Trong tự nhiên, ngồi nguồn nitơ được tạo ra cho đất từ quá trình amon hóa, quá trình nitrat hóa, nguồn nitơ còn ñược tạo ra từ quá trình cố ñịnh nitơ phân tử ñược thực hiện bởi các nhóm
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN LÊ QUANG DŨNG PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN CỐ ĐỊNH NITƠ TỰ DO Azotobacter sp TRÊN MỘT SỐ LOẠI ĐẤT Ở ĐĂK LĂK LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC BUÔN MA THUỘT, NĂM 2011 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực, ñược ñồng tác giả cho phép sử dụng chưa cơng bố cơng trình khác Họ tên tác giả Lê Quang Dũng LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập nghiên cứu để hồn thành luận văn này, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành kính trọng đến: PGS.TS Nguyễn Anh Dũng, người trực tiếp hướng dẫn khoa học, tận tình dẫn tơi hồn thành luận văn tốt nghiệp PGS TS Nguyễn Hữu Hiệp, TS Võ Thị Phương Khanh, Thầy cô giáo môn sinh học khoa KHTN&CN, tập thể thầy cô giáo trường đại học Tây Ngun giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu đóng góp ý kiến q báu cho tơi hồn thành luận văn Những anh chị lớp cao học Sinh Học Thực Nghiệm khóa 3, tơi san buồn vui, học tập trao ñổi kiến thức q trình làm đề tài Các em sinh viên CN Sinh K07 anh chị làm việc môn sinh học thực vật, môn khoa học đất, sẵn sàng giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Cuối tơi xin chân thành cảm ơn nhà khoa học ngành, ñồng nghiệp, bạn bè người thân ñã ñộng viên giúp ñỡ tạo ñiều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập nghiên cứu làm luận văn tốt nghiệp Đăk Lăk, tháng 10 năm 2011 Tác giả Lê Quang Dũng DANH MỤC CÁC BẢNG 2.1 Nồng ñộ IAA thành lập ñồ thị ñường chuẩn 29 3.1 Ký hiệu, ñịa ñiểm phân lập chủng vi khuẩn môi trường Ashby 34 3.2 Mô tả Hình thái khuẩn lạc 24 chủng vi khuẩn phân lập ñược 36 3.3 Khả cố ñịnh nitơ chủng vi khuẩn Azotobacter sp 40 3.4 Khả sinh IAA chủng vi khuẩn Azotobacter sp 42 3.5 Ảnh hưởng chủng vi khuẩn Azotobacter sp ñến số cải 44 3.6 Ảnh hưởng chủng vi khuẩn Azotobacter sp ñến chiều cao cải 45 3.7 Ảnh hưởng chủng VK Azotobacter sp ñến khối lượng rễ cải 3.8 Ảnh hưởng chủng VK Azotobacter sp ñến suất cải 48 3.9 Ảnh hưởng mật ñộ vi khuẩn Azotobacter sp ñến số cải 47 50 3.10 Ảnh hưởng mật ñộ vi khuẩn Azotobacter sp ñến chiều cao cải 52 11 Ảnh hưởng mật ñộ vi khuẩn Azotobacter sp ñến khối lượng rễ cải 53 3.12 Ảnh hưởng mật độ vi khuẩn lên diện tích cải 55 3.13 Ảnh hưởng mật ñộ vi khuẩn Azotobacter sp ñến suất cải 56 3.14 Hàm lượng nitơ tổng số (mg/l) chủng vi khuẩn Azotobacter sp tuyển chọn nuôi cấy từ nguồn carbon khác 58 3.15 Hàm lượng nitơ tổng số (mg/l) chủng vi khuẩn Azotobacter sp tuyển chọn ni cấy nồng độ glucose khác 61 3.16 Hàm lượng nitơ tổng số (mg/l) bốn chủng vi khuẩn Azotobacter sp tuyển chọn nuôi cấy khoản nhiệt ñộ khác 63 3.17 Hàm lượng nitơ tổng số (mg/l) chủng vi khuẩn Azotobacter sp tuyển chọn ni cấy pH khác 65 3.18 Hàm lượng nitơ tổng số (mg/l) chủng vi khuẩn Azotobacter sp tuyển chọn nuôi cấy thời gian khác 67 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Giữa đất, vi sinh vật trồng có mối quan hệ tác ñộng qua lại lẫn Quá trình hình thành ñất độ phì đất chịu ảnh hưởng yếu tố vật lí, hóa học vi sinh vật Vi sinh vật tổng hợp giải phóng vào đất chất hữu cần thiết tạo độ phì cho ñất, ngược lại ñất môi trường sống cần thiết cho vi sinh vật, ñất vi sinh vật tác ñộng lớn ñến trồng, ñặc biệt cung cấp nguồn dinh dưỡng, nguồn dinh dưỡng quan trọng cho trồng nguồn nitơ [8] Người ta nhận thấy muốn thu hoạch 12 tạ hạt hecta, trồng lấy ñi khỏi ñất khoảng 30 kg nitơ [3] Theo thống kê hàng năm sản phẩm nơng nghiệp giới lấy khỏi đất khoảng 100 – 110 triệu nitơ (G Colar Greenland) [3] Trong lượng phân nitơ hóa học bù ñắp ñược phần lượng nitơ mà lấy ñi khỏi ñất Lạm dụng mức việc sử dụng phân hóa học làm đất xấu đi, cân ñối chất dinh dưỡng làm giảm hệ vi sinh vật có ích, việc sản xuất phân nitơ hóa học cịn gặp nhiều khó khăn, giá thành cao Vấn ñề ñặt làm ñể bổ sung lượng dinh dưỡng nitơ cho ñất cách có hiệu nhất, vừa tiết kiệm chi phí sản xuất, bảo vệ mơi trường Một giải pháp ñang ñược áp dụng ñể cải tạo đất sử dụng phân bón vi sinh vật Nhóm vi sinh vật phân có tác dụng cải thiện độ phì, cân dinh dưỡng đất, cải thiện tính chất lý, hóa ñất, ñặc biệt hạn chế ô nhiễm môi trường, nhiễm mơi trường nước q trình rửa trơi [1] Trong tự nhiên, ngồi nguồn nitơ tạo cho đất từ q trình amon hóa, q trình nitrat hóa, nguồn nitơ cịn tạo từ q trình cố định nitơ phân tử thực nhóm vi sinh vật đất, có đóng góp nhóm vi khuẩn cố định nitơ tự Azotobacter sp Các vi sinh vật thuộc nhóm có khả chuyển hóa nitơ phân tử thành hợp chất chứa nitơ mà trồng có khả hấp thụ ñược [3] Azotobacter sp loại vi khuẩn hiếu khí, sống tự đất, chúng có khả cố định đạm cao khơng phụ thuộc vào chủ Ngồi đặc điểm số chủng thuộc chi cịn có khả sinh tổng hợp nên IAA (chất kích thích sinh trưởng thực vật) Chính nhờ đặc điểm quan trọng vi khuẩn Azotobacter sp ñược ứng dụng rộng rãi chế phẩm phân bón vi sinh vật làm tăng suất trồng Ở Việt Nam có số cơng trình nghiên cứu vi sinh vật cố ñịnh nitơ tự số loại ñất ñể làm phân vi sinh, chưa có nghiên cứu thành phần loài thuộc chi Azotobacter sp số loại ñất Đăk Lăk Xuất phát từ thực tế đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu ñề tài: “Phân lập tuyển chọn số chủng vi khuẩn cố ñịnh nitơ tự Azotobacter sp số loại ñất Đăk Lăk” Mục tiêu ñề tài - Tuyển chọn ñược số chủng Azotobacter sp cố ñịnh ñạm cao số loại ñất Đăk Lăk - Đánh giá hiệu số chủng vi khuẩn Azotobacter sp ñối với sinh trưởng cải (Brassica juncea) Ý nghĩa ñề tài Ý nghĩa khoa học Đề tài góp phần phân lập, tuyển chọn số chủng vi khuẩn Azotobacter sp địa có khả cố ñịnh ñạm cao số loại ñất Đăk Lăk, góp phần vào cơng cơng tác bảo tồn đa dạng vi sinh vật Đăk Lăk Tây Nguyên Ý nghĩa thực tiễn Đề tài sở cho việc lựa chọn chủng Azotobacter sp số loại đất Đăk Lăk có hoạt tính cố định nitơ cao để sản xuất phân vi sinh có hiệu quả, nâng cao độ phì nhiêu đất, hạn chế bón phân hóa học, tăng suất trồng góp phần phát triển nơng nghiệp sinh thái bền vững Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nguồn nitơ tự nhiên Trong nước, nitơ chủ yếu dạng hợp chất NH4+, NO2-, NO3- Trong ñất có dạng nitơ tồn nitơ vơ muối khoáng nitơ hữu xác, chất tiết từ sinh vật Các hợp chất chứa nitơ xác, chất tiết ñộng vật thực vật bị số loại nấm vi khuẩn phân giải Trong đất amon chuyển hóa toàn thành hợp chất nitrat Phần lớn hợp chất nitrat thực vật hấp thụ, phần cịn lại bị mưa rửa trơi tác dụng phản nitrat hóa Hợp chất đạm mà thực vật hút từ ñất phần gốc rễ ñược trả lại ñất, phần lại ñược ñộng vật thực vật dị dưỡng tiêu thụ, lại biến thành chất tiết trả lại ñất Những chất hữu tác dụng nhiều loại vi sinh vật, nấm bị khử thành đạm dạng hữu hiệu Nitơ khơng khí tồn chủ yếu dạng nitơ phân tử (N2) chiếm khoảng 80%, dạng nguyên tử kép (N2) khóa chặt với thơng qua liên kết cộng hóa trị bền vững (N≡N) Mặc dù cần nguyên tố này, hấp thụ nitơ dạng NO3- NH4+ [3] Để sử dụng nguồn nitơ lớn từ khơng khí có đường hóa học sinh học Hóa học: Kể từ năm 1920, phương pháp công nghiệp Haber - Bosch ñã giúp người phá vỡ liên kết ba Biện pháp địi hỏi phải thực nhiệt ñộ cao (450 – 500oC), áp suất 125 atm Fe3+ chất xúc tác Các hợp chất nitơ tổng hợp hóa học cung cấp cho trồng nguồn nitơ lớn ổn ñịnh Tuy nhiên, bên cạnh việc sử dụng phân ñạm tổng hợp hóa học cho nơng nghiệp làm tăng suất trồng đem lại tác hại khơng nhỏ, trung bình có 40 – 50 % lượng đạm bón hấp thu, phần cịn lại gây nhiễm mơi trường đất, nước, khơng khí… từ gây hại chí tiêu diệt sinh vật có lợi Các hợp chất chứa nitơ phân bón hóa học gây hại lớn ñối với cá, ñộng vật thân mềm kể người Sinh học: Nhờ vi sinh vật tiết enzyme nitrogenase để thực q trình sinh học đặc biệt - q trình cố định nitơ Nhóm vi sinh vật có khả thực q trình gọi vi sinh vật cố định nitơ Việc sử dụng phân bón vi sinh làm đất khơng bị nhiễm, khả giữ ẩm tốt hơn, tăng cường khả cải tạo ñất hệ sinh vật có ích hoạt động mạnh làm cho ñất tơi xốp hơn, dễ hút chất dinh dưỡng Ngồi ra, cịn có đường tạo nitơ khác sấm chớp hay cháy [12] 1.2 Vai trị nitơ thực vật Nitơ thành phần quan trọng cấu tạo nên phân tử hữu protein, diệp lục, ATP… Hàm lượng nitơ thành phần chất khô thực vật dao ñộng từ – 3% Tuy hàm lượng thấp nitơ có vai trị sinh lý đặc biệt quan trọng ñời sống sinh trưởng phát triển hình thành suất trồng Thiếu nitơ, sinh trưởng kém, chlorophyll khơng tổng hợp đầy đủ, vàng, ñẻ nhánh phân cành kém, sút giảm hoạt ñộng quang hợp nên suất giảm Nếu thừa nitơ ảnh hưởng nghiêm trọng ñến sinh trưởng, phát triển suất trồng sinh trưởng mạnh thân tăng nhanh nên yếu, dễ đổ, thu hoạch gặp nhiều khó khăn 1.3 Q trình chuyển hóa nitơ tự nhiên 1.3.1 Q trình khống hóa Q trình khống hóa q trình phân hủy xác hữu tác ñộng quần thể vi sinh vật thành chất khống hịa tan hay chất khí tỏa nhiệt, tùy thuộc vào điều kiện khống hóa mà cho sản phẩm khác Giai đoạn có tham gia chủng vi sinh vật nitrat hóa Nitrosomonas Nitrobacter - vi khuẩn tham gia vào trình oxy hóa hợp chất chứa nitơ thành nitrat (NO3-), dạng thích hợp trồng hấp thu Vi khuẩn amon hóa NH4+ Hợp chất hữu Vi khuẩn nitrat hóa NH4 + NO2Nitrosomonas NO2- Nitrobacter NO3- 1.3.2 Q trình phản nitrat hóa Là q trình phân hủy chuyển hóa hợp chất nitrat điều kiện yếm khí tác dụng vi sinh vật tạo thành nitơ Vi khuẩn phản nitrat hóa NO3- N2 1.3.3 Q trình cố định nitơ phân tử Q trình thực vi sinh vật cố ñịnh nitơ Rhizobium sống cộng sinh rễ họ ñậu hay Azotobacter sống tự do, biến đổi N2 khơng khí thành NH3, từ NH3 tổng hợp hợp chất chứa nitơ khác cung cấp cho trồng ñồng thời làm giàu thêm nitơ cho ñất Để q trình xảy phải có lực khử mạnh, ATP thực điều kiện kỵ khí (do ñiều kiện enzyme nitrogenase hoạt ñộng) Nitrogenase N + H2 H2O NH3 NH4+ Vi khuẩn cố định đạm Cơ chế hóa sinh q trình cố định nitơ vi khuẩn sống tự ñất * * 108.161 973.450 * * 117.931 1061.380 * * 220.243 2642.920 * * 118.324 1419.890 * * 44.218 530.620 * 1 241.333 724.000 * 185.100 555.300 * 72.633 217.900 * 222.587 667.760 * 2 91.380 274.140 * 39.833 119.500 * 213.213 639.640 * 100.750 302.250 * 3 10.520 31.560 * 203.840 611.520 * 96.067 288.200 * 53.887 161.660 -A N A L Y S I S K Value O F Degrees of Source Freedom V A R I A N C E Sum of Squares T A B L E Mean F Square Value Prob -1 Replication 149.330 74.665 0.5323 Factor A 18601.158 6200.386 44.2059 Factor B 187455.964 93727.982 668.2379 AB 7839.977 1306.663 9.3159 22 3085.751 140.261 0.0000 0.0000 0.0000 -7 Error -Total 35 217132.180 -Coefficient of Variation: 9.28% s_ for means group 1: 3.4188 Number of Observations: 12 3.9477 Number of Observations: 3.4188 Number of Observations: 12 6.8377 Number of Observations: y s_ for means group 2: y s_ for means group 4: y s_ for means group 6: y Bảng phụ 3.13: Hàm lượng nitơ tổng số bốn chủng vi khuẩn tuyển chọn nuôi cấy nồng ñộ carbon khác Nồng ñộ glucose % 1% 2% 3% 4% Lặp lại Hàm lượng ñạm tổng số (mg/l) Az15.2 Az3.1 Az3.2 Az7.2 49.20 105.44 35.15 21.09 49.20 91.38 49.20 7.03 35.15 105.44 35.15 21.09 246.02 147.61 105.44 189.78 246.02 161.67 91.38 175.73 246.02 161.67 105.44 189.78 246.02 217.90 203.84 175.73 231.96 231.96 189.78 175.73 246.02 217.90 203.84 189.78 217.90 203.84 203.84 203.84 203.84 217.90 189.78 189.78 217.90 217.90 189.78 189.78 Function: FACTOR Experiment Model Number 8: Two Factor Randomized Complete Block Desig Data case no to 48 Factorial ANOVA for the factors: Replication (Var 1: laplai) with values from to Factor A (Var 2: vk) with values from to Factor B (Var 3: nongdocacbon) with values from to Variable 4: dam Grand Mean = 159.325 T A B L E Grand Sum = 7647.620 O F Total Count = 48 M E A N S Total * * 160.790 2572.640 * * 156.396 2502.340 * * 160.790 2572.640 * * 186.271 2235.250 * * 173.384 2080.610 * * 133.552 1602.620 * * 144.095 1729.140 * * 50.377 604.520 * * 172.213 2066.560 * * 210.872 2530.460 * * 203.840 2446.080 * 1 44.517 133.550 * 246.020 738.060 * 241.333 724.000 * 213.213 639.640 * 100.753 302.260 * 2 156.983 470.950 * 222.587 667.760 * 213.213 639.640 * 39.833 119.500 * 100.753 302.260 * 3 199.153 597.460 * 194.467 583.400 * 16.403 49.210 * 185.097 555.290 * 180.413 541.240 * 4 194.467 583.400 A N A L Y S I S K O F Degrees of Value Source Freedom V A R I A N C E Sum of Squares T A B L E Mean F Square Value Prob -1 Replication 205.920 102.960 1.7449 Factor A 21839.470 7279.823 123.3753 Factor B 200093.904 66697.968 1130.3679 AB 29973.555 3330.395 56.4421 30 1770.166 59.006 0.1919 0.0000 0.0000 0.0000 -7 Error -Total 47 253883.016 -Coefficient of Variation: 4.82% s_ for means group 1: 1.9204 Number of Observations: 16 2.2175 Number of Observations: 12 2.2175 Number of Observations: 12 y s_ for means group 2: y s_ for means group 4: y s_ for means group 6: 4.4349 Number of Observations: y Trắc nghiệm phân hạng ảnh hưởng nồng ñộ carbon khác ñến khả cố ñịnh ñạm chủng vi sinh vật tuyển chọn Function : RANGE Error Mean Square = 59.01 Error Degrees of Freedom = 30 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 17.25 s_ = 4.435 at alpha = 0.010 x Original Order Mean = 44.52 Mean = 246.0 Mean = 241.3 Mean = 213.2 Mean = 100.8 Mean = 157.0 Mean = 222.6 Mean = 213.2 Mean = 39.83 Mean 10 = 100.8 Mean 11 = 199.2 Mean 12 = 194.5 Mean 13 = 16.40 Mean 14 = 185.1 Mean 15 = Mean 16 = Ranked Order G Mean = 246.0 A A Mean = 241.3 A A Mean = 222.6 B Mean = 213.2 BC Mean = 213.2 BC Mean 11 = 199.2 CD B Mean 12 = 194.5 D BC Mean 16 = 194.5 CD Mean 14 = 185.1 D Mean 15 = 180.4 D CD Mean = 157.0 D Mean = 100.8 F Mean 10 = 100.8 F D Mean = 44.52 G 180.4 D Mean = 39.83 G 194.5 CD Mean 13 = 16.40 BC F E G F H E H Bảng phụ 3.14: Hàm lượng nitơ tổng số bốn chủng vi khuẩn tuyển chọn ni cấy nhiệt độ khác Nhiệt ñộ Lặp lại o 30 C o 35 C 40oC Hàm lượng ñạm tổng số (mg/l) Az15.2 Az3.1 Az3.2 Az7.2 260.07 217.90 189.78 189.78 260.07 217.90 189.78 189.78 246.02 231.96 175.73 175.73 203.84 231.96 203.84 133.55 189.78 217.90 203.84 133.55 189.78 231.96 217.90 119.49 77.32 35.15 105.44 21.09 77.32 35.15 91.38 21.09 77.32 21.09 77.32 35.15 Function: FACTOR Experiment Model Number 8: Two Factor Randomized Complete Block Design Data case no to 36 Factorial ANOVA for the factors: Replication (Var 1: laplai) with values from to Factor A (Var 2: vk) with values from to Factor B (Var 3: nhietdo) with values from to Variable 4: dam Grand Mean = 152.686 T A B L E Grand Sum = 5496.710 O F Total Count = 36 M E A N S Total * * 155.810 1869.720 * * 152.295 1827.540 * * 149.954 1799.450 * * 175.724 1581.520 * * 160.108 1440.970 * * 161.668 1455.010 * * 113.246 1019.210 * * 212.042 2544.500 * * 189.782 2277.390 * * 56.235 674.820 * 1 255.387 766.160 * 194.467 583.400 * 77.320 231.960 * 222.587 667.760 * 2 227.273 681.820 * 30.463 91.390 * 185.097 555.290 * 208.527 625.580 * 3 91.380 274.140 * 185.097 555.290 * 128.863 386.590 * 25.777 77.330 A N A L Y S I S K O F Degrees of Value Source Freedom V A R I A N C E Sum of Squares T A B L E Mean F Square Value Prob -1 Replication 208.502 104.251 1.5248 Factor A 19998.664 6666.221 97.4986 Factor B 170424.489 85212.245 1246.2946 AB 16612.383 2768.731 40.4948 22 1504.194 68.372 0.2398 0.0000 0.0000 0.0000 -7 Error -Total 35 208748.233 -Coefficient of Variation: 5.42% s_ for means group 1: 2.3870 Number of Observations: 12 2.7563 Number of Observations: 2.3870 Number of Observations: 12 4.7740 Number of Observations: y s_ for means group 2: y s_ for means group 4: y s_ for means group 6: y Trắc nghiệm phân hạng ảnh hưởng nhiệt ñộ khác ñến khả cố ñịnh ñạm chủng vi sinh vật tuyển chọn Function :RANGE Error Mean Square = 68.37 Error Degrees of Freedom = 22 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 19.03 s_ = 4.774 at alpha = 0.010 x Original Order Mean = 255.4 Mean = 194.5 Mean = 77.32 Mean = 222.6 Mean = 227.3 Mean = 30.46 Mean = 185.1 Mean = 208.5 Mean = 91.38 Mean 10 = 185.1 Mean 11 = 128.9 Mean 12 = 25.78 Ranked Order A Mean = 255.4 Mean = 227.3 B Mean = 222.6 B B Mean = 208.5 BC B Mean = 194.5 CD Mean = 185.1 D Mean 10 = 185.1 D Mean 11 = 128.9 Mean = 91.38 F Mean = 77.32 F Mean = 30.46 G Mean 12 = 25.78 G CD F G D BC F D E G A E Bảng phụ 3.15: Hàm lượng nitơ tổng số bốn chủng vi khuẩn tuyển chọn nuôi cấy pH khác pH Lặp lại Hàm lượng ñạm tổng số (mg/l) Az15.2 Az3.1 Az3.2 Az7.2 49.20 21.09 77.32 189.78 49.20 21.09 77.32 189.78 49.20 35.15 91.38 175.73 217.90 119.49 203.84 189.78 217.90 119.49 217.90 203.84 246.02 77.32 203.84 203.84 231.96 217.90 147.61 119.49 231.96 217.90 119.49 119.49 246.02 231.96 147.61 91.38 119.49 119.49 35.15 21.09 119.49 91.38 21.09 21.09 105.44 91.38 21.09 49.20 Function: FACTOR Experiment Model Number 8: Two Factor Randomized Complete Block Design Data case no to 48 Factorial ANOVA for the factors: Replication (Var 1: laplai) with values from to Factor A (Var 2: vk) with values from to Factor B (Var 3: ph) with values from to Variable 4: dam Grand Mean = 128.866 T A B L E Grand Sum = 6185.550 O F Total Count = 48 M E A N S Total * * 130.036 2080.580 * * 127.401 2038.410 * * 129.160 2066.560 * * 156.982 1883.780 * * 113.637 1363.640 * * 113.637 1363.640 * * 131.207 1574.490 * * 85.520 1026.240 * * 185.097 2221.160 * * 176.898 2122.770 * * 67.948 815.380 * 1 49.200 147.600 * 227.273 681.820 * 236.647 709.940 * 114.807 344.420 * 25.777 77.330 * 2 105.433 316.300 * 222.587 667.760 * 100.750 302.250 * 82.007 246.020 * 208.527 625.580 * 3 138.237 414.710 * 25.777 77.330 * 185.097 555.290 * 199.153 597.460 * 110.120 330.360 * 4 30.460 91.380 A N A L Y S I S K Value O F Degrees of Source Freedom V A R I A N C E Sum of Squares T A B L E Mean F Square Value Prob -1 Replication 57.652 28.826 0.1748 Factor A 15118.064 5039.355 30.5522 Factor B 132705.006 44235.002 268.1846 0.0000 0.0000 AB 110146.251 12238.472 30 4948.271 164.942 74.1985 0.0000 -7 Error -Total 47 262975.244 -Coefficient of Variation: 9.97% s_ for means group 1: 3.2107 Number of Observations: 16 3.7075 Number of Observations: 12 3.7075 Number of Observations: 12 7.4149 Number of Observations: y s_ for means group 2: y s_ for means group 4: y s_ for means group 6: y Trắc nghiệm phân hạng ảnh hưởng pH khác ñến khả cố ñịnh ñạm chủng vi sinh vật tuyển chọn Function : RANGE Error Mean Square = 164.9 Error Degrees of Freedom = 30 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 28.84 s_ = 7.415 at alpha = 0.010 x Original Order Mean = 49.20 Mean = 227.3 Ranked Order F AB Mean = 236.7 A Mean = 227.3 AB Mean = 236.7 Mean = 114.8 Mean = 25.78 Mean = 105.4 Mean = 222.6 Mean = 100.8 Mean = 82.01 Mean 10 = 208.5 Mean 11 = 138.2 Mean 12 = 25.78 Mean 13 = 185.1 Mean 14 = 199.2 Mean 15 = 110.1 Mean 16 = 30.46 A Mean = 222.6 AB Mean 10 = 208.5 ABC Mean 14 = 199.2 BC Mean 13 = 185.1 C Mean 11 = 138.2 D E Mean = 114.8 DE E Mean 15 = 110.1 DE Mean = 105.4 DE Mean = 100.8 E Mean = 82.01 E C Mean = 49.20 F BC Mean 16 = 30.46 F Mean = 25.78 F Mean 12 = 25.78 F DE F DE AB ABC D F DE F Bảng phụ 3.16: Hàm lượng nitơ tổng số bốn chủng vi khuẩn tuyển chọn nuôi cấy thời gian khác Thời gian (ngày) Lặp lại Hàm lượng ñạm tổng số (mg/l) Az15.2 Az3.1 Az3.2 Az7.2 35.15 91.38 35.15 105.44 49.20 63.26 21.09 77.32 49.20 91.38 21.09 105.44 63.26 147.61 63.26 189.78 77.32 161.67 49.20 189.78 63.26 147.61 63.26 203.84 189.78 231.96 147.61 189.78 189.78 231.96 147.61 203.84 203.84 217.90 161.67 203.84 231.96 217.90 203.84 189.78 231.96 231.96 217.90 203.84 260.07 217.90 203.84 203.84 Function: FACTOR Experiment Model Number 8: Two Factor Randomized Complete Block Design Data case no to 48 Factorial ANOVA for the factors: Replication (Var 1: laplai) with values from to Factor A (Var 2: vk) with values from to Factor B (Var 3: thoigian) with values from to Variable 4: dam Grand Mean = 147.902 T A B L E Grand Sum = 7099.310 O F Total Count = 48 M E A N S Total * * 145.852 2333.640 * * 146.731 2347.690 * * 151.124 2417.980 * * 137.065 1644.780 * * 171.041 2052.490 * * 111.293 1335.520 * * 172.210 2066.520 * * 62.092 745.100 * * 118.321 1419.850 * * 193.297 2319.570 * * 217.899 2614.790 * 1 44.517 133.550 * 67.947 203.840 * 194.467 583.400 * 241.330 723.990 * 82.007 246.020 * 2 152.297 456.890 * 227.273 681.820 * 222.587 667.760 * 25.777 77.330 * 58.573 175.720 * 3 152.297 456.890 * 208.527 625.580 * 96.067 288.200 * 194.467 583.400 * 199.153 597.460 * 4 199.153 597.460 A N A L Y S I S K O F Degrees of Value Source Freedom V A R I A N C E Sum of Squares T A B L E Mean F Square Value Prob -1 Replication 255.236 127.618 1.2598 Factor A 31007.034 10335.678 102.0328 Factor B 182385.761 60795.254 600.1646 AB 29352.197 3261.355 32.1958 30 3038.929 101.298 0.2983 0.0000 0.0000 0.0000 -7 Error -Total 47 246039.156 -Coefficient of Variation: 6.80% s_ for means group 1: 2.5162 Number of Observations: 16 2.9054 Number of Observations: 12 2.9054 Number of Observations: 12 y s_ for means group 2: y s_ for means group 4: y s_ for means group 6: 5.8108 Number of Observations: y Trắc nghiệm phân hạng ảnh hưởng thời gian ni cấy khác đến khả cố ñịnh ñạm bốn chủng vi sinh vật tuyển chọn Function : RANGE Error Mean Square = 101.3 Error Degrees of Freedom = 30 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 22.60 s_ = 5.811 at alpha = 0.010 x Original Order Mean = 44.52 Mean = 67.95 Mean = 194.5 Mean = 241.3 Mean = 82.01 Mean = 152.3 Mean = 227.3 Mean = 222.6 Mean = 25.78 Mean 10 = 58.57 Mean 11 = 152.3 Mean 12 = 208.5 Mean 13 = 96.07 Mean 14 = 194.5 Mean 15 = 199.2 Ranked Order HI Mean = 241.3 A Mean = 227.3 AB Mean = 222.6 ABC Mean 12 = 208.5 BCD Mean 15 = 199.2 CD Mean 16 = 199.2 CD AB Mean = 194.5 D ABC Mean 14 = 194.5 D Mean 11 = 152.3 E Mean = 152.3 E Mean 13 = 96.07 F Mean = 82.01 FG Mean = 67.95 GH D Mean 10 = 58.57 GH CD Mean = 44.52 GH D A FG E I GH E BCD Mean 16 = 199.2 CD F HI