới quã trinh mắt xương bẽdiễnra lãm giam nhiều số lượng cùa các bẽ xương thi ớ namgiới dường như

số lượng bèxươngkhông thay dôi mà chu yếu là móng dần các bè xương

Một nghiên cứu cua Riggs vàcộng sự (2008) kháosát MĐX vovà xương bèbang phương phápchụp cắt lớp vi tinh định lượng (pQCT) cho thay quá trinh

giám xương bẽdiễn rangay sau khi dột dược KLXĐvà cao diêm là ờ phụ nừ

sau thời kỳmàn kinh, côn ớnam giới matxươngbè có ý nghía sau tuổi65 và

mất xương vocó ý nghĩa sau luôi 7530 Quá trình mất xương chịu tác động

cũanhicu yểu tố: yếu tố ditruyền, tuồi, tinh trạng thiều hụt hormon ít hoạtdộngthe lực, thiếu vitamin Dvàcalci,sứ dụng thuốc glucocorticoid, hay mắc

một số bệnh(cường cận giáp, suy thận, suy tuyên dưới đồi COPD ) các yếu

tổ này làmtảng sổ lượngđem vị chu chuyến xương trên be mặtcác bè xương,lâm tăng toe dộ chu chuyến xương, mất càn bàng giừa húy xương và tạoxương (húy xương làng lên), từ dó làm tâng tốc độ mất xương, giâm khốilượng xương (MĐX) vã tâng tốn thương vi cẩu trúc xương (tàng tinh de gày

xương) dẫn dền loăng xương

Như vậy sự khác nhau ve cơ bangiữacấu trúc xươnggiừanamvà nữ ơ tuổi trươngthànhvà quátrinh lão hóa cua bộ xương làmcho kha năngchịu

lực cua bộxươngcuanam tốt hơncuanừ diều này lý giaitýlệ loãngxương

và gày xương ơnamgiớithấphơn ớ nữgiới

1.3 Đa hình don nucleotide

1.3.1 Khái niệm về da hình dơn

polymorphisms, thưởngdược gụilà SNPs (phát âm là "Snips"), lã loại biểndôi di truyền phốbiểnnhấtcùa người MồiSNP đại diện cho một sựkhác biệt

chi(ĩ một d<m vị cấu tạoduynhấtcua DNAlà nucleoúd Vi dụ một SNPcóthe cỏ sựthaythếnucleotidcytosin(C) với thymin(T) trong một đoạn nàodô

cùa DNA (Hĩnh 1.2) Sự xuất hiện cua SNPs là hiện tượng phổ biển trongtoànbộ chuồi DNA cua một người Nguyênnhãn hình thành nên các SNPs cóthê do tác dộng cua chọn lọc tự nhiên, hộgen cùa ngườitựbiến dối và sưa

chừa de thích nghi với mỏi trườngsổng Qua quá trinh tiến hỏa và chọnlọc

nhũng biểnthểcõ kha nâng thích nghi sè xuất hiện vớitấn số ốn định trong một quầnthế nào đó Tậphợpcác diêm da hĩnh trên mộtgen dượcgọilãtính

da hình cùa gen Tuy nhiên không phaitắtcà sự biền đòi nucleotid đơn đều là

SNP Dêđượcxếploại là SNP.sựthay đói một nucleotidphảiđượcxuấthiện

với tần suất từ 1% tro lẽn trong quần the5’ Khoang325 triệu SNP dà dượcxác định trong bộ gcn người 15 triệu trong sổ dó hiện diện với tần số 1% hoặc cao hon trong các quần thê khác nhau trên toàn thegiới34 Những biếnthè này thường dược tim thấy trong đoạn DNAgiừa cãcgen ờ vũng không

màhoádodỏ SNPs it anh hương đen chức nângcuaproteinhaylãmthaydôikiêu hĩnh Tuynhiên,dây có thêlànhùngdấuẩn sinh học giúp các nhãkhoahọc xác định vị trí các gen có liênquan với bệnh Khi SNPs xuấthiệntrong

một gen hoặc tạikhuVựcdiềukhiển cua gen,nó có thềảnhhướng đến chứcnângcuagen.dầnđen có vai trỏ dối vớimộtbệnh lý cụ thêliênquan đến gen

dô Hầu hét các SNPs không cỏ anhhường đến súc khoe hoặc sự phát triển

cua cơthe Bên cạnh dó mộtsổ SNPs dã dược chúng minhcỏ vai trò quan

trọng trong quá trinh phát triển cua cơ thê Nhiều nghiên cứu đà tìm thấy

SNPs cóthê giúp dựđoánphánủng cua mộtcánhân với các loạt thuốc nhất

định, sự nhụycam với các yếu tốmôitrườngnhư độc tốvànguy cơ pháttriển

một bệnh cụ the.SNPs cùng có thề được sư dụng dê theo dõi sự di truyềngenbệnh trong gia dinh I lưóngnghiên cứu mói cua nền yhọc hiện nay lã xác

dịnh mối liên quan cua SNPs với các bệnh lý da yếu tố như bệnh loăng

xương, tim mạch, tiều đường và ungthư từ đó hướngtớipháttriển nen yhọc

cá thê hoá trong chân đoản và diều trị

Hình 1.1 Du hình nucleotid đơn (Ngnồn: https://lmk.sprmger.eom/iirticle./10.1007/sl 1356-022-19981-7ị 1.3.2 Các loại SNPs

Dựa vàovịtri SNP.s đượcphànchia thành 2 loạichinh55:

- SNPs hên kết (còn gọi lã SNPs chi thị) không nằm trong gcn và khônganh hương den chức nângtống hợp protein cua gen Mặc dù vậy SNPs dượcphát hiện thườngnam gần gen liênquanđển một bệnh nàođó nên cóthề sư

dụng SNPs như dấu hiệusinlihọc dè xác định bệnh hoặc genbệnh

- SNPs nằm trong gen là nguyên nhân anh hướngdền chức nângcùaprotein, liênquanđếnbệnhhay anh hươngdền sự đápứng với thuốc diềutrị.baogồm:

+ SNPs mã hoánằm trẽn vùngmà hoã cua gendần den sự thaydôiacid

amin cùa protein do gcndómàhoá

+ SNPs không màhóanằm trong vùng điều hoá củagencóthế dần đen

thay đổi mứcđộbiêuhiệngen thòng qua mứcđộ RNAvà protein

1.3.3 Vai trò và ừng dụng cùa SNPs trong Y học

Các biến thê trong trinh tự DNA cua con người có the anh hươngđềncáchcơthêphát triềnbệnh,cách cơthêđápứng với các tãc nhàngãybệnh

các hỏa chất, thuốc, vaccin và cãc loại tác nhàn khác Các SNPdược cho là

chia khỏa tiềm năng trongviệc thực hiện cá thêhoả trong yhọc Một SNP

đơn có thê là nguyên nhângây ra một bệnh di truyền Đối với cácbệnhphứctạp.các SNPthường không hoạt động đơn lé mã chúngkếthọpvớicác SNP

khác và tương tácvớiđiều kiện mỏi trường đê biêu hiện một tinh trạngbệnh

lý Vai trò quan trọng nhẩt cua các SNP trong cãc nghiên cún y học là sư

dụng dê so sánh các vùng cua hộ gen giừa các nhóm người (có thê lá giừabệnh nhân và ngườikhoe mạnh) trong cácnghiêncứu ờ mức toànbộ hộ gen (genome-wide association studies-GWAS) Các nghiên cứu tươngquantoàn

hộ gen (GWAS)đã cho phép phát hiện nhicu SNP có tác động đen một sổbệnh lý đa yen tổ như đái tháo đường, táng huyết áp bệnh lý loângxương,

bẽophi Các nghiên cứu tiền hành trên các cơ sờdữliệubộgen cua cácquầnthế đà khôngchi phát hiệnđượcnhùngbiển thế di truyền và bệnh di truyền

mã còn đưaracác gợi ý dê tiến hànhcác nghiên cứu nhàm tim ra cách phóng ngừa vã chừa bệnh trong tươnglai không xa

1.3.4 Một sổ phươnịỊ pháp xác (lịnh kiêu gen cùa da hình dơn nucleotỉd^

Một trong nhùng tháchthức lớn cùa sinh họcphàntứhiệnđạilàtimhiên

về sự khác biệt giữacácloàihaygiữacáccá thê trong loài về sự mã hóa trong

hệ gen Đa hĩnh đơn nucleotid (SNP)đượcbiết lã sự xuất hiện chu yểutrong

sự da dạng VC kiêu gen Trẽn 80% các đa hình dà biết tạo lẽn sự khác biệtgiữacãccã thê trong I loài Các da hỉnh đơn nucleotidđược cholá cỏ vaitrò

trong sự khác biệt về hiệuqua khi diềutrị thuốc cùng nhưtácđộng cùa mỏi

trường sống đến mỏi cã nhãn Do vậykiêugencuacãcSNPlãmộtbiếnquan

trọng trong các nghiên cứu tương tác giừa mòi trường vàhệ gen trong quá

trinhhình thành bệnh ỡ người Cho den nay dã cỏ nhiều phương pháp kỳ

thuật xác định kiêugen cúa SNP Trong chuyên de này tòi chi trinh bàymộtvài phương pháp kĩ thuật chinh thường được Sừ dụng trong các phòng xétnghiệm di truycn

1.3.4 J Phương phàp ARMS PCR (Amplification refractory mutation system!*

ARMS PCR (Amplification refractory mutation system) là một ứng

đụng cùa PCRtrong đóDNAđược khuếch đại bảngcác alcn mồi tương ứng đặc hiệu ARMS PCR Li phươngpháp rất hữu ích cho việcxác định cácđộtbiến diêm hoặc đa hĩnh Nỏcùng là phương phápquan trọng đe xác định kiêu

gen trong DNA là đông hợphay dị hợp Dị hợp tứ hoặc dông họp tư dượcphânbiệtbangcách sư dụng ARMSmỗi cho alcn dột biến (Mutation) và binhthường (Wild type) Các phanứng cho alen dộtbiên và cácalcn binh thườngđượcthựchiện trong ồngriêngbiột Trong pinning pháp này giếng I sứ dụng cặp mồi F (Forward primer) và Rw (Reverse wild type), giếng 2 sư dụngcộp

mỗi F và Rm (Reverse mutation) Sự xuất hiện của săn phẩm đặc hiệu ớ càhaigiếng là kiêu gen dị hợptư.nếuchixuấthiệnờ giếng thứ I là đồng hợp tứ binh thường, nểu chixuấthiện ớ giếng thứ 2 làdồng hợp tư đột biến

* Ưu dì ent vù nhược diêm cua phương pháp: ARMS-PCR lã phương

phápcódộnhạy cao kỳ thuật dim gianvàgiã thành re dượcáp dụng rộngrài

trong các labo sinh học phàn tư ớ Việt Nam Ápdụng dược cho tat ca cácSNP mà không cần phai có diêm cắt Vi vậy trong phạm vi cuađề tài nàychùng tỏi sư dụng phương pháp ARMS-PCR cho xác định da hình gcn

(Restriction Enzym, RE) Nói cách khác, dãy lả phương pháp so sánh DNA

cua cáccáthè khác nhau sau khicắt mẫubằngmộtenzym giới hạn nham timhicu xcm có hay không dột biền diêm (mat hay xuat hiện một vị trigiới hạn

mới) hoặc có hay không sự thayđốimột trinh tự DNA Ncu trinh tự DNAcuahaicáthecùng loàihoàntoàn giống nhau về số lượng và kích thước thi sẽ có

sự giống nhau về các bàng DNA sau khi chạy điện di Ngược lụi nếu cỏ sựxuất hiện đột biến diem hoặc thaydồi một trinh tựđoạn DNA trên sợi DNAthì sè có sự khácnhau về các băng DNA Quá trinh thựchiện kì thuật RFLP-PCR gồm cácgiaiđoạn sauÍS:

- Tiến hãnh phan ứng PCR với cụp mồi thích hợp đe khuyếch đại đoạn

DNA chứa SNP cân phântích

- Tien hànhphân cat đoạnDNA này với một enzym giới hạn thích hợp

-Điện di xác dịnh sự khácnhau của câcbángDNA và dưarakết luận

Enzym ỳứi hạn: Enzym giới hạn (hay enzym cắt) - là một enzymquan

trọng trong các enzym endonuclease tác động lên phán tư DNA và có đặc

diêm là cắt DNA ớ nhưng vị trí xác định Cho đền nay người ta dà biếtkhoangtrên500loại enzym giới hạn khác nhau Đặc diêm chung cua các loại

enzym giói hạn:

-Đồuđược chiết tách từ vi khuân vã tên enzym mang têncua vi khuân

-Catphân tư DNAxoan kép o nhừng trinh tự base đặc hiệu (hay còn gọi

là vị tri giới hạn trinh tự giới hạn) vớitừng loại enzym

- Vị tri cẳtthường có 4-8 nuclcotid, dặc trưng quan trọng nhất cua trinh

tự giới hạn lã đoạn DNA gồm 4-8 cộp nucleotid nàycó trinh tự giống nhau

khi đọc theochiều3*-5' và 5*-3\Vivậy vị tricat cùa enzymgiốngnhautrên

ca 2 mạch

-Sau khi cúng bị cat vớicùngloạienzym giới hạn các sợi don DNA có

các dầu kết dinh vói các nucleotid bo sung chonhau ’

f)iện di DNA: Acid nucleotid là các dại phân tư tíchdiện âm trong diện

trường cỏ điện thẻvà cường độ thích hợp, DNA di chuyên từ cựcâmđẻncực

dương cũadiện trường.Đê kiêmtra và xác dịnh tinh chất cùa DNA, cầndiện

di DNA trên gcl Phân tứ DNA câng nhodi động câng nhanh Cô 2 loại gcldược sư dụng dê diện di ĐNAđó làgcl polyacrylamid vâ gel agarose, trongnghiên cứu này chúng lôi sư dụng gel agarose Tùy theo chiều dãi cua sán

phẳm màlựachọnnồngđộgcl thích hợp thườngdaođộng trong khoáng

Rcdsafc hoặc Ethidium bromide, dưới ánh sáng tù ngoại DNA gắn với

Redsafe/ Ethidium bromide sèphát sáng Khi cho chạy diện di DNA nghiên

cứu thường có DNAmẫu (marker) cùng chạy đê so sánh, xác định kích thước của doạn DNA$

* ưu điếm cùa phương pháp: RFLP-PCR lã phương pháp có độ nhạy cao kỳ thuật đon gian dề thực hiện, không yêu cầu nhiều VC trang thiết bị

phức tạp.dược áp dụng rộngrãi trong các labo sinh hụcphân tứ ơ Việt Nam.Tuynhiên, không phái tắtcacác SNPđềucóthe có sầnenzym cat đạc hiệu

Ilơn nữa.phươngpháp này cũng đòi hòithờigian vi trong quá trinh thựchiệnphaitiến hànhdiện di 2 lẩn Bởivậy trong phạm vi cua để tài này chúng tôi

sư dụng phương phápRFLP-PCR cho xác định 2 đa hình gcn I.RP5ỌS9R và FTOrs \121980 Sauđó kiêm tralại bangphươngphápgiai trinh tự gcn

L3.4.Ỉ Phương pháp Taqmatr

Phương phápnàycùng dựa trẽn nguyên lý cua phânứng PCR, trong dó

sư dụng 1 mồi xuôi và 1 mỗi ngược dè khuếch dại đoạnADN chứa SNPcần

nghiên cứu đồng thời sư dụng 2 probecógắn huỳnh quangpháthiệnđặchiệucho từng alen cua SNP Tại vị tridầu 5’ I probedượcganchất nhuộmphát

huỳnh quang VIC dê phát hiện "alen I", probe cỏn lụigan chất nhuộmphát

huỳnh quang 6 FAM(6 carboxyiluorescein) dê phát hiện “alen 2" Tại mỏi dầu cua probecógắn chất dập tẳt tin hiệu huỳnh quang Trongquá trinh xay

ra phân ứng cãcprobepháthiệncác alien cùng vói cãcmồi xuôi hoặc ngược

tạoracác san phâmđậc hiệu tươngứng vớitin hiẹuhuỳnh quang dậc trưng cho mồi alen,quadóxãc định dượckiêugen cua SNP

Phương pháp Taqman xác dịnh kiêu gen cùa SNP có độchính xác caotuy nhiên khi thực hiện cẩn có vật liệu và thiết bị đá tiền, dovậysẽkhóápdụngkĩ thuật náyrộng rải Ư cãc phòng thi nghiệm

ì.3.4.4 Phương pháp giai trinh lựgen

Phương pháp giúi trinh tự gcn dược coilà tiêu chuân vàngchoviệc xãc

đinh kiều gcnvi chúng có độ tin cậy và chinh xác cao Giai trinh tự gcn chophép xác dinh kiêu gen cuanhieu SNP cũng như trinh lự xung quanh SNP.Thục hiện kĩ thuật này dôi hói trang thiết bịphức tạp cần có nhân viên có

kinh nghiệm vã đượchuân luyện, hơn nừa vật tư tiêuhaothường có giá thành cao Do vậy trong nghiên cửucua chúng lôi chi ứng dụng dê kiêmđịnh lại

tính chinh xác của 2 phương phápRFLP-PCR vã ARMS-PCR

1.4 Vaitrô cùa genMTHFR, LRP5 vá FTO đổivói loãng xương và gây xương

1.4.1 I 'ai trà cứa gen nói chưng đối với loãng xương

Vãi trò cùa di truyền (gcn) liênquan den MĐX dà dượcbiếtđến từ trước

dó ('ác nghiên cứu trên các cập song sinh ơ ca nam và nừ cho thayycu tơ di truyền dông vai trô quan trọng với bệnh loãng xương, quyết định 50-80% sự

thay đôi cua MĐX tùy theo từng nghiên cứu Hơn nừa các nghiên cứu cũngchi ra rằng gen dỏng vai trô quan trọng trong chuyên hóa xương vã quá trinhmẩtxương40, (ien là yếu tố nguy cơkhôngthay dôi được nhưng có kha nàng can thiệp dược Gcn không những ánh hương den khối lượng xương dinh màcòn tham gia vàocác giai đoạn trong chu chuyên xương Tim ra các yếu tố nguy cơtheocảthê hóa là xuhướnghiệnnay và là yếu tố quyết định choviệc

can thiệp sớm nhảm lãm giam nguy cơ loãng xươngvàcáchậuquá cua nó

* Cácnghiên cứu về các gen ứng viên (candidate gen)41*2: cãcnghiên

cứu ve cãcgcn tảcdộngdencác con đường sinh hóa.dược lý và sinh lý hục

cua quả trình tạo xương và húy xương dược thực hiện khá sớm Phân lớnnhùngSNPcóanh hương đến MĐX và gây xương đà đượcchi ra trong nhiều

nghiên cứu với các giã trịp khác nhau và có sự khác biệtgiữa các chungtộc

khác nhau Nhùng SNPquan trọngvà phốbiếnnhất dã dược xác địnli liênquan den cácquá trình hình thành tế bão tạo xương, húy xương, tin hiệuWnt

cua tếbãotạo xương, vitamin D, Estrogen Collagen Mevalonatenhư là cảcgenLRP5 LRP6 DKKI VDR ColAI ESRI ESR2 Cãc nghiêncini Ve cácgcnứngviên nãy đà đưa den nhiều phát hiện có V nghía lâmsàngquantrụng

trong việcxác định yếu tố nguy cơ ánh hương đến loãng xương

* Nghiêncứu tương quantoàn hộ geu (GWAS (genome wideassociation

studies):Trong nhữngnám gần đây với sự pháttriền nhanh cua khoahọc sự

ra din cùa các nghiên cứu GWAS dà pháthiệnra nhiều SNPmới có liênquandền MĐX và gàyxương Năm 2007 Kiel và cộngsự dà tiếnhànhnghiên cứu

GWASđầu liên xác định mối lương quangiừa40 SNPdược cholàcó nguy

cư anhhường den MDX, tuy nhiên docởmẫu còn khiêm tốn nên dà không

tim thấy mỗi tương quan có ý nghĩa thống kê giữa 40 SNPnãy với mật dộ

xương Đennám2008hainghiêncứuGWASđược còngbố dà xác định dược

4 locus liên quan đến MĐX (LRP3.ESR1 OPG và RANKL) Thêmvào dócáctãc gia cũngpháthiệncácgenLRP3, RANK, I.RP40, ZBTB40 vá SPTBNỈ

lâmlãng nguy cơ gày xương

Urano và cộng sụ43 tiền hànhmột phân tích gộpcác nghiên cứuGWAS

trong 8 nãm (2007-2015) dã pháthiệnra nhiều SNPmới liênquanđen loãng

xương và gày xươngơ trẽn quầnthềngười datrắng và người Châu Á Trong

đôcácSNP liênquandencácquá trinh sinh học cuaxương dà biếtdải: con

đường tin hiệu WNT/0-catenin: catenin 01 (CTNNBlh sclerostin (SOST)

LRP4, LRP3, GPRÌ77, WNT4 WNT5B WNT16 dickkopfi tDKKl). gentông

hợp protein xoắn xuyên máng 4 (SFRP4) Jagged 1 (JAG1), MEF2C và

AXINL Các nghiên cứu GWAS cho loãng xươngcũng dã xác định dược ba

yểu tổquan trọng là RANK RANKL và OPG tác dộngđen quả trinh biệthỏa tề bão gốc trung mò thành tềbàotạo xương Tuy nhiên các tác giacùngtim thấy mộtsốgenanh hường den mật độ xương vàgãy xương màhiệntại

chưa giái thích được vai trò cua nó trong các cơ che sinh học cùa xương

(FAM2J0A, SLC25AÌỈ Ỵ Nghiên cúu cua tác gia Kempt vã cộng sự nảm

2013 tiến hành trên 14.492 người Anh ơ cã 2 giới phát hiện được 307 SNPtrên 203 locus gãy anh hươngđền MĐX ơ mức cỏ ỷ nghĩa,trong đó có 153

locus mới pháthiện so vớicáccôngbổ trước đó nhóm tãc gia cùng chi ra 12SNPliênquanđếngày xương mộtcách có ý nghĩa44

Nâm2021 tácgiaZhuXvàcộngsự*tiếnhànhnghiêncứuphàntích gộp

512nghiêncửuGWAStrênthegiới trong vông 12nám đà tim thấy 518 locus trong bộ gcnngười ảnh hướng đến MĐX và gãy xương Trong đó chi 20%

locus này giãi thích được mốt liên quan cùa nó với cơ chế sinh học cùa

xương Loãng xương là một bệnh lý phức tạp đa yếu tơ sự tác động cua genđến loãng xương và gãy xương đã dược khẳng định Tuy nhiên cơ chế tãcđộng thực sự trẽn xương vẫn còn nhiều diều chưa sáng to Do dó vản cần

nhiều nghiên cứutrẽncác dổi tượng chủngtộc.giới tinh, độ tuổi khácnhaudêlàmsángto vai trô cua gen với loàng xương và gày xương

Nghiên cứu trên quẩn the người Châu Á:Các nghiên cứuGWAS tiến

hãnh trẽn dồi tượngngườidatrắng dà đượccõng bố khá nhiêu, trong khiđóchi cỏ rất ít nghiên cửuGWAS tiến hành trên quần thêngươi Châu Á Yang

và cộng sự tiến hành nghiên củu bệnh chửng trên 700 người Hán cao tuồi gồm 350bệnhnhàn gãy cỗ xươngdùi và 350ngườikhoe mạnh làm dối chúng

dã tim thấy gen UGT2BÌ7 liên quan đen gày xương hông45 Nghiên cứuGWAS khác cua tác giaGuo vã cộng sự dà chi ra rang SNPrsl3182402 cùagenALDH7A1 nằm trên nhánh ngắn nhicm sắc thósố 5 tăng nguy cơ gày

xương hông46 Nghiêncứu GWAS dầu tiên ờ NhậtBàn trẽn 6.700 cho thấycỏmồiliênquangiừaSNP rs760537S cua genFONGvới loàng xương4' Hwang

và cộng Sự đà xác định gen MECOMlàmtâng nguy cơ gây xương ơ 1.119bệnh nhãn gãy xương vói 3.444 người dối chứng người Hán Quốc vàNhật

Ban (với OR: 1,39)4S

Trong đề tài này chúng tôi chọn nghiên cứu 3 đa hình gen MTHFR

C677T(rslSOl133) LRP5 Q89R(rs-l 1494 349) và FTO rsl 121980 với loăng

xương vi trẽn thể giới dã có nhiều nghiên cúu cho thấy mối liênquangiữa 3

da hình kiêu gen này với mật độ xương và các kct qua này dược lặp lại ờ nhiều chung tộc châu Án châu Á châu úc Hoạt dộng cua gen MTHFR hèn

quan đền nồng độ homocystem máu anh hướng đến chuyếnhóaCuá xương

Gen LRP5 liênquandềncon đường tin hiệu \Vnl p-catenin cỏ anh hươngđến

tếbãotạo xương vàquy định khối lượngxương Gen FTO đà được tim thấy

có liênquan đến loàng xương và gày xương ơ người TrungQuốc và ủc Dặcbiệt trong cácnghiêncứutrênquầnthè người Việt cũng cho thấysựxuấthiện

cua 3 da hinh gcn này trong cácbệnh béo phi.tànghuyếtảp, ung thư, gút xáythaihèn tiếp

ỉ.4.2 t 'ai trù của gen LRP5 dồi vứi loãng Xtrưng

Hình ỉ.2 Vị tri gen LRP5 trên nhiễm sắc thế sổ ỉ ỉ

(Nguồn https://ghr nhu nih.gov/gene/LRP5 location ị

ỉ 4.2.2 Chức nàng cùa gen LRP5

Gcn bao gồm 23 cxon, gồm 5.124 cặp bazo chịu trách nhiệm mà hóaprotein xuyên màng LRP5 với 1.614aminoacid Protein LRP5 dược gần vào

màng tế bào một phần còn hầu het cấu trúc cúa nó ỡ vùng ngoại bào Phần

ngoại bào này thường liên kết với phức hộ Wnt/Frizzlc bãm vảo khi khơi

dộngcon đường tin hiệup catenin - Wnt phần đuôi ơ trong tế bào chắt cô liên

quanđen sự bấthoạtphức hợp GSK-3B

- Cư chế hoạt dộng cưa /ỉ ca ten in - Hnt signal pathway:đáy còn gụi làconđường tin lúịu Wnt cố điên: Khi cỏ Sựlúộndiện cũa Wnt kíchhoạtcon

đường tin hiệnp catcnin Wnt (hình A) Wnt gầnkếtvớiphần ngoại bàocùaprotein Ị.RP5/LRP6 và protein Frizzled(protein xoan 7 dần xuyên màng) sự gắn kết nàycótác dụng ứcchế sự phosphoryl hóa Axin-Gsk3 cùa p caỉenin

và ức che sự thoái hóacuap-catcnin.p-catcninđượctích lùy nhiêu trong bàotương và vào nhân tể bãotạo thành một phứchọp hụt nhàn vói hộ sỗ phiên măTCFVLEF liênkết DN/\ và chùngcùngkíchhoạtcâcgen Wnt Khi không có

mật Will (hĩnh B) thi phức họp protein Axin sèđược tạo ratừ 4 thành phần

phosphoryl hóa tuần tự bời Ck vàGsk3.fpcatenin bị phânhúy bời proteasomc

dovậy p-catenin khôngtruyền tin hiệu vào nhân tebào'0

Hình A Hoạt hóa Wnt Hình B ức chề Wnt

ỉỉình 13 Can dường tin hiệu /ỉ cafenin - Wnf9

Tin hiệu Wntrắtquan trọng choviệc phânchiatebào (sự giatàng),gancác tế bào với nhau(độbám dinh), chuyên dộng tế bão (di cư) và nhiều hoạtdộngtể bào khác Tín hiệu Wnt có 0 nhiêu te bào trong co thè: mắt,xương.gan

- Tâc dộng cua cơn dường tin hiệu Ị! ca ten in - tint trên xưưng'

Cácnghiên cứu dược lý vã ditruyền họcchi ra rằng con dường tin hiệuWnt có lác dụng làmtàng MDX thông qua co chê tánghoạt động cua tebãolạo xương, làm mới lébão nguồn gốc trung mô tảng biệt hóa lề bão nguồn

(sterm cell) thành tế bào tạo xương (Osteoblast), giam quá trinh chết theo

chươngtrinh(apotosis) cùa têbàotạoxương và tèbàoxương (Osteocyte)

ỉ.-ỉ.2.3 Da hinh gen LRP5 và anh htrưng dồi vứi MDX và gây Xtrưng

* Da hình gen LRP5 Q89R

Da hình gen LRP3 Q89R (rs41494349)nấm tràicxon thứ 2 có sự thaythếnucleotidA ờ vịtri 266thành Gđản tớisự biến dôi acid amin Glutamine (Q) thành arginin (R) ớ vị tii S9 cua phân tư protein LRP5 làm thay dốiphần cánh quạt dầu liên trên phân tư ProteinLRP5 (p-propeller 1) (hinh 1.4) Cảcnghiên cứuchi ra rằng da hình gen LRP5 Q89R gây anh hương dến tinh kỵnước cua phântưproteinLRP5 từdóanhhươngden sự lươngláccuaphàn tư

protein LRP5 với cãc protein khác Mặc dũ chức nâng thựcsựcua mồi mien

trẽn phântirprotein LRP5 vần chưa chắc chấn nhưngcãcnghiên cữu cho thắy

nhữngda hình gen làm thay đốicấu trúc cuaprotein LRP5 có liên quanđếnMĐX Da hình gen QS9R pháthiện lầndầutiên ơNhật Bannám2002 dolác

già Okubo vã cộng sự nghiên cứu irên 172người tinh nguyện,timthấy tần suẳtcuaalcnGlá 8%52.Sauđónăm2004tácgia Migazuchi vàcộng sự nghiêncimtrêndốilượngphụnữ cho thầytầnsuất alen G lã 8.7%53.Tuy nhiên cácnghiên

cứu chothảytỹ lộ da hìnhgcnnàylàrấtthắpờngười đa trâng và châu Plii

xuyên máng (hình chửnhật màu đen) vã mien

ngoại bào chửa các peptid tin hiệu (hình chù

tròn màu xanh lá cây) dược ngân cách bời I mien p- propeller (dường thảng dửng màu đcn

và thanh ngang màudó) và ba lần lặplạiLDLR

(hình bầu dục màu trắng).Mỗimiền P“ propeller

có sáu lưỡi(thanh ngắn màu đen) vànăm phần

YWTD (thanh ngang mâu đỏ) Đa hình Q89Rnằm trong phiền thử 2 cùa vùng |i- propellerthứ nhất

Hình 1.4 Cẩu trúc phùn tư protein LRP5

* Anh hường cua các da hình gen LRP5 lên MDX và gây xương

Cácnghiên cữu về anh hương cùagcnI.RPỹ lénmậtđộxươngdãdượclác gia Gong và cộng sự mô ta từ nám 199654 Tiếp sau dó nhóm lác giáJohnson và cộng sựdà mô ta ãnh hương cua gen LRP5 làm láng mật dộxương trong hội chủng OPPG55 Den năm 2002 Boyden và cộng sự dã liếnhành nghiên cứu về dột biếngenLRP5 G171V -đột biến thaythếacid amin Glycine bằngValinlãmtàng MĐX (HBM-Hight Bone Mass)56.Độtbiếnnàylâm suy giam sự đối kháng cùa DKK-I vớitínhiệuWnt - LRP5 ’Frizzleddo

dò làm táng hoạt hóa tin hiệu Wnt và lừ dó Làm lâng MĐX Nhùng nghiên

cứu nãy gợi ý rang genLRP5 có vai trỏ quan trọng với MDXmặc dù cácđộtbiến gen gâyra hội chửngOPPG và HBM lã hiếm gộp Thời gian sau dó đã

có nhiều nghiên cửu cùa các tác gia trên người Châu Âu Châu Mỳ và Châu Á

về tácđộngcuagcnLRPỈ trẽn MĐX vãgàyxươngđượccòngbố Các nghiên

cứu đềuchothầy cỏ mổi lienquangiữađa hình gen den MĐX và gàyxương

ơ cahaigiới

Những nghiên cứu quansát trên cácchung tộc khácnhauchokết qua timthấy mỗi liên quan giừa các đa hình gen LRP5 với loàng xương và gàyxương5 ^ Đa sốcác nghiên cứu ve mỗi liên quan cua đa hình gen LRP5 với

loãngxươngvàgãyxươngớnamgiớiđãchiracó6SNP:A1330V(rs3736228)

gen LRP5 gày tác động đền MĐX vã gày xươngtrong đõ tan suất xuất hiện

nhiều nhất là 3 SNP: A133OV («3736228), V667M («4988321) và Q89R

(«41494349) Nghiên cứu cuaVanMcure và cộng sự nãm200861 mộtnghiên

cứu lớn đa trung tâm liencứu.tiếnhành trẽn 37.534 người từ 18 tiling tàm ỡ Châu Àu vãBấcMỷ lữ năm 2004 đếnnăm2007chothấykếl quã đa hình gcn

LRPỳ V667M và AI330V liên quan den giam MĐX cột sống thát lưng vàtương tự như vậy người ta cùng quan sát dược anh hường cua chúngvởi

MĐX CXĐ Nghiên cứu này cùng chi ra mối liên quan với gày xương cột

sống, theo đó hai alen trẽn đềutăngnguycơ gãy xương cột sống vớiOR 1.26;95% khoang tin cậy (Cl- confidence interval) 1.08-1.47 choalen V667M và

OR: 1.12;95% CI; 1.01 -1.24 cho alen A133OV.Nguycơ gày tấtcacácxươngcũng tàng với alen V677M (OR: 1.14; 95%CI: 1.05-1.24 vã alen A1330V

(OR: 1.06:95% CI: 1.01-1.12)

Nghiên cứu của SaarinenA và cộng sụ0- ỡ 235 nam giới Phần Lan tuồi

từ 18.3 den 20.6chokếtquá có sự liênquan alcnAI33OV cùa genLRPỈvới

sự giam MĐX ớ nam giới tré tuồi, trong đó người mang kiểu gen AV có MĐXơ cô xương dùi thàp hơn so với người mang kiêu gen AA Tươngtự lerrari cũng chi ra mối liên quan giữa 2 da hình AI33OVvà V667M gen

LRP5 với MĐX ớnam giới loàng xươngnguyênphát"’

Nghiêncứu MrOs ờ Thụy Điênđược tiến hành trẽn 3.014 namgiới tuổi

từ69-81 cho kết qua namgiới mang SNPV677M (rs4988321) ớexon9sècỏ

MĐX Ư cột sống that lưng thấp hơn 3% so với người không mang gen

(p<0.05)

1.4.3 ỉ'ai trờ cùa gen MTHFR (loi vời loãng Xtrưng

1.4.3.1 Cấu trúc gen MTHFR

Gen.\ÍTHFRnằm trẽn nhánh ngannhiễm sẩc thê số 1 (lp36.3) bắt đầu

từ base 1944 từ đầup vã kếtthúcờ cặp base 27374 Tông cộng có 25431 cộpbase Gen MTHFR bao gồm11 exon vã11 intron6' (hinh 1.5)

1.4.3.2 Chửc nâng cũa gen MTI1FR

Gen MTHFR mà hóa protein enzym Methylene tetrahydro folate

reductase là một trong nhùngenzymequan trọng trong quá trinh chuyênhóa

folate MTHFR là một phântử protein cỏ kliổi luting phântứ70 kDa có vai

trò xúc tác quá trinh chuyền 5.10 Methylene tetrahydrofolate thành 5- Methylene tetrahydrofolate, lã một đồng chất (cũng vớivitamin B12.enzym

methioninsynthethasc) trong quá trinh chuyên Homocystein thành Methionin(hình 1.6).Các biếndôi cùa genMTHFR sè gây tâng nồng dụ Homocystein mâu.Homocystein là một chất rất quan trọng trong quá trinh chuyênhóacùa

cơ thê tăng nồngđộ homocystcin gây tâng nguy cơ mắc nhiều bệnh lý dáitháodưỡng,bệnh lý timmạch vã anh hướng den MĐX vả gày xương

Hình 1.6 Sư dồ quá trình chuyển hóa cùa MTHCR

(htĩps://nưhfìẴupport.com.au/2017/07/high-hoìnocysteme-canạffect-brain-heart-pregnancy//

* Cơ chếtácdộugcùa Homocystcin trên xương

Các nghiêncứu trên người VCca chế tác dộng cua homocystcin đỗi vói

xưong côn it, tuy nhiên một nghiên cứu trẽn chuột đượcchoánhomocystcin

trong võng 10 tuần cho thấy giâm khói lượngxương,chiều dài xương vàbedày xương khoáng từ 10 đen 15% Herrmann vã cộng sự64 cho ràng Homocystein có vai trò trong cà4giaiđoạn cùa quá trinh chu chuyênxương

ơ người trướng thành: một là tăng hoạt động cua te báo huy xương, hai là giam hoạt dộng cua te bào tạo xương, ba lã giám dòngmáuđền xương và bổn

là trực tiếp tác động lẽnchất nen cãn bán cua xương Nghiên cini cua Neetu Tyagi và cộng sự trên chuột cùng cho thấy nồng độ cao cùa Homocystein

trong máu gây giam dòng máu tới xương65 Vai trò ánh hườngtrục tiếp cùa Homocystein lên xương Ihôngqua cơ che lãm anh hường đối chải nen cânbancua xương đâ dược chúng minh rỏ rệt quanhiều nghiên cứu: Herrmann

vã cộngsự66 chothấyphân tưHomocystein liênkết với cácphân tứ collagentypl cùachất nền cânban xươngthông quanhóm thiolvà một nhóm amin do

dólàm anh hưởng dến cẩu trúccuabộkhungprotein cua xương (bone matrix)

gãy giam sức mạnh cua xương Nghiên cứucua Liu vã cộng sụ5 cho thấyHomocystein ức chề lysyl oxidaselãmột enzym quan trọng trong quả trinh

tạocác liên kct chéo cua các sợi collagen trong chất nen cản ban xương dodótáng nguy cơ gãy xương Cơ chế gày úc chế lysyl oxidase rất phức tạp:RomanThaler vã cộng sự đã xác dinh đượctácdụng cua Homocysteinthõng

qua kích thíchtông hợp Interleukin 6 (ILÓ) cytokin này sè tác dộng vàothụthê IL6 trên màng tếbàotiềntạo xương tham gia vào con dường truyền tin

hiệuphụ thuộc IL6/JAK2 (Janus kinase) lâmtânghoạt động cua yếu tố phiên

mà Fill và Dnmtl gây tâng methyl hóa vùng khới dộng gen LOX từdó ức

che sự phiên mà cùa gen LOX gây giâm tống hợp protein enzym (lysyloxidaze) Dodó sự hình thành liên kết chéo collagensau dịch mà bị giám65 (hình1.7)

Hình 1.7 Cư c hề rác đụng cứa Homocystein lên xưưngis

1.4.3.3 Dư hình gen MTHFR và ánh hương đồi ven MDX và gãy xương

Có khoáng 50 diêm dahình trên gcn.\ĨTHFR dà được tim thấy trêncơ

thê người Trong dỏ hai da hình hay gặp lã MTHFR A1298C vã MTHFR

C677T ca hai da hình gen nàyđềulàm giam hoạt tính enzym MTHFR và đản

tới tăng nồng độ homocjlein máu dã có nhiêu nghiên cứu cho thấy ánhhưởng cùa da hĩnh gen C677Tlênmậtđộxương vã gày xương Trongnghiên

cứu nàychúng tỏi xem xét den da hìnhgen MTHFRC677T (rs!8O1133) và

anh hướng cua nólẽn loảng xương ơnamgiới

* Dặc điếm cũa đa hình MTHFR C677T ỉrsì8OỈỈ33)

MTHFRC677T(rsl80ỉ 133) lã đột biến diêm thaythế nucleotid cytosin thành thymin ờ vị tri 677 đột biến nãy dần den thay thế acid ainin Alanin thành Valin ờ vị tri 222 trẽn phànlữ protein MTHFR TrongđókiểugenCT

và TT tụo ra enzyin hoạt tinh bằng 30% và 65% tương ủng so với kiêu gcn

cc dần tới các da hìnhgcnớ vị tri C677T gây ra gìàni nồng độ enzym MT1ĨFR

từdó lãmtâng nồngdộ Homocystein huyếtthanh lã một yen tổ nguy co cua

nhiều bệnh mạn tính bao gồm bệnh lý tim mạch, bộnh thận mạn đái tháo

dường, loãng xương và tảng nguy cơ gãy xương69

*Anh hưởng Ciia các đa hình gen MTHFR lên MDX và gãy xương

Đa sổ cãc nghiên ciniđểu cho thấy người mang kiêu gcn dồng họptư TT

có nguy cơ loãng xương cao hơnngười mang kiêu gen cc ơ cáhaigiới,trong

dó khá nhiềunghiên cửu trên phụnừmànkinh: MortenM Villadsen vã cộng

sự(2004)nghiêncứu trẽn 724 đốitượng gồm 388 bệnhnhân loàng xương và

336 dối chứng đà cho thầykieu gen TT cua MTHFRC677T(rslSOl133)làmtángnguycơ gày xương vàLà một yếu tỗdựbão nguy cơ giam MĐX tại cột

sống that lưng ơ phụnừĐanMạch °

Robert R McLean và cộng sự (2004) nghiên cứu 1.632 dối tượng gồm

cãnam và nữ (NghiêncứuFramingham Offspring được tiến hãnhtrên cư dân

thị trấn Framingliam.bang Massachusetts Mỳ) Nhữngngười tham gia được

định lượng ve nồng dộ folate trong huyet tương và xác dịnh tinh đa hình

MTHFR1S1801133 Kct quaxác định cỏ mồi liênquangiừa đa hình kiêugen

TTcua MTHFR rsISO 1133 và mật độ xương phụ thuộc vào nồng dộ folat

huyẽt thanh Người mang kiêu gen TT có mạt dộ xương thâp hơn người

không mangkiều gen TT1

Nám 2016 Hong Zhuo Li và cộng sự phân tích tông họp 21 nglũêncúntrẽn 33.045 đối tượng cho thảy đa hĩnh gen \JTHFR C677T (1S1801133)

cỏ liênquan vớiMDX cỗ xương dùi ơphụnữ sau măn kinh, ư người da trang

vã ớ nam giói theo đó người mang kiêu gen TT cua đa hỉnh gen MTHFR

C677T lãm giảmmật độxương so với kiêugen cc 2

Năm 2020 Xiao-Chen và cộng sự dà tổng hợp 7 nghiên cứu bệnhchứng

trên phụnữ Trung Quốc.Mexico và TháiLan tim hiên mỗi liênquangiừađa

hĩnh genMTHFRC677T(rslSOl133)với nguy cơ loãng xương Kết qua chi

rarang nhừngngười có alen T dà làm tâng nguy cơ mac bệnh loãng xương

trong mô hinh dồng trội kiêugenTT so vớikiêugencc(OR = 2.36 95%CI:

1.81 3.08 p<0.05) mò hình trội kiêu gen TT và CT so với kiểu gen cc

(OR 1.47.95%CI: 1.21 - 1.77, p<0.05) mò hình lận kieugenTT so với kiêugen cc và CT(OR 2.16.95%CI: 1.71 2.74 p<0.05)73

1.4.4 Vai trò cùa gen FTO (Fat Mass Obesity associated) dôi vứi loăng xương ỉ.4.4 ỉ Cẩn trúc cua gen FTO

Ờ người gen FTO nam trêncánh dài cua nhiễm sắcthe số 16 tại vị tri

16ql2.2 FTO \ Á một gcn lởn gồm 9 exon dãi him 400kb (từ nuclcotid:

53.5737.874 đến nuclcotid 54.148.378) (hĩnh 1.8) Hầu hểtcác SNP (Singcl

nucleotidpholymorphism) trẽngen FTO dà dược phát hiện cho tới nay đềunamơ vùng intron I.dày là vùng intron lớn nhát cua gcn vã trinhtự có tinh

Theodữ liệu từ Gcnccards.org, gen FTO có tất ca 8054 SNP trong dónghiên cứu VC FTO tập trung chú ycu vào các SNPớ vùng intron I và intron

8 Một số SNP dược nghiên cứu nhiều trên cộng dồng thế giới bao gồm:1S9939609.rs 8050136 rs9949128 rs!4210S5 rsl7S17449 rsl 121980 (vùng

intron 1).rs918031.rs 1588413(vũngintron 8)

Gen FTO cỏ vai trỏ rat quan trọng dối với sự pháttriểnbinh thường cua

cư thế bao gồm hộxương, hộthần kinh vàtim mạch, các con chuột mắt chức

nâng gen FTO ngay sau khi sinh ra dàcỏ cân nặng thấp, MĐX tháp, chậmpháttricn so vớinhómchửng 6

Các nghiên cứuthực nghiệm trên chuộtkhi loại bóhoàn toàngenFTO

cùngchokểtqualươnglự tức là nhũngcon chuột nãycùng bị chết sám: 50%

số chuột náy bị chết trong vòng 4 tuần sau khi sinh,nhùngcon chuột sống sótdược qua then gian caisữa (4 tuần sau khi sinh) thường là nhũngconchuột

cỏ kiêu gcnđồng hợp từ nhưng kiêu hỉnh rất phức tạp 6 Nám 2019 sựhiểubiã về vai trò cũa genFIO với xương dường nhưdược sáng to lum tác giã Zhang Q vã cộng sự đà tiềnhãnh thực nghiệm loạibó genFTO trong toàn

cư thê hoặc có chọnlọccácnguyên bào xương ư chuột.Cahai mõ hĩnh chuộtthực nghiệm đều cỏ sự giam thêtich xương đãng kê so với tuốiờca xương vo

vả xươngbẽ.cáctãcgiãthấy rang FTO cóvai trỏ quantrọng trong hoạt động

cua các nguyên bão xương thõng qua việctàng cưỡng tinh ổn định cúaphản

tưmRNA mã hóa các protein có chức nângbao vệ tề bão khơi tồn thươngdo

nhiễm dộc

Mộtnghiêncứucua Boisscl vàcộng sự (2009)s trong một gia dinh cùng

huyết thống có nguon gốc A Rập với 9 thành viên bị hội chứng đa dị tật không rõ nguyên nhân (gọi lã hội chứng polymal formation) Tất cá nhữngngười này đều có kiêu gcn đồng hợp tư đổi với một đột biểndơnnuclcotid ớ

vị tri 947 có sự thay the (ỉ thành A trong gen FTO dẫn den sự thay theGlutaminthành Arginine ơ vị iri316;dộtbiến R3Ì6Ọ làmmấthoàntoàn hoạt

dộngdcmcthylasccùaproteinFTO Các biêuhiện cùa hội chứngpolyformation