Tb và kt cnsh

Đại học Nông Lâm TPHCM THIẾT BỊ VÀ KỸ THUẬT CNSH Giáo viên hướng dẫn: TS Huỳnh Văn Biết 1 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT DROPLET DIGITAL PCR ĐỂ PHÁT HIỆN NHIỄM TRÙNG VI KHUẨN Mycobacteria tuberculosis 2 THÀNH Lưu Nguyễn Tứ Anh - 21126274 VIÊN Trượng Hoàng Minh Yến - 21126343 Mai Công Thành - 21126500 NHÓM 3 1 2 ĐẶT VẤN ĐỀ VÀ GIỚI THIỆU VỀ MỤC TIÊU BỆNH LAO Nội 3 4 dung chính DROPLET ỨNG DỤNG DIGITAL PCR (ddPCR) 5 KẾT LUẬN 4 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ • Lao phổi xảy ra khi vi khuẩn Mycobacteria tuberculosis (M tuberculosis) trực tiếp tấn công phổi và phá hủy các mô tế bào của cơ quan này • Sự phát triển nhanh chóng của công nghệ sinh học phân tử đã khắc phục được những hạn chế về thời gian và độ nhạy thấp của phương pháp nhuộm và nuôi cấy nhanh axit để chẩn đoán bệnh lao • Droplet Digital PCR (ddPCR) và ứng dụng của nó trong bệnh lao, với hy vọng khơi dậy những ý tưởng mới trong phòng ngừa và điều trị bệnh lao 5 1.2 MỤC TIÊU Dùng sinh học phân tử nhằm định lượng, chuẩn đoán sớm và phát hiện ra vi khuẩn Mycobacteria tuberculosis (M tuberculosis) là nguyên nhân chính gây ra bệnh lao (hay còn gọi là Lao phổi) bằng phương pháp Droplet Digital PCR là phương pháp định lượng acid nucleoic với độ nhạy cao và không cần đường chuẩn 6 2 GIỚI THIỆU VỀ BỆNH LAO 7 2.1 Bệnh lao là gì? • Bệnh lao (TB), do nhiễm Mycobacteria tuberculosis (MTB), thường ảnh hưởng đến phổi nhất • Bệnh lao lây lan qua không khí khi người mắc bệnh lao phổi ho, hắt hơi hoặc khạc nhổ • Tồn tại hai tình trạng liên quan đến bệnh lao: nhiễm lao tiềm ẩn (LTBI) và bệnh lao 8 2.2 Giới thiệu về vi khuẩn Mycobacteria tuberculosis (MTB) • Mycobacteria tuberculosis (MTB), còn được gọi là trực khuẩn Koch, là một loài vi khuẩn gây bệnh thuộc họ Mycobacteriaceae và là tác nhân gây bệnh lao 9 3.1 MỘT SỐ HẠN CHẾ CỦA CÁC KỸ THUẬT PCR ĐỜI TRƯỚC 1 Kết quả định lượng hoàn toàn phụ thuộc vào đường chuẩn 2 Chỉ phân biệt được sự khác biệt về hàm lượng DNA giữa 2 mẫu khi sự khác biệt này lớn hơn 2 lần 3 Kết quả bị sai lệch lớn khi có chất ức chế phản ứng trong mẫu DNA hoặc RNA 10 3.2 Droplet • Kỹ thuật được sử dụng trong sinh học phân tử để Digital PCR định lượng và phân tích các mẫu DNA hoặc RNA – ddPCR là gì? • Dựa trên phân vùng, kỹ thuật số, chia mẫu thành hàng nghìn giọt có kích thước nanolit, mỗi giọt chứa một số lượng nhỏ phân tử mục tiêu • Sự khuếch đại của các phân tử mục tiêu xảy ra trong mỗi giọt, cho phép định lượng tuyệt đối các phân tử mục tiêu có trong mẫu ban đầu • ddPCR thường được sử dụng trong nghiên cứu di truyền, chẩn đoán và y học chính xác 11 3.3 Nguyên lý hoạt động của Droplet Digital PCR (ddPCR) 12 4 ỨNG DỤNG DROPLET DIGITAL PCR TRONG CHUẨN ĐOÁN NHIỄM VI KHUẨN Mycobacteria tuberculosis 13 Định lượng Chẩn đoán bệnh lao Mycobacterium ở bệnh nhân nhiễm tuberculosis HIV • Phát hiện và định lượng thành công MTB • Sự khuếch đại dương tính của các trình tự trong huyết tương bệnh nhân lao đặc hiệu MTB (IS6110 và gyrB) trong huyết tương của bệnh nhân bị suy giảm miễn dịch • Định lượng các phân tử mục tiêu có bản sao nặng thấp với độ chính xác và độ nhạy cao hơn, phát hiện các mục tiêu DNA đặc hiệu MTB 14 (IS6110) trong các mẫu máu toàn phần • Định lượng tuyệt đối và độ nhạy cao trong các mẫu máu toàn phần từ những trẻ sơ sinh không có các triệu chứng hô hấp sớm và khó lấy được đờm Phát hiện bệnh lao Mycobacteria Phát hiện nhiễm trùng lao trong các mẫu khác nhau tiềm ẩn • Trong các mẫu máu toàn phần • Phát hiện MTB trong tế bào CD34 + đơn nhân • Trong exosome (IS6110) máu ngoại vi từ những người trưởng thành • Phát hiện trong mẫu đường hô hấp không có triệu chứng có kết quả xét nghiệm • Trong mẫu bệnh lý và đánh giá độ nhạy của dương tính với IGRA ddPCR để phát hiện MTB trong các mẫu được • Cần phân lập từng tế bào có nhân riêng lẻ, cố định bằng formalin và nhúng parafin (FFPE) điều này rất phức tạp và hạn chế ứng dụng lâm sàng Phát hiện nhiễm trùng Mycobacteria leprae • Sử dụng qPCR và ddPCR để phát hiện hai mục tiêu DNA nhạy cảm (RLEP và GroEL) của trực khuẩn bệnh phong và sau đó đánh giá độ nhạy và độ đặc hiệu của phương pháp 15 5 KẾT LUẬN Sự kết hợp giữa công nghệ vi lỏng ddPCR là phương pháp định lượng và PCR mang lại cho ddPCR những để phát hiện axit nucleic với độ nhạy đặc tính độc đáo và ngày càng được cao, độ tái lập cao và không có sử dụng trong các lĩnh vực lâm sàng đường chuẩn Trở thành một phương pháp mới để chẩn đoán bệnh lao và chuẩn đoán ở những bệnh nhẫn nhiễm HIV 16 MỘT SỐ HẠN CHẾ • Mặc dù các dụng cụ và thuốc thử cho ddPCR đều có sẵn trên thị trường nhưng giá thành cao hạn chế việc sử dụng rộng rãi • Việc lựa chọn mục tiêu phát hiện và thiết lập ngưỡng phát hiện cũng là thách thức đối với việc ứng dụng ddPCR vào thực hành lâm sàng • Việc thiết lập các đường ngưỡng cho giọt dương và giọt âm có thể làm sai lệch kết quả 17 Tài Fan Y, Chen J, Liu M, et al Application of Droplet Digital PCR to Detecti liệu on of Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium leprae Infection THAM s: A Narrative Review Infect Drug Resist 2022;15:1067-1076 Publishe KHẢO d 2022 Mar 15 doi:10.2147/IDR.S349607 Labrador, Jorge & Garberi, Federico & Garberi, Juan & Peneipil, Julian & Garberi, Miguel & Scigliano, Luis & Troncoso, Alcides (2011) Diagnosis of Mycobacterium tuberculosis using molecular biology technology Asian Pacific journal of tropical biomedicine 1 89-93 10.1016/S2221- 1691(11)60002-6 https://hellobacsi.com/ho-va-benh-duong-ho-hap/benh-lao/lao- phoi/ http://www.sinhhocphantu.net/2018/07/27/pcr-ky-thuat-so-la-gi/ https://diamet.lv/files/QX100_System.pdf 18 THANK YOU FOR LISTENING Have a good day 19