Chiết xuất, phân lập và xác định cấu trúc một số hợp chất trong cây cỏ nhọ nồi

Biện luận cấu trúc các hợp chất phân lập được từ Cỏ nhọ nồi .... Cỏ nhọ nồi là dược liệu được nghiên cứu rất nhiều cả trong nước và quốc tế như Trung Quốc, Nhật Bản, Ấn Độ, Thái Lan,…với

TỔNG QUAN

Vài nét về họ Cúc (Asteraceae)

Trong lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida), họ Cúc (Asteraceae hay Compositae) là họ thực vật lớn nhất, với hơn 1.600 chi và 23.000 loài Chúng chủ yếu phân bố ở đồng cỏ và thảm thực vật trên núi, ít gặp hơn trong rừng nhiệt đới ẩm ở độ cao thấp Họ Cúc nổi bật trong các loài thực vật được sử dụng bởi các dân tộc bản địa trên toàn thế giới, đặc biệt là trong y học.

Các loài thuộc họ Cúc đặc trưng bởi cụm hoa dạng đầu, bao phấn hữu tính, và quả có chùm lông Quả của chúng là loại quả bế, được hình thành từ một lá noãn và không nứt ra khi chín.

Họ Cúc chứa nhiều chất chuyển hóa thứ cấp phong phú, đóng vai trò quan trọng trong sự tiến hóa của chúng Thông tin về các hợp chất này rất quý giá trong việc phân loại, vì sự hiện diện hoặc vắng mặt của các hợp chất hóa học cụ thể thường chỉ ra mối quan hệ phân loại ở phân họ và cấp thấp hơn.

Tổng quan về cây Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba)

Cây Cỏ nhọ nồi hay còn gọi là cỏ mực, hạn liên thảo và có tên khoa học là Eclipta alba hoặc Eclipta prostrata (L.), thuộc họ Cúc Asteraceae (Compositae) [1], [2]

Theo “Từ điển cây thuốc Việt Nam” của tác giả Võ Văn Chi [1], Cỏ nhọ nồi có vị trí phân loại như sau:

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU

1.2.2 Đặc điểm thực vật của Cỏ nhọ nồi ( Eclipta alba ) [2]

Cây thảo mọc hằng năm có thân cao từ 10-60 cm, phân nhánh màu lục, đôi khi hơi đỏ tía và phủ lông cứng Lá mọc đối, có phiến hình ngọn giáo đến bầu dục, dài 3-10 cm và rộng 0,5-2,5 cm, với mép nguyên hoặc khía răng, có lông tơ dày ở cả hai mặt Cụm hoa hình bán cầu, đường kính 1-1,2 cm, nằm trên cuống dài 1,5 mm, ở nách lá hoặc ngọn cành, với tổng bao gồm 1 hàng lá bắc hình bầu dục có lông tơ ở mặt lưng Đế hoa lồi, rộng 1 cm, hoa ở mép là hoa cái có tràng dạng lưỡi nhỏ, màu trắng với đầu có hai thùy; hoa lưỡng tính ở giữa có hình ống với đầu có 4-5 thùy Quả bế dẹt, có 3 cạnh màu đen.

Hình 1.1 Cây cỏ nhọ nồi ( Eclipta alba ) [12]

Bộ phận dùng: Phần cây trên mặt đất Có thể thu hái quanh năm, dùng tươi hay phơi khô

Ra hoa và kết quả từ tháng 3 đến tháng 11, loài cây này thường mọc hoang ở những nơi ẩm mát ven làng và đồng ruộng, có thể phát triển từ vùng thấp đến độ cao 1800m Nó phân bố phổ biến khắp Việt Nam, từ Bắc vào Nam, và còn xuất hiện ở nhiều quốc gia nhiệt đới khác thuộc châu Á và châu Phi.

Tính vị, quy kinh: Vị ngọt, chua, tính hàn Quy kinh vào can và thận

Công dụng của thảo dược này bao gồm tư âm bổ thận, lương huyết, bổ huyết và thanh nhiệt giải độc Nó thường được sử dụng để điều trị các tình trạng như nôn ra máu, chảy máu cam, xuất huyết tử cung, viêm gan mạn tính, viêm ruột và lỵ Thảo dược này cũng có hiệu quả trong việc hỗ trợ trẻ em suy dinh dưỡng, điều trị ù tai, rụng tóc do sinh non và suy nhược thần kinh Ngoài ra, nó còn được dùng để chữa nấm da, vết loét, chảy máu, viêm da, viêm họng, ban chẩn, lở ngứa, đau mắt, sưng răng, đau dạ dày và các bệnh nấm ngoài da gây rụng tóc.

1.2.3 Thành phần hóa học của Cỏ nhọ nồi ( Eclipta alba )

Various studies on the chemical composition of the plant Eclipta prostrata (cỏ nhọ nồi) have revealed a rich array of compounds, including coumestans, alkaloids, glycosides, flavonoids, triterpenoids, saponins, lipids, polyacetylenes, steroids, and phytosterols The leaves contain wedelolactone, demethylwedelolactone, demethylwedelolactone-7-glucoside, stigmasterol, and β-terthienylmethanol, while the roots are noted for their hentriacontanol and heptacosanol content The above-ground parts of the plant are characterized by phytosterol, β-amyrin in n-hexane extracts, luteolin-7-glucoside, β-glucoside of phytosterol, triterpenic acid glucosides, and wedelolactone.

Nghiên cứu về Eclipta alba đã chỉ ra sự hiện diện của các alkaloid như ecliptine và nicotine, cùng với các alkaloid steroid có hoạt tính sinh học như verazine, dehydroverazine và ecliptalbine Vào năm 1998, M S Kader và các cộng sự từ Đại học Quốc gia Virginia, Hoa Kỳ, đã phân lập tám hợp chất alkaloid có khung steroid từ dịch chiết methanol của Eclipta alba Alkaloid chính được xác định trong nghiên cứu này là

(20S,25S)-22,26-iminocholesta-5,22 (N) -dien-3-β-ol (verazine) (1), (20R)-verazine

(2) và các alkaloid khác được xác định là 20-epi-3-dehydroxy-3-oxo-5,6-dihydro-4,5 dehydroverazine (3), ecliptalbine [(20R)-20-pyridyl-cholesta-5-ene-3β,23-diol] (4), (20R)-4β-hydroxyverazine (5), 4β-hydroxyverazine (6), (20R)-25β-hydroxyverazine

Hình 1.2 Cấu trúc của các hợp chất Alkaloid b Coumestan

Coumestan, a derivative of coumarin, is found in various plants Key coumestans isolated from Eclipta prostrata include wedelolactone, demethylwedelolactone, and demethyl-wedelolactone-7-glucoside.

Hình 1.3 Cấu trúc của các hợp chất Coumestan

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU c Flavonoid và Sterol

Flavonoids found in the plant known as cỏ nhỏ nồi include apigenin, luteolin, luteolin-7-glucoside, and quercetin Additionally, the sterols present in this plant consist of phytosterol, glucoside of phytosterol, daucosterol, β-sitosterol, stigmasterol, and stigmasterol-3-O-glycoside.

Hình 1.4 Cấu trúc của các hợp chất Flavonoid

Hình 1.5 Cấu trúc của các hợp chất Sterol

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU d Saponin triterpen

Saponin triterpene, specifically eclalbatin, along with α-amyrin, ursolic acid, and oleanolic acid, has been isolated from Eclipta alba In 1997, S Yahara and colleagues from Kumamoto University in Japan successfully isolated eclalbasaponin VII-X.

24) [55] Năm 2008, M K Lee và công sự tại Đại học quốc gia Seoul Hàn Quốc đã phân lập được acid echinocystic (25) và các dẫn xuất glycosid, eclalbasaponin I-III (26-28) và eclalbasaponin V (29) [40]

Hình 1.6 Cấu trúc của các hợp chất Saponin triterpen 1

Hình 1.7 Cấu trúc của các hợp chất Saponin triterpen 2 e Dẫn xuất thiophen và polyacetylen

Năm 1966, F Bolhman và cộng sự tại Đại học Kỹ thuật Berlin, Đức, đã phân lập hai dẫn xuất thiophen và polyacetylen từ lá khô của cỏ nhọ nồi Cùng năm, N R Krishnaswamy và nhóm nghiên cứu tại Đại học Delhi, Ấn Độ, đã xác định cấu trúc của α-terthienyl methanol từ Eclipta alba.

P Sing và cộng sự tại Đại học tổng hợp Kỹ thuật Berlin Đức đã phân lập từ rễ và phần trên mặt đất của Eclipta alba được một thành phần dithienyl acetylen (34)

34 Hình 1.8 Cấu trúc của các dẫn xuất thiophen và polyacetylen

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU f Tinh dầu

The main components of essential oils include heptadecane, 6,10,14-trimethyl-2-pentadecanone, n-hexadecanoic acid, pentadecane, eudesma-4(14),11-diene, phytol, diisooctyl ester of octadec-9-enoic acid, (Z,Z)-9,12-octadecadienoic acid, (Z)-7,11-dimethyl-3-methylene-1,6,10-dodecatriene, and (Z,Z,Z)-1,5,9,9-tetramethyl-1,4,7-cycloundecatriene Other notable compounds include D-dithienylacetylene ester, ecliptal or α-terthienyl aldehyde, α-terthienyl-methanol, and α-formylterthienyl.

1.2.4 Tác dụng sinh học của Cỏ nhọ nồi ( Eclipta alba ) a Tác dụng giảm đau, chống viêm

Nghiên cứu cho thấy dịch chiết ethanol và alkaloid toàn phần từ Eclipta alba có hiệu quả giảm đau đáng kể khi sử dụng với liều 150mg/kg.

250 mg/kg và 500 mg/kg theo đường uống Tác dụng giảm đau này có hiệu quả như nhau ở cả cơn đau trung tâm cũng như ngoại biên [47]

Liều 100 và 200 mg/kg dịch chiết methanol của cỏ nhọ nồi khi sử dụng đường uống cho thấy hiệu quả chống viêm rõ rệt trên mô hình gây phù chân chuột bằng carrageenin và lòng trắng trứng, so sánh với indomethacin (10mg/kg) và cyproheptadine (8 mg/kg) Ngoài ra, cỏ nhọ nồi còn có tác dụng kháng khuẩn và chống nấm.

Nhiều nhà khoa học đã chứng minh Eclipta alba có tiềm năng kháng khuẩn mạnh mẽ Nghiên cứu chỉ ra rằng các hợp chất chiết xuất từ Eclipta alba có khả năng chống lại các vi khuẩn như Staphylococcus aureus, E coli, Staphylococcus cholermidis và Salmonella typhimurium.

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Đối tượng

Dược liệu nghiên cứu là cây cỏ nhọ nồi Eclipta alba, được thu hái từ tỉnh Thanh Hóa vào tháng 06/2018 Sau khi thu hoạch, dược liệu được sấy khô ở nhiệt độ 50-60 độ C, đạt độ ẩm khoảng 5% Sau đó, dược liệu được thái nhỏ hoặc xay nhỏ và bảo quản trong túi polymer, để nơi khô ráo, tránh ẩm ướt.

2.2 Hóa chất, thiết bị 2.2.1 Hóa chất

- Dung môi công nghiệp dùng trong chiết xuất: methanol, ethanol, n-hexan, ethyl acetat, dicloromethan, aceton

- Dung dịch thuốc thử H 2 SO 4 10% trong ethanol đốt nóng để phát hiện viết chất trên bản mỏng

- Bản mỏng tráng DC-Alufolien 60G F 254 (Merck) (silica gel, 0,25 mm) và bản mỏng pha đảo RP-18 F 254 (Merck, 0,25 mm)

- Bột silica gel pha thường (0,040-0,063 mm, Merck)

- Chất chuẩn wedelolacton, quercetin, methyl gallat đạt tinh khiết 98%

- Máy cất quay Rotavapor R-220 (Buchi)

- Máy cất quay Buchi dung tích bình cất 250ml, 500ml, 1000ml

- Tủ sấy Memmert, Binder-FD115

- Máy siêu âm Power sonic 405

- Bếp điện, bếp cách thủy Memmert

- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC Shimadzu Detector Diode array

- Cân kĩ thuật Precisa BJ 610C, cân phân tích Precisa 262SMA-FR, Máy đo hàm ẩm

- Đèn UV- Vilber lourmat, máy chụp ảnh UV

Dụng cụ thủy tinh bao gồm bình gạn 1000ml, bình nón 250ml, bình cầu với các dung tích 250ml, 500ml, và 1000ml, cột sắc ký đa dạng, phễu thủy tinh, ống đong, cùng với ống nghiệm ở nhiều kích thước khác nhau.

2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp chiết xuất, phân lập

Cỏ nhọ nồi được chiết xuất qua phương pháp chiết nóng bằng methanol, sau đó tiến hành lọc để loại bỏ bã dược liệu và thu gom dịch chiết Cuối cùng, dung môi được cất thu hồi dưới áp suất giảm, tạo ra cao đặc toàn phần.

Cao toàn phần được phân tán trong nước và trải qua quá trình chiết xuất phân đoạn bằng cách sử dụng dung môi có độ phân cực tăng dần, bắt đầu từ n-hexan và sau đó là ethyl acetat, để thu được các phân đoạn tương ứng.

Phân lập các hợp chất có thể thực hiện bằng phương pháp sắc ký cột sử dụng silica gel pha thường (0,040-0,063 mm, Merck) kết hợp với quá trình kết tinh lại trong dung môi Quá trình sắc ký cột được tiến hành để tách biệt các hợp chất hiệu quả.

Khảo sát cao tổng bằng sắc ký lớp mỏng với nhiều hệ dung môi khác nhau giúp chọn lựa hệ dung môi tối ưu có khả năng tách tốt, từ đó làm dung môi rửa giải hiệu quả.

Để chuẩn bị cột sắc ký, cần đảm bảo cột khô và sạch, lắp đặt thẳng đứng trên giá cố định Đầu tiên, nhồi một lớp bông xuống đáy cột, sau đó cân một lượng chất nhồi cột phù hợp cho vào cốc có mỏ và thêm dung môi thích hợp, khuấy đều để loại bỏ bọt khí Tiếp theo, từ từ đưa hỗn hợp chất nhồi cột lên cột, gõ nhẹ để tránh tạo bọt khí Cuối cùng, cho dung môi chảy liên tục qua cột cho đến khi cột ổn định.

Để nạp mẫu, trước tiên cần trộn đều chất hấp phụ với dung dịch mẫu phân tích Tiếp theo, làm bay hơi dung môi cho đến khi thu được bột tơi mịn Sau đó, đưa mẫu lên cột và rải đều thành một lớp trên bề mặt cột Cuối cùng, đặt một miếng bông lên trên để bảo vệ bề mặt cột.

+ Rửa giải: sử dụng hệ dung môi thích hợp để rửa giải

Để theo dõi các phân đoạn, sử dụng sắc ký lớp mỏng trên bản mỏng tráng sẵn DC-Alufolien 60G F254 và RP-18 của Merck Chất được phát hiện bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm và 366 nm, kết hợp với thuốc thử là dung dịch H2SO4 10% trong ethanol.

Thu thập các phân đoạn có sắc ký đồ tương đồng và kiểm tra độ tinh khiết của các chất phân lập bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng, sử dụng các hệ dung môi phù hợp.

2.3.2 Phương pháp xác định cấu trúc

Cấu trúc của các hợp chất được xác định thông qua sự kết hợp giữa các phương pháp phổ hiện đại và các đặc trưng hóa lý như điểm nóng chảy Các phương pháp phổ phổ biến trong việc xác định cấu trúc bao gồm phổ khối lượng (MS) và phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR).

Phổ khối lượng cung cấp thông tin về khối lượng của các ion được tạo ra từ phân tử, cho thấy rằng trong cùng một điều kiện ion hóa, sự phân mảnh của ion mẹ sẽ tuân theo những quy luật nhất định Các chất có cấu trúc tương đồng sẽ tạo ra những phân mảnh tương tự Bằng cách phân tích khối lượng các phân mảnh và kết hợp với các phương pháp phổ khác, người ta có thể xác định cấu trúc của các chất chưa biết So sánh phổ khối của chất chưa biết với phổ khối của chất đã biết là một phương pháp hữu hiệu để định danh chất đó một cách chính xác.

Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) là phương pháp phân tích quan trọng trong hóa học, được sử dụng để nghiên cứu cấu trúc phân tử Khi chất chứa hạt nhân có spin lẻ như ^1H và ^13C được đặt trong từ trường ngoài, các spin hạt nhân sẽ sắp xếp theo hai hướng: thuận và ngược chiều với từ trường Bằng cách chiếu xạ bức xạ điện từ có tần số thích hợp, các spin này hấp thu năng lượng và chuyển lên mức năng lượng cao Khi ngừng chiếu xạ, chúng sẽ giải phóng năng lượng để trở về trạng thái cân bằng Qua việc xác định năng lượng hấp thu hay giải phóng của các hạt nhân cùng loại trong phân tử, ta có thể thu được phổ NMR Tùy thuộc vào mục đích nghiên cứu, có thể đo nhiều loại phổ khác nhau, bao gồm phổ một chiều như ^1H-NMR, ^13C-NMR, DEPT và các phổ hai chiều như COSY để phân tích mối tương quan giữa các hạt nhân.

Các phương pháp được sử dụng để xác định cấu trúc các hợp chất được phân lập từ cỏ nhọ nồi là:

- Phổ khối lượng phun mù điện tử (ESI-MS)

- Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1 H-NMR, 13 C-NMR, HSQC, HMBC.

KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

Chiết các phân đoạn Cỏ nhọ nồi và phân lập các hợp chất từ cao phân đoạn etyl

3.1.1 Kết quả chiết phân đoạn Cỏ nhọ nồi

Lấy 2 kg cỏ nhọ nồi được xay mịn chiết nóng với MeOH, chiết 3 lần ở 70 0 C, mỗi lần 3 giờ, với tỉ lệ DL/DM: 1/8 Sau đó, lọc lấy dịch chiết và cô dưới áp suất giảm thu được cao tổng NTP (288,3 g)

Phân tán 280g NTP vào 2l nước, sau đó lắc với hệ dung môi n-hexan và EtOAc theo thứ tự tăng dần độ phân cực Tiến hành lắc 3 lần với mỗi dung môi, sau đó gộp dịch chiết và cô dưới áp suất giảm để thu được các phân đoạn tương ứng, bao gồm phân đoạn n-hexan (NH).

20,6g), phân đoạn EtOAc (NE: 60,9g) và phân đoạn nước (NW: 197,3 g) được biểu diễn như Hình 3.1

Hình 3.1 Sơ đồ phương pháp chiết xuất phân đoạn Cỏ nhọ nồi

1 Phân tán cao trong nước

2 Lắc phân đoạn lần lượt với n-hexan (x3), EtOAc (x3)

Cao EtOAc (NE) (60,9g) Cao n-hexan (NH)

3.1.2 Kết quả phân lập các hợp chất trong Cỏ nhọ nồi

Sử dụng 60g cao phân đoạn NE, tiến hành sắc ký cột pha thường với silica gel và hệ dung môi gradient DCM-MeOH (100%, 30/1, 20/1, 10/1, 8/1, 5/1), đã thu được 7 phân đoạn được ký hiệu là NE1-7.

Sắc ký cột pha thường phân đoạn NE4 (5,3g) với hệ dung môi DCM-MeOH (10/1) đã thu được các phân đoạn ký hiệu NE4.1 đến NE4.4 Trong đó, phân đoạn NE4.1 (1,9g) được tiếp tục sắc ký cột pha thường với hệ dung môi DCM-MeOH (8/1), từ đó thu được hợp chất N01 (426mg) và N02 (112mg) Phân đoạn NE4.2 (1,1g) cũng được tiến hành sắc ký cột pha thường với hệ dung môi DCM-MeOH (8/1), dẫn đến việc thu nhận hợp chất N03 (48mg).

Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ cao phân đoạn EtOAc của cỏ nhọ nồi

CC: pha thường DCM/MeOH (100%, 30/1, 20/1, 10/1, 8/1, 5/1)

CC: pha thường DM: DCM/MeOH (10/1)

CC: pha thường DM: DCM/MeOH (8/1)

CC: pha thườngDM: DCM/MeOH (8/1)

UV 254nm UV 366nm TT H 2 SO 4 10%/Ethanol

Hình 3.3 SKĐ TLC của N01 và cao EtOAc

Biện luận cấu trúc các hợp chất phân lập được từ Cỏ nhọ nồi

Hợp chất N01: chất bột màu trắng

Hợp chất wedelolacton có công thức phân tử C16H10O7, được xác định qua phổ ESI-MS với m/z 314 [M +] Các dữ liệu từ phổ 13C-NMR, 1H-NMR và DEPT (Bảng 3.1) hoàn toàn phù hợp với cấu trúc phân tử của hợp chất này, như thể hiện trong Hình 3.3.

Phổ 1 H-NMR cho tín hiệu proton của nhóm methoxy ở δ H 3,88 (3H, s, H-15) Hai tín hiệu proton ở vị trí para của vòng thơm ở δ H 7,35 (1H, s, H-13), 7,16 (1H, s, H-10); Hai tín hiệu ở δ H 6,44 (1H, d, J=2,5 Hz, H-6) và 6,59 (1H, d, J=2,0 Hz, H-8) là tín hiệu proton vòng thơm ở vị trí meta

Phổ 13 C-NMR của N01 có 16 tín hiệu carbon, trong đó: tín hiệu cacbon cacbonyl của vòng lacton ở δ C 164,0; 4 tín hiệu ở δ C 99,5; 94,5; 99,6 và 106,0 là tín hiệu của 4 nhóm CH kề nối đôi (CH=), 10 tín hiệu ở 103,3; 161,4, 98,4, 156,3, 164,4, 157,0, 151,2, 146,7, 115,7 là tín hiệu của 10 carbon bậc 4 kề nối đôi Tín hiệu ở 56,3 là cacbon của nhóm OCH 3 gắn vào vòng benzene Phổ HMBC cho thấy nhóm OCH 3 này tương tác với C7 (δ = 164,4)

Tương tác H→C được xác định qua phổ HMBC, cho phép xác định vị trí của các proton và carbon trong phân tử N01 (Bảng 3.1) Dựa trên kết quả phổ cộng hưởng từ hạt nhân và các đặc trưng vật lý, cùng với việc so sánh với tài liệu đã công bố [42], cấu trúc của N01 được xác nhận là 5,11,12-Trihydroxy-7-methox

Hình 3.6 Cấu trúc hợp chất N01 (Wedelolacton)

Bảng 3.1 Dữ liệu phổ của hợp chất N01 và wedelolacton

1 H-NMR (δ ppm, 500MHz, MeOD, J Hz)

Hợp chất N02: Chất rắn màu vàng, điểm nóng chảy 313-314 o C

R f = 0,35 (TLC, silica gel, CH 2 Cl 2 /MeOH 9/1,v/v), Hiện màu vàng sau khi phun thuốc thử H 2 SO 4 10% trong cồn, hơ nóng và hiện màu đen với dung dịch FeCl 3 /etanol 5%

Bảng 3.2 Dữ liệu phổ của hợp chất N02 và quercetin

Phân tích phổ 1 H-NMR, 13 C-NMR và DEPT của chất N02 cho thấy các tín hiệu đặc trưng của flavonol Trong phổ 1 H-NMR, có 5 proton vòng thơm, trong đó 3 tín hiệu tương tác ABX xuất hiện ở δ H 7,82 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2'), 7,69 (1H, dd, J = 8,5; 2,0 Hz, H-6'), và 6,99 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5') thuộc vòng thơm B Hai tín hiệu proton tương tác meta ở δ H 6,51 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8) và 6,26 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6) thuộc về vòng thơm A.

Phổ 13 C-NMR và DEPT chỉ ra chất N02 gồm 15 cacbon với 5 CH nhân thơm ở δ C 99,1 (C-6), 94,4 (C-8), 115,7 (C-2'), 116,2 (C-5') và 121,4 (C-6'), 10 C trong đó tín hiệu δ C 176,5 ppm đặc trưng cho nhóm cacbonyl, bốn cacbon có độ chuyển dịch δ C 145,8, 148,3, 162,3, 164,9 ppm đặc trưng cho dạng liên kết của nhân thơm với nhóm OH của các cacbon C-3', C-4', C-5, C-7 Ngoài ra, tín hiệu của cacbon ở δ C

136,7 (C-3) đặc trưng cho cacbon của nối đôi liên kết với một nhóm hydroxyl

Dựa vào dữ liệu phổ và so sánh điểm nóng chảy với các thông tin đã được công bố trước đó, cấu trúc của chất N02 được xác định là 3,3',4',5,7-pentahydroxyflavone, hay còn gọi là quercetin.

Hình 3.7 Cấu trúc hợp chất N02 (Quercetin) 3.2.3 Biện luận cấu trúc N03

Hợp chất N03: Chất rắn màu trắng, điểm nóng chảy là 201-202°C

Mẫu thử hiện màu nâu khi chiếu ánh sáng UV 254 nm, nhưng không xuất hiện màu sắc ở UV 365 nm Sau khi xử lý bằng thuốc thử H2SO4 10% trong cồn và hơ nóng, mẫu sẽ chuyển sang màu đen khi tiếp xúc với dung dịch FeCl3/etanol 5%.

Bảng 3.3 Dữ liệu phổ của hợp chất N03 và methyl gallat

Phổ 1 H-NMR của chất N03 cho một tín hiệu singlet của hai proton trong vòng thơm δ H 7,07 (2H, s, H-2 & H-6) Sự có mặt của một metyl este thể hiện qua tín hiệu singlet của proton metyl δ H 3,83 (3H, s, H-OCH 3 )

Phổ 13 C-NMR của N03 cho tín hiệu của 8 cacbon trong đó tín hiệu của cacbon cacbonyl ở δ C 169,0 (C-7), cacbon metyl este δ C 52,3 Sáu cacbon thuộc về vòng thơm xuất hiện trong khoảng chuyển dịch δ C 110,1-146,4, trong đó C-1 và C-4 cho tín hiệu tương ứng ở δ C 121,5; 139,7 Tín hiệu chồng chập của hai cacbon methin C-2 và C-6 ở δ C 110,1 với cường độ mạnh Tương tự vậy, hai cacbon vòng thơm còn lại C-3 và C-5 xuất hiện ở δ C 146,4 Các dữ kiện phổ trên gợi ý cho ta về cấu trúc một phenolic thế tetra ở các vị trí 1,3,4,5 của hợp chất N03 trong đó có một metyl este và ba nhóm còn lại là hydroxy Các tương tác HMBC cho phép xác định cụ thể từng vị trí của các nhóm chức vào nhân thơm Từ nhận định trên, kết hợp với tài liệu tham khảo [43] cho phép kết luận cấu trúc của hợp chất N03 là methyl 3,4,5-trihydroxybenzoate hay methyl gallat

Bàn luận

Dược liệu được chiết xuất bằng phương pháp chiết nóng với dung môi MeOH, lựa chọn này vì tính đơn giản và dễ thực hiện, phù hợp với quy mô phòng thí nghiệm MeOH có khả năng chiết xuất nhiều nhóm hoạt chất và dễ tìm, nhưng cần lưu ý rằng đây là một dung môi độc Sau đó, cao chiết được phân đoạn thành các phần với dung môi có độ phân cực tăng dần như n-hexan và EtOAc, nhằm thuận lợi cho quá trình phân tách tiếp theo.

3.3.2 Về phân lập và xác định cấu trúc của các hợp chất

Quá trình phân lập các chất hóa học bằng phương pháp sắc ký cột mang lại hiệu quả tách cao, dễ thực hiện và chi phí thấp, phù hợp với quy mô phòng thí nghiệm Để lựa chọn phân đoạn và thăm dò hệ dung môi rửa giải, phương pháp sắc ký lớp mỏng được sử dụng để định tính các chất trong phân đoạn cũng như theo dõi các chất trong quá trình phân lập.

Wedelolacton, một coumestan có hàm lượng lớn trong cây cỏ nhọ nồi, đóng vai trò quan trọng trong nhiều tác dụng dược lý Chất này đã được chứng minh có nhiều tác dụng sinh học, bao gồm khả năng ức chế phospholipase A2, RNA-polymerase virus viêm gan C, và hoạt động của Na +, K + -ATPase.

Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU được sử dụng như thuốc để kháng lại nọc độc rắn và có khả năng chống oxy hóa [19],

Tác dụng chống viêm đã được chứng minh qua việc ức chế hoạt động của IKK, đồng thời có khả năng giảm nồng độ IL-1β, mang lại tiềm năng điều trị cho các bệnh như viêm khớp dạng thấp, hen suyễn và sốc nhiễm trùng.

Wedelolactone đã được chứng minh có tác dụng chống ung thư hiệu quả Nghiên cứu cho thấy hợp chất này ức chế sự phát triển của carcinosarcoma và tế bào adenoma tuyến yên in vitro, đồng thời ngăn chặn sự phát triển của tế bào ung thư tuyến tiền liệt cả trong môi trường in vitro và in vivo Đặc biệt, wedelolactone ức chế sự tăng trưởng và gây ra quá trình apoptosis trong các tế bào ung thư vú MDA-MB-231 nhờ khả năng liên kết với DSDNA, ức chế topoisomerase IIa và ngăn chặn sự tổng hợp DNA.

Wedelolacton đã được nghiên cứu và chứng minh có khả năng chống viêm hiệu quả, cũng như phòng ngừa và điều trị các bệnh nhiễm trùng nặng Nghiên cứu tại Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội cho thấy wedelolactone có tác dụng làm giảm các phản ứng viêm do zymosan gây ra.

Quercetin, một flavonoid nổi tiếng, đã được sử dụng trong chế độ ăn uống của con người từ lâu, mang lại nhiều lợi ích sức khỏe Nó có tác dụng chống oxy hóa, hỗ trợ chống béo phì, giảm viêm, kháng vi-rút, kháng khuẩn và chống ung thư.

Quercetin được cho là có tiềm năng điều trị ung thư mạnh mẽ, với khả năng ức chế sự tăng sinh của nhiều loại tế bào ung thư như đại trực tràng, tuyến tiền liệt, gan, tuyến tụy và phổi Nó tác động đến chu trình tế bào của các tế bào này, ngăn chặn sự phát triển của chúng Chức năng chống ung thư của quercetin liên quan đến khả năng chống oxy hóa mạnh mẽ của nó.

Nghiên cứu cho thấy quercetin có tác dụng tích cực trong việc giảm nguy cơ các bệnh tim mạch Cụ thể, ở bệnh nhân tăng huyết áp, liều quercetin 730 mg/ngày trong 4 tuần đã giúp hạ huyết áp tâm thu 7 mm Hg, huyết áp tâm trương 5 mm Hg và áp lực động mạch trung bình 5 mm Hg Thêm vào đó, một nghiên cứu khác cho thấy việc sử dụng 150 mg quercetin/ngày trong 42 ngày đã làm giảm huyết áp tâm thu và mức LDL ở những người béo phì có triệu chứng hội chứng chuyển hóa.

Nghiên cứu của Homer et al (1990) chỉ ra rằng một số vi khuẩn như Bacteroides gingivalis, Bacteroides intermedius và Treponema denticola có khả năng phân giải protein Methyl gallat cho thấy hiệu quả ức chế sự phát triển của E coli mà không ảnh hưởng đến vi khuẩn sản xuất axit lactic Hơn nữa, methyl gallat cũng kết hợp hiệp đồng với ciprofloxacin để tăng cường khả năng chống lại Salmonella.

Methyl gallat là một chất chống oxy hóa quan trọng, có khả năng kháng tiểu cầu và bảo vệ DNA khỏi tổn thương do stress oxy Ngoài ra, methyl gallat còn giúp giảm stress oxy hóa trong bệnh tiểu đường.

Tiêu đề	Chiết Xuất, Phân Lập Và Xác Định Cấu Trúc Một Số Hợp Chất Trong Cây Cỏ Nhọ Nồi
Tác giả	Đinh Thị Nguyệt Ánh
Người hướng dẫn	PGS.TS. Dương Thị Ly Hương, ThS. Nguyễn Thị Hồng Anh
Trường học	Đại học Quốc gia Hà Nội
Chuyên ngành	Dược học
Thể loại	khóa luận tốt nghiệp
Năm xuất bản	2019
Thành phố	Hà Nội

Định dạng
Số trang	65
Dung lượng	2,26 MB