Trang 5 Xác định một số chủng nấm có khả năng phân hủy nhựa PE.. Một số nghiên cứu trước đây về nấm phân hủy PENấm Enzyme Kỹ thuật, đánh giá phân tích NguồnAlternaria alternata Gao et a
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC PHÂN LẬP VÀ ĐỊNH DANH MỘT SỐ CHỦNG NẤM CÓ KHẢ NĂNG PHÂN HỦY NHỰA POLYETHYLENE GVHD: TS Huỳnh Văn Biết Sinh viên thực hiện: 21126325 Lý Gia Hân 21126413 Dương Võ Phương Ngân 21126482 Đặng Thị Bảo Quyên Tp Hồ Chí Minh, ngày 24 tháng 10 năm 2023 NỘI DUNG 01 GIỚI THIỆU 02 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 03 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 04 KẾT QUẢ DỰ KIẾN Nguồn ảnh: vtv.vn I Giới thiệu Ô NHIỄM RÁC THẢI NHỰA I.I.Giới thiệu Giới thiệu Tái chế • Khoảng 500 tỉ đến 1000 tỉ túi nhựa được tiêu thụ • Năm 2020, khoảng 367 triệu sản phẩm nhựa được 9% Rác thải nhựa (Geyer et al 2017) sản xuất • Trong đó, PE chiếm tỷ trọng cao, khó phân hủy (Plastics Europe, 2021) Chôn lấp, đốt 60% I Giới thiệu Bảng Một số nghiên cứu trước nấm phân hủy PE Nấm Enzyme Alternaria alternata Laccase, peroxidase, Oxidoreductases Zalerion maritimum Phanerochaete chrysosporium & Trametes versicolor Manganese peroxidase Kỹ thuật, đánh giá phân tích Nguồn FTIR, XRD, GC-MS, GPC, (Gao et al., 2022) SEM, Genomic, RNA Seq, FTIR-ATR NMR Spectroscopy, SEM, (Paỗo et al., 2017) optical & electron microscopy Enzyme assays, Protein purification, HT-GPC, (Iiyoshi et al., 1998) Mục tiêu Xác định số chủng nấm có khả phân hủy nhựa PE Nội dung nghiên cứu PHÂN LẬP • Thu thập mẫu • Mơi trường phân lập nấm CFBSDA • Mơi trường chọn lọc nấm LCFSDA ĐÁNH GIÁ ĐỊNH DANH • Hình thái + Đại thể + Vi thể • Sinh học phân tử PHÂN HỦY PE • Đánh giá chỉ tiêu + Khảo sát PE mơi trường LCFSDA + Phân tích kết chụp SEM Phương pháp nghiên cứu 3.2 Định danh hình thái Đại thể Ủ 37 độ C quan sát 21 ngày + Mơ tả hình thái khuẩn lạc: màu sắc, hình dạng, vòng đồng tâm + Tốc độ sinh trưởng + Ghi nhận đặc điểm đặc trưng Hình Phanerodontia chrysosporium (Burds.) Hjortstam &; Ryvarden ==> Kết mô tả tương tự với mô tả nghiên cứu trước 3.2 Định danh hình thái Phương pháp nghiên cứu (Burds.) Hjortstam &; Ryvarden 2010 Vi thể • Lactophenol cotton blue (LPCB) nhuộm màu • Kính hiển vi với độ phóng đại 40X, 100X + Quan sát cấu trúc sợi nấm, chiều rộng, vách ngăn + Hình dạng, kích thước bào tử Hình Phanerodontia chrysosporium + Cành sinh bào tử a-c Conidiophores phân nhánh mang conidia cuối d–f Conidia bị cụt đầu (bào tử đơn) + Cấu ==> Kếttrúc quảđặc môtrưng tả tương tự với hai đầu (bào tử đốt) mô tả nghiên cứu Thu thập - phân lập - định danh 3.3 Định danh sinh học phân tử LY TRÍCH ADN TỔNG SỐ Chuẩn bị mẫu nấm PHẢN ỨNG PCR ĐIỆN DI PHÂN TÍCH DNA PHÂN TÍCH KẾT QUẢ Primer Chu trình nhiệt 10 11 12 Thu thập - phân lập - định danh 3.3 Định danh phân tử LY TRÍCH ADN TỔNG SỐ Ly tâm 20 phút • Hút dịch sang tube • Thêm Chloroform theo tỷ lệ 1:1 Ly tâm Ly tâm • 500μm)L dd đệm ly giải • Tỷ dịch Ethanol 70% lệ ethanol 1:2 • Rửa lần với dung • Loại bỏ phần dịch, sấy khơ • Thêm 50μm)L dd đệm TE • Bảo quản -20°C 95% 13 Thu thập - phân lập - định danh 3.3 Định danh phân tử PHẢN ỨNG PCR PRIMER • ITS1F (F) • ITS4 (R) CHU TRÌNH NHIỆT Bảng 3: Chu trình nhiệt phản ứng PCR Nhiệt độ (°C) Bảng 2: Các đoạn mồi được sử dụng nghiên cứu Nguồn: doi:10.1371/journal.pone.0097629.t001 Thời gian 95 95 40 s 55 40 s 72 60 s 72 Số chu kỳ 01 35 Giữ 4°C đến tắt máy Nguồn: doi:10.1080/12298093.2022.2152951 14 Thu thập - phân lập - định danh 3.3 Định danh phân tử ĐIỆN DI PHÂN TÍCH DNA • Máy phân tích ADN ABI 3730XL được sử dụng kỹ thuật điện di mao quản gel (CGE) : gel agarose 1% • Phân tích đoạn DNA giải trình tự DNA truyền thống PHÂN TÍCH KẾT QUẢ Hình Máy ABI 3730 XL • Tất trình tự được làm ứng dụng FinchTV v.1.4 được xác định BLAST NCBI 15 Đánh giá khả phân hủy PE 4.1 Đối tượng • LDPE có độ dày 22,5 µm khơng có xúc tác, phụ gia + CFBSDA: Bổ sung 15g agar vào 1L môi trường LCFSDA 30mm • Mơi trường + LCFSDA: Nước cất 1L, Peptone 10g, PE 1g 30mm Khảo sát PE chỉ tiêu 50m 50mm Phương pháp phân tích mơi trường LCFSDA PE m PE Phân tích kết chụp SEM 16 17 18 Hình Khảo sát thay đổi PE môi trường LCFSDA Ống nghiệm 1: Mẫu khơng có chủng nấm Ống nghiệm 2: Mẫu có chủng Hình Kết chụp PE kính hiển vi điện tử SEM nấm Nguồn: Đặng Thị Ngọc Sang ctv (2020) 19