Tb và kt cnsh

ỨNG DỤNG KỸ THUẬT DROPLET DIGITAL PCR ĐỂ PHÁT HIỆN NHIỄM TRÙNG VI KHUẨN Mycobacteria tuberculosis 2... MỤC TIÊUDùng sinh học phân tử nhằm định lượng, chuẩn đoán sớm và phát hiện ra vi

THIẾT BỊ VÀ

KỸ THUẬT CNSH

Đại học Nông Lâm TPHCM

Giáo viên hướng dẫn: TS Huỳnh Văn Biết

1

ỨNG DỤNG KỸ THUẬT DROPLET DIGITAL PCR

ĐỂ PHÁT HIỆN NHIỄM

TRÙNG VI KHUẨN

Mycobacteria tuberculosis

2

THÀNH

VIÊN

NHÓM

Trượng Hoàng Minh Yến - 21126343

Mai Công Thành - 21126500 Lưu Nguyễn Tứ Anh - 21126274

3

ĐẶT VẤN ĐỀ VÀ

MỤC TIÊU

2

GIỚI THIỆU VỀ BỆNH LAO

5 KẾT LUẬN

Nội

dung

chính

3

DROPLET DIGITAL PCR

(ddPCR)

4 ỨNG DỤNG

4

1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ

• Droplet Digital PCR (ddPCR) và ứng dụng của nó trong bệnh lao, với hy vọng khơi dậy những ý tưởng mới trong phòng ngừa và điều trị bệnh lao.

• Lao phổi xảy ra khi vi khuẩn Mycobacteria tuberculosis (M tuberculosis) trực tiếp tấn công phổi và phá hủy các mô tế bào của cơ quan này.

• Sự phát triển nhanh chóng của công nghệ sinh học phân tử đã khắc phục được những hạn chế về thời gian và độ nhạy thấp của phương pháp nhuộm và nuôi cấy nhanh axit để chẩn đoán bệnh lao.

5

1.2 MỤC TIÊU

Dùng sinh học phân tử nhằm định lượng, chuẩn đoán sớm

và phát hiện ra vi khuẩn Mycobacteria tuberculosis (M

tuberculosis) là nguyên nhân chính gây ra bệnh lao (hay

còn gọi là Lao phổi) bằng phương pháp Droplet Digital PCR là phương pháp định lượng acid nucleoic với độ nhạy cao và không cần đường chuẩn.

6

2 GIỚI THIỆU VỀ

BỆNH LAO

7

2.1 Bệnh lao là

gì?

• Bệnh lao (TB), do nhiễm Mycobacteria

tuberculosis (MTB), thường ảnh hưởng

đến phổi nhất.

• Bệnh lao lây lan qua không khí khi người mắc bệnh lao phổi ho, hắt hơi hoặc khạc nhổ.

• Tồn tại hai tình trạng liên quan đến bệnh lao: nhiễm lao tiềm ẩn (LTBI) và bệnh lao

8

2.2 Giới thiệu về vi khuẩn

Mycobacteria tuberculosis

(MTB)

• Mycobacteria tuberculosis (MTB), còn

được gọi là trực khuẩn Koch, là một loài

vi khuẩn gây bệnh thuộc họ

Mycobacteriaceae và là tác nhân gây

bệnh lao.

9

3.1 MỘT SỐ HẠN CHẾ CỦA CÁC KỸ

THUẬT PCR ĐỜI TRƯỚC

2 Chỉ phân biệt được sự khác biệt về hàm lượng DNA giữa 2

mẫu khi sự khác biệt này lớn hơn 2 lần

3 Kết quả bị sai lệch lớn khi có chất ức chế phản ứng trong

mẫu DNA hoặc RNA.

1 Kết quả định lượng hoàn toàn phụ thuộc vào đường chuẩn

10

• Kỹ thuật được sử dụng trong sinh học phân tử để định lượng và phân tích các mẫu DNA hoặc RNA

• Dựa trên phân vùng, kỹ thuật số, chia mẫu thành hàng nghìn giọt có kích thước nanolit, mỗi giọt chứa một số lượng nhỏ phân tử mục tiêu

3.2 Droplet

Digital PCR

– ddPCR là gì? • Sự khuếch đại của các phân tử mục tiêu xảy ra

trong mỗi giọt, cho phép định lượng tuyệt đối các phân tử mục tiêu có trong mẫu ban đầu

• ddPCR thường được sử dụng trong nghiên cứu di truyền, chẩn đoán và y học chính xác.

11

3.3 Nguyên lý hoạt động của Droplet Digital PCR (ddPCR)

12

4 ỨNG DỤNG DROPLET

DIGITAL PCR TRONG CHUẨN ĐOÁN NHIỄM VI

KHUẨN Mycobacteria

tuberculosis

13

Định lượng

Mycobacterium

tuberculosis

• Phát hiện và định lượng thành công MTB

trong huyết tương bệnh nhân lao

• Định lượng các phân tử mục tiêu có bản sao

thấp với độ chính xác và độ nhạy cao hơn,

phát hiện các mục tiêu DNA đặc hiệu MTB

(IS6110) trong các mẫu máu toàn phần

• Định lượng tuyệt đối và độ nhạy cao trong

các mẫu máu toàn phần từ những trẻ sơ

sinh không có các triệu chứng hô hấp sớm

và khó lấy được đờm.

Chẩn đoán bệnh lao

ở bệnh nhân nhiễm

HIV

• Sự khuếch đại dương tính của các trình tự đặc hiệu MTB (IS6110 và gyrB) trong huyết tương của bệnh nhân bị suy giảm miễn dịch nặng.

14

Phát hiện bệnh lao Mycobacteria

trong các mẫu khác nhau

• Trong các mẫu máu toàn phần

• Trong exosome (IS6110)

• Phát hiện trong mẫu đường hô hấp

• Trong mẫu bệnh lý và đánh giá độ nhạy của

ddPCR để phát hiện MTB trong các mẫu được

cố định bằng formalin và nhúng parafin (FFPE)

• Phát hiện MTB trong tế bào CD34 + đơn nhân máu ngoại vi từ những người trưởng thành không có triệu chứng có kết quả xét nghiệm dương tính với IGRA

• Cần phân lập từng tế bào có nhân riêng lẻ, điều này rất phức tạp và hạn chế ứng dụng lâm sàng

Phát hiện nhiễm trùng lao

tiềm ẩn

Phát hiện nhiễm trùng Mycobacteria leprae

• Sử dụng qPCR và ddPCR để phát hiện hai mục tiêu DNA nhạy cảm (RLEP và GroEL) của trực khuẩn bệnh phong và sau đó đánh giá độ nhạy và độ đặc hiệu của phương pháp

15

Sự kết hợp giữa công nghệ vi lỏng

và PCR mang lại cho ddPCR những

đặc tính độc đáo và ngày càng được

sử dụng trong các lĩnh vực lâm sàng

Trở thành một phương pháp mới để chẩn đoán bệnh lao và chuẩn đoán

ở những bệnh nhẫn nhiễm HIV.

ddPCR là phương pháp định lượng

để phát hiện axit nucleic với độ nhạy cao, độ tái lập cao và không có đường chuẩn

16

MỘT SỐ

HẠN CHẾ

• Mặc dù các dụng cụ và thuốc thử cho ddPCR

đều có sẵn trên thị trường nhưng giá thành

cao hạn chế việc sử dụng rộng rãi

• Việc lựa chọn mục tiêu phát hiện và thiết lập

ngưỡng phát hiện cũng là thách thức đối với

việc ứng dụng ddPCR vào thực hành lâm

sàng.

• Việc thiết lập các đường ngưỡng cho giọt

dương và giọt âm có thể làm sai lệch kết

quả.

17

Tài

liệu

THAM

KHẢO

Fan Y, Chen J, Liu M, et al Application of Droplet Digital PCR to Detecti

on of Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium leprae Infection s: A Narrative Review Infect Drug Resist 2022;15:1067-1076 Publishe

d 2022 Mar 15 doi:10.2147/IDR.S349607

https://hellobacsi.com/ho-va-benh-duong-ho-hap/benh-lao/lao-phoi/

Labrador, Jorge & Garberi, Federico & Garberi, Juan & Peneipil, Julian &

Garberi, Miguel & Scigliano, Luis & Troncoso, Alcides (2011) Diagnosis of Mycobacterium tuberculosis using molecular biology technology Asian

Pacific journal of tropical biomedicine 1 89-93 10.1016/S2221-1691(11)60002-6

http://www.sinhhocphantu.net/2018/07/27/pcr-ky-thuat-so-la-gi/

https://diamet.lv/files/QX100_System.pdf

18

THANK YOU FOR LISTENING

Have a good day

19