1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.

201 5 0

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Tiêu đề Nghiên Cứu Sự Kích Thích Tính Kháng Bệnh Cháy Bìa Lá Lúa Do Vi Khuẩn Xanthomonas Oryzae Pv. Oryzae Bằng Dịch Trích Cỏ Cứt Heo Ageratum Conyzoides L.
Tác giả Mai Như Phương
Người hướng dẫn PGS.TS. Trần Thị Thu Thủy, PGS.TS. Nguyễn Thị Thu Nga
Trường học Trường Đại Học Cần Thơ
Chuyên ngành Bảo Vệ Thực Vật
Thể loại luận án tiến sĩ
Năm xuất bản 2023
Thành phố Cần Thơ
Định dạng
Số trang 201
Dung lượng 2,84 MB

Cấu trúc

  • CHƯƠNG 1. GIỚI THIỆU (16)
    • 1.1 Tính cấp thiết của luận án (16)
    • 1.2 Tính mới của luận án (17)
    • 1.3 Mục đích nghiên cứu (17)
    • 1.4 Nội dung nghiên cứu (17)
    • 1.5 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu (17)
      • 1.5.1 Đối tượng nghiên cứu (17)
      • 1.5.2 Phạm vi nghiên cứu (17)
    • 1.6 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn (18)
      • 1.6.1 Ý nghĩa khoa học (18)
      • 1.6.2 Ý nghĩa thực tiễn (18)
  • CHƯƠNG 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU (19)
    • 2.1 Bệnh cháy bìa lá lúa (Bacterial leaf blight disease) (19)
      • 2.1.1 Tình hình và mức độ gây hại của bệnh cháy bìa lá (19)
      • 2.1.2 Tác nhân gây bệnh (20)
      • 2.1.3 Triệu chứng bệnh (22)
      • 2.1.4 Những yếu tố ảnh hưởng đến bệnh cháy bìa lá (23)
      • 2.1.5 Biện pháp phòng trừ bệnh cháy bìa lá lúa (24)
    • 2.2 Sự tương tác giữa vi khuẩn gây bệnh và cây trồng (25)
      • 2.2.1. Quá trình xâm nhiễm và gây bệnh của vi khuẩn (25)
      • 2.2.2 Phản ứng phòng vệ của cây trước sự tấn công và gây hại của vi khuẩn (29)
    • 2.3 Sự kích thích tính kháng bệnh trên cây trồng (39)
      • 2.3.1 Khái niệm về kích kháng (39)
      • 2.3.2 Các hình thức kích kháng (39)
      • 2.3.3 Tác nhân kích thích tính kháng (42)
      • 2.3.4 Cơ chế của sự kích thích tính kháng bệnh do vi khuẩn gây ra trên cây trồng (45)
      • 2.3.5 Vai trò, ứng dụng của dịch trích thực vật trong phòng trừ bệnh hại trên cây trồng (55)
      • 2.3.6 Một số kết quả nghiên cứu, ứng dụng dịch trích thực vật trong kích thích tính kháng bệnh trên cây trồng (60)
    • 2.4 Đặc điểm của dịch trích cỏ cứt heo A. conyzoides L. và một số giống lúa RVT (66)
      • 2.4.1 Đặc điểm cây cỏ cứt heo (A. conyzoides L.) (66)
      • 2.4.2 Đặc điểm của giống lúa trong thí nghiệm (69)
  • CHƯƠNG 3. (72)
    • 3.1 Phương tiện thí nghiệm (72)
      • 3.1.1 Địa điểm và thời gian thực hiện thí nghiệm (72)
      • 3.1.2 Vật liệu thí nghiệm (72)
      • 3.1.3 Các dụng cụ và thiết bị thí nghiệm (73)
    • 3.2 Phương pháp thí nghiệm (73)
      • 3.2.1 Thu thập, phân lập và đánh giá khả năng gây hại của các chủng vi khuẩn X. oryzae pv (73)
      • 3.2.2 Đánh giá khả năng gây hại của chủng vi khuẩn BL36 trên một số giống lúa phổ biến tại tỉnh Bạc liêu (78)
      • 3.2.4 Khảo sát hoạt tính enzyme có liên quan đến tính kháng chống bệnh cháy bìa lá lúa của dịch trích cỏ cứt heo (84)
      • 3.2.5 Đánh giá khả năng hạn chế bệnh cháy bìa lá lúa của dịch trích cỏ cứt heo ở điều kiện ngoài đồng (88)
  • CHƯƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN (90)
    • 4.1 Thu thập, phân lập và đánh giá khả năng gây hại của các chủng vi khuẩn X. oryzae pv. oryzae gây bệnh cháy bìa lá lúa trên một số giống lúa (90)
      • 4.1.1 Phân lập các chủng vi khuẩn X. oryzae pv. oryzae tại tỉnh Bạc Liêu (90)
      • 4.1.2 Đánh giá Khả năng gây hại của các chủng vi khuẩn Xoo gây bệnh cháy bìa lá lúa trên giống lúa RVT (93)
      • 4.1.3 Khả năng gây hại của chủng vi khuẩn BL36 trên một số giống lúa phổ biến trong điều kiện nhà lưới (98)
    • 4.2 Xác định nồng độ và biện pháp xử lý dịch trích cỏ cứt heo (A. conyzoides L.) trong phòng trừ bệnh cháy bìa lá lúa trong điều kiện nhà lưới (100)
      • 4.2.1 Đánh giá ảnh hưởng của dịch trích cỏ cứt heo (A. conyzoides L.) đối với vi khuẩn X (100)
      • 4.2.2 Ảnh hưởng lên quá trình nảy mầm hạt lúa của dịch trích cỏ cứt heo (A. conyzoides L.) (102)
      • 4.2.3 Hiệu quả của các nồng độ dịch trích trong phòng trừ bệnh cháy bìa lá lúa ở điều kiện nhà lưới (104)
      • 4.2.4 Hiệu quả của các nồng độ và biện pháp xử lý dịch trích trong phòng trừ bệnh cháy bìa lá lúa ở điều kiện nhà lưới (111)
    • 4.3 Hoạt tính một số enzyme trong cơ chế kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa bằng dịch trích cỏ cứt heo (120)
      • 4.3.1 Hoạt tính enzyme phenyalanine ammonia lyase (120)
      • 4.3.2 Hoạt tính enzyme Peroxidase (124)
      • 4.3.3 Hoạt tính enzyme Catalase (127)
      • 4.3.4 Thảo luận chung về khảo sát hoạt tính enzyme (129)
      • 4.3.5 Hiệu quả của dịch trích cỏ cứt heo trong phòng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn X (129)
    • 4.4 Hiệu quả của dịch trích cỏ cứt heo trong trong việc phòng trị bệnh cháy bìa lá lúa ở điều kiện ngoài đồng (133)
      • 4.4.1 Hiệu quả của dịch trích cỏ cứt heo trong trong việc phòng trị bệnh cháy bìa lá lúa (133)
      • 4.4.2 Hiệu quả của dịch trích cỏ cứt heo trong trong phòng trị bệnh cháy bìa lá lúa vụ Đông - Xuân năm 2020-2021 (139)
      • 4.4.3 Thảo luận chung (145)
  • CHƯƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐẾ XUẤT (150)
    • 5.1 Kết luận (150)
    • 5.2 Đề xuất (150)
  • TÀI LIỆU THAM KHẢO (151)

Nội dung

Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.Nghiên cứu sự kích thích tính kháng bệnh cháy bìa lá lúa do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv. oryzae bằng dịch trích cỏ cứt heo Ageratum conyzoides L.

GIỚI THIỆU

Tính cấp thiết của luận án

Việt Nam đứng thứ 2-4 trong xuất khẩu gạo toàn cầu, với Đồng Bằng Sông Cửu Long (ĐBSCL) là vựa lúa lớn nhất, có diện tích trồng lúa hơn 40 triệu ha Tuy nhiên, tình trạng thâm canh tăng vụ đã dẫn đến sự bùng phát của nhiều loại sâu bệnh, ảnh hưởng nghiêm trọng đến năng suất và chất lượng lúa gạo, trong đó bệnh cháy bìa lá là một trong những bệnh phổ biến nhất vào mùa mưa Theo thống kê năm 2021, bệnh này đã nhiễm nặng trên diện tích hơn 25.000 ha tại Bạc Liêu, khiến nông dân phải sử dụng nhiều loại thuốc hóa học, gây lo ngại về chất lượng lúa, môi trường và sức khỏe con người Do đó, cần tìm biện pháp quản lý bệnh hiệu quả, giảm thiểu việc sử dụng thuốc hóa học và chi phí đầu tư Nghiên cứu về sự kích thích tính kháng bệnh trong cây trồng, đặc biệt là bằng dịch trích cỏ cứt heo, đang được chú trọng nhằm nâng cao khả năng chống chịu của cây lúa đối với bệnh cháy bìa lá do vi khuẩn Xanthomonas oryzae pv oryzae Mục tiêu của đề tài là xác định nồng độ và biện pháp xử lý dịch trích cỏ cứt heo hiệu quả trong phòng bệnh cháy lá lúa, đồng thời gia tăng hoạt tính của các enzyme liên quan đến sự kích kháng trong cây lúa.

Tính mới của luận án

Nghiên cứu cho thấy sự gia tăng hoạt tính của các enzyme như catalase, peroxidase và phenylalanine trong cây lúa liên quan đến khả năng kháng bệnh cháy bìa lá Điều này xảy ra khi cây lúa được xử lý bằng dịch trích cỏ cứt heo, góp phần nâng cao sức đề kháng của cây đối với bệnh tật.

Xác định khả năng cây lúa kháng bệnh cháy bìa lá lúa từ dịch trích cỏ cứt heo trong điều kiện ngoài đồng.

Mục đích nghiên cứu

Nghiên cứu xác định nồng độ và biện pháp xử lý dịch trích cỏ cứt heo nhằm hạn chế bệnh cháy bìa lá lúa do X oryzae pv oryzae gây ra Đồng thời, nghiên cứu cũng chỉ ra một số cơ chế kích thích khả năng kháng bệnh của cây trồng đối với bệnh cháy bìa lá lúa tại tỉnh Bạc Liêu.

Nội dung nghiên cứu

Đề tài thực hiện gồm những nội dung chính:

Nội dung 1: Thu thập và đánh giá khả năng gây hại của các chủng vi khuẩn

Xanthomonas oryzae pv oryzae gây bệnh cháy bìa lá lúa

Nghiên cứu đánh giá khả năng ức chế của dịch trích cỏ cứt heo đối với vi khuẩn gây bệnh cháy bìa lá lúa và ảnh hưởng của nó đến sự mọc mầm của hạt lúa Kết quả cho thấy dịch trích cỏ cứt heo có khả năng giảm thiểu bệnh cháy bìa lá lúa hiệu quả, đồng thời xác định nồng độ và phương pháp xử lý tối ưu để đạt được hiệu quả cao nhất trong việc phòng ngừa bệnh này.

Nội dung 3: Khảo sát sự gia tăng hoạt tính của một số emzyme liên quan đến sự kích thích tính cây trồng kháng bệnh cháy bìa lá lúa

Nội dung 4: Đánh giá khả năng hạn chế bệnh cháy bìa lá lúa của dịch trích cỏ cứt heo trong điều kiện ngoài đồng.

Đối tượng và phạm vi nghiên cứu

1.5.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu của luận án là bệnh cháy bìa lá do vi khuẩn X oryzae pv oryzae, dịch trích cỏ cứt heo A conyzoides L

Luận án nghiên cứu về bệnh cháy bìa lá do vi khuẩn X oryzae pv oryzae gây ra trên giống lúa RVT tại Bạc Liêu Nghiên cứu bao gồm việc thu thập mẫu bệnh vi khuẩn từ đồng ruộng, phân lập và tuyển chọn các chủng vi khuẩn triển vọng trong phòng thí nghiệm và nhà lưới Đánh giá khả năng gây hại của vi khuẩn trên các giống lúa khác nhau và hiệu quả ức chế của dịch trích cỏ cứt heo đối với bệnh này cũng được thực hiện Nghiên cứu xác định nồng độ và biện pháp xử lý nhằm giảm thiểu bệnh trong điều kiện nhà lưới, đồng thời đánh giá hiệu quả của dịch trích cỏ cứt heo đối với bệnh cháy bìa lá lúa cả trong nhà lưới và ngoài đồng.

Ý nghĩa khoa học và thực tiễn

Luận án nghiên cứu về việc sử dụng dịch trích cỏ cứt heo trong quản lý bệnh cháy bìa lá lúa, cung cấp dữ liệu khoa học hệ thống từ phòng thí nghiệm đến thực địa Số liệu thu thập đầy đủ và thống kê chính xác, tạo nền tảng cho các bài giảng tại các trường Đại học Điểm mới của nghiên cứu là xác định được cơ sở khoa học của dịch trích cỏ cứt heo như một sản phẩm thảo dược có khả năng ức chế vi khuẩn gây bệnh, từ đó phát triển chế phẩm thảo dược giúp phòng trừ bệnh cháy bìa lá lúa và giảm thiểu việc sử dụng thuốc hóa học.

Nghiên cứu cung cấp cơ sở cho các nhà quản lý đề xuất chiến lược quản lý bệnh hại thân thiện với môi trường Kết quả này cũng giúp nông dân giảm thiểu việc sử dụng thuốc hóa học, thay vào đó là sử dụng dịch trích từ thực vật để kiểm soát bệnh cháy bìa lá lúa.

Phương tiện thí nghiệm

3.1.1 Địa điểm và thời gian thực hiện thí nghiệm

Thu thập các chủng vi khuẩn Xoo gây bệnh cháy bìa lá trên lúa tại 5 huyện thuộc tỉnh Bạc Liêu

Phòng thí nghiệm Phòng trừ sinh học và Phòng thí nghiệm bệnh cây thuộc Khoa Bảo vệ thực vật, trường Nông Nghiệp đã tiến hành phân lập và nuôi cấy vi khuẩn Xoo, cùng với các thí nghiệm enzyme Để đánh giá khả năng gây hại, các thí nghiệm nhà lưới cũng được thực hiện tại khu nhà lưới của Khoa Bảo vệ thực vật.

Các thí nghiệm ngoài đồng được thực hiện tại hai huyện Hồng Dân và Phước Long tỉnh Bạc Liêu

Thời gian : Thời gian nghiên cứu được thực hiện từ năm 2016 đến năm 2022

Nguồn vi khuẩn: Vi khuẩn được phân lập từ những mẫu lúa bị bệnh cháy bìa lá tại

5 huyện khác nhau thuộc tỉnh Bạc Liêu

Giống lúa: Giống lúa được sử dụng cho thí nghiệm là RVT, OM18, OM5451, Đài Thơm 8 và Jasmine 85

Nguồn kích kháng: Cỏ cứt heo (A conyzoides L.) được lấy phần thân và lá xay ra làm dịch trích kích kháng

Các môi trường được sử dụng trong thí nghiệm bao gồm:

Môi trường Wakimoto cải tiến (Wakimoto, 1995)

Môi trường King’s B Agar (Atlas, 2010)

3.1.3 Các dụng cụ và thiết bị thí nghiệm

Trong thí nghiệm, cần sử dụng các dụng cụ như chậu nhựa lớn hoặc nhỏ, ống nghiệm, đĩa Petri có đường kính 9 cm, đũa vạch vi khuẩn, lame, lamel, bình tam giác, chai thuỷ tinh, đèn cồn, kim mũi giáo, kéo, kẹp và ống hút (pipette).

Trong các thí nghiệm, một số thiết bị quan trọng bao gồm tủ thanh trùng ướt, tủ thanh trùng khô, tủ cấy, kính hiển vi, cân điện tử, máy đo pH, nồi chưng cách thuỷ, cùng với các máy móc và hóa chất cần thiết cho phân tích sinh hóa.

Phương pháp thí nghiệm

3.2.1 Thu thập, phân lập và đánh giá khả năng gây hại của các chủng vi khuẩn X oryzae pv oryzae gây bệnh cháy bìa lá lúa trên giống lúa RVT

3.2.1.1 Thu thập, phân lập các chủng vi khuẩn X oryzae pv oryzae gây bệnh cháy bìa lá lúa trên một số giống lúa trồng phổ biến tại Bạc Liêu Địa điểm: Thu thập mẫu bệnh cháy bìa lá lúa tại 5 huyện bao gồm Phước Long,

Giá Rai, Hồng Dân, Vĩnh Lợi, Hoà Bình

Phân lập và trữ nguồn mẫu vi khuẩn tại phòng thí nghiệm Phòng trừ sinh học, Khoa Bảo vệ thực vật, Trường Nông Nghiệp, Đại học Cần Thơ

Mục tiêu: thu thập được các chủng vi khuẩn X oryzae pv oryzae gây bệnh cháy bìa lá lúa làm vật liệu cho những thí nghiệm tiếp theo

Mẫu lúa bệnh được thu thập từ các ruộng có diện tích trên 1000 m² tại 5 huyện: Phước Long, Giá Rai, Hồng Dân, Vĩnh Lợi và Hoà Bình, với mỗi huyện lấy ít nhất 2 xã Việc thu mẫu diễn ra vào sáng sớm, tập trung vào những lá mới có triệu chứng bệnh theo mô tả của Ou (1985), Vũ Triệu Mân (2007) và Phạm Văn Kim (2016).

Sau khi thu thập các mẫu bệnh, chúng được cho vào túi nylon và chuyển vào thùng đá để bảo quản lạnh Tiếp theo, các mẫu này sẽ được đưa về phòng thí nghiệm để tiến hành phân lập vi khuẩn gây bệnh.

Mẫu bệnh có triệu chứng điển hình của cháy bìa lá được xử lý bằng cách thanh trùng bề mặt bằng cồn 70% và cắt ở vùng tiếp giáp giữa mô khỏe và bệnh Sau đó, nhỏ giọt nước cất vô trùng lên mẫu bệnh đã được chuẩn bị trên lame vô trùng, để yên một phút cho vi khuẩn thấm vào nước Cuối cùng, rút 50 µl huyền phù vi khuẩn và đưa vào đĩa chứa môi trường King’s B, thực hiện phương pháp vạch theo hình minh họa (Hình 3.1).

Giọt huyền phù ban đầu

Hình 3.1 Phân lập vi khuẩn gây bệnh trên môi trường King’B

Ủ mẫu vi khuẩn ở nhiệt độ 25-30°C trong 48 giờ Sau đó, tách ròng vi khuẩn bằng que cấy đã khử trùng, cấy vào đĩa Petri với môi trường Wakimoto cải tiến Mẫu vi khuẩn thuần được chuyển sang ống nghiệm chứa môi trường Wakimoto đã tạo mặt nghiêng, nuôi và bảo quản ở nhiệt độ 4°C để lưu trữ, và có thể lưu giữ lâu dài trong điều kiện -35°C với glycerol 80%.

Các mẫu vi khuẩn sau khi phân lập được đánh dấu bằng ký hiệu như BL01, BL02, v.v Trong đó, "BL" là viết tắt của tỉnh Bạc Liêu, còn các số 01, 02, v.v thể hiện thứ tự của từng vi khuẩn trong bộ nguồn phân lập.

3.2.1.2 Đánh giá khả năng gây hại của các chủng vi khuẩn X oryzae pv oryzae gây bệnh cháy bìa lá trên giống lúa RVT trồng phổ biến tại Bạc Liêu

Mục tiêu của nghiên cứu là xác định chủng vi khuẩn gây bệnh cháy bìa lá lúa nặng nhất trên giống lúa RVT Nghiên cứu được thực hiện tại Phòng thí nghiệm Phòng trừ sinh học và khu nhà lưới thuộc Khoa Bảo vệ Thực vật, Trường Nông Nghiệp, Đại học Cần Thơ.

Vật liệu: 22 chủng vi khuẩn được phân lập từ thí nghiệm 3.2.1.1 và giống lúa RVT

Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm được bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên gồm

22 nghiệm thức tương ứng 22 chủng vi khuẩn phân lập Mỗi lặp lại là một chậu lúa với

3 cây (chồi) được lây bệnh, mỗi chồi 3 lá trên cùng được lây bệnh

Chuẩn bị hạt giống vô trùng là bước quan trọng, bao gồm việc tuyển chọn những hạt lúa RVT chắc khỏe, đồng đều và sạch bệnh Sau khi chọn lựa, tiến hành ngâm hạt trong nước ấm khoảng 54 độ C trong 2 giây để đảm bảo chất lượng hạt giống.

Để kích thích hạt nảy mầm đồng đều và giảm thiểu mầm bệnh, hạt giống cần được ngâm trong nước lạnh trong 15 phút Sau đó, hạt được khử trùng bằng dung dịch NaOCl 2,63% (thuốc tẩy gia dụng Javen pha loãng với nước vô trùng theo tỷ lệ 1:1) trong 30 phút và rửa lại từ 3 đến 5 lần bằng nước vô trùng (Ella et al., 2011) Cuối cùng, hạt giống sau khi khử trùng được ủ trong đĩa Petri có lót giấy thấm vô trùng, duy trì độ ẩm bằng nước cất vô trùng để hỗ trợ quá trình nứt nanh.

Trồng lúa bắt đầu bằng việc gieo hạt giống đã ủ và nứt nanh vào chậu nhựa C7 (15*14 cm) chứa 1,5 kg đất khô, tương đương 2,04 kg đất ở độ ẩm 36% Mỗi chậu sẽ gieo 5 hạt lúa Sau khi trồng, lúa cần được chăm sóc và bón phân theo công thức của Nguyễn Ngọc Đệ (2008), bao gồm 120N – 40P2O5 – 30K2O, được chia làm 5 thời kỳ bón phân.

 Bón lót: 1 ngày trước khi gieo: 100% P2O5

 Bún thỳc lần 4: ẳ N cũn lại (14 NSKG)

Phân bón được tính toán dựa trên số chậu, rồi hòa loãng với nước và tưới đều cho từng chậu

Chuẩn bị huyền phù vi khuẩn bằng cách nuôi các chủng vi khuẩn trên đĩa thạch Wakimoto cải tiến với 2% agar Sau 48 giờ, thu huyền phù vi khuẩn bằng nước cất vô trùng vào ống tuýp 50 ml vô trùng Cuối cùng, so sánh độ đục của huyền phù ở bước sóng 600 nm và điều chỉnh về giá trị 0,3 bằng nước cất vô trùng.

Vào ngày thứ 45, bệnh nhân tạo được thực hiện theo phương pháp cắt chóp lá (Leaf-clipping method) của Kauffman (1973) bằng cách nhúng mũi kéo vào huyền phù vi khuẩn (OD600nm=0,3) và cắt chóp lá khoảng 2-3 cm trên lá trưởng thành của chồi, mỗi chồi cắt 3 lá trên cùng và mỗi chậu cắt 3 chồi Sau khi lây bệnh, chậu lúa được bao phủ bằng bọc kiếng trong kích thước 40*60 cm và ủ tối ở 25°C trong 24 giờ với điều kiện phòng ủ bệnh (nhiệt độ 25°C, độ ẩm 90%).

+Tỷ lệ (%) chiều dài vết bệnh (TLCDVB)

TLCDVB = (Chiều dài vết bệnh/chiều dài lá)*100 á l dà i u ề C hi

Chậu được chuyển đến khu vực nhà lưới có bóng mát, nơi độ ẩm được duy trì bằng cách phun sương thường xuyên, nhằm tạo điều kiện thuận lợi cho sự phát triển của bệnh.

Ghi nhận chỉ tiêu chiều dài lá và chiều dài vết bệnh sau 7 ngày lây bệnh theo phương pháp Kauffman (1973) Dựa vào chiều dài lá và chiều dài vết bệnh, tính toán phần trăm tỷ lệ chiều dài vết bệnh theo công thức của Gnanamanickam et al (1999).

Ghi nhận các chỉ tiêu bệnh

Hình 3.2 Phương pháp lây bệnh cháy bìa lá lúa (hình phía trên); phương pháp đo chiều dài lá bệnh và chiều dài lá (hình phía dưới) (Ke and Yuan., 2017)

Ch iều d ài lá Ch iều v ết b ện h

Cấp 1 Cấp 3 Cấp 5 Cấp 7 Cấp 9

+ Chỉ số bệnh: Sử dụng thang đánh giá cấp bệnh theo Ezuka và Horino (1972) để đánh giá sự phát triển của bệnh trong điều kiện nhà lưới

Bảng 3.1: Thang đánh giá cấp bệnh theo Kauffman (1973)

Cấp bệnh Mô tả cấp bệnh

3 Chiều dài vết bệnh 1/2 chiều dài lá

9 Chiều dài vết bệnh bằng chiều dài lá hoặc gây lá hoại tử hoàn toàn

Hình 3.3 Cấp bệnh cháy bìa lá lúa theo miêu tả Kauffman (1973)

Từ đó tính ra chỉ số bệnh theo công thức

A1.….an: Số lá bệnh ở cấp 1,…,n

P: Tổng số lá quan sát

N: Cấp bệnh cao nhất trong thang đánh giá

Xử lý số liệu: Số liệu được nhập vào phần mềm Excel và phân tích thống kê bằng phần mềm SPSS 20 qua phép thử Duncan

3.2.2 Đánh giá khả năng gây hại của chủng vi khuẩn BL36 trên một số giống lúa phổ biến tại tỉnh Bạc liêu

Mục tiêu của nghiên cứu là xác định mức độ gây bệnh của chủng vi khuẩn BL36 trên năm giống lúa phổ biến tại Bạc Liêu Nghiên cứu được thực hiện tại Phòng thí nghiệm Phòng trừ sinh học và khu Nhà lưới thuộc Khoa Bảo vệ thực vật, Trường Nông Nghiệp, Đại học Cần Thơ.

Vật liệu: Chủng vi khuẩn BL36 gây bệnh cao nhất từ thí nghiệm 3.2.1.2 và 5 giống lúa phổ biến tại Bạc Liêu là Jasmine 85, RVT, OM18, OM5451, Đài thơm 8

Ngày đăng: 26/01/2024, 08:55

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w