Nghiên ứu phát triển que thử nhanh phát hiện sự nhiễm virus rubella ở người

Trang 1 ------NGUY N TH ÁNH HÒA ỄỊNGHIÊN C U PHÁT TRI N QUE TH NHANH ỨỂỬPHÁT HI N S NHI M VIRUS RUBELLA ỆỰỄỞ NGƯỜILUẬN VĂN THẠC SĨKỸ THUẬT CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI ƯỚN

-NGUY N TH ÁNH HÒA Ễ Ị

NGHIÊN C U PHÁT TRI N QUE TH NHANH Ứ Ể Ử

PHÁT HI N S NHI M VIRUS RUBELLA Ệ Ự Ễ Ở NGƯỜI

CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC

1.TS.NGÔ THU HƯỜNG 2.PGS.TS.KHUẤT HỮU THANH

LỜI CAM ĐOAN

LỜI CẢM ƠN

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC HÌNH

DANH MỤC BẢNG

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

1.1 Đặc điểm của virus Rubella 3

  3

 4

 5

 5

 6

  7

 10

 11

 13

1.2 Tình hình nhiễm virus Rubella trên thế giới và Việt Nam 13

 13

 14

1.3 Các phương pháp phát hiện virus Rubella 15

 15

 realtime PCR 15

 (Immunofluorescent antibody-IFA) 16

  16

1.4 Thiết kế que thử nhanh dựa trên phương pháp sắc ký miễn dịch 18

1.4.1 Nguyên lý 18

 19

CHƯƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23

2.1 Vật liệu 23

 23

 23

 .24

2.2 Phương pháp nghiên cứu 24

2.2.1. 24

  - 25

 vàng 30

 31

CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32

3.1 Nghiên cứu tinh chế kháng thể kháng Rubella 33

3.2 Thiết lập điều kiện tạo que thử 37

 40

 41  41

 42

 43

 44

 49

3.4 Lựa chọn dung dịch chuẩn bị mẫu 50

3.5 Đánh giá que thử 51

 51

 52

 52

 .53

3.6 Hướng dẫn sử dụng que thử nhanh rubella 55

3.7 Khả năng ứng dụng que thử tại Việt Nam 57

CHƯƠNG IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58

Kết luận 58

Kiến nghị 58

TÀI LIỆU THAM KHẢO 59

LỜI CAM ĐOAN

Tác giả

Nguyễn Thị Ánh Hòa

LỜI CẢM ƠN

(POLYVAC

PGS







Gold Nanoparticles Bovine Serum Albumine Complementary DNA Congenital Rubella Syndrome Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Fusion Peptide

Immunoglobulin Messenger RNA

№n-Structural Protein Polyacrylamide Gel Electrophoresis Protein A

Phosphate Buffered Saline Polymerase Chain Reaction Ribonucleic Acid

World Health Organization

DANH MỤC HÌNH

Hình 1.3 Hình thái virus Rubella 9

19

Hình 3.5 Th .

Hình

DANH MỤC BẢNG

-PAGE

trình tiêm ch

1.1 Đặc điểm của virus Rubella

xin (Meruvax

1.1.6 

(15,4%) và G (30,8%)

p150 và p90

Hình 1.3 Hình thái virus Rubella

Hình 1.4              

         a protein E1 và E2



[29]

1.1.7  

glycoloprotein E2 và/

clathrin

(clathrin-alph

Hình 1.5[29]

1.1.8 

không

R, PC

1.3.3 

(Immunofluorescent antibody-IFA)

1.3.4 



m tra (KT2 - virus Rubella - KT1 -

- Màng nitrocellulose (Hãng Biotech)

-

- (Hãng Biotech Absorbent pad H5076, size 20x30 cm)

40% Acryamide 1,125 1,5 1,8 1,875 0,188

20% SDS 0,03 0,03 0,03 0,03 0,008 10% APS 0,05 0,05 0,05 0,05 0,02 Temed 0,01 0,01 0,01 0,01 0,005

H2O 3,285 2,91 2,61 2,535 0,904

6,0 6,0 6,0 6,0 1,5

Các bước chính trong quá trình tạo cộng hợp kháng thể và hạt nano vàng

(1)

2CO3

(2) Ch

3.1 Nghiên cứu tinh chế kháng thể kháng Rubella

ng hai thành ph n protein chi m t l l n trong huy t thanh Ngoài

c kho i 25 kDa chí

T n không bám c ng ch y 2) xu t hi n t t c

u huy t thanh ngo i tr

ng v i IgG chu i n ng và chu i nh Cáccho th y các thành ph n protein t

qua protein A và c thu l y b ng glycine T k t qu

n k t lu n r c tinh s ch t huykháng th nh b ng ph n m m QuantityOne (Bio-rad, M ) l

nh nBradford Hi u su t tinh ch c là 1,74 mg/ml huy t thanh

, kháng th (IgG) kháng virus Rubella c tinh s

t huy t thanh l n s d ng s c ký ái l c v i gel protein A sepharose Quy

   Protein A  

Kiểm tra sự hoạt động của que thử :

1,0 g; 0,5 g; 0,1

Hình 3.8   g

3.2.3 

Hình 3 10  nano vàng (30 phút, 60 phút, 90 phút, 120 phút, 150 phút)

Hình 3.11

 (CB1, CB2, CB3, CB4, CB5, CB6)

p (hình 3.11

NC b105 Whatman 99

Hình 3.15 

  g; 0,1 g; 0,3 g; 0,5    g

3.3.4  lai

oC, 25oC, 37oC

oC trong 30 phút

3.4 Lựa chọn dung dịch chuẩn bị mẫu

t

(SB1) SB 20mM : (SB2): SB 20mM + 0,1% Triton X100 (SB3) SB 20mM+ 2% sucrose :

(SB4) SB 20mM+ 2% sucrose+ 0,1% Triton X100 : (SB5) PBS 50mM pH 7,4 :

Hình 3.21



3.5.4 

virus Rubella và virus Rubella

:

Hình 3.22  que cho virus Rubella

i virus R

R

Âm tính Dương tính

CHƯƠNG IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận

-

9 Khán

TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT

1

2

3

TÀI LIỆU TIẾNG ANH

4 Min-Hsin, C, Joseph, I., (2007) Molecular Virology of Rubella virus

5 Banatvala, J E., Best, Jennifer, M., Bertrand, J., Bowern, Narellea (1970 )

Serological assessment of rubella during pregnancy Br Med J., 3,247 p

6 Vesikari, T., Vaheri, (1968 A ) Rubella: a method for rapid diagnosis of a

recent infection by demonstration of the IgM antibodies Br Med J., 1, 221 p

7 Baublis, J V., Brown, G C (1968) Specific response of the

immunoglobulins to rubella infection Proc Soc Exp Biol Med., pp.128

-206

8 Best, Jenifer M., Banatvala, J E., Wastom, D., (1969 Serum IgM and IgG )

responses in postnatally acquired rubella Lancet, pp.2-65

9 Cohen, Sophia, M., Ducharme, Claire P., Carpenter, Charlotte, A., Deibel,

R (1968) Rubella antibody in IgG and IgM immunoglobulins detected by

immunofluorescence J Lab Clin Med., pp -760 72

10 Desmyter, J., South, Mary A., Rawls, W E (1971 The IgM antibody )

response in rubella during pregnancy J Med Microbiol., pp.4-107

11 Haire, M, Hadden, D.S.M (1972) Rapid diagnosis of rubella by direct

immunofluorescent staining of desquamated cells in throat swabs J Med

Microbiol., pp.5-231

12 Centers for Disease Control 001) (2 Control and prevention of rubella: evaluation and management of suspected outbreaks, rubella in pregnant women, and surveillance for congenital rubella syndrome MMWR,

16 Infectious Diseases and immunization Committee, Canadian Paediatric

Society (CPS) (1999) Prevention of congenital rubella syndrome Paediatr

Child Health 4(2), pp.155 7

17 Obstetrics, W., Cunningham, F.G., Hauth, J.C., Leveno, K.J., Gilstrap, L III, Bloom, S.L., Wenstrom, K.D., eds (2001), 21st ed New York: McGraw-, Hill Medical Publishing Division, p.1467

18 Gabbe, S.G., Niebyl, J.R., Simpson, J.L., eds (2002) Obstetrics-normal

Purpura in congenital and acquired rubella N Engl J Med 273(25), ,

pp.1362 6

22 Miller, E., Cradock-Watson, J.E, Pollack, T.M (1982) Consequences of

confirmed maternal rubella at successive stages of pregnancy Lancet 2, ,

pp.781 4

23 Gregg, N.M (1941) Congenital cataract following German measles in

the mother Trans Am Ophthalmol Soc, pp.3-35

24 Reef, S.E., Plotkin, S., Cordero, , Katz, M., Cooper, L., Schwartz, B.JF ,

et al (2000) Preparing for congenital syndrome elimination: summary of the

Workshop on Congenital Rubella Syndrome Elimination in the United States

Clin Infect Dis 31, pp.85 95

25 Cooper, L.Z., Preblub, S.R., Alford, C.A (1995) Rubella In: Remington

J.S., Klein J.O., eds Infectious diseases of the fetus and newborn 4th edition

Philadelphia: WB Saunders, p.268

26 Weil, M.L., Itabashi, H., Cremer, N.E., Oshiro, L, Lennette, E.H., Carnay,

L (1975) Chronic progressive panencephalitis due to rubella virus

stimulating subacute sclerosing panencephalitis N Engl J Med 292, pp.994,

http://www.benhviennhi.org.vn/news/detail/701/hoi-chung-rubella-  

http://tudu.com.vn/vn/suc-khoe-mang-thai/mong-duoc- -van- -ket-qua-xet-tu ve

nghiem-rubella [Accessed 2 Feb 2018]

31 Miocevic, O., Craig, R.C., Laughlin, M J., Buck, R L Slowy, P D.,

Shirtcliff, E.A (2017) Quantitative Lateral Flow Assays for Salivary

Biomarker Assessment: A Review Iowa State University, Ames, IA, United

[online] Available at:

https://www.researchgate.net/figure/Structure-and-sequence-of-a-typical-lateral-flow-test-strip_fig1_317602663 [Accessed 2

Feb 2018]