(Luận án tiến sĩ) nghiên cứu một số đặc tính sinh học của virus cúm a h5 biến chủng mới ở đàn gia cầm làm cơ sở cho phòng chống dịch bệnh tại việt nam

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN VĂN LÂM NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VIRUS CÚM A/H5 BIẾN CHỦNG MỚI Ở ĐÀN GIA CẦM LÀM CƠ SỞ CHO PHÒNG CHỐNG DỊCH BỆNH TẠI VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2021 luan an HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN VĂN LÂM NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VIRUS CÚM A/H5 BIẾN CHỦNG MỚI Ở ĐÀN GIA CẦM LÀM CƠ SỞ CHO PHÒNG CHỐNG DỊCH BỆNH TẠI VIỆT NAM Ngành : Bệnh lý học chữa bệnh vật nuôi Mã số : 64 01 02 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Tô Long Thành PGS.TS Chu Đức Thắng HÀ NỘI - 2021 luan an LỜI CAM ĐOAN Dữ liệu luận án phần đề tài độc lập cấp quốc gia "Nghiên cứu phân bố biến chủng (clade) virus cúm A/H5N1 đàn gia cầm Việt Nam làm sở cho việc phòng chống dịch bệnh đạt hiệu cao", mã số ĐTĐL.CN10/15, giai đoạn 2015-2018, Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ương làm đơn vị chủ trì đề tài Tơi xin cam đoan: (1) tất kết thu luận án tơi nhóm nghiên cứu thực hiện, kết công bố với đồng ý chủ nhiệm đề tài thành viên tham gia thực hiện; (2) kết trình bày luận án trung thực, khách quan không trùng lặp với luận án tiến sĩ công bố trước đây; (3) giúp đỡ cho việc thực luận án cảm ơn, thơng tin trích dẫn luận án rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Tác giả luận án Nguyễn Văn Lâm i luan an LỜI CẢM ƠN Trong trình thực đề tài hồn thành luận án, tơi nhận giúp đỡ nhiều tổ chức cá nhân Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý Đào tạo, Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam tạo điều kiện thuận lợi trình học tập, trang bị cho kiến thức quý báu giúp đỡ hồn thành cơng trình nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến: PGS.TS Tơ Long Thành, Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ương; PGS.TS Chu Đức Thắng, Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam, người thầy hướng dẫn khoa học, trực tiếp giúp đỡ tơi q trình thực đề tài hồn thành luận án Tơi xin cảm ơn tập thể thầy cô kỹ thuật viên thuộc Bộ môn Nội - Chẩn Dược - Độc chất, Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn Lãnh đạo cán Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ương tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ cho tơi hồn thành đề tài nghiên cứu Nghiên cứu có sử dụng kinh phí đề tài độc lập cấp quốc gia mã số ĐTĐL.CN-10/15 "Nghiên cứu phân bố biến chủng (clade) virus cúm A/H5N1 đàn gia cầm Việt Nam làm sở cho việc phòng chống dịch bệnh đạt hiệu cao", Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ương làm đơn vị chủ trì đề tài Đặc biệt, xin chân thành cảm ơn thành viên nhóm nghiên cứu, đồng tác giả Nguyễn Thị Thúy Mận, Nguyễn Hoàng Đăng, Nguyễn Đăng Thọ Tô Long Thành cho phép sử dụng kết nghiên cứu công bố vào phần nội dung luận án Nhân dịp hoàn thành luận án, tơi ln biết ơn gia đình, đặc biệt vợ tôi, bên cạnh, động viên, giúp đỡ tơi hồn thành đề tài nghiên cứu luận án Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Nghiên cứu sinh Nguyễn Văn Lâm ii luan an MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng viii Danh mục hình ix Trích yếu luận án xi Thesis abstract xiii Phần Mở đầu .1 1.1 Tính cấp thiết đề tài .1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu 1.3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 1.4 Những đóng góp luận án 1.5 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.5.1 Ý nghĩa khoa học .4 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu .5 2.1 Đại cương bệnh cúm gia cầm 2.1.1 Lịch sử bệnh cúm gia cầm 2.1.2 Tình hình dịch bệnh cúm A/H5N1 giới 2.1.3 Tình hình dịch bệnh cúm A/H5N1 Việt Nam .11 2.1.4 Dịch tễ học bệnh cúm gia cầm 14 2.1.5 Triệu chứng bệnh cúm gia cầm 16 2.1.6 Bệnh tích bệnh cúm gia cầm 17 2.1.7 Chẩn đoán bệnh cúm gia cầm 19 2.2 Virus học cúm gia cầm 21 2.2.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc virus cúm type A 21 2.2.2 Đặc tính kháng nguyên virus cúm type A 23 2.2.3 Thành phần hóa học virus 24 iii luan an 2.2.4 Sự nhân lên tác động gây bệnh virus 24 2.2.5 Độc lực virus .27 2.2.6 Đặc tính protein khả biến chủng virus 27 2.2.7 Sức đề kháng virus 33 2.2.8 Nuôi cấy lưu giữ virus .33 2.2.9 Danh pháp 33 2.3 Phòng chống bệnh cúm gia cầm 33 2.3.1 Vacxin phòng bệnh cúm gia cầm .33 2.3.2 Tình hình nghiên cứu sử dụng vacxin phòng bệnh cúm gia cầm 35 Phần Nội dung phương pháp nghiên cứu 38 3.1 Nội dung nghiên cứu 38 3.1.1 Giám sát để tìm virus cúm A/H5 biến chủng 38 3.1.2 Nghiên cứu số đặc tính sinh học virus cúm A/H5 biến chủng 38 3.1.3 Nghiên cứu khả bảo hộ virus cúm A/H5 biến chủng loại vacxin 38 3.2 Nguyên liệu nghiên cứu 39 3.2.1 Dụng cụ lấy mẫu 39 3.2.2 Hóa chất lấy mẫu .39 3.2.3 Vacxin động vật thí nghiệm 40 3.3 Phương pháp nghiên cứu 40 3.3.1 Phương pháp lấy mẫu 40 3.3.2 Phản ứng Realtime RT-PCR để sàng lọc, phát virus cúm A/H5Nx 42 3.3.3 Giám định virus phân lập phương pháp HI .45 3.3.4 Phân tích đặc điểm sinh học phân tử virus A/H5 biến chủng 46 3.3.5 Phương pháp xác định số độc lực virus A/H5 biến chủng 47 3.3.6 Phương pháp đánh giá triệu chứng lâm sàng 48 3.3.7 Phương pháp mổ khám toàn diện 49 3.3.8 Chuẩn bị tiêu vi thể phương pháp paraffin .50 3.3.9 Phương pháp công cường độc kiểm tra hiệu lực phòng bệnh vacxin với virus cúm A/H5 biến chủng .50 3.4 Phương pháp xử lý số liệu .52 iv luan an Phần Kết nghiên cứu thảo luận 53 4.1 Giám sát để tìm virus cúm A/H5 biến chủng 53 4.1.1 Kết thu thập mẫu sàng lọc virus cúm A .53 4.1.2 Kết xác định subtype H5 từ mẫu dương tính với virus cúm A 55 4.1.3 Kết xác định subtype H5N1 từ mẫu dương tính với virus cúm A/H5 57 4.1.4 Kết xác định subtype H5N6 từ mẫu dương tính với virus cúm A/H5 60 4.1.5 Kết xét nghiệm virus cúm A/H5 biến chủng theo loài 62 4.1.6 Nghiên cứu phân loại virus cúm A/H5 biến chủng thu thập từ gà, vịt chim cút 63 4.1.7 Kết nghiên cứu nguồn gốc phát sinh virus cúm A/H5 biến chủng qua phân tích phả hệ dựa gen HA .65 4.1.8 Sự xuất virus cúm A/H5 biến chủng theo thời gian không gian .70 4.2 Một số đặc tính sinh học virus cúm A/H5 biến chủng .74 4.2.1 Đặc tính sinh học phân tử tiểu phần HA1 biến chủng 74 4.2.2 Đặc tính gây bệnh virus cúm A/H5 biến chủng 80 4.2.3 Triệu chứng bệnh tích virus cúm A/H5 biến chủng gây gia cầm .82 4.3 Khả bảo hộ virus cúm A/H5 biến chủng loại vacxin .90 4.3.1 Khả vượt qua đáp ứng miễn dịch dị chủng virus clade 2.3.2.1c 91 4.3.2 Khả vượt qua đáp ứng miễn dịch dị chủng virus clade 2.3.4.4a 96 4.3.3 Khả vượt qua đáp ứng miễn dịch dị chủng virus clade 2.3.4.4b 101 4.3.4 Biến đổi bệnh lý gà có miễn dịch dị chủng sau cơng cường độc virus clade 2.3.4.4a clade 2.3.4.4b 106 4.3.5 Thảo luận khả vượt qua đáp ứng miễn dịch dị chủng biến thể virus cúm A/H5Nx 106 Phần Kết luận đề nghị .108 5.1 Kết luận 108 5.2 Đề nghị 109 Danh mục cơng trình cơng bố liên quan đến luận án .110 Tài liệu tham khảo 111 Phụ lục .128 v luan an DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Diễn giải ADN Axit deoxyribonucleic AI Avian influenza ARN Axit ribonucleic ATSH An toàn sinh học Bộ NN&PTNT Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn Bp Base pair CEF Chicken Embryo Fibroblast CGC Cúm gia cầm CK Chicken CS Cộng CT Cycle of threshold CTCPTTYTW1 Công ty Cổ phần thuốc Thú y Trung ương DK Duck ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay FAO Food and Agriculture Organization GMT Geometic Mean Titer Gs Goose HA Hemagglutination HSD Hạn sử dụng HGKT Hiệu giá kháng thể HI Hemagglutination Inhibition HPAI Highly Pathgenic Avian Influenza IVPI Intravenous Pathogenicity Index Kb Kilo base LPAI Low Pathogenic Avian Influenza M Matrix protein MDCK Madin-Darby-Canine-Kidney MDK Muscovy duck MDT Mediocris Downtime vi luan an MEGA Molecular Evolution Genetic Analysis NA Neuraminidae NCVD National Centre for Veterinary Diagnostics NEP Nuclear export protein NP Nucleoprotein NS Non-strutural protein NSX Ngày sản xuất OIE Office International des Épizooties PA Polymerase acidic PB1 Polymerase basic protein PB2 Polymerase basic protein PBS Phosphate Buffered Saline PCR Polymerase Chain Reaction SPF Specific pathogen free RT-PCR Reverse transcriptase- Polymerase Chain Reaction RNP Ribonucleoprotein TCID50 Tissue Culture Infective Dosage TCN Tiêu chuẩn ngành TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TW Trung ương VN Việt Nam WHO World Health Organization vii luan an DANH MỤC BẢNG TT Tên bảng Trang 2.1 Sự xuất virus cúm A/H5 biến chủng giai đoạn 2003-2014 .7 2.2 Tình hình dịch cúm gia cầm giới giai đoạn 2004 - 2017 .10 2.3 Bệnh tích điển hình gà mắc cúm gia cầm 18 3.1 Cơ cấu thu thập mẫu đề tài 41 3.2 Danh mục cặp mồi phát gen M, H5, N1 N6 43 3.3 Danh mục trình tự mồi giải trình tự gen HA1 HA2 .44 3.4 Bố trí thí nghiệm cơng cường độc 47 3.5 Bố trí thí nghiệm kiểm tra hiệu lực phòng bệnh vacxin với virus H5N1 clade 2.3.2.1c, H5N6 clade 2.3.4.4a H5N6 clade 2.3.4.4b 51 4.1 Bệnh tích đại thể gà lơ thí nghiệm sau cơng cường độc 93 viii luan an 13B Kết theo dõi lâm sàng nhóm thí nghiệm vacxin Re-5 virus cúm A/H5N1 clade 2.3.2.1c gà Ký hiệu gà Re-5 351 352 353 354 355 356 357 358 359 360 Đối chứng CCĐ 361 362 363 364 365 366 367 368 369 370 Vacxin không CCĐ 382 383 Đối chứng không CCĐ 384 385 Hiệu giá kháng thể (log2) 7.6 8 9 9 Triệu chứng lâm sàng (1: ốm; 2: ốm nặng; 3: chết) Ngày sau công cường độc 3 10 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 0 0 0 0 0 1 1 3 3 1 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Điểm lâm sàng Tỷ lệ chết (%) 1.13 1.9 1.3 2.4 0 2.7 0 1.8 50 2.3 100 2.3 2.4 2.1 2.5 2.3 2.4 2.1 2.5 2.2 2.2 8 0 0 0 0 142 luan an 0 13C Bài thải virus sau công cường độc virus cúm A/H5N1 clade 2.3.2.1c gà sử dụng vacxin Navet-vifluvac Re-5 Virus thải Ký hiệu gà Navetvifluvac 103 106 118 129 131 135 138 139 140 142 Đối chứng CCĐ 331 332 333 334 335 336 337 338 339 340 Vacxin không CCĐ 341 342 Đối chứng không CCĐ 343 344 Ngày Ngày 10 33.68 40 30.81 40 34.56 34.25 27.64 31.36 35.55 32.96 36.66 33.03 40 40 40 40 40 40 Virus thải 40 40 33.32 20.59 21.01 21.32 20.34 21.14 20.54 19.9 19.04 21.23 19.95 21.4 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 Ngày Ngày 10 Ngày chết Re-5 33.62 40 20.98 351 352 353 354 355 356 357 358 359 360 Đối chứng CCĐ 361 362 363 364 365 366 367 368 369 370 Vacxin không CCĐ 382 383 Đối chứng không CCĐ 384 385 33.88 36.55 27.80 29.87 38.44 31.83 32.29 28.98 40 36.56 32.83 32.34 40 Ký hiệu gà Ngày chết 143 luan an 40 40 40 40 19.22 21.41 40 22.32 21 21.24 19.18 21.07 20.88 20.42 21.26 20.88 21.55 21.98 21.88 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 Phụ lục 14: Đánh giá hiệu lực vacxin với virus cúm H5N6 clade 2.3.4.4a gà vịt 14A Kết theo dõi lâm sàng nhóm thí nghiệm vacxin Navet-vifluvac virus H5N6 clade 2.3.4.4a gà Ký hiệu gà Navetvifluvac 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 Đối chứng CCĐ 301 302 303 304 305 306 307 308 309 310 Vacxin không CCĐ 111 112 Đối chứng không CCĐ 321 322 Hiệu giá kháng thể (log2) Triệu chứng lâm sàng (1: ốm; 2: ốm nặng; 3: chết) Điểm lâm sàng Tỷ lệ chết (%) 5.2 0.28 20 0 0 0 0 Ngày sau công cường độc 3 10 3 3 1 3 0 0 0 0 0 2.29 1 1 1 3 1 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 2.3 2.3 2.1 2.4 2.5 2.2 2.5 2.1 2.1 2.2 0 0 0 0 144 luan an 100 0 14B Kết theo dõi lâm sàng nhóm thí nghiệm vacxin Re-5 virus H5N6 clade 2.3.4.4a gà Ký hiệu gà Re-5 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 Đối chứng CCĐ 311 312 313 314 315 316 317 318 319 320 Vacxin không CCĐ 211 212 Đối chứng không CCĐ 323 324 Hiệu giá kháng thể (log2) 7.4 9 9 Triệu chứng lâm sàng (1: ốm; 2: ốm nặng; 3: chết) Ngày sau công cường độc 10 3 3 3 3 2 3 0 0 0 0 0 1 1 3 3 1 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Điểm lâm sàng Tỷ lệ chết (%) 0.44 0 0 1.6 1.4 1.4 30 2.3 100 2.3 2.4 2.1 2.5 2.3 2.4 2.1 2.5 2.2 2.2 7.5 0 0 0 0 145 luan an 0 14C Kết theo dõi lâm sàng nhóm thí nghiệm vacxin Navet-vifluvac virus H5N6 clade 2.3.4.4a vịt Ký hiệu vịt Navet-vifluvac Hiệu giá kháng thể (log2) Triệu chứng lâm sàng (1: ốm; 2: ốm nặng; 3: chết) Ngày sau công cường độc Điểm lâm sàng Tỷ lệ chết (%) 0.07 10 151 152 10 153 154 10 155 156 157 11 158 159 160 1 0.2 1 0.5 Đối chứng CCĐ 1.15 351 352 353 354 355 356 357 358 359 360 VX không công CCĐ 8.5 161 162 Đối chứng không CCĐ 371 372 0 3 3 3 2.1 2 3 1.3 70 2 3 3 1.8 1 1 3 1.2 3 0.9 0.3 1 1 0.4 1 2 1.2 3 3 3 2.3 0 0 0 0 146 luan an 14D Kết theo dõi lâm sàng nhóm thí nghiệm vacxin Re-5 virus H5N6 clade 2.3.4.4a vịt Re-5 Hiệu giá kháng thể (log2) 9.3 251 252 253 254 255 256 257 258 259 260 9 10 11 10 11 Đối chứng CCĐ 361 362 363 364 365 366 367 368 369 370 0 0 0 0 0 Vacxin không CCĐ 8.5 261 262 10 0 Đối chứng không CCĐ 0 373 374 0 0 Ký hiệu vịt Triệu chứng lâm sàng (1: ốm; 2: ốm nặng; 3: chết) Ngày sau công cường độc 1 1 Điểm lâm sàng Tỷ lệ chết (%) 0.06 10 0.2 0.4 0 0 0 1.1 2 1 2 3 2 3 3 2 3 3 3 3 147 luan an 3 3 3 3 3 3 60 1.7 0.2 1.2 2.3 0.3 1.6 1.8 1.9 0 14E Bài thải virus sau công cường độc virus cúm A/H5N6 clade 2.3.4.4a gà sử dụng vacxin Navet-vifluvac Re-5 Virus thải Ký hiệu gà Navetvifluvac 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 Đối chứng CCĐ 301 302 303 304 305 306 307 308 309 310 Vacxin không CCĐ 111 112 Đối chứng không CCĐ 321 322 Virus thải Ngày Ngày 10 Ngày chết Ký hiệu gà Ngày Ngày 10 Ngày chết 39.19 30.72 17.57 Re-5 30.07 34.97 20.98 40 38.45 40 40 36.48 40 40 37.10 39.82 40 31.21 29.18 32.91 31.31 32.68 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 Đối chứng CCĐ 311 312 313 314 315 316 317 318 319 320 Vacxin không CCĐ 211 212 Đối chứng không CCĐ 323 324 31.49 31.00 36.12 28.45 24.13 25.54 26.93 32.76 30.62 33.64 34.02 37.43 33.47 35.09 30.91 16.95 32.15 25.13 31.18 18.18 21.58 18.02 20.23 23.09 16.71 17.92 20.16 19.78 18.13 16.42 19.03 16.08 17.77 18.18 21.37 22.13 21.10 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 148 luan an 19.22 21.41 35.78 22.32 38.11 21.65 17.98 23.22 18.41 16.54 17.24 18.35 16.48 21.51 18.48 19.11 16.02 17.64 21.20 20.45 21.74 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 14F Bài thải virus sau công cường độc virus cúm A/H5N6 clade 2.3.4.4a vịt sử dụng vacxin Navet-vifluvac Re-5 Virus thải Ký hiệu vịt Virus thải Ký hiệu vịt Ngày Ngày 10 39.42 Re-5 39.56 39.88 40 40 38.41 40 39.6 33.21 32.44 39.75 40 40 40 40 40 38.11 40 37.90 40 38.23 40 40 251 252 253 254 255 256 257 258 259 260 40 40 40 40 40 40 38.16 40 37.4 40 40 39.76 40 39.06 40 40 40 40 40 40 Đối chứng CCĐ 33.37 36.06 Đối chứng CCĐ 31.74 36.37 351 352 353 354 355 356 357 358 359 360 31.42 35.44 34.27 28.43 32.66 36.77 39.5 35.12 34.98 25.08 361 362 363 364 365 366 367 368 369 370 25.44 33.16 30.48 23.41 29.51 38.09 34.64 35.05 31.45 36.13 Vacxin không CCĐ 40 40 Vacxin không CCĐ 40 40 161 162 40 40 40 40 261 262 40 40 40 40 Đối chứng không CCĐ 40 40 Đối chứng không CCĐ 40 40 371 372 40 40 38.48 40 373 374 40 40 40 40 Ngày Ngày 10 Navetvifluvac 38.34 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 Ngày chết 21.05 20.33 21.5 40 18.41 35.03 19.06 22.22 33.14 24.15 21.67 149 luan an Ngày chết 19.26 18.37 37.33 20.08 17.12 34.42 33.72 21.46 18.94 19.56 40 Phụ lục 15: Đánh giá hiệu lực vacxin với virus cúm H5N6 clade 2.3.4.4b gà vịt 15A Kết theo dõi lâm sàng nhóm thí nghiệm vacxin Navet-vifluvac virus H5N6 clade 2.3.4.4b gà Ký hiệu gà Hiệu giá kháng thể (log2) Navet-vifluvac 4.7 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 Đối chứng CCĐ 301 302 303 304 305 306 307 308 309 310 Vacxin không CCĐ 111 112 Đối chứng không CCĐ 321 322 6 6 3 0 0 0 0 0 4.5 Triệu chứng lâm sàng (1:ốm, 2:ốm nặng, 3:chết) Ngày sau công cường độc 10 Điểm Tỷ lệ lâm chết sàng (%) 0.47 3 3 1 3 2 3 3 1 3 3 3 1 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 1.8 0 0 0 1.5 1.4 2.37 2.8 2.8 1.5 2.4 2.9 2.2 2.8 1.7 2.4 2.2 0 0 0 0 150 luan an 30 100 0% 0% 15B Kết theo dõi lâm sàng nhóm thí nghiệm vacxin Re-5 virus H5N6 clade 2.3.4.4b gà Ký hiệu gà Hiệu gía kháng thể (log2) Triệu chứng lâm sàng (1:ốm, 2:ốm nặng, 3:chết) Ngày sau công cường độc 10 Điểm lâm sàng Tỷ lệ chết (%) 30% Re-5 7.8 0.49 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 8 9 0 1.9 0 0 Đối chứng CCĐ 311 312 313 314 315 316 317 318 319 320 0 0 0 0 0 Vacxin không CCĐ 7.5 211 212 0 Đối chứng không CCĐ 0 323 324 0 0 3 3 3 3 3 3 2.36 1 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 151 luan an 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 100% 2.8 2.8 1.5 2.8 2.5 2.3 1.4 2.9 2.4 2.2 0% 0% 15C Kết theo dõi lâm sàng nhóm thí nghiệm vacxin Navet-vifluvac virus H5N6 clade 2.3.4.4b vịt Triệu chứng lâm sàng (1:ốm, 2:ốm nặng, 3:chết) Ký hiệu vịt HGKT (log2) Ngày sau công cường độc Navetvifluvac 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 Đối chứng CCĐ 351 352 353 354 355 356 357 358 359 360 Vacxin không CCĐ 161 162 Đối chứng không CCĐ 371 372 8.3 11 11 10 1 10 1 1 1 2 1 1 0 0 0 0 0 1 3 2 1 1 3 1 1 3 3 1 3 3 3 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Điểm lâm sàng Tỷ lệ chết (%) 0.22 0 0.5 0.7 0 0 1.32 80 2.2 1.6 0.3 1.8 1.1 1.2 0.9 0.8 1.2 2.1 0 0.0 0 0 152 luan an 0 15D Kết theo dõi lâm sàng nhóm thí nghiệm vacxin Re-5 virus H5N6 clade 2.3.4.4b vịt Ký hiệu vịt Re-5 251 252 253 254 255 256 257 258 259 260 Đối chứng công cường độc Hiệu giá kháng thể (log2) 8.7 8 10 10 11 Triệu chứng lâm sàng (1:ốm, 2:ốm nặng, 3:chết) Ngày sau công cường độc 1 1 1 10 0 0 0 0 153 luan an 3 3 3 3 3 70 2 3 3 1.35 1 3 3 1 3 Vacxin không công cường độc 1 3 1 3 0.11 0.4 0 0 0 0.7 0 0 0 0 0 3 1 1 3 Tỷ lệ chết (%) 361 362 363 364 365 366 367 368 369 370 261 262 Đối chứng không công cường độc 373 374 Điểm lâm sàng 1.7 1.2 0.7 1.1 0.3 0.6 1.8 1.9 2.2 0 15E Bài thải virus sau công cường độc virus cúm A/H5N6 clade 2.3.4.4b gà sử dụng vacxin Navet-vifluvac Re-5 Virus thải Virus thải Ký hiệu gà Ngày Ngày 10 Ngày chết Navetvifluvac 34.83 36.62 19,81 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 Đối chứng CCĐ 301 302 303 304 305 306 307 308 309 310 Vacxin không CCĐ 31.68 36.51 35.66 34.67 38.78 32.33 37.22 34.54 28.23 38.68 18,32 38.78 40 111 112 40 37.56 Đối chứng không CCĐ 321 322 Ký hiệu gà Ngày Ngày 10 Ngày chết Re-5 27.4 33.21 25.75 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 Đối chứng CCĐ 311 312 313 314 315 316 317 318 319 320 Vacxin không CCĐ 23.76 30.46 28.89 28.55 29.48 30.51 29.04 22.35 26.76 24.20 35.81 32.52 31.59 39.67 39.60 40 40 211 212 40 39.33 40 39.19 39.98 39.66 Đối chứng không CCĐ 39.14 40 40 39.95 39.32 40 323 324 40 38.27 40 40 37.12 37.45 36.23 39.05 33.12 37.59 19,13 21,98 35.78 28.13 18.76 29.35 33.51 17.45 20.23 17.57 18.96 19.76 18.65 19.09 17.74 20.78 17.37 29.10 40 35.44 34.32 34.98 27.93 154 luan an 25.29 25.8 26.16 35.12 35.59 31.43 30.41 24.62 20.30 32.34 24.48 32.08 35.78 21.57 20.55 19.23 19.67 18.46 19.03 21.88 22.34 20.35 19.94 36.32 28.78 29.43 27.03 15F Bài thải virus sau công cường độc virus cúm A/H5N6 clade 2.3.4.4b vịt sử dụng vacxin Navet-vifluvac Re-5 Virus thải Virus thải Ký hiệu vịt Ngày Ngày 10 Navetvifluvac 35.33 36.20 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 Đối chứng CCĐ 351 352 353 354 355 356 357 358 359 360 Vacxin không CCĐ 35.68 39.51 31.66 40 40 32.33 31.22 34.54 40 28.39 35.35 40 34.45 31.23 40 29.94 40 38.23 40 32.78 33.61 32.09 38.78 40 161 162 40 37.56 Đối chứng không CCĐ 371 372 Ký hiệu vịt Ngày Ngày 10 Re-5 39.56 39.88 251 252 253 254 255 256 257 258 259 260 Đối chứng CCĐ 361 362 363 364 365 366 367 368 369 370 Vacxin không CCĐ 40 40 40 40 40 40 38.16 40 37.4 40 40 39.76 40 39.06 40 40 40 40 40 40 33.06 31.64 39.2 40 40 40 261 262 38.42 40 40 40 39.98 39.66 Đối chứng không CCĐ 39.19 40 40 39.95 39.32 40 373 374 39.02 39.35 40 40 29.35 33.51 31.46 29.10 40 35.44 34.32 40 34.98 27.93 Ngày chết 21.27 23.45 22.23 31.82 20.96 18.65 19.09 32.35 21.78 22.75 155 luan an 27.86 33.97 29.55 36.9 40 35.29 32.72 34.35 30.58 29.4 Ngày chết 22.08 19.74 21.11 33.61 20.36 30.23 31.07 24.70 24.93 21.62 Một số hình ảnh trình nghiên cứu Phát virus PCR (trái) phân lập virus nuôi tế bào (phải) Bố trí thử nghiệm cơng cường độc đánh giá hiệu lực vacxin vịt gà 156 luan an