Ttnctptn chiều thứ 6 ca 3 nhóm 2 bài 3

Đặt vấn đềTừ hàng ngàn năm trước Đông trùng hạ thảo đã được ghi lại trong các cuốn ydược kinh điển như là một vị dược liệu nổi tiếng quý hiếm và tốt cho sức khỏe conngười.Theo y học cổ t

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC



BÁO CÁO THỰC TẬP

ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN

CỦA DỊCH CHIẾT ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO

Nhóm 2 – Chiều thứ 6 ca 3

Lớp: DH21SHB

Giảng viên hướng dẫn : TS Lê Thị Diệu Trang

Sinh viên thực hiện:

Nguyễn Lan Anh - 21126009 Huỳnh Ngọc Thùy Dương – 21126037 Phạm Thị Mỹ Hạnh - 21126054

Nguyễn Nhật Hòa – 21126347 Thạch Vinh – 21126259

TP.Hồ Chí Minh, tháng 03 năm 2023

MỤC LỤC

CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU 2

1.1 Đặt vấn đề 2

1.2 Mục tiêu đề tài 2

1.3 Nội dung đề tài 2

CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Đông trùng hạ thảo 3

2.1.1 Nguồn gốc 3

2.1.2 Phân loại 3

2.1.3 Đặc điểm sinh học 4

2.1.4 Đặc điểm hình thái 6

2.1.5 Ứng dụng 6

2.2 Vi khuẩn tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) 8

2.2.1 Nguồn gốc 8

2.2.2 Phân loại 8

2.2.3 Đặc điểm hình thái 9

2.2.4 Đặc điểm sinh học 9

2.3 Kháng sinh Tetracillin 9

2.3.1 Đặc điểm 9

2.3.2 Cơ chế hoạt động 9

2.3.3 Ứng dụng 10

CHƯƠNG 3: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10

3.1 Thời gian thực hiện 10

3.2 Mục tiêu 10

3.3 Vật liệu và đối tượng 10

3.3.1 Đối tượng nghiên cứu 10

3.3.2 Vật liệu nghiên cứu 10

3.3.3 Dụng cụ và thiết bị 10

3.4 Phương pháp nghiên cứu 11

3.4.1 Kiểu bố trí thí nghiệm 11

3.4.2 Các bước thực hiện 11

CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 12

4.1 Kết quả 12

4.2 Thảo luận 12

CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN 13

5.1 Kết luận 13

5.2 Nghị luận 13

CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU

1.1 Đặt vấn đề

Từ hàng ngàn năm trước Đông trùng hạ thảo đã được ghi lại trong các cuốn y dược kinh điển như là một vị dược liệu nổi tiếng quý hiếm và tốt cho sức khỏe con người.Theo y học cổ truyển, đông trùng hạ thảo có vị ngọt, tính ấm, đi vào kinh phế, thận, mang đến rất nhiều công dụng cho sức khỏe con người như bổ phổi, trừ đàm, bình suyễn, ích thận, bồi bổ sức khỏe, trị lao lực, tăng cường sức khoẻ, nâng cao thể trạng, phòng tránh ung thư, tốt cho đường huyết, tịm mạch, huyết áp,

Cordyceps spp hay winter worm summer grass có bản chất là dạng ký sinh của

loài nấm Cordyceps sinensic (thuộc nhóm Ascomycetes) trên cơ thể sâu Hepialus

fabricius, được biết đến là một một loại đông dược quý và đã được chính thức xếp loại

như một dược phẩm với các hoạt tính kháng vi sinh vật, kháng ung thư, ngừa di căn, điều hòa miễn dịch

Ngày nay những nghiên cứu khoa học hiện đại cũng đã chỉ ra, thành phần dưỡng chất quan trọng có trong đông trùng hạ thảo như Cordycepin, Adenosine, nhóm HEAA (Hydroxyethyl Adenosine Analogs), protein, vitamin và khoáng chất có tác dụng kháng ung thư, kháng vi sinh vật, ức chế quá trình di căn của các tế bào ung thư, nâng cao khả năng miễn dịch cho cơ thể, tăng cường sức khỏe Ngoài ra còn có tác dụng tăng cường các hoạt động miễn dịch, điều tiết phản ứng đáp tế bào lympho, ngăn cản các virus, vi khuẩn gây bệnh xâm cực kỳ hiệu quả

Với những hoạt tính mà Đông trùng hạ thảo đã có tiến hành nghiên cứu khả

năng kháng khuẩn của cao chiết Đông trùng hạ thảo (Cordyceps millitaris).

1.2 Mục tiêu đề tài

Đánh giá khả năng kháng khuẩn của cao chiết Đông trùng hạ thảo (Cordyceps

millitaris).

1.3 Nội dung đề tài

Tiến hành đánh giá khả năng kháng khuẩn của dịch chiết đông trùng hạ thảo dựa theo phương pháp khuếch tán kháng sinh trong thạch (Kirby Bauer) Sau 24-48 giờ tiến hành quan sát, đọc kết quả, so sánh và đánh giá khả năng kháng khuẩn của

Đông trùng hạ thảo (Cordyceps millitaris).

CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Đông trùng hạ thảo

2.1.1 Nguồn gốc

Đông trùng hạ thảo là một giống nấm ký sinh trên loài sâu non Sở dĩ chúng có tên gọi “đông trùng hạ thảo” do chúng là kết quả hiện tượng vào mùa đông, ấu trùng

các loài bướm thuộc chi Thitarodes bị nấm thuộc chi Ophiocordyceps hoặc Cordyceps

ký sinh Đó là một dạng ký sinh giữa một loài nấm túi có tên khoa học là

Ophiocordyceps sinensis với sâu non (ấu trùng) của một loài côn trùng thuộc chi Thitarodes Sau đó, loại nấm này sẽ hút chất dinh dưỡng từ bên trong cơ thể ấu trùng

và lớn lên theo dạng sợi Sau 1 thời gian – thường là mùa hè, sợi nấm phát triển mạnh nhờ sử dụng dưỡng chất trong xác trùng, nấm thoát ra khỏi xác sâu và vươn lên mặt đất, phát triển thành Đông trùng hạ thảo

2.1.2 Phân loại

Giới: Nấm

Ngành: Ascomycoa

Ngành phụ: Ascomycotina

Lớp: Ascomycetes/Pyrenomycetes

Bộ: Hypocreales

Họ: Clavicipataceae

Giới: Cordyceps

Loài: Cordyceps militaris

Phân loại theo chủng loài: Loài này được Miles Berkeley miêu tả khoa học lần

đầu tiên năm 1843 như là Sphaeria sinensis Loài này được biết đến như là Cordyceps

sinensis cho tới năm 2007, khi phân tích phát sinh chủng loài phân tử được sử dụng để

sửa đổi phân loại của 2 họ Cordycipitaceae và Clavicipitaceae, với kết quả là tạo ra tên gọi cho một họ mới là Ophiocordycipitaceae và việc chuyển một số loài

Cordyceps sang chi Ophiocordyceps Hiện nay, có hơn 400 loài Đông trùng hạ thảo,

hầu hết có nguồn gốc từ Bhutan, Trung Quốc, Hàn Quốc, Nepal, Thái Lan và Việt

Nam Loài được nhân nuôi phổ biến trên quy mô công nghiệp nhất hiện nay là C.

militaris do có dược tính cao và thời gian sản xuất ngắn.

Hình 1: Nấm đông trùng hạ thảo

Phân loại theo xuất xứ:

+ Tự nhiên: chủ yếu được khai thác ở vùng cao nguyên Tây Tạng

+ Nhân tạo: được nuôi cấy trên nhộng tằm hoặc một số môi trường hữu cơ khác

2.1.3 Đặc điểm sinh học

Nấm Đông trùng hạ thảo (còn gọi là Đông trùng thảo, Trùng thảo hay Hạ thảo đông trùng) là các loài nấm ký sinh trên sâu non, nhộng hoặc sâu trưởng thành của một

số loài côn trùng Loài nấm đầu tiên các nhà khoa học Trung Quốc xác định trên vùng

núi trên cao nguyên Tây Tạng thuộc chi Cordyceps là C sinensis ký sinh vào ấu trùng của loài bướm thuộc chi Thitarodes Năm 1878, các nhà khoa học phát hiện ra loài C.

militaris cũng ký sinh trên ấu trùng của các loài côn trùng thuộc chi Thitarodes.

2.1.3.1 Sự phân bố của đông trùng hạ thảo trong tự nhiên

Sự phân bố của nấm Đông trùng hạ thảo hay các loài thuộc chi Cordyceps phụ

thuộc vào nhiệt độ, độ ẩm và ánh sáng của môi trường Chúng thường phân bố ở vùng núi có độ cao từ 2000- 3000m so với mực nước biển Dựa trên đặc điểm hình thái cũng như đặc điểm về thông tin di truyền, các loài nấm thuộc họ này bao gồm các chi chủ

yếu là: Cordyceps, Elaphocordyceps, Metacordyceps và Ophiocordyceps

Nấm Đông trùng hạ thảo dùng để sản xuất dược liệu được xác định gồm hơn

680 loài khác nhau, chỉ riêng Trung Quốc đã tìm thấy hơn 60 loài Trong công bố của

các nhà khoa học Hàn Quốc, 25 loài nấm thuộc chi Cordyceps phân bố ở Hàn Quốc được mô tả đặc điểm hình thái và hình ảnh bao gồm: C adaesanensis, C agriota

Kawamura, C bifisispora, C crassispora, C discoideocapiata, C formicarum, C gemiculata, C gracilis, C heteropoda, C ishikariensis, C kyushuensis, C martialis,

C militaris, C nutans, C ochraceostromata, C ophioglossoides, C oxycephala, C.

pentatoni, C pruinosa, C rosea, C scarabaeicola, C sinensis, C sphecocephala, C tricentri, C yongmoonensis

Sự phân bố của nấm Đông trùng hạ thảo hay các loài thuộc chi Cordyceps phụ

thuộc vào nhiệt độ, độ ẩm và ánh sáng của môi trường Thành phần loài nấm Đông trùng hạ thảo khá phong phú ở trên các vùng sinh thái khác nhau và nhiều loài có phạm vi phân bố rộng, các loài có đặc điểm phân bố đặc hữu cho từng vùng Chúng được tìm thấy trong tự nhiên ở các quốc gia: Trung Quốc, Hàn Quốc, Thái Lan, Nhật Bản, Việt Nam,…

2.1.3.2 Cấu tạo hình thái của một số loài nấm thuộc chi

Cordyceps

Trong tự nhiên, nấm Cordyceps để hoàn thành chu kỳ sinh trưởng của mình

chúng phải trải qua nhiều giai đoạn phát triển phức tạp, từ giai đoạn sống trong đất tới sau khi lây nhiễm vào cơ thể ấu trùng, chúng chịu sự cạnh tranh với các vi khuẩn khác,

thậm chí cạnh tranh với các loài trong chi Cordyceps Mô tả hình thái một số loài nấm thuộc chi Cordyceps:

C sinensis

Phần cơ thể ấu trùng giống như nhộng tằm, có chiều dài từ 3-5 cm, đường kính

từ 3-8 mm, màu vàng đậm tới vàng nâu

Quả thể hình trụ mảnh, 4-7 cm chiều dài và khoảng 3 mm, với đỉnh nhọn

C gracilis

Cơ thể ấu trùng giống như một con tằm, mảnh,chiều dài 2-4 cm và đường kính 2-5 mm; màu vàng nâu, tím, nâu hoặc nâu đỏ

Quả thể như sợi chỉ, 2-3 cm chiều dài và khoảng 2 mm đường kính, với phần phình ra ở đỉnh, có hình cầu Quả thể bám không chắc

C barnesii

Cơ thể ấu trùng cong hình thận, ngắn, 1,5-2 cm chiều dài, đầu nhỏ, với một cặp răng

Chỉ có 1 quả thể, mảnh và cong, 2- 6 cm chiều dài và khoảng 2

mm đường kính

C militaris Môi chất dinh dưỡng

không có cơ thể ấu trùng

Quả thể có kích thước to đều từ trên xuống dưới, hơi cong, chiều

dài khoảng 5 cm, màu vàng cam đến màu đỏ da cam

2.1.4 Đặc điểm hình thái

Đông trùng hạ thảo tự nhiên khi còn sống, người ta có thể trông rõ hình con sâu, với đuôi là một cành nhỏ, mọc lá Khi sấy khô, nó có mùi tanh như cá, đốt lên có mùi thơm Phần "lá" hình dạng giống ngón tay, dài khoảng 4-11 cm do sợi nấm mọc dính liền vào đầu sâu non mà thành Đầu sâu non giống như con tằm, dài chừng 3-5

cm, đường kính khoảng 0,3-0,8 cm Bên ngoài có màu vàng sẫm hoặc nâu vàng với khoảng 20-30 vằn khía, vằn khía ở gần đầu nhỏ hơn Đông trùng hạ thảo nhân tạo mọc lên từ môi trường nuôi cấy sẽ có hình sợi dài khoảng 5-7cm, màu vàng cam nhạt hoặc vàng cam sẫm tùy vào điều kiện nuôi trồng, giống cấy

Hình 2: đông trùng hạ thảo nhân tạo (bên trái) và tự nhiên (bên phải)

2.1.5 Ứng dụng

Hoạt chất quan trọng nhất của Đông trùng hạ thảo là cordycepin, đây là một hoạt chất hữu ích để cải thiện sức khỏe con người Đó cũng là thước đo giá trị của

Đông trùng hạ thảo Tăng cường hàm lượng Cordycepin trong chủng Đông trùng hạ

thảo nuôi nhân tạo luôn là việc mà các nhà nuôi trồng chúng hướng tới Dưới đây là một số lợi ích đến từ Đông trùng hạ thảo:

Tăng số lượng tinh trùng: Lượng Cordycepin trong tế bào tăng trong thời gian

sử dụng chế phẩm nên có khả năng chất này làm tăng lượng tinh dịch và chất lượng tinh trùng ở lợn

Hạn chế virus cúm: Acidic polysaccharide (APS) tách chiết từ nấm Cordyceps

militaris nuôi trồng trên đậu nành nảy mầm có khả năng ứng dụng trong điều trị cúm

A Chất này góp phần điều hòa hoạt động miễn dịch của các đại thực bào

Tan huyết khối: Enzyme tiêu sợi huyết tách chiết từ nấm Cordyceps militaris có

hoạt tính gắn fibrin và đo đó xúc tiến việc phân hủy fibrin đang được nghiên cứu để

thay thế cho các enzyme fibrinolytic giá thành cao hiện đang được sử dụng cho bệnh tim lão hóa ở người

Tính kháng viêm: dịch chiết từ quả thể nấm Cordyceps militaris (CMWE) đã

được thử nghiệm cho thấy có tác dụng ức chế mạnh đến việc sản xuất các chất trung gian gây viêm của tế bào

2.1.5.1 Chất chống oxy hóa

Hoạt tính kháng oxy hóa: Các nghiên cứu cho thấy chất CM-hs-CPS2

chứatrong dịch chiết nấm Cordyceps militaris có tính kháng DPPH, hoạt tính khử và

tạo phức ở nồng độ (8mg/m) là 89%, 1,188 và 85%

2.1.5.2 Kháng tế bào ung thư

Các hợp chất chống ung thư: Hợp chất Cordycepin (3′-deoxyadenosine) từ nấm cho thấy có hoạt tính kháng vi sinh vật, kháng ung thư, ngừa di căn, điều hòa miễn dịch

Kháng khuẩn, kháng nấm và kháng ung thư: Cordycepin ngăn sự biểu hiện của gen T2D chịu trách nhiệm điều hòa bệnh tiểu đường thông qua việc ức chế các đáp ứng viêm phụ thuộc NF-κB, do đó được hi vọng sẽ ứng dụng được như một chất điềuB, do đó được hi vọng sẽ ứng dụng được như một chất điều hòa miễn dịch dùng trong điều trị các bệnh về miễn dịch

2.1.5.3 Chống mệt mỏi và stress

Dịch chiết bằng nước nóng của Cordyceps sinensis có tác dụng chống mệt mỏi

và stress trên chuột ICR và chuột Sprague-Dawly

2.1.5.4 Cải thiện hệ hô hấp

Dịch chiết bằng cồn cho kết quả:

+ Ức chế sự tăng sinh những tế bào BALF (Bronchoalveolar lavage fluids) được hoạt hóa bởi lipopolysaccharide (LPS)

+ Ức chế sự sản xuất IL-1 beta, IL-6, IL-8, IL-10 và INF – alpha trên BALF 2.1.5.5 Chống sợi hóa gan

Trên mô hình chuột Sprague –Dawly, gây sợi hóa gan bằng Dimethyl

nitrosamine, cho uống Cordyceps sinensis, kết quả cho thấy giảm đáng kể sợi hóa ở

gan, bởi nó thúc đẩy sự thoái giáng chất collagen như Hydroxyproline, ức chế metalloproteinase – 2 ở mô, collagen loại IV và loại I

2.1.5.6 Kích thích hệ miễn dịch

Tính chất điều hòa hệ miễn dịch của polysaccharides từ Cordyceps sinensis đã

được khảo qua xét nghiệm máu ngoại vi Kết quả: Dịch chiết có khả năng gây sản xuất

yếu tố hoại tử bướu alpha (TNF-alpha), Interleukin (IL)-6, và IL-10

2.2 Vi khuẩn tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus)

2.2.1 Nguồn gốc

Staphylococcus aureus do Robert Koch phát hiện năm 1878 sau khi thực hiện

phân lập từ mủ ung nhọt Năm 1880 Louis Paster cũng đã tiến hành phân lập và nghiên

cứu về Staphylococcus aureus Ngày 09/04/1880 bác sĩ người Scotland Alexander

Ogston đã trình bày tại hội nghị lần thứ 9 hội phẫu thuật Đức một báo cáo khoa học,

trong đó ông sử dụng khái niệm tụ cầu khuẩn (Staphylococcus) và trình bày tương đối

đầy đủ vai trò của vi khuẩn này trong các bệnh lý sinh mủ lâm sàng

Đến năm 1881 Ogston đã thành công trong việc gây bệnh thực nghiệm, đây là

tiền đề cho những nghiên cứu về S aureus sau này Đến năm 1884 Rosenbach đã thực

hiện một loạt các nghiên cứu tỉ mỉ hơn về vi khuẩn này Và ông đã đặt tên cho vi

khuẩn này là Staphylococcus aureus Năm 1926 Julius von Daranyi là người đầu tiên

phát hiện mối tương quan giữa sự hiện diện hoạt động men coagulase huyết tương của

vi khuẩn với khả năng gây bệnh của nó Tuy nhiên mãi đến năm 1948 phát hiện này

mới được chấp nhận rộng rãi

2.2.2 Phân loại

Giới: Eubacteria

Ngành: Firmicutes

Lớp: Bacilli

Bộ: Bacillales

Họ: Staphylococcaceae

Chi: Staphylococcus

Trên phương diện gây bệnh, tụ cầu khuẩn được chia thành hai nhóm chính: tụ

cầu có coagulase và tụ cầu không có coagulase S aureus gây bệnh ngộ độc thực phẩm

là tụ cầu có coagulase Nhờ enzyme này mà trên môi trường nuôi cấy có máu, vi khuẩn

tạo nên các khuẩn lạc màu vàng nên còn được gọi là tụ cầu vàng

Hình 3: Staphylococcus aureus dưới kính hiện vi điện tử 20,000x

Phân loại tụ cầu dựa trên kháng nguyên: Các tụ cầu có nhiều loại kháng nguyên: protein, polysaccharid, acid teichoic của vách tế bào vi khuẩn Nhưng dựa vào kháng nguyên, việc định loại vi khuẩn rất khó khăn Phân loại tụ cầu dựa trên phage (phage type): tụ cầu được phân vào các nhóm I, II, III, IV Đây là phương pháp sử

dụng nhiều trong phân loại S Aureus.

2.2.3 Đặc điểm hình thái

Tụ cầu (“Staphylococcus” bắt nguồn từ tiếng Hy lạp, với “staphyle” có nghĩa chùm nho) Tế bào tụ cầu khuẩn S aureus hình tròn, đường kính 0,5-1µm, không di

động, không sinh nha bào, không sinh bào tử, không có vỏ capsule (giáp mô), không

có lông, bắt màu Gram dương

2.2.4 Đặc điểm sinh học

Vi khuẩn tụ cầu vàng có khả năng hình thành màng sinh học bảo vệ không bị thực bào bởi bạch cầu đa nhân (PMN), sinh độc tố và khả năng gây bệnh Các loại độc tố: Tụ cầu vàng sản sinh ra 11 độc tố: độc tố gây hội chứng sốc nhiễm độc (TSST-Toxic shock syndrome toxin); độc tố exfoliatin hay độc tố epidermolitic; độc tố alpha; độc tố bạch cầu (leucocidin); ngoại độc tố sinh mủ (pyrogenic); dung huyết tố (hemolysin hay staphylolysin); fribrinolysin (staphylokinase); coagulase; hyaluronidase; β – lactamase và độc tố ruột (enterotoxin)– trong đó có SEB Ngoài ra,

tụ cầu có hệ enzyme phong phú góp phần làm tăng độc lực của chúng đối với các tế bào vật chủ

2.3 Kháng sinh Tetracillin

2.3.1 Đặc điểm

Kháng sinh Tetracycline nổi tiếng với phổ hoạt động rộng, trải rộng trên nhiều loại vi khuẩn Gram dương và âm, xoắn khuẩn, vi khuẩn nội bào bắt buộc, cũng như ký sinh trùng đơn bào Các tetracycline đầu tiên là các sản phẩm tự nhiên có nguồn gốc từ quá trình lên men của xạ khuẩn

2.3.2 Cơ chế hoạt động

Tetracycline ưu tiên liên kết với các ribosome của vi khuẩn và tương tác với mục tiêu RNA ribosome 16S (rRNA) được bảo tồn cao trong tiểu đơn vị 30S của ribosome, bắt giữ quá trình dịch mã bằng cách can thiệp vào vị trí của RNA chuyển aminoacyl (tRNA) trong quá trình kéo dài