Áp dụng kỹ thuật sinh họ phân tử phát hiện đột biến gen btk gây bệnh suy giảm miễn dịh bẩm sinh thể không ó gammaglobulin máu liên kết nhiễm sắ thể giới tính x

N ồng độ kháng th trong máu ngoể ại vi Trang 17 IgD, Globulin mi n dng mi n d ch.. Tiêu chu n chẩẩn đoán bệnh SGMD th XLA ể Tiêu chuẩn chẩn đoán xác định definitif+ Tìm th t bi n trên

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI *** - NGÔ MẠNH TIẾN ÁP DỤNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN GEN BTK GÂY BỆNH SUY GIẢM MIỄN DỊCH BẨM SINH THỂ KHƠNG CĨ GAMMAGLOBULIN MÁU LIÊN KẾT NHIỄM SẮC THỂ GIỚI TÍNH X LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC HÀ NỘI - 2018 Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! 17057205015901000000 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI *** - NGÔ MẠNH TIẾN ÁP DỤNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN GEN BTK GÂY BỆNH SUY GIẢM MIỄN DỊCH BẨM SINH THỂ KHƠNG CĨ GAMMAGLOBULIN MÁU LIÊN KẾT NHIỄM SẮC THỂ GIỚI TÍNH X Chun ngành: Cơng nghệ sinh học LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS KHUẤT HỮU THANH HÀ NỘI - 2018  Độc lập – Tự – Hạnh phúc BẢN XÁC NHẬN CHỈNH SỬA LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên tác giả luận văn: Ngô M Ti Đề tài luận văn: “            Chuyên ngành:  Mã số SV: CB160059     - Trang       Cytoplasmic tyrosine ki on tyrosine kinase - Cytoplasmic tyrosine kinase tyrosine kinase - Trang 8,    máu,   -   proB B - Trang 10.1Cytoplasmic tyrosine kinase tyrosine kinase - Trang Cytoplasmic tyrosine kinase tyrosine kinase - Trang 14 thành  i -   - Trang          mRNA           introng -   -   Ngày 08 tháng 11 2018 Tác giả luận văn Giáo viên hƣớng dẫn CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG ii LỜI CAM ĐOAN Tôi Ngơ Mnh Tin, hc viên lp Cao hc khóa 16B-CNSH hc Bách Khoa Hà Ni, chuyên ngành Công ngh Sinh hc,  u ca trc tip thc hi ca thy PGS TS Khut Hu Thanh Cơng trình khơng trùng lp vi bt k nghiên cc c b ti Vit Nam Các s liu thông tin nghiên cu hồn tồn xác trung thc, mt ph  c cơng b tp chí khoa hc chuyên ngành vi s ng ý cho phép cng tác gi Phn cịn lc cơng b bt kì cơng trình khác Hà Nội, ngày 25 tháng  Tác gi Ngô Mạnh Tiến i LỜI CẢM ƠN L u tiên, em xin c cm    n i th PGS.TS Khut Hu Thanh - i hc Bách khoa Hà Nn tình ch bo  viên em sut q trình nghiên c hồn thành lu Em xin chân thành cm Ngng khoa Di Sinh hc phân t- Bnh vi  o  u ki thành nghiên cu Em xin cy cô b môn Công ngh Sinh hc Công ngh th phi hc Bách Khoa Hà Nt kin thc ch trình hc tp rèn luyn Trong thi gian hc tp nghiên cu em c s  t ng viên khích l ca tp th cán b nhân viên khoa Di truyn Sinh hc phân t, em xin chân thành c  Cui cùng, cho phép em gi li c quan tâm, c ng hc tp Ngô Mạnh Tiến ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tên đầy đủ Nghĩa tiếng việt Bp Base pair C BTK  c.DNA Complementary DNA Cs Cng s DNA Deoxyribonucleric acid dNTP Dideoxynucleoside triphosphate EtBr Ethidium bromide Kb Kilo base kDa Kilo Dalton MLPA Multiplex DNA b sung Ligation-dependent K thut khu   Probe Amplification vào phn ng ni mRNA messenger RNA RNA thông tin RNA Ribonucleic acid NST Nhim sc th PCR Polymerase chain reaction Phn ng chui trùng hp sIg Surface Immunoglobulin Kháng th b mt SNPs Single nucleotide  polymorphisms SGMD Suy gim min dch SGMDBS Suy gim min dch bm sinh TVDT n di truyn XLA X-linked agammaglobulinemia Bnh suy gim min dch bm s th không gammaglobulin máu liên kt nhim sc th gii tính X iii DANH MỤC CÁC BẢNG Bng 2.1 Thành phn phn ng PCR .24 Bng 2.2 Trình t cp mi phn ng PCR khui gen BTK .25 Bng 2.3 Trình t mi phn ng PCR m .27 Bng 2.4 Thành phn phn ng PCR m 27 Bng 3.1 Kt qu t bin bng k thut gii trình t gen Bt bin mi gen BTK Bng 3.4 Kt qu t bin bng k thut MLPA Bng 3.5 Kiu gen ca 31 bnh nhân XLA .44 Bng 3.6 T l t bin ca gen BTK 46 iv DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Nng  kháng th  tr .5 Hình 1.2: S phát trin bit hóa ca lympho B bnh XLA  cu trúc gen BTK Hình 1.4 Cu trúc chiu protein BTK 11  t bin gen BTK gây bn Hình 2.2 n gen BTK Hình 3.1 n di sn phm PCR khui gen BTK i b Hình 3.2 Kt qu ng Hình 3.3 t bin c.1735G>C (p.D579H) gen BTK 36 Hình 3.4 t bin c.1908+2_11delinsC gen BTK .37 Hình 3.5 t bin c.521-1G>A (p.IVS6-1G>A) gen BTK 38 Hình 3.6 t bin c.1578_1581del (p.C527Wfs*2) gen BTK 38 Hình 3.7 n di bnh nhân XLA-26 XLA-27 gen BTK .41 Hình 3.8 Kt qu phân tích MLPA ca bnh nhân XLA-26 XLA-27 42 Hình 3.9 Phân b dt bin gen BTK 45 Hình 3.10 T l phát hit bin vùng gen BTK 47 Hình 3.11 V trí t l  t bin gen BTK gây bnh XLA  bnh nhân nghiên cu 48 v MỤC LỤC L i LI C ii DANH MC CÁC KÝ HIU, CÁC CH VIT TT iii DANH MC CÁC BNG iv DANH MC CÁC HÌNH V TH .v MC LC vi M U .1 NG QUAN 1.1 Bnh suy gim min dch bm sinh 1.2 Bnh suy gim min dch th không gammaglobulin máu liên kt nhim sc th gii tính X (XLA)  1.2.1 nh XLA .4  1.2.2 m lâm sàng ca bnh XLA  1.2.3 m cn lâm sàng ca bnh XLA .5 1.2.4 Dch t hc  di truyn bnh XLA .10 1.3.1 V trí cu trúc gen BTK 10 Cu trúc 1.3.2 ch  1.3.3 m di truyt bin gen BTK 1.4 Chnh XLA 12 1.4.1.Tiêu chun lâm sàng 13 1.4.2.Xét nghim cn lâm sàng 13 1.4.3 Xét nghim sinh hc phân t phân tích gen BTK 15 1.5 Tình hình nghiên cu bnh XLA 16 1.5.1 Tình hình nghiên cu th gii 16 1.5.2 Tình hình nghiên cu ti Vit Nam 18 U ng nghiên cu 19 vi