Chiết xuất, phân lập stipuleanosid r2 từ sâm vũ diệp (panax bipinnatifidus seem ) làm nguyên liệu xây dựng chất chuẩn cho dược liệu

TỔNG QUAN

CHẤT CHUẨN, CHẤT ĐỐI CHIẾU

Chất chuẩn, hay còn gọi là chất chuẩn đối chiếu, là yếu tố thiết yếu trong việc đánh giá nguyên liệu, bán thành phẩm và thành phẩm theo các quy trình đã được xác định, nhằm đảm bảo rằng kết quả phân tích đạt độ chính xác và độ tin cậy cao.

Chất chuẩn đối chiếu là một phần quan trọng của đo lường và thiết lập tính khả thi trong so sánh (comparability) và có thể truy nguyên được (traceability)[6]

Theo dược điển Việt Nam V, chất đối chiếu là chất đồng nhất đã được xác định đúng để sử dụng trong các phép thử hóa học, vật lý và sinh học Trong các phép thử này, các tính chất của chất đối chiếu được so sánh với các tính chất của chất thử Để đảm bảo tính chính xác, chất đối chiếu cần có độ tinh khiết phù hợp với mục đích sử dụng.

Theo định nghĩa của FDA, chất chuẩn đối chiếu là một lô hợp chất thuốc được chế tạo đặc biệt thông qua tổng hợp độc lập hoặc tinh chế nguyên liệu, và được kiểm chứng qua nhiều thử nghiệm phân tích để xác định tính xác thực và độ tinh khiết tối đa Chất này thường được sử dụng để phân giải cấu trúc và làm chuẩn cho các chất chuẩn làm việc.

Chất đối chiếu được dùng trong các phép thử sau:

- Định tính bằng phương pháp quang phổ hấp thụ hồng ngoại

- Định lượng bằng phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại và khả kiến, quang phổ huỳnh quang

- Các phép thử định tính và định lượng bằng phương pháp sắc ký

- Định lượng bằng phương pháp vi sinh vật

- Các phép chuẩn độ đo thể tích, phân tích khối lượng

- Các phép thử sinh học

- Một số phép thử khác có hướng dẫn trong các chuyên luận riêng [3]

Ngoài ra chất đối chiếu còn dùng để:

- Thẩm định một phương pháp mới

- Chuẩn hóa các chất đối chiếu khác

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a vital raw material for producing high-quality medicinal products This compound plays a significant role in traditional medicine, highlighting its importance in the pharmaceutical industry The standardized extraction process ensures the efficacy and safety of the final herbal formulations, making it a valuable ingredient in various therapeutic applications.

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU

- Khẳng định giá trị pháp lý của một phương pháp đã chuẩn hóa [15]

Chất chuẩn trong lĩnh vực khoa học dược phẩm được phân loại thành hai loại chính: chất chuẩn sơ cấp (primary standards) và chất chuẩn thứ cấp (secondary standards).

Chất chuẩn sơ cấp là các hợp chất có chất lượng và độ tinh khiết được xác định độc lập, được công nhận mà không cần tham chiếu đến các tiêu chuẩn khác.

Chất chuẩn thứ cấp (secondary standards) là các hợp chất có chất lượng và độ tinh khiết được xác định thông qua việc so sánh với chất chuẩn phân tích.

So sánh 2 loại chất chuẩn:

B ả ng 1 So sánh 2 lo ạ i ch ấ t chu ẩ n [18]

Chất chuẩn sơ cấp Chất chuẩn thứ cấp

Tên gọi khác Chất chuẩn gốc Chất chuẩn phòng thí nghiệm, chất chuẩn làm việc Độ tinh khiết 99.5% 95%

Chất lượng Cao Kém hơn chất chuẩn sơ cấp Đặc tính Được chấp nhận mà không cần so sánh

Yêu cầu phải so sánh với chất chuẩn phân tích

- Dùng trong mục đích công nghiệp:

+ Quá trình phát triển thuốc + Nghiên cứu và phát triển (R&D) + Chuẩn hóa dụng cụ, phương pháp và vật liệu

+ Chuẩn hóa chất chuẩn thứ cấp

Dùng trong phòng thí nghiệm và kiểm tra chất lượng (QC)

Như thuốc hoặc mỹ phẩm cho người tiêu dùng

Cho mục đích nghiên cứu yêu cầu độ tinh khiết trên 95%

Tính sẵn có Tổng hợp độc lập và lượng sẵn có vô cùng ít Được cung cấp từ nhà máy Bulk hoặc bào chế trong phòng thí nghiệm

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a fundamental ingredient in the formulation of high-quality herbal medicines This plant is recognized for its therapeutic properties, making it a valuable resource in traditional and modern herbal practices The standardized extraction process ensures the consistency and efficacy of the active compounds, contributing to the overall quality of the herbal products derived from this source.

Giá cả Rất cao Thấp hơn

1.1.4 Sự cần thiết của việc thiết lập chất chuẩn đối chiếu

Hiện nay, trên thế giới đã có một số chất chuẩn đặc trưng của dược liệu với độ tinh khiết cao Mặc dù chỉ có ít chất chuẩn có thể tiếp cận và thường có giá rất cao, nhưng việc nghiên cứu và sản xuất các chất chuẩn này rất quan trọng Chúng giúp cải thiện công tác kiểm tra và giám sát chất lượng thuốc cũng như nguyên liệu làm thuốc, mang lại sự thuận tiện trong quy trình này.

Hiện nay, Việt Nam có hơn 500 chất chuẩn, bao gồm chất chuẩn Quốc tế, chuẩn khu vực, chuẩn Dược điển Việt Nam, chuẩn phòng thí nghiệm và chuẩn chính Tuy nhiên, phần lớn trong số đó là chất chuẩn hóa học, trong khi số lượng chất chuẩn có nguồn gốc từ dược liệu rất hạn chế Sự thiếu hụt này đang gây ra nhiều khó khăn cho ngành Dược.

Việc không thực hiện kiểm tra và giám sát đầy đủ đối với dược liệu và các sản phẩm bào chế từ dược liệu đang lưu hành trên thị trường dẫn đến nhiều rủi ro cho sức khỏe cộng đồng.

Việc không tiêu chuẩn hóa các thuốc sản xuất trong nước từ dược liệu hoặc chiết xuất dược liệu về hàm lượng dược chất dẫn đến khó khăn trong việc bào chế các sản phẩm thuốc chất lượng cao Điều này ảnh hưởng đến khả năng đáp ứng nhu cầu phòng bệnh và chữa bệnh của người dân.

Nghiên cứu và thiết lập chất chuẩn cho các hợp chất chiết xuất từ dược liệu là một nhiệm vụ quan trọng trong lĩnh vực khoa học công nghệ, nhằm đáp ứng nhu cầu thực tiễn ngày càng cao.

1.1.5 Phương pháp thiết lập chất chuẩn

1.1.5.1 Thi ế t l ậ p, b ả o qu ả n và phân ph ố i ch ấ t chu ẩn sơ cấ p

Quy trình thiết lập chất chuẩn sơ cấp bao gồm các bước như sau [34]:

- Đánh giá nhu cầu thiết lập chất chuẩn đối chiếu (CCĐC)

- Lựa chọn nguồn nguyên liệu dùng để thiết lập CCĐC từ nhà cung cấp

- Đánh giá chất chuẩn đối chiếu:

+ CCĐC dùng cho phép thử định tính: Thông thường chỉ cần kết quả đánh giá từ một phòng thí nghiệm đủ tiêu chuẩn

CCĐC (chuẩn chất đối chiếu) được sử dụng để thử độ tinh khiết, yêu cầu mô tả đặc tính chi tiết hơn so với phép thử định tính, đặc biệt trong các phép thử giới hạn Khi áp dụng kỹ thuật SKLM, độ tinh khiết tối thiểu được khuyến nghị là ≥ 90%, trong khi đối với HPLC hoặc GC, yêu cầu độ tinh khiết cao hơn là ≥ 95% Thông thường, chỉ cần một phòng thí nghiệm tham gia đánh giá CCĐC cho phép thử độ tinh khiết Nếu CCĐC được phân lập hoặc điều chế lần đầu tiên, cần thực hiện một số phép thử hóa lý như phổ NMR, phổ MS và phân tích nguyên tố để mô tả đặc tính đầy đủ.

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus Seem (commonly known as Sam Vu Diep) serves as a crucial ingredient in the formulation of high-quality herbal medicine This compound is recognized for its potential health benefits, making it an essential component in the development of effective herbal remedies Leveraging the properties of stipuleanoside R2 can enhance the efficacy and therapeutic value of traditional medicine products.

TỔNG QUAN VỀ SÂM VŨ DIỆP

Sâm vũ diệp có tên khoa học là Panax bipinnatifidus Seem [2,12], thuộc chi Nhân sâm (Panax L), họ Ngũ gia bì (Araliaceae), bộ Hoa tán (Apiales) [1]

SVD là một loại cây thân thảo sống lâu năm, thích bóng râm và môi trường ẩm ướt Cây có thân rễ dài với nhiều đốt và vết sẹo do thân cây rụng hàng năm Thân khí sinh của SVD cao từ 20 đến 30 cm, thường mọc đơn độc, thẳng đứng và rỗng ở giữa, có các vạch dọc Vào mùa đông, cây thường lụi, nhưng từ giữa tháng 2 đến đầu tháng 3, nó sẽ mọc chồi mới.

Lá kép chân vịt thường có 2 - 3 chiếc mọc thành vòng, với lá chét gồm 5 - 7 lá thuôn dài từ 2,5 - 14 cm và rộng từ 1,5 - 4 cm Lá có gốc tròn, đầu nhọn, xẻ thùy không đều, mép có răng cưa và có lông.

Cụm hoa tán đơn mọc ở ngọn với cuống dài 5 – 10 cm, chứa từ 20 – 90 hoa Hoa màu trắng đục, có 5 cánh và bầu 2 - 3 ô, cuống hoa mảnh dài từ 1 – 1,5 cm Quả hình cầu hoặc cầu dẹt, đường kính từ 0,6 – 1,2 cm, khi chín có màu đỏ với chấm đen ở đầu, chứa 1 – 2 hạt Hạt có hình cầu hoặc gần cầu, màu xám trắng, vỏ cứng và có rốn hạt.

Hình 1.1 Hình ảnh sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.)

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a vital ingredient in the formulation of high-quality herbal medicine This natural compound is recognized for its therapeutic properties and plays a crucial role in the development of effective herbal remedies By utilizing Panax bipinnatifidus as a primary source, manufacturers can ensure the production of standardized and potent herbal products that meet industry quality standards.

SVD là một loài sâm tự nhiên, được phát hiện sớm tại Việt Nam Trên thế giới, SVD phân bố ở Trung Quốc, Ấn Độ và Nepal, đặc biệt là vùng cận Himalaya.

Sa Pa, Bát Xát - Lào Cai và huyện Than Uyên - Lai Châu Tây Bắc [2,11-12] ở độ cao 1900-2400 m, trong rừng ẩm

Saponin là thành phần chính trong lá và rễ cây SVD, chủ yếu bao gồm saponin khung oleanan với hàm lượng cao và một số saponin khung dammaran với hàm lượng thấp hơn Các hợp chất hoạt tính chính trong nhóm dược liệu này bao gồm ginsenoside, notoginsenoside và chikusetsusaponin.

Năm 1989, các nhà khoa học Trung Quốc đã phân lập thành công 13 saponin khung dammaran từ lá của một loại dược liệu, trong đó có nhiều ginsenosid đặc trưng như F1, F2, F3, Rg2, Rb, Rd, Re và Rb3.

Năm 2002, nghiên cứu của Trần Công Luận chỉ ra rằng thân rễ và rễ củ SVD chứa hai nhóm chất chính là polyacetylen và saponin, bên cạnh các thành phần như acid béo và acid amin.

Vào năm 2003, nghiên cứu đã xác định rằng thành phần saponin trong thân rễ SVD chủ yếu là saponin triterpen thuộc nhóm oleanan, bao gồm các chất như chikusetsusaponin IV, zingibrosid R1 và ginsenosid Ro Bên cạnh đó, còn có các saponin triterpen thuộc nhóm dammaran như Rb1, Rd, Re, Rg1 và Rg2.

Năm 2018, nhóm nghiên cứu của Đại học Quốc gia Hà Nội đã phân lập được hai saponin từ rễ của SVD: stipuleanosid R2 và aralosid A methyl este [30]

Như vậy, tổng cộng có 28 hợp chất saponin đã được xác định từ các phần của cây SVD

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a fundamental ingredient in the formulation of high-quality medicinal products This compound is recognized for its potential therapeutic benefits, making it a valuable resource in the pharmaceutical industry The use of Panax bipinnatifidus in drug development emphasizes the importance of sourcing effective natural ingredients to enhance the efficacy and safety of herbal medicines.

Hình 1.2 Các h ợp chất tách được từ rễ cây sâm vũ diệp [2 4]

Năm 2016, một nhóm nghiên cứu Trung Quốc đã công bố kết quả sàng lọc hoạt tính diệt tế bào ung thư từ 57 cây thuốc trong cơ sở dữ liệu y học cổ truyền Trung Quốc, trong đó Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) là một trong những loài cho thấy khả năng ức chế sự phát triển của tế bào ung thư.

Năm 2017, một nghiên cứu cho thấy SVD có khả năng ức chế ngưng tập tiểu cầu in vitro với các phân đoạn và mức liều khác nhau Cụ thể, phân đoạn tổng, n-butanol và ethylacetat thể hiện tác dụng ở các mức liều 0,5-1-2-5 mg/mL, trong khi phân đoạn ether có hiệu quả ở các mức liều 1-2-5 mg/mL.

Me Methyl Ara(f) α- L-arabinofuranosyl Ara(p) α-L-arabinopyranosyl Glc β-D-glucopyranosyl Xyl β-O-xylopyranosyl

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus Seem, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a fundamental ingredient in the development of high-quality pharmaceutical products This natural compound is recognized for its potential health benefits and is increasingly utilized in traditional medicine and modern therapies By focusing on the extraction process and its applications, we can enhance the quality and efficacy of herbal medicines derived from this valuable plant.

Các nhà nghiên cứu đã phát hiện rằng các thành phần ginsenoside Rh 1, Rh 2, Rg 1, Rg 2 và chikusetsusaponin L 5 có khả năng ức chế hoạt động của enzyme tyrosinase hơn 50% Enzyme này đóng vai trò quan trọng trong quá trình tổng hợp melanin, một sắc tố quyết định màu sắc của da Sự dư thừa enzyme tyrosinase có thể dẫn đến tình trạng da đen, sạm màu và nám.

Rễ cây SVD ngâm rượu và chiết xuất dưới dạng tinh sâm mang lại nhiều lợi ích cho sức khỏe, đặc biệt là cải thiện chức năng sinh dục Ngoài ra, người dân ở vùng trồng SVD còn sử dụng thân và lá để nấu cao, sau đó pha với nước hoặc rượu để uống, giúp đạt hiệu quả tương tự như rễ Tại Trung Quốc, SVD được ứng dụng trong y học để điều trị các bệnh như lao, chảy máu cam, thổ huyết và các chấn thương do ngã.

TỔNG QUAN VỀ STIPULEANOSID R2

Stipuleanosid R2 là một hợp chất saponin quan trọng, chiếm tỷ lệ lớn nhất trong SVD và đang thu hút sự quan tâm nghiên cứu của các nhà khoa học Hợp chất này được phân lập từ một số dược liệu như sâm vũ diệp, tam thất hoang, Aralia taibaiensis và Aralia elata.

1.2.1 Công thức hóa học và đặc điểm

Hình 1.3 C ấu trúc hóa học của stipuleanosid R2 [ 37]

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus Seem, also known as Sam Vu Diep, serves as a key ingredient in the development of high-quality medicinal materials This natural compound is essential for creating effective pharmaceutical formulations, highlighting its significance in the herbal medicine industry.

Tên khoa học theo hệ thống IUPAC:

(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[[(3S,4aR,6aR,6bS,8aS,12aS,14aR,14bR)-4,4,6a,6b,11,11,14b- heptamethyl-8a-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2- yl]oxycarbonyl-1,2,3,4a,5,6,7,8,9,10,12,12a,14,14a-tetradecahydropicen-3-yl]oxy]- 3-[(2S,3R,4R,5S)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-5-hydroxy-4- [(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxane-2- carboxylic acid [33]

Tính chất lý hóa: Chất bột màu trắng, độ tan: 0,57 g/l [38], điểm nóng chảy 210 -

Nghiên cứu in vitro đã chỉ ra rằng stipuleanosid R2 có khả năng gây độc tế bào ung thư, đặc biệt là ức chế sự phát triển của các tế bào ung thư bạch cầu như K562 và U937 Ngoài ra, hợp chất này còn có tác dụng chống oxy hóa, hạ đường huyết,

1.2.3 Các nghiên cứu về stipuleanosid R2

Hiện nay, nghiên cứu về hợp chất stipuleanosid R2 trong dược liệu còn hạn chế, cả ở trong nước và quốc tế Các nghiên cứu chủ yếu tập trung vào việc phân lập hợp chất này và phát triển phương pháp định lượng trong thân rễ SVD Để nâng cao chất lượng nghiên cứu, cần thiết phải thiết lập các tiêu chuẩn cho chất chuẩn stipuleanosid R2.

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus Seem, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a fundamental ingredient in the formulation of high-quality medicinal products This natural compound is essential for ensuring the efficacy and safety of herbal remedies, highlighting its significance in traditional and modern pharmacology By utilizing this potent extract, manufacturers can enhance the therapeutic properties of their products, catering to the growing demand for natural health solutions.

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

NGUYÊN VẬT LIỆU

Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) được trồng và thu hái ở Sa Pa, Lào Cai là dược liệu được nghiên cứu trong đề tài này

Thân rễ SVD là một đối tượng nghiên cứu đặc biệt, có nhiều đốt và vết sẹo, với hình dáng cong ngoằn ngoèo, dài từ 7-12 cm và đường kính từ 1,2-1,8 cm Chất liệu của nó cứng chắc và giòn, dễ bẻ, với mặt bẻ lởm chởm và màu vàng nâu nhạt Ngoài ra, thân rễ này còn có mùi thơm nhẹ và vị đắng, hơi ngọt.

Để xử lý mẫu thân rễ SVD, trước tiên cần rửa sạch và để khô Sau đó, thái lát mỏng và sấy khô ở nhiệt độ 50°C cho đến khi độ ẩm đạt dưới 10% Cuối cùng, bảo quản mẫu trong túi nilong kín, đặt ở nơi khô ráo và thoáng mát để sử dụng trong nghiên cứu.

Hình 2.1 M ẫu sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) thu hái tại Sa Pa, Lào

- Dung môi công nghiệp được cất lại trước khi dùng (chiết xuất dược liệu, sắc ký lớp mỏng, sắc ký cột) gồm:

+ Ethanol (EtOH) + Methanol (MeOH) + n-Hexan

+ Dicloromethan (CH 2 Cl 2 ) + Cloroform (CHCl 3 )

- Chất chuẩn liên kết stipuleanosid R2 (Wako Chemicals, Nhật Bản, độ tinh

The extraction of stipuleanoside R2 from the root of Panax bipinnatifidus, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a crucial ingredient for the formulation of high-quality herbal medicines This compound is recognized for its potential health benefits and is increasingly utilized in the development of effective pharmaceutical products The emphasis on sourcing quality raw materials like stipuleanoside R2 highlights the importance of maintaining standards in herbal medicine production.

- Dung môi chạy sắc ký HPLC (Methanol, acetonitril) của Merck, Đức

- Hạt nhồi dùng cho sắc ký cột loại:

+ Pha thường silica gel 60 (230-400 mesh, Nacalai Tesque, Nhật Bản) + Pha đảo YMC ODS-A (50 μm, YMC Co Ltd., Nhật Bản)

Bản mỏng tráng sẵn trên đế nhôm loại Kieselgel 60 F254 và TLC Silica gel 60 RP-18 F254S của Merck (Đức) được sử dụng để phát hiện chất Việc phát hiện có thể thực hiện bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm và 365 nm, hoặc bằng cách sử dụng dung dịch thuốc thử.

H 2 SO 4 10% hơ nóng để phát hiện vết chất

Trong quá trình nghiên cứu đề tài, chúng tôi đã sử dụng các thiết bị và dụng cụ đạt tiêu chuẩn ISO/IEC 17025 và GLP tại Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội.

- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) Agilent 1260 Infinity (Agilent Technologies, Mỹ) với detector DAD và bộ phận bơm mẫu tự động

- Tủ sấy Memmert (Memmert – Đức), tủ hút

- Cân kĩ thuật Precisa BJ 610C, cân phân tích Precisa 262SMA-FR (sai số 0,0001g, Precisa - Thụy Sĩ)

- Cân xác định hàm ẩm Prescisa HA 60

- Máy siêu âm Power sonic 405 (Powersonic - Hàn Quốc)

- Máy cất quay Rotavapor R-220, Rotavapor R-200 (Buchi, Thụy Sĩ)

- Máy đo điểm nóng chảy BUCHI 535

- Bếp điện, bếp đun cách thủy

- Cột sắc ký các loại kích cỡ

- Dụng cụ thủy tinh: bình gạn, bình nón, phễu lọc, cốc có mỏ, bình định mức, bình cầu dung tích 50 - 2000 mL, ống nghiệm, pipet chính xác

NỘI DUNG NGHIÊN CỨU

- Nghiên cứu chiết xuất, phân lập và tinh chế stipuleanosid R2 từ dược liệu sâm vũ diệp

- Bước đầu xây dựng bộ dữ liệu nhận dạng stipuleanosid R2: nhiệt độ nóng chảy, dữ liệu phổ

- Phân tích định tính, định lượng stipuleanosid R2 tinh chế được

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a key ingredient in the formulation of high-quality herbal medicines This natural compound is recognized for its beneficial properties, making it an essential component in the development of effective pharmaceutical products The focus on using standardized extracts ensures that the therapeutic benefits are maximized, aligning with industry standards for herbal medicine quality.

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.3.1 Nghiên cứu chiết xuất, phân lập và tinh chế, xác định cấu trúc hóa học của stipuleanosid R2

2.3.1.1 Phương pháp chiết xuất các hợp chất saponin từ dược liệu

Nghiên cứu về thành phần hoạt chất trong sâm vũ diệp cho thấy saponin là thành phần chính Để xác định phương pháp chiết xuất phù hợp nhất cho mẫu thân rễ SVD, cần tham khảo tài liệu liên quan đến chiết xuất saponin và sapogenin trong dược liệu.

- Phương pháp chiết mẫu: chiết siêu âm với dung môi ethanol 70%

- Phương pháp chiết phân đoạn: chiết lỏng-lỏng

1 Thân rễ SVD sau khi rửa sạch, phơi khô, thái nhỏ được chiết siêu âm bằng dung môi EtOH 70% ở nhiệt độ 40 0 C, chiết 3 lần

2 Thu dịch chiết, sau đó lọc dịch chiết qua giấy lọc, gom lại, cất quay loại dung môi dưới áp suất giảm, đun cách thủy thu được cao tổng ethanol

3 Cao ethanol thu được cho phân tán trong nước rồi lắc lần lượt với các dung môi có độ phân cực tăng dần ether, ethyl acetat và n-butanol lặp lại 3 lần theo tỷ lệ 1:1

4 Các phân đoạn thu được cho cất quay chân không dưới áp suất giảm để thu hồi dung môi, đun cách thủy thu được 3 cắn tương ứng với từng phân đoạn

2.3.1.2 Phương pháp phân lập v à tinh ch ế stipuleanosid R 2 trong cao r ễ SVD

Lựa chọn n-butanol làm phân đoạn để tiến hành phân lập, áp dụng phương pháp sắc ký cột pha thường và sắc ký cột pha đảo Quá trình phân lập được theo dõi thông qua sắc ký lớp mỏng.

Sắc ký cột (SKC) sử dụng chất hấp phụ là silica gel pha thường (silica gel 60, kích thước 0,04 - 0,063 nm, Nacalai Tesque, Inc., Nhật) và pha đảo YMC ODS-A (50àm, YMC Co Ltd, Nhật) Quá trình phân lập được theo dõi bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng (SKLM).

- Sắc ký lớp mỏng (SKLM): được thực hiện trên bản mỏng Silicagel 60 F 254

Silicagel RP-18 F 254 S (Merk) được hoạt hóa ở 105 độ C trong 1 giờ Để phát hiện chất, sử dụng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm và 366 nm, hoặc phun dung dịch H2SO4 10% lên bản mỏng, sau đó sấy khô và hơ nóng trên bếp điện từ cho đến khi xuất hiện màu.

Tinh chế chất phân lập bằng phương pháp kết tinh lại hoặc rửa nhiều lần bằng dung môi thích hợp

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus Seem, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a fundamental ingredient in the formulation of high-quality herbal medicines This natural compound is recognized for its potential health benefits, making it an essential component in the development of effective pharmaceutical products The use of stipuleanoside R2 enhances the therapeutic properties of herbal formulations, contributing to their efficacy and quality in the health and wellness industry.

2.3.1.3 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập được

Sử dụng các phương pháp phổ như phổ khối lượng (ESI-MS) và phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT) kết hợp với việc so sánh dữ liệu thu được với các tài liệu tham khảo đã công bố, giúp xác định cấu trúc của chất phân lập một cách chính xác.

2.3.2 Xây dựng bộ dữ liệu nhận dạng chất

Dữ liệu chuẩn dùng để nhận dạng chất nhằm cung cấp thông tin cho thiết lập hồ sơ nhận dạng chuẩn Việc nhận dạng chất dựa vào:

- So sánh phổ của chất phân tích với phổ chất chuẩn trong cùng điều kiện

So sánh thông tin phổ, dữ liệu hóa lý và hằng số vật lý của chất phân tích với tài liệu khoa học hoặc thông tin đã công bố là bước quan trọng trong nghiên cứu Việc tập hợp các dữ liệu chuẩn này giúp xác nhận rằng hợp chất đang được nghiên cứu đúng là đối tượng cần phân tích.

Các phương pháp xây dựng bộ dữ liệu bao gồm: đo điểm chảy, đo phổ tử ngoại khả kiến trong dung môi MeOH, đo phổ hồng ngoại trong KBr, đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều (H1 NMR, C13 NMR, DEPT) và hai chiều (COSY, HMBC, HSQC), cùng với đo phổ khối lượng (MS).

2.3.3 Phương pháp định tính, định lượng stipuleanosid R2 trong SVD bằng HPLC

This article discusses the analysis of high-performance liquid chromatography (HPLC) using the Agilent 1260 Series Infinity system from Agilent Technologies, USA It highlights the use of a DAD detector and an automatic sample injection system, emphasizing the advantages of this advanced technology in enhancing analytical precision and efficiency.

 Khảo sát và lựa chọn điều kiện sắc ký

 Nhận dạng các pic trên sắc ký đồ của chất stipuleanosid R2 phân lập được từ thân rễ SVD

Tiến hành sắc ký HPLC để phân lập mẫu và cao BuOH theo điều kiện đã chọn Nhận diện pic trên sắc ký đồ (SKĐ) của chất phân lập dựa vào thời gian lưu tương ứng của mẫu thử, đồng thời xác định hàm lượng hợp chất stipuleanosid R2 trong dược liệu thông qua tương quan diện tích pic trên SKĐ.

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a vital ingredient in the formulation of high-quality herbal medicines This natural compound is renowned for its potential health benefits, making it an essential component in the development of effective pharmaceutical products By utilizing stipuleanoside R2, manufacturers can enhance the therapeutic properties of their formulations, ensuring they meet rigorous quality standards in the herbal medicine industry.

KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

Chiết xuất, phân lập và tinh chế Stipuleanosid R2 trong Sâm vũ diệp

Cân 500g thân rễ SVD (độ ẩm 7,81%) được chiết xuất bằng phương pháp siêu âm ở 70 độ C với ethanol 70% trong 3 giờ Sau khi lọc và loại bỏ dung môi, thu được 95,9g cao chiết tổng ethanol Cao chiết này được hòa tan trong 500mL nước cất và tiến hành chiết phân bố lỏng-lỏng với các dung môi có độ phân cực tăng dần, bao gồm ether, ethyl acetat và n-butanol.

Quá trình chiết xuất được thực hiện với mỗi dung môi 3 lần, mỗi lần 500 mL Các dịch chiết phân đoạn sau khi cất thu hồi dung môi và sấy dưới áp suất giảm, thu được 3 cắn tương ứng với từng phân đoạn: ether (5,82 g), ethyl acetat (2,70 g) và n-butanol (21,70 g) Hình 3.1 minh họa quy trình chiết xuất này.

Hàm lượng cắn 3 phân đoạn trong nguyên liệu khô được trình bày ở bảng 3.1

B ả ng 3.1 Hàm lượ ng c ắn các phân đoạ n chi ế t xu ấ t t ừ Sâm v ũ diệ p

STT Phân đoạn Khối lượng dược liệu (g)

% so với nguyên liệu khô

Nhận xét cho thấy rằng phân đoạn n-butanol đạt khối lượng cắn cao nhất trong ba phân đoạn, chiếm 4,71% so với nguyên liệu khô Trong khi đó, khối lượng cắn thu được từ phân đoạn ether và ethyl acetat lần lượt chỉ đạt 1,26% và 0,59%.

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus Seem, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a crucial raw material in the production of high-quality medicinal ingredients This natural compound is increasingly recognized for its potential health benefits and applications in traditional medicine Utilizing Panax bipinnatifidus not only enhances the efficacy of herbal formulations but also ensures compliance with industry standards for pharmaceutical quality.

Hình 3.1 Quy trình chi ế t xu ấ t stipuleanosid R2

Tiến hành phân lập sắc ký sử dụng cột nhồi silica gel (Φ85 mm × 80 mm) với hệ dung môi CH2Cl2 - MeOH theo gradient nồng độ từ tỷ lệ 5:1 đến 0:1, v/v, mỗi phân đoạn 600 mL Các dịch rửa giải được kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng, và các ống có cùng thành phần được gom lại Cuối cùng, dưới áp suất giảm, thu được 4 phân đoạn ký hiệu B1, B2, B3, B4.

Thân rễ SVD sau sơ chế

1 Chiết siêu âm DM EtOH 70%

3 Cất quay áp suất giảm

Cắn Ether Dịch còn lại

Cất quay áp suất giảm, sấy

Cắn EtOAc Dịch còn lại

Ethyl acetat, lắc, gạn Cất quay áp suất giảm, sấy

Cắn n-butanol Dịch còn lại n-butanol, lắc, gạn

Cất quay áp suất giảm, sấy

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus Seem (Sam Vu Diep) serves as a crucial raw material for the production of high-quality herbal medicines This natural compound is recognized for its potential therapeutic benefits, making it an essential ingredient in the formulation of effective medicinal products Utilizing Panax bipinnatifidus Seem not only enhances the quality of herbal formulations but also aligns with the growing demand for natural and sustainable health solutions.

Từ phân đoạn B4 (5,1 g), hợp chất stipuleanisid R2 (180 mg) được tách chiết bằng sắc ký cột pha đảo RP18 (Φ50 mm x 350 mm) với hệ pha động MeOH - H2O (1:1, v/v, 1600 mL).

3.1.3 Kiểm tra độ tinh khiết của stipuleanosid R2 phân lập được bằng SKLM

Hợp chất stipuleanosid R2 được phân lập và kiểm tra độ tinh khiết bằng phương pháp SKLM Silicagel RP-18 F 254 S trên cùng một bản mỏng Quá trình triển khai sử dụng hệ dung môi Methanol : H2O với tỷ lệ 2:1, kết quả thu được thể hiện qua sắc ký đồ như hình 3.3.

Hình 3.3 S ắc ký đồ của h ợp chất stipuleanosid R2 phân l ập được sau khi phun

Hình 3.2 S ơ đồ phân l ậ p h ợ p stipuleanosid R2 t ừ phân đoạ n n-butanol

SKC pha đảo C18 (Φ50 mm × 350 mm) MeOH - H 2 O

3,7 g Sắc ký cột Silica gel (Φ85 mm × 80 mm)

The extraction of stipuleanoside R2 from Sam Vu Diep (Panax bipinnatifidus Seem.) serves as a foundational ingredient for the development of high-quality medicinal materials This plant is recognized for its beneficial properties, making it a valuable resource in the pharmaceutical industry Utilizing stipuleanoside R2 enhances the efficacy and standardization of herbal formulations, contributing to the advancement of herbal medicine.

Sau khi tiến hành phun thuốc thử, hợp chất stipuleanosid R2 cho thấy vết màu hồng đậm, sau đó chuyển sang màu tím, đặc trưng cho các dẫn xuất triterpen với hệ số Rf là 0,4 Điều này cho phép chúng tôi kết luận sơ bộ rằng chất phân lập được là chất tinh khiết Để xác định độ tinh khiết của stipuleanosid R2, chúng tôi còn áp dụng phương pháp chuẩn hóa diện tích bằng HPLC, được trình bày chi tiết ở mục 3.3.2.

3.2 Xây dựng bộ dữ liệu nhận dạng stipuleanosid R2 3.2.1 Đặc điểm cảm quan Đặc điểm cảm quan của đối tượng nghiên cứu được quan sát bằng mắt thường dưới ánh sáng ban ngày: bột màu trắng

Tiến hành đo điểm chảy theo DĐVN V (PL-168, phương pháp 1 – phương pháp đo trong mao quản) Thu được kết quả là:

B ả ng 3.2 K ế t qu ả đo điể m ch ả y c ủ a stipuleanosid R2

Lần đo Kết quả ( o C) Điểm chảy lý thuyết ( o C)

Góc quay cực của hợp chất stipuleanosid R2 là [α] = +7,5 (c 0,2, MeOH) Phổ ESI-MS cho thấy m/z 1087 [M-H], tương ứng với khối lượng phân tử M = 1088 Phổ 1H-NMR (CD3OD; 500 MHz) và 13C-NMR (CD3OD; 125 MHz) cùng với DEPT được trình bày trong bảng 3.3, cung cấp thông tin chi tiết về cấu trúc của hợp chất.

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus Seem, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a high-quality raw material for pharmaceutical applications This compound is essential in the development of effective herbal medicines, showcasing its significance in the health and wellness industry By utilizing this natural ingredient, manufacturers can ensure the production of standardized herbal products that meet stringent quality requirements.

Extracting the stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus Seem serves as a key ingredient for developing quality herbal medicines This extraction process emphasizes the importance of utilizing high-standard raw materials to ensure the efficacy and safety of the final pharmaceutical products.

*  c của stipuleanosid R2 đo trong CD 3 OD [25]; a Đo trong CD 3 OD, b 125 MHz, c 500 MHz

Hợp chất stipuleanosid R2 được phân lập dưới dạng bột màu trắng, năng suất quay cực riêng [α] = +7,5 (c 0,2, MeOH) Hợp chất này phản ứng với H 2 SO 4 10

Phân tích định tính, định lượng stipuleanosid R2 tinh chế được bằng HPLC 22 1 Khảo sát và lựa chọn điều kiện sắc ký

3.3.1 Khảo sát và lựa chọn điều kiện sắc ký

Trong luận văn Thạc sĩ của Nguyễn Thị Thu Thủy, đề tài "Nghiên cứu thành phần saponin của thân rễ sâm vũ diệp" được trình bày với phương pháp nghiên cứu chi tiết Nghiên cứu này nhằm mục đích phân tích và xác định các thành phần saponin có trong thân rễ sâm vũ diệp, từ đó đánh giá giá trị dược liệu của loài cây này Phương pháp được áp dụng bao gồm việc thu thập mẫu, phân tích hóa học và so sánh với các tiêu chuẩn đã được công nhận Kết quả nghiên cứu sẽ cung cấp thông tin quý giá cho việc ứng dụng sâm vũ diệp trong y học và phát triển sản phẩm từ thiên nhiên.

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a high-quality raw material for pharmaceutical applications This compound is essential in developing standardized medicinal products, ensuring efficacy and safety in herbal remedies Utilizing Panax bipinnatifidus in the formulation of herbal medicines highlights its significant role in traditional and modern healthcare.

23 các phương pháp định lượng hợp chất saponin bằng HPLC [26], chúng tôi tiến hành khảo sát và lựa chọn điều kiện sắc ký để phân tích như sau:

- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao Agilent 1260 Infinity

- Cột sắc ký: Agilent Eclipse Plus C18 (ϕ 4,6 × 100 mm; cỡ hạt 3,5μm)

- Detector DAD phát hiện ở bước sóng 203nm

- Tốc độ dòng: 0,8mL/phút

- Thể thớch bơm mẫu: 20àl

- Dung môi pha mẫu: Methanol

- Pha động: Acetonitril (kênh A) : 0,5% acid acetic/H 2 O (kênh B) với chương trình gradient như bảng 3.4

B ảng 3.4 Chương tr ình dung môi

3.3.2 Nhận dạng pic trên sắc ký đồ của stipuleanosid R2 phân lập được

Để phân lập mẫu stipuleanosid R2, cân khoảng 1,0 mg chất bằng cân phân tích chính xác Sau đó, pha loãng mẫu này trong methanol để đạt nồng độ 1000 µg/mL Tiếp theo, siêu âm dung dịch trong 10 phút và lọc qua màng lọc 0,45 µm.

Để pha mẫu thử, cân chính xác khoảng 100,0 mg cao n-butanol từ thân rễ SVD, sau đó hòa tan trong methanol với nồng độ 100,0 mg/mL Tiến hành siêu âm trong 10 phút, sau đó ly tâm để tách dịch chiết và lọc qua màng lọc 0,45 µm.

Để pha mẫu chất chuẩn liên kết stipuleanosid R2, cần cân chính xác khoảng 1,0 mg stipuleanosid R2 và hòa tan trong methanol với nồng độ 400,0 µg/mL Sau đó, siêu âm trong 10 phút và lọc qua màng lọc 0,45 µm.

Tiến hành sắc ký HPLC hợp chất phân lập được và cao butanol so sánh với SKĐ thu được của mẫu chất chuẩn

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus Seem, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a high-quality raw material for pharmaceutical applications This compound is increasingly recognized for its potential benefits in various medicinal formulations, making it an essential ingredient in the development of effective herbal remedies.

Kết quả phân tích HPLC cho thấy stipuleanosid R2 là hợp chất thiên nhiên có trong SVD, với thời gian lưu trong dung dịch cao butanol được chuẩn bị là 15,565 phút và 15,564 phút Giá trị này tương đương với thời gian lưu của chất chuẩn là 15,565 phút.

3.3.3 Định lượng stipuleanosid R2 phân lập được

Yêu cầu: Hàm lượng không được thấp hơn 95,0% tính theo nguyên trạng

Mẫu hợp chất stipuleanosid R2 được phân lập bằng cách cân chính xác 6 mẫu, mỗi mẫu khoảng 10 mg, vào bình định mức 20 mL Sau đó, hòa tan và pha loãng bằng MeOH, siêu âm trong 10 phút, và cuối cùng lọc qua màng lọc 0,45 µm.

Pha mẫu dung dịch đối chiếu stipuleanosid R2: dùng cân phân tích cân chính xác khoảng 10 mg chuẩn stipuleanosid R2 vào bình định mức 20 mL, hòa tan và pha

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a vital raw material in the production of high-quality herbal medicine This component is essential for ensuring the efficacy and safety of pharmaceutical formulations derived from this plant By focusing on the standardized extraction process, manufacturers can enhance the therapeutic properties of the final herbal products, meeting both regulatory standards and consumer expectations.

25 loãng vừa đủ bằng MeOH, siêu âm 10 phút, ly tâm lấy dịch chiết rồi lọc qua màng lọc 0,45 àm

Tiến hành chạy HPLC với điều kiện sắc ký như đã nêu ở mục 3.3.1 Thu được kết quả sắc ký trình bày ở bảng 3.6

B ả ng 3.6 K ế t qu ả định lượ ng nguyên li ệ u thi ế t l ậ p ch ấ t chu ẩ n

Mẫu thử Khối lượng (mg) Diện tích pic (mAU*s)

Hàm lượng (%) Pic chính Tổng pic

Các mẫu thử đều đạt hàm lượng trên 95,0% (tính theo nguyên trạng), cho thấy tiềm năng phù hợp để thiết lập chất chuẩn đối chiếu Tuy nhiên, để đưa ra kết luận chắc chắn, cần thực hiện thêm các phương pháp đặc hiệu và chính xác hơn.

The extraction of stipuleanosid R2 from Panax bipinnatifidus Seem serves as a fundamental ingredient in the formulation of quality medicinal products This natural compound is essential for creating effective herbal remedies, highlighting the importance of sourcing high-quality raw materials in the pharmaceutical industry.

BÀN LUẬN

Về chiết xuất, phân lập và tinh chế

Quy trình chiết xuất dược liệu SVD bằng phương pháp chiết siêu âm sử dụng dung môi ethanol 70 độ mang lại nhiều ưu điểm như tăng tốc độ chiết, giảm nhiệt độ và áp suất khi chiết Sau khi thu được cao chiết toàn phần, quá trình phân đoạn được thực hiện bằng phương pháp chiết lỏng - lỏng với các dung môi có độ phân cực tăng dần, bao gồm ether, ethyl acetat và n-butanol, giúp loại bỏ các thành phần không phân cực và kém phân cực Kết quả thu được các cắn phân đoạn với khối lượng lần lượt là 1,26% với ether, 0,59% với EtOAc và 4,71% với BuOH so với nguyên liệu khô ban đầu, tạo điều kiện thuận lợi cho bước phân lập hợp chất stipuleanosid R2 - một saponin phân cực.

4.1.2 Phân lập và tinh chế

Phân đoạn n-butanol với hàm lượng cao nhất đã được sử dụng để phân lập stipuleanosid R2 bằng sắc ký cột pha thuận với hệ dung môi CH2Cl2 – MeOH theo gradient nồng độ Qua việc kết hợp với SKLM, phân đoạn B4 cho thấy sắc ký đồ có vết màu hồng tím rõ nét, phù hợp với đặc tính của hợp chất cần phân lập Tiếp theo, sắc ký cột pha đảo đã được thực hiện để tinh chế stipuleanosid R2 từ dược liệu SVD, thu được 180 mg bột màu trắng Kiểm tra độ tinh khiết bằng SKLM cho thấy chất tinh chế hiện một vết màu hồng chuyển sang màu tím, đặc trưng của dẫn xuất triterpen Kết quả này cho thấy stipuleanosid R2 tinh chế có độ tinh khiết cao, mở ra khả năng ứng dụng phương pháp này trong phân lập hợp chất stipuleanosid R2 từ SVD và các dược liệu khác.

Stipuleanosid R2 có nhiều tác dụng dược lý quan trọng trên lâm sàng, bao gồm khả năng gây độc đối với một số dòng tế bào ung thư Mặc dù hiện tại các tác dụng này chưa được áp dụng rộng rãi trong điều trị, nhưng nếu được nghiên cứu và sử dụng phổ biến trong tương lai, việc phân lập và tinh chế stipuleanosid R2 sẽ là cần thiết để phục vụ cho nghiên cứu tác dụng sinh học của nó.

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus Seem, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a fundamental ingredient in the formulation of high-quality medicinal materials This natural compound is recognized for its potential health benefits, making it a valuable resource in the pharmaceutical industry By utilizing this plant-derived extract, manufacturers can ensure the efficacy and safety of their herbal products, aligning with industry standards for medicinal formulations.

30 như vậy thì quy trình chiết xuất, phân lập và tinh chế mà chúng tôi đưa ra có thể ứng dụng được.

Bước đầu xây dựng bộ dữ liệu nhận dạng

Việc xác minh cấu trúc của stipuleanosid R2 tinh chế từ Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) được thực hiện bằng phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT) và phân tích khối phổ (ESI-MS) đã khẳng định công thức phân tử và cấu trúc của hợp chất này phù hợp với lý thuyết Kết quả đo nhiệt độ nóng chảy của chất phân lập cũng xác nhận rằng sản phẩm tinh chế thực sự là stipuleanosid R2.

Phân tích định tính, định lượng stipuleanosid R2 phân lập được bằng HPLC30 1 Xây dựng phương pháp

Chúng tôi đã xây dựng phương pháp HPLC với detector DAD để định tính và định lượng stipuleanosid R2 tinh chế Phương pháp phân tích định lượng saponin bằng HPLC được công nhận bởi Dược điển các nước, cho thấy tính tiên tiến so với phương pháp quang phổ và khối lượng hiện tại Phương pháp này có nhiều ưu điểm, từ việc pha mẫu, chuẩn bị dung môi đến tiến hành sắc ký đều rất đơn giản Trong khoảng nồng độ khảo sát, có mối tương quan tuyến tính chặt chẽ giữa diện tích pic và nồng độ chất phân tích, đồng thời đảm bảo độ đúng và độ đặc hiệu cao.

Sau khi tham khảo tài liệu và các điều kiện hiện có, chúng tôi đã chọn chương trình sắc ký như mô tả ở mục 3.3.1 Điều kiện sắc ký này cho phép tách chất nghiên cứu trong mẫu thử từ dịch chiết n-butanol của thân rễ SVD một cách hiệu quả, với pic cân đối và thời gian lưu hợp lý, phù hợp cho việc định lượng thành phần trong thân rễ SVD.

4.3.2 Phân tích định tính và định lượng stipuleanosid R2 tinh chế được 4.3.2.1 Định tính

Kết quả trên SKĐ chạy HPLC của 3 mẫu: stipuleanosid R2 phân lập được, cao BuOH và chất chuẩn đối chiếu đều cho pic ở thời gian lưu ở khoảng phút thứ

15 Theo các tài liệu nghiên cứu cho đến hiện nay, có thể khẳng định thời gian lưu đó là của hợp chất stipuleanosid R2

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a vital raw material for the development of high-quality medicinal products This natural compound is recognized for its potential health benefits and is increasingly utilized in the pharmaceutical industry Ensuring the purity and efficacy of this extract is crucial for creating effective herbal remedies and supplements.

Bằng phương pháp HPLC với detector UV, chúng tôi đã xác định chính xác hàm lượng stipuleanosid R2 tinh chế là 96,22  0,11 (%), vượt qua ngưỡng 95,0% (tính theo nguyên trạng) Kết quả này đáp ứng yêu cầu để thiết lập chất chuẩn đối chiếu và xác định giới hạn tạp chất liên quan của stipuleanosid R2.

Stipuleanosid R2 được tinh chế và xây dựng thành chất đối chiếu cho phân tích và tiêu chuẩn hóa, nhằm thiết lập chất chuẩn phục vụ kiểm nghiệm dược liệu SVD Sau khi xác định độ tinh khiết bằng SKLM và HPLC, chúng tôi đã thực hiện chiết xuất, phân lập và tinh chế Tuy nhiên, để hoàn thiện việc thiết lập chất chuẩn stipuleanosid R2, cần đánh giá thêm một số chỉ tiêu khác theo tiêu chí của DĐVN và Dược điển quốc tế.

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a key ingredient in the development of high-quality herbal medicine This process highlights the importance of using standardized raw materials to ensure the efficacy and safety of herbal products By focusing on the extraction of potent compounds, the pharmaceutical industry can enhance the therapeutic potential of traditional remedies.

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN

Với các kết quả thực nghiệm thu được đề tài đã đạt được các mục tiêu đề ra là:

1 Nghiên cứu chiết xuất, phân lập và tinh chế Stipuleanosid R2 từ dược liệu sâm vũ diệp

2 Bước đầu xác minh cấu trúc hóa học, xây dựng bộ dữ liệu nhận dạng của chất tinh chế được

3 Định tính, định lượng stipuleanosid R2 phân lập được

Việc xây dựng tiêu chuẩn cho hợp chất saponin stipuleanosid R2 từ thân rễ SVD đã đóng góp quan trọng vào cơ sở dữ liệu hóa thực vật và tiêu chuẩn hóa dược liệu SVD Điều này cũng tạo nền tảng cho các nghiên cứu về hoạt tính sinh học của các đối tượng tiềm năng trong chi Panax Hơn nữa, các kết quả này có ý nghĩa thực tiễn trong công tác kiểm nghiệm thuốc và kiểm nghiệm dược liệu.

Hướng nghiên cứu tiếp theo, tôi xin phép được kiến nghị:

1 Nghiên cứu thiết lập tiêu chuẩn chất chuẩn stipuleanosid R2 để có tài liệu bổ sung về chất chuẩn đối chiếu trên vào Dược điển Việt Nam xuất bản lần thứ

2 Tiến hành nghiên cứu thiết lập các chất chuẩn đối chiếu khác có nguồn gốc dược liệu phục vụ nhu cầu kiểm tra chất lượng dược liệu cũng như các sản phẩm từ dược liệu

The extraction of stipuleanoside R2 from Panax bipinnatifidus, commonly known as Sam Vu Diep, serves as a crucial raw material for the development of high-quality herbal medicines This natural compound is recognized for its potential therapeutic properties, making it an essential ingredient in the formulation of effective herbal remedies By focusing on the extraction process and the quality standards of this ingredient, we can enhance the efficacy and safety of herbal products.

[1] Lê Đình Bích, Trần Văn Ơn (2007) Thực vật học tập 1, NXB Y học, Hà Nội

Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương và Nguyễn Thượng Dong cùng các cộng sự đã biên soạn cuốn sách "Cây thuốc và Động vật làm thuốc ở Việt Nam" tập 2, xuất bản năm 2003 bởi Nhà xuất bản Khoa học Kỹ thuật, cung cấp thông tin chi tiết về các loại cây thuốc và động vật được sử dụng trong y học truyền thống tại Việt Nam, với nội dung từ trang 711 đến 714.

[3] Bộ y tế (2017), Dược điển Việt Nam V tập 2, Nhà xuất bản y học, tr PL-113,

Tiêu đề	Chiết Xuất, Phân Lập Stipuleanosid R2 Từ Sâm Vũ Diệp (Panax Bipinnatifidus Seem.) Làm Nguyên Liệu Xây Dựng Chất Chuẩn Cho Dược Liệu
Tác giả	Bùi Thị Thanh Vân
Người hướng dẫn	TS. Nguyễn Hữu Tùng
Trường học	Đại học Quốc gia Hà Nội
Chuyên ngành	Dược học
Thể loại	khóa luận tốt nghiệp
Năm xuất bản	2019
Thành phố	Hà Nội

Định dạng
Số trang	45
Dung lượng	1,52 MB