Đang tải... (xem toàn văn)
Đặt vấn đềTừ hàng ngàn năm trước Đông trùng hạ thảo đã được ghi lại trong các cuốn ydược kinh điển như là một vị dược liệu nổi tiếng quý hiếm và tốt cho sức khỏe conngười.Theo y học cổ t
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO THỰC TẬP ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA DỊCH CHIẾT ĐƠNG TRÙNG HẠ THẢO Nhóm – Chiều thứ ca Lớp: DH21SHB Giảng viên hướng dẫn: TS Lê Thị Diệu Trang Sinh viên thực hiện: Nguyễn Lan Anh - 21126009 Huỳnh Ngọc Thùy Dương – 21126037 Phạm Thị Mỹ Hạnh - 21126054 Nguyễn Nhật Hịa – 21126347 Thạch Vinh – 21126259 TP.Hồ Chí Minh, tháng 03 năm 2023 MỤC LỤC CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Nội dung đề tài CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 2.1 Đông trùng hạ thảo 2.1.1 Nguồn gốc .3 2.1.2 Phân loại 2.1.3 Đặc điểm sinh học 2.1.4 Đặc điểm hình thái 2.1.5 Ứng dụng 2.2 Vi khuẩn tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) .8 2.2.1 Nguồn gốc .8 2.2.2 Phân loại 2.2.3 Đặc điểm hình thái 2.2.4 Đặc điểm sinh học 2.3 Kháng sinh Tetracillin 2.3.1 Đặc điểm 2.3.2 Cơ chế hoạt động 2.3.3 Ứng dụng 10 CHƯƠNG 3: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 3.1 Thời gian thực 10 3.2 Mục tiêu .10 3.3 Vật liệu đối tượng 10 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu 10 3.3.2 Vật liệu nghiên cứu .10 3.3.3 Dụng cụ thiết bị 10 3.4 Phương pháp nghiên cứu .11 3.4.1 Kiểu bố trí thí nghiệm 11 3.4.2 Các bước thực .11 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .12 4.1 Kết 12 4.2 Thảo luận .12 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN 13 5.1 Kết luận 13 5.2 Nghị luận 13 CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Từ hàng ngàn năm trước Đông trùng hạ thảo ghi lại y dược kinh điển vị dược liệu tiếng quý tốt cho sức khỏe người.Theo y học cổ truyển, đơng trùng hạ thảo có vị ngọt, tính ấm, vào kinh phế, thận, mang đến nhiều công dụng cho sức khỏe người bổ phổi, trừ đàm, bình suyễn, ích thận, bồi bổ sức khỏe, trị lao lực, tăng cường sức khoẻ, nâng cao thể trạng, phòng tránh ung thư, tốt cho đường huyết, tịm mạch, huyết áp, Cordyceps spp hay winter worm summer grass có chất dạng ký sinh của lồi nấm Cordyceps sinensic (thuộc nhóm Ascomycetes) thể sâu Hepialus fabricius, biết đến một loại đơng dược q thức xếp loại dược phẩm với hoạt tính kháng vi sinh vật, kháng ung thư, ngừa di căn, điều hòa miễn dịch Ngày nghiên cứu khoa học đại ra, thành phần dưỡng chất quan trọng có đơng trùng hạ thảo Cordycepin, Adenosine, nhóm HEAA (Hydroxyethyl Adenosine Analogs), protein, vitamin khống chất có tác dụng kháng ung thư, kháng vi sinh vật, ức chế trình di của tế bào ung thư, nâng cao khả miễn dịch cho thể, tăng cường sức khỏe Ngồi cịn có tác dụng tăng cường hoạt động miễn dịch, điều tiết phản ứng đáp tế bào lympho, ngăn cản virus, vi khuẩn gây bệnh xâm hiệu Với hoạt tính mà Đơng trùng hạ thảo có tiến hành nghiên cứu khả kháng khuẩn của cao chiết Đông trùng hạ thảo (Cordyceps millitaris) 1.2 Mục tiêu đề tài Đánh giá khả kháng khuẩn của cao chiết Đông trùng hạ thảo (Cordyceps millitaris) 1.3 Nội dung đề tài Tiến hành đánh giá khả kháng khuẩn của dịch chiết đông trùng hạ thảo dựa theo phương pháp khuếch tán kháng sinh thạch (Kirby Bauer) Sau 24-48 tiến hành quan sát, đọc kết quả, so sánh đánh giá khả kháng khuẩn của Đông trùng hạ thảo (Cordyceps millitaris) CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đông trùng hạ thảo 2.1.1 Nguồn gốc Đông trùng hạ thảo giống nấm ký sinh lồi sâu non Sở dĩ chúng có tên gọi “đông trùng hạ thảo” chúng kết tượng vào mùa đơng, ấu trùng lồi bướm thuộc chi Thitarodes bị nấm thuộc chi Ophiocordyceps Cordyceps ký sinh Đó dạng ký sinh lồi nấm túi có tên khoa học Ophiocordyceps sinensis với sâu non (ấu trùng) của lồi trùng thuộc chi Thitarodes Sau đó, loại nấm hút chất dinh dưỡng từ bên thể ấu trùng lớn lên theo dạng sợi Sau thời gian – thường mùa hè, sợi nấm phát triển mạnh nhờ sử dụng dưỡng chất xác trùng, nấm thoát khỏi xác sâu vươn lên mặt đất, phát triển thành Đông trùng hạ thảo 2.1.2 Phân loại Giới: Nấm Ngành: Ascomycoa Ngành phụ: Ascomycotina Lớp: Ascomycetes/Pyrenomycetes Bộ: Hypocreales Họ: Clavicipataceae Hình 1: Nấm đơng trùng hạ thảo Giới: Cordyceps Loài: Cordyceps militaris Phân loại theo chủng loài: Loài Miles Berkeley miêu tả khoa học lần năm 1843 Sphaeria sinensis Loài biết đến Cordyceps sinensis năm 2007, phân tích phát sinh chủng lồi phân tử sử dụng để sửa đổi phân loại của họ Cordycipitaceae Clavicipitaceae, với kết tạo tên gọi cho họ Ophiocordycipitaceae việc chuyển số lồi Cordyceps sang chi Ophiocordyceps Hiện nay, có 400 lồi Đơng trùng hạ thảo, hầu hết có nguồn gốc từ Bhutan, Trung Quốc, Hàn Quốc, Nepal, Thái Lan Việt Nam Lồi nhân ni phổ biến quy mô công nghiệp C militaris có dược tính cao thời gian sản xuất ngắn Phân loại theo xuất xứ: + Tự nhiên: chủ yếu khai thác vùng cao nguyên Tây Tạng + Nhân tạo: nuôi cấy nhộng tằm số môi trường hữu khác 2.1.3 Đặc điểm sinh học Nấm Đơng trùng hạ thảo (cịn gọi Đông trùng thảo, Trùng thảo hay Hạ thảo đông trùng) loài nấm ký sinh sâu non, nhộng sâu trưởng thành của số lồi trùng Loài nấm nhà khoa học Trung Quốc xác định vùng núi cao nguyên Tây Tạng thuộc chi Cordyceps C sinensis ký sinh vào ấu trùng của loài bướm thuộc chi Thitarodes Năm 1878, nhà khoa học phát loài C militaris ký sinh ấu trùng của lồi trùng thuộc chi Thitarodes 2.1.3.1 Sự phân bố đông trùng hạ thảo tự nhiên Sự phân bố của nấm Đơng trùng hạ thảo hay lồi thuộc chi Cordyceps phụ thuộc vào nhiệt độ, độ ẩm ánh sáng của môi trường Chúng thường phân bố vùng núi có độ cao từ 2000- 3000m so với mực nước biển Dựa đặc điểm hình thái đặc điểm thơng tin di truyền, lồi nấm thuộc họ bao gồm chi chủ yếu là: Cordyceps, Elaphocordyceps, Metacordyceps Ophiocordyceps Nấm Đông trùng hạ thảo dùng để sản xuất dược liệu xác định gồm 680 loài khác nhau, riêng Trung Quốc tìm thấy 60 lồi Trong cơng bố của nhà khoa học Hàn Quốc, 25 loài nấm thuộc chi Cordyceps phân bố Hàn Quốc mô tả đặc điểm hình thái hình ảnh bao gồm: C adaesanensis, C agriota Kawamura, C bifisispora, C crassispora, C discoideocapiata, C formicarum, C gemiculata, C gracilis, C heteropoda, C ishikariensis, C kyushuensis, C martialis, C militaris, C nutans, C ochraceostromata, C ophioglossoides, C oxycephala, C pentatoni, C pruinosa, C rosea, C scarabaeicola, C sinensis, C sphecocephala, C tricentri, C yongmoonensis Sự phân bố của nấm Đông trùng hạ thảo hay loài thuộc chi Cordyceps phụ thuộc vào nhiệt độ, độ ẩm ánh sáng của môi trường Thành phần lồi nấm Đơng trùng hạ thảo phong phú vùng sinh thái khác nhiều loài có phạm vi phân bố rộng, lồi có đặc điểm phân bố đặc hữu cho vùng Chúng tìm thấy tự nhiên quốc gia: Trung Quốc, Hàn Quốc, Thái Lan, Nhật Bản, Việt Nam,… 2.1.3.2 Cấu tạo hình thái số lồi nấm thuộc chi Cordyceps Trong tự nhiên, nấm Cordyceps để hoàn thành chu kỳ sinh trưởng của chúng phải trải qua nhiều giai đoạn phát triển phức tạp, từ giai đoạn sống đất tới sau lây nhiễm vào thể ấu trùng, chúng chịu cạnh tranh với vi khuẩn khác, chí cạnh tranh với lồi chi Cordyceps Mơ tả hình thái số lồi nấm thuộc chi Cordyceps: Loài Ấu trùng Phần thể ấu trùng giống Quả thể nhộng tằm, có chiều Quả thể hình trụ mảnh, 4-7 cm C sinensis dài từ 3-5 cm, đường kính chiều dài khoảng mm, với từ 3-8 mm, màu vàng đậm đỉnh nhọn tới vàng nâu Cơ thể ấu trùng giống tằm, mảnh,chiều C gracilis dài 2-4 cm đường kính 2-5 mm; màu vàng nâu, tím, nâu nâu đỏ Cơ thể ấu trùng cong hình C barnesii thận, ngắn, 1,5-2 cm chiều dài, đầu nhỏ, với cặp C militaris Môi chất dinh Quả thể sợi chỉ, 2-3 cm chiều dài khoảng mm đường kính, với phần phình đỉnh, có hình cầu Quả thể bám khơng Chỉ có thể, mảnh cong, 2- cm chiều dài khoảng mm đường kính dưỡng Quả thể có kích thước to từ khơng có thể ấu trùng xuống dưới, cong, chiều dài khoảng cm, màu vàng cam đến màu đỏ da cam 2.1.4 Đặc điểm hình thái Đơng trùng hạ thảo tự nhiên cịn sống, người ta trơng rõ hình sâu, với đuôi cành nhỏ, mọc Khi sấy khơ, có mùi cá, đốt lên có mùi thơm Phần "lá" hình dạng giống ngón tay, dài khoảng 4-11 cm sợi nấm mọc dính liền vào đầu sâu non mà thành Đầu sâu non giống tằm, dài chừng 3-5 cm, đường kính khoảng 0,3-0,8 cm Bên ngồi có màu vàng sẫm nâu vàng với khoảng 20-30 vằn khía, vằn khía gần đầu nhỏ Đông trùng hạ thảo nhân tạo mọc lên từ mơi trường ni cấy có hình sợi dài khoảng 5-7cm, màu vàng cam nhạt vàng cam sẫm tùy vào điều kiện ni trồng, giống cấy Hình 2: đông trùng hạ thảo nhân tạo (bên trái) tự nhiên (bên phải) 2.1.5 Ứng dụng Hoạt chất quan trọng của Đông trùng hạ thảo cordycepin, hoạt chất hữu ích để cải thiện sức khỏe người Đó thước đo giá trị của Đông trùng hạ thảo Tăng cường hàm lượng Cordycepin chủng Đông trùng hạ thảo nuôi nhân tạo việc mà nhà nuôi trồng chúng hướng tới Dưới số lợi ích đến từ Đơng trùng hạ thảo: Tăng số lượng tinh trùng: Lượng Cordycepin tế bào tăng thời gian sử dụng chế phẩm nên có khả chất làm tăng lượng tinh dịch chất lượng tinh trùng lợn Hạn chế virus cúm: Acidic polysaccharide (APS) tách chiết từ nấm Cordyceps militaris ni trồng đậu nành nảy mầm có khả ứng dụng điều trị cúm A Chất góp phần điều hịa hoạt động miễn dịch của đại thực bào Tan huyết khối: Enzyme tiêu sợi huyết tách chiết từ nấm Cordyceps militaris có hoạt tính gắn fibrin đo xúc tiến việc phân hủy fibrin nghiên cứu để thay cho enzyme fibrinolytic giá thành cao sử dụng cho bệnh tim lão hóa người Tính kháng viêm: dịch chiết từ thể nấm Cordyceps militaris (CMWE) thử nghiệm cho thấy có tác dụng ức chế mạnh đến việc sản xuất chất trung gian gây viêm của tế bào 2.1.5.1 Chất chống oxy hóa Hoạt tính kháng oxy hóa: Các nghiên cứu cho thấy chất CM-hs-CPS2 chứatrong dịch chiết nấm Cordyceps militaris có tính kháng DPPH, hoạt tính khử tạo phức nồng độ (8mg/m) 89%, 1,188 85% 2.1.5.2 Kháng tế bào ung thư Các hợp chất chống ung thư: Hợp chất Cordycepin (3′-deoxyadenosine) từ nấm cho thấy có hoạt tính kháng vi sinh vật, kháng ung thư, ngừa di căn, điều hòa miễn dịch Kháng khuẩn, kháng nấm kháng ung thư: Cordycepin ngăn biểu của gen T2D chịu trách nhiệm điều hịa bệnh tiểu đường thơng qua việc ức chế đáp ứng viêm phụ thuộc NF-κB, hi vọng ứng dụng chất điềuB, hi vọng ứng dụng chất điều hòa miễn dịch dùng điều trị bệnh miễn dịch 2.1.5.3 Chống mệt mỏi stress Dịch chiết nước nóng của Cordyceps sinensis có tác dụng chống mệt mỏi stress chuột ICR chuột Sprague-Dawly 2.1.5.4 Cải thiện hệ hô hấp Dịch chiết cồn cho kết quả: + Ức chế tăng sinh tế bào BALF (Bronchoalveolar lavage fluids) hoạt hóa lipopolysaccharide (LPS) + Ức chế sản xuất IL-1 beta, IL-6, IL-8, IL-10 INF – alpha BALF 2.1.5.5 Chống sợi hóa gan Trên mơ hình chuột Sprague –Dawly, gây sợi hóa gan Dimethyl nitrosamine, cho uống Cordyceps sinensis, kết cho thấy giảm đáng kể sợi hóa gan, thúc đẩy thoái giáng chất collagen Hydroxyproline, ức chế metalloproteinase – mô, collagen loại IV loại I 2.1.5.6 Kích thích hệ miễn dịch Tính chất điều hòa hệ miễn dịch của polysaccharides từ Cordyceps sinensis khảo qua xét nghiệm máu ngoại vi Kết quả: Dịch chiết có khả gây sản xuất yếu tố hoại tử bướu alpha (TNF-alpha), Interleukin (IL)-6, IL-10 2.2 Vi khuẩn tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) 2.2.1 Nguồn gốc Staphylococcus aureus Robert Koch phát năm 1878 sau thực phân lập từ mủ ung nhọt Năm 1880 Louis Paster tiến hành phân lập nghiên cứu Staphylococcus aureus Ngày 09/04/1880 bác sĩ người Scotland Alexander Ogston trình bày hội nghị lần thứ hội phẫu thuật Đức báo cáo khoa học, ơng sử dụng khái niệm tụ cầu khuẩn (Staphylococcus) trình bày tương đối đầy đủ vai trò của vi khuẩn bệnh lý sinh mủ lâm sàng Đến năm 1881 Ogston thành công việc gây bệnh thực nghiệm, tiền đề cho nghiên cứu S aureus sau Đến năm 1884 Rosenbach thực loạt nghiên cứu tỉ mỉ vi khuẩn Và ông đặt tên cho vi khuẩn Staphylococcus aureus Năm 1926 Julius von Daranyi người phát mối tương quan diện hoạt động men coagulase huyết tương của vi khuẩn với khả gây bệnh của Tuy nhiên đến năm 1948 phát chấp nhận rộng rãi 2.2.2 Phân loại Giới: Eubacteria Ngành: Firmicutes Lớp: Bacilli Bộ: Bacillales Họ: Staphylococcaceae Hình 3: Staphylococcus aureus kính vi điện tử 20,0 Chi: Staphylococcus Trên phương diện gây bệnh, tụ cầu khuẩn chia thành hai nhóm chính: tụ cầu có coagulase tụ cầu khơng có coagulase S aureus gây bệnh ngộ độc thực phẩm tụ cầu có coagulase Nhờ enzyme mà mơi trường ni cấy có máu, vi khuẩn tạo nên khuẩn lạc màu vàng nên gọi tụ cầu vàng Phân loại tụ cầu dựa kháng nguyên: Các tụ cầu có nhiều loại kháng nguyên: protein, polysaccharid, acid teichoic của vách tế bào vi khuẩn Nhưng dựa vào kháng nguyên, việc định loại vi khuẩn khó khăn Phân loại tụ cầu dựa phage (phage type): tụ cầu phân vào nhóm I, II, III, IV Đây phương pháp sử dụng nhiều phân loại S Aureus 2.2.3 Đặc điểm hình thái Tụ cầu (“Staphylococcus” bắt nguồn từ tiếng Hy lạp, với “staphyle” có nghĩa chùm nho) Tế bào tụ cầu khuẩn S aureus hình trịn, đường kính 0,5-1µm, khơng di động, khơng sinh nha bào, khơng sinh bào tử, khơng có vỏ capsule (giáp mơ), khơng có lơng, bắt màu Gram dương 2.2.4 Đặc điểm sinh học Vi khuẩn tụ cầu vàng có khả hình thành màng sinh học bảo vệ không bị thực bào bạch cầu đa nhân (PMN), sinh độc tố khả gây bệnh Các loại độc tố: Tụ cầu vàng sản sinh 11 độc tố: độc tố gây hội chứng sốc nhiễm độc (TSSTToxic shock syndrome toxin); độc tố exfoliatin hay độc tố epidermolitic; độc tố alpha; độc tố bạch cầu (leucocidin); ngoại độc tố sinh mủ (pyrogenic); dung huyết tố (hemolysin hay staphylolysin); fribrinolysin (staphylokinase); coagulase; hyaluronidase; β – lactamase độc tố ruột (enterotoxin)– có SEB Ngồi ra, tụ cầu có hệ enzyme phong phú góp phần làm tăng độc lực của chúng tế bào vật chủ 2.3 Kháng sinh Tetracillin 2.3.1 Đặc điểm Kháng sinh Tetracycline tiếng với phổ hoạt động rộng, trải rộng nhiều loại vi khuẩn Gram dương âm, xoắn khuẩn, vi khuẩn nội bào bắt buộc, ký sinh trùng đơn bào Các tetracycline sản phẩm tự nhiên có nguồn gốc từ q trình lên men của xạ khuẩn 2.3.2 Cơ chế hoạt động Tetracycline ưu tiên liên kết với ribosome của vi khuẩn tương tác với mục tiêu RNA ribosome 16S (rRNA) bảo tồn cao tiểu đơn vị 30S của ribosome, bắt giữ trình dịch mã cách can thiệp vào vị trí của RNA chuyển aminoacyl (tRNA) trình kéo dài Tetracycline thường coi kháng sinh kìm khuẩn; nhiên, hoạt tính diệt khuẩn cụ thể của sinh vật phân lập ống nghiệm gần đây, hoạt tính diệt khuẩn của tigecycline E coli K pneumoniae mơ hình chuột cho thấy đánh giá khả diệt khuẩn in vitro khơng thiết dự đoán kết in vivo 2.3.3 Ứng dụng Tetracycline , bán nhiều tên thương hiệu khác nhau, loại thuốc kháng sinh đường uống thuộc họ thuốc tetracycline , sử dụng để điều trị số bệnh nhiễm trùng, bao gồm mụn trứng cá, bệnh tả, bệnh brucella, bệnh dịch hạch, sốt rét giang mai CHƯƠNG 3: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Thời gian thực - Thời gian: Vào lúc 13h30 chiều thứ 6, ngày 03/03/2023 - Địa điểm: Tại phòng BIO317, tịa nhà A1, Đại học Nơng Lâm TP HCM 3.2 Mục tiêu Đánh giá khả kháng khuẩn của dịch chiết đông trùng hạ thảo 3.3 Vật liệu đối tượng 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu - Dịch chiết đông trùng hạ thảo 3.3.2 Vật liệu nghiên cứu - Dịch chiết đông trùng hạ thảo - Vi khuẩn cầu vàng (Staphylococcus aureus) - Kháng sinh Tetracillin 3.3.3 Dụng cụ thiết bị - Thiết bị: Nồi hấp, tủ cấy, tủ sấy,… - Dụng cụ thí nghiệm - Vật tư tiêu hao - Hóa chất: Mơi trường Potato Dextrose agar (PDA) Thạch khoai tây môi trường dùng để phát nấm men, nấm mốc bơ, sản phẩm từ sữa thực phẩm khác Môi trường PDA sử dụng để 10 chuẩn bị nấm Aspergillus niger xét nghiệm Harmonised Microbial Limit Tests (enumeration test) Vai trị của mơi trường PDA: Potato Dextrose Agar (PDA) chứa dextrose nguồn carbonhydrate cho trình tăng trưởng, dịch khoai tây cung cấp nguồn dinh dưỡng cho phát triển của hầu hết loại nấm Thạch tác nhân làm đặc môi trường Một số ứng dụng của môi trường PDA: Phân lập nấm men nấm mốc sản phẩm từ sữa, thịt thực phẩm khác (thực phẩm) Phát nấm mốc chịu nhiệt sản phẩm (trái cây) qua xử lý nhiệt (thực phẩm) 3.4 Phương pháp nghiên cứu 3.4.1 Kiểu bố trí thí nghiệm Thí nghiệm tiến hành theo phương pháp khuếch tán kháng sinh thạch (Kirby Bauer) Sau 24-48 ,đo đường kính dựa vào đường kính xác định độ nhảy của kháng sinh ,tạo vịng trịn khơng có vi khuẩn Khoanh giấy khuếch tán môi trường thạch ức chế phát triển của vi khuẩn 3.4.2 Các bước thực Bước 1: Chuẩn bị đủ dụng cụ thí nghiệm vệ sinh chỗ cấy theo quy trình Bước 2: Sát khuẩn tay dụng cụ, châm lửa đèn cồn Bước 3: Hơ nóng que cấy thành đĩa, dùng kim tiêm hút lượng nhỏ dung dịch khuẩn tụ cầu vàng bơm vào đĩa thạch Bước 4: Dùng que cấy trang đĩa ,tới dung dịch khơ hồn tồn đặt đĩa kháng sinh vào đĩa thạch nhíp kẹp Bước 5: Đậy nắp đĩa quấn màng bọc thực phẩm lại để khơng cho mẩu nấm phát tán ngồi Bỏ tất đĩa vào túi nilong buộc lại Trong trình làm thí nghiệm để tránh mẫu bị nhiễm bẩn, cần đặt mẫu gần đèn cồn trơng suốt q trình thí nghiệm 11 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết Sau q trình ni cấy quan sát phát triển của vi khuẩn cầu vàng (Staphylococcus aureus) Ghi nhận kết sau ngày nuôi cấy sau: Đĩa Đĩa Đĩa Đĩa Hình 4: Tác dụng kháng khuẩn của cao chiết đông trùng hạ thảo 4.2 Thảo luận Nhận xét: Do lúc cấy chưa sát khuẩn tay kỹ, dụng cụ cấy khơng hơ nóng kỹ, thao tác chưa chuẩn nên cấy bị tạp nhiễm thời gian ủ tế bào nấm mốc phát triển Đồng thời nấm mốc tác động khiến cho vi khuẩn lên khơng khơng thể xuất Khắc Phục: Điều quan trọng q trình ni cấy vi sinh vật tránh khơng đưa thêm vi sinh vật ngoại nhiễm vào môi trường ni cấy Muốn vậy, ngồi thao tác ln phải tiến hành điều kiện vô trùng, yếu tố từ môi trường, dụng cụ chứa, dụng cụ nuôi cấy đến vật dụng cần thiết khác phải khử trùng thích hợp để vơ trùng trước sử dụng Trước tiến hành cấy, cần vệ sinh nơi cấy dung dịch cồn, rửa tay dung dịch cồn trước bắt đầu cấy (để hạn chế tạp nhiễm trình cấy) Thao tác cấy thực không gian vô trùng tạo lửa đèn cồn, lửa đèn cồn có tác dụng oxy hóa khơng khí tạo khơng gian vơ trùng, đồng thời dùng để đốt khử trùng que cấy, miệng chai lọ, ống nghiệm mở, đóng, nút bông, nắp nhựa… Để tránh việc gây nhiễm thông qua tiếp xúc, cần mang găng tay tiến hành sát trùng tay cồn 70° dung dịch diệt khuẩn Kết đánh giá khả kháng khuẩn của đơng trùng hạ thảo thể vịng kháng khuẩn của đối chứng dương, đối chứng âm dịch cao chiết đông trùng hạ thảo vi khuẩn tụ cầu vàng thống kê Bảng 1: 12 Lần lặp lại Độ lệch chuẩn Đường kính vịng kháng khuẩn (mm) Đối chứng dương Đối chứng âm Cao chiết ĐTHT (Tetracillin) 3,5 4,5 3,75 ± 0,645 0 0 0 0 SD Bảng 1: Đường kính vịng kháng khuẩn của cao chiết đông trùng hạ thảo CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN 5.1 Kết luận Sau ngày nuôi cấy đĩa, ta thấy vịng trịn khơng xuất vi khuẩn gọi vùng ức chế dựa vào mà ta đưa kết luận mức độ nhạy của kháng sinh khả kháng thuốc của vi khuẩn Kết quan sát đối chứng dương (kháng sinh Tetracilin) có xuất vịng trịn kháng khuẩn, cịn cao chiết đơng trùng hạ thảo đối chứng âm lại khơng thấy có xuất vòng kháng khuẩn Sau tham khảo số nhóm nghiên cứu cho thấy dịch chiết đơng trùng hạ thảo có khả tạo vịng kháng khuẩn Nên thời gian dài (3 ngày) khả đối kháng của dịch chiết giảm vi khuẩn phát triển mạnh nồng độ dịch chiết thấp nên khả kháng khuẩn bị q trình thực thao tác khơng dẫn đến kết không 5.2 Nghị luận Kiến nghị cần thực thêm nghiên cứu/ thí nghiệm với nồng độ vi khuẩn, dịch chiết khác (tăng nồng độ cao chiết đông trùng hạ thảo) Đồng thời theo dõi, ghi nhận kết khoảng thời gian khác nhau, giảm khoảng cách thời gian lần nhận kết Giảm thời gian quan sát ghi kết xuống 24 48 13