Những nghiên cứu về độc lực của tác nhân gây bệnh hoại tử gan tụy cấp trên tôm thẻ chân trắng.. Kết quả xác định mối quan hệ các yếu tố môi trƣờng nhiệt độ, độ mặn, pH với sự xuất hiện c
GI O V OT O TR N ỌC QU N N Ồ N ẬT N U ỆT N ÊN CỨU N ỠN MẬT Ộ V K UẨN Vibrio parahaemolyticus  BỆN O TỬ AN TỤ CẤP TRÊN TÔM T Ẻ C ÂN TRẮN VÀ Ề XUẤT B ỆN P ÁP P ÒN N ỪA Ngành: S N ỌC T ỰC N ỆM Mã số: 8420114 Người hướng dẫn: 1 TS Trần Thanh Sơn 2 PGS TS Võ Văn Nha L CAM OAN Tôi xin cam đoan đề án thạc sĩ trên đây là công trình nghiên cứu của tôi ƣợc dẫn dắt và hƣớng dẫn bởi TS Trần Thanh Sơn và PGS TS Võ Văn Nha ác nhận định nêu ra trong đề án là kết quả nghiên cứu nghiêm túc, độc lập của bản thân tôi ề án dựa trên cơ sở làm, tìm hiểu, nghiên cứu trực tiếp và dựa trên các tài liệu khoa học đã đƣợc công bố ề án đảm bảo tính khách quan, trung thực và khoa học Bình Định, ngày 27 tháng 10 năm 2023 Tác giả ồ Nhật Nguyệt L I CẢM N Trong suốt quá trình để hoàn thành đề án tốt nghiệp, ngoài sự nỗ lực cố gắng của bản thân, tôi đã nhận đƣợc sự giúp đỡ nhiệt tình của tập thể và cá nhân Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn các thầy giáo, cô giáo giảng dạy tại Trƣờng ại học Quy Nhơn, Khoa Khoa học tự nhiên, đặc biệt là Bộ môn Sinh học ứng dụng - Nông nghiệp đã trực tiếp hoặc gián tiếp truyền đạt cho tôi những kiến thức quý báu trong quá trình học tập, nghiên cứu tại Trƣờng ại học Quy Nhơn ặc biệt tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Trần Thanh Sơn và PGS TS Võ Văn Nha đã tận tình hƣớng dẫn và giúp đỡ trong suốt thời gian thực hiện đề án, cũng nhƣ trong quá trình hoàn thành đề án tốt nghiệp Và tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới các anh, chị đang công tác tại Viện Nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản III đã giúp đỡ, chia sẻ nhiều kinh nghiệm và tạo nhiều điều kiện tốt nhất để tôi hoàn thành đề án tốt nghiệp Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè đã giúp đỡ, ủng hộ, động viên tinh thần để tôi hoàn thành tốt đề án tốt nghiệp của mình Tôi xin chân thành cảm ơn! Bình Định, ngày 27 tháng 10 năm 2023 Học viên ồ Nhật Nguyệt MỤC LỤC LỜI AM OAN LỜI ẢM ƠN ANH M HỮ VIẾT TẮT ANH M ẢNG ANH M HÌNH MỞ ẦU 1 1 ặt vấn đề 1 2 Tính cấp thiết 2 3 Mục tiêu của đề án 4 4 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề án 4 Chương 1: TỔN QUAN TÀ L ỆU 5 1.1 Tình hình nuôi và bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPN ) trên tôm nƣớc lợ 5 1.1.1 Tình hình nuôi tôm 5 1.1.2 Tình hình bệnh và những nghiên cứu về bệnh AHPND 20 1.2 Sinh học, dịch tễ học và những nghiên cứu về độc lực của tác nhân gây bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPN ) 24 1.2.1 Dịch tễ học của bệnh hoại tử gan tụy cấp trên tôm thẻ chân trắng 24 1.2.2 Tác nhân gây bệnh gan tụy cấp trên tôm thẻ chân trắng 25 1.2.3 Những nghiên cứu về độc lực của tác nhân gây bệnh hoại tử gan tụy cấp trên tôm thẻ chân trắng 27 1.3 Một số định hƣớng xử lý bệnh AHPN trên tôm thẻ chân trắng 29 1.3.1 Chế phẩm sinh học (Probiotics) 29 1.3.2 Liệu pháp thực khuẩn (Phage Therapy) 30 1.3.3 Các hợp chất có nguồn gốc từ thực vật/tự nhiên 32 1.3.4 Chất kích thích miễn dịch có nguồn gốc từ thực vật 33 1.3.5 Quản lý môi trường 34 1.3.6 Công nghệ Biofloc 35 1.3.7 Quản lý ao nuôi 36 1.3.8 Cơ sở hạ tầng và công nghệ 36 Chương 2: VẬT LIỆU, NỘ DUN VÀ P N P ÁP N ÊN CỨU 38 2.1 ối tƣợng và phạm vi nghiên cứu 38 2.2 Nội dung nghiên cứu 39 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 39 2.3.1 Xác định mối quan hệ các yếu tố môi trường (nhiệt độ, độ mặn, pH) với sự xuất hiện của AHPND trên tôm thẻ chân trắng dựa trên việc thu thập số liệu quan trắc 39 2.3.2 Phương pháp xác định ngưỡng mật độ vi khuẩn gây AHPND 40 LD50 = 10a - x 42 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 45 Chương 3: KẾT QUẢ N ÊN CỨU 46 3.1 Kết quả xác định mối quan hệ các yếu tố môi trƣờng (nhiệt độ, độ mặn, pH) với sự xuất hiện của AHPN trên tôm thẻ chân trắng dựa trên việc thu thập số liệu quan trắc từ năm 2014 - 2019 46 3.1.1 Kết quả thống kê mô tả mẫu nghiên cứu 46 3.1.2 Kết quả phân tích mô hình hồi quy nhị phân đa biến (Binary logistic) giữa các yếu tố môi trường nước (nhiệt độ, pH, độ mặn) với V.parahaemolyticus gây AHPND trên tôm thẻ chân trắng 47 3.2 Kết quả xác định ngƣỡng vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus gây bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPN ) trên tôm thẻ chân trắng 49 3.2.1 Kết quả theo dõi các yếu tố môi trường các nghiệm thức thí nghiệm 49 3.2.2 Kết quả xác định ngưỡng vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus gây bệnh hoại tử gan tụy cấp (AHPND) trên tôm thẻ chân trắng 50 3.3 Kết quả điều tra, đánh giá hiện trạng và hiệu quả sử dụng hoạt chất chính trong các sản phẩm kiểm soát AHPN tại địa bàn huyện Tuy Phƣớc, tỉnh ình ịnh 53 3.4 ề xuất các biện pháp phòng ngừa AHPN trên tôm thẻ chân trắng 54 KẾT LUẬN VÀ Ề N Ị 56 1 Kết luận 56 2 ề nghị 56 DAN MỤC CÔN TRÌN K OA ỌC à CÔN BỐ CỦA TÁC Ả 57 TÀ L ỆU T AM K ẢO 58 P Ụ LỤC QU ẾT ỊN AO TÊN Ề TÀ (BẢN SAO) DAN MỤC C Ữ V ẾT TẮT Từ viết tắt Nghĩa đầy đủ AHPND ệnh hoại tử gan tụy cấp EMS Hội chứng tôm chết sớm HDPE Nhựa tổng hợp Polyethylene FAO Tổ chức Nông lƣơng Liên Hiệp quốc GAA Hiệp hội nuôi trồng thủy sản toàn cầu ộ nông nghiệp và phát triển nông thôn ộ NN&PTNT Hội nghị thị trƣờng thủy sản toàn cầu GSMC Nuôi trồng thủy sản NTTS Hiệp hội chế biến và xuất khẩu thủy sản Việt Nam VASEP Tôm chân trắng Nghiệm thức TCT Thí nghiệm NT TN DAN MỤC CÁC BẢN ảng 1 iện tích, sản lƣợng tôm nuôi nƣớc lợ năm 2022 9 Bảng 2 Thí nghiệm xác định ngƣỡng V parahaemolyticus gây AHPN trên tôm thẻ chân trắng 40 ảng 3 Thống kê mô tả mẫu nghiên cứu 46 ảng 4 Kết quả phân tích mô hình hồi quy nhị phân ( inary logistic) 47 ảng 5 Kết quả theo dõi các yếu tố môi trƣờng các nghiệm thức thí nghiệm 50 ảng 6 Kết quả thí nghiệm xác định ngƣỡng vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus gây AHPN trên tôm thẻ chân trắng 51 DAN MỤC CÁC ÌN Hình 1 Sản lƣợng nuôi trồng thủy sản của Việt Nam qua các năm ( ựa theo số liệu từ VASEP) 11 Hình 2 Sản lƣợng tôm nuôi năm 2021 – 2022 & cơ cấu tôm nuôi năm 2022 17 Hình 3 Sản lƣợng tôm nuôi Việt Nam năm 2022 – 2023 & cơ cấu tôm nuôi năm 2023 17 Hình 4 Mô hình bờ nuôi tôm ở ình ịnh 18 Hình 5 ơ chế gây bệnh của Vibrio parahaemolyticus trên tôm 20 Hình 6 Hình thái vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus (http://vienloci.org.vn/benh-tom-chet-som-ems/) gây bệnh hoại tử gan tuỵ cấp 25 Hình 7 Tôm thẻ chân trắng có dấu hiệu nhiễm bệnh hoại tử gan tụy (A, ) Gan tụy (HP) teo, màu nhợt nhạt; dạ dày (ST) và ruột (MG) không có thức ăn Hình ( , ) là tôm khỏe cho thấy HP có kích thƣớc bình thƣờng với màu da cam hơi tối, dạ dày và ruột đầy thức ăn Hình ( ) và ( ) là mẫu lấy từ hai con tôm ở hình (A) và ( ) tƣơng ứng (Nguồn: Loc Tran et al., 2013) 26 Hình 8 Sơ đồ tổng quát về vai trò của Probiotics 30 Hình 9 Sơ đồ tổng quan về vòng đời của thực khuẩn thể, bao gồm chu trình lytic và lysogenic 31 Hình 10 Hoạt động kích thích miễn dịch của các hợp chất có nguồn gốc thực vật 33 Hình 11 Sơ đồ tổng quan về vai trò có thể có của hệ thống biofloc đối với vật chủ, mầm bệnh và môi trƣờng trong cơ sở nuôi tôm 35 Hình 12 Kết quả Realtime P R dƣơng tính với AHPN ở mẫu tôm thẻ chân trắng thí nghiệm 52 Hình 12 cho thấy mẫu dƣơng tính với AHPN có đƣờng biểu diễn huỳnh quang FAM và HEX cùng vƣợt lên khỏi ngƣỡng tín hiệu và cũng có một số trƣờng hợp mẫu dƣơng tính mạnh với trình tự mục tiêu, đƣờng biểu diễn huỳnh quang HEX có thể nằm dƣới ngƣỡng tín hiệu 52