(Luận văn thạc sĩ) khảo sát thành phần hóa học của cây hương nhu tía (ocimum sanctum l ) họ bạc hà (lamiaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC Chuyên ngành: HÓA HỮU CƠ Đề tài: KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY HƯƠNG NHU TÍA (Ocimum sanctum L.) HỌ BẠC HÀ (Lamiaceae) Người hướng dẫn khoa học: Ths PHÙNG VĂN TRUNG Sinh viên thực hiện: NGUYỄN THỤY KHẢ ÁI THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH 2012 LỜI CẢM ƠN Luận văn thực phịng Hóa Học Các Hợp Chất Thiên Nhiên – Viện Cơng Nghệ Hóa Học – Viện Khoa học Công Nghệ Việt Nam; số Mạc Đĩnh Chi, phường Bến Nghé, quận 1, tp.Hồ Chí Minh; năm 2012 Với lòng trân trọng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn đến: PGS.TS Nguyễn Ngọc Hạnh Cô động viên tạo điều kiện tốt để em hồn thành khóa luận ThS Phùng Văn Trung Trưởng phịng Hóa Học Các Hợp Chất Thiên Nhiên Thầy tận tình hướng dẫn em kỹ thuật, truyền đạt kiến thức chuyên môn, giúp em giải khó khăn gặp phải trình thực luận văn ThS Phan Nhật Minh, cử nhân Nguyễn Tấn Phát, cử nhân Nguyễn Trung Kiên, cử nhân Võ Thị Bé anh chị trường Đại học Cần Thơ, bạn sinh viên thực luận văn phịng Hố Học Các Hợp Chất Thiên Nhiên, năm 2012 giúp đỡ, hướng dẫn, góp ý, cung cấp tài liệu, tạo điều kiện để em làm tốt cơng việc mình… Q thầy Ban Giám Hiệu trường Đại Học Sư Phạm TP.HCM, Ban chủ nhiệm Khoa Khoa Hóa-Tổ Hóa Hữu Cơ, tất quý thầy cô giáo trang bị cho em kiến thức tảng vững suốt thời gian học trường, niên khóa 2008-2012 Cuối cảm ơn gia đình giúp đỡ, động viên, tạo điều kiện từ vật chất đến tinh thần cho học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn TP.Hồ Chí Minh, tháng 05, năm 2012 NGUYỄN THỤY KHẢ ÁI DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Viết đầy đủ B.W Body Weight CHCl3 Chloroform COSY Correlation Spectroscopy D Doublet Dd Doublet of doublet DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer DMSO EtOAc EtOH Dimethyl sulfoxide Ethyl acetate Ethanol HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation J Coupling constant M Multiplet MeOH Methanol NMR Nuclear Magnetic Resonance PA Pure analysis ppm Parts per million PNP para-Nitrophenol PNP-Glc α para-Nitrophenyl- -D-glucoside Rf Retention factor s Singlet t Triplet T Technical TLC Thin Layer Chromatography UV Ultra Violet δ Chemical shift DANH MỤC CÁC BẢNG BẢNG: Bảng 1.1 Trang Khảo sát đường kính vịng vơ khuẩn Bảng 1.2: Tổng quan thành phần hóa học hương nhu tía 27 Bảng 3.1: Kết sắc ký cột HPLC cao EtOAc 40 Bảng 3.2: Cách pha mẫu thử hoạt tính 45 Bảng 41: Khối lượng loại cao so với nguyên liệu 46 Bảng 4.2: Dữ liệu phổ HSQC Os01 48 Bảng 4.3: Dữ liệu phổ Bảng 4.4: Dữ liệu phổ H-NMR, 13 50 Bảng 4.5: So sánh liệu phổ Os01 với tài liệu tham khảo 51 Bảng 4.6: Dữ liệu phổ Bảng 4.7: Dữ liệu phổ H-NMR, 13 57 Bảng 4.8: So sánh liệu phổ Os02 với tài liệu tham khảo 57 Bảng 4.9: So sánh liệu phổ Os03 với tài liệu tham khảo 60 Bảng 4.10: Dữ liệu phổ Bảng 4.11: Dữ liệu phổ H, Bảng 4.12: Kết đo mật độ quang mẫu dựng đường chuẩn 70 Bảng 4.13: Kết đo mật độ quang mẫu Os03 70 13 C-NMR DEPT Os01 C-NMR, HMBC Os01 13 C-NMR phổ DEPT Os02 C-NMR, HMBC Os02 13 C DEPT Os04 13 C, HMBC Os04 49 56 67 68 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ- BIỂU ĐỒ: Sơ đồ: Trang Sơ đồ 3.1: Quy trình chiết xuất cao EtOH 38 Sơ đồ 3.2: Quy trình phân lập hợp chất từ cao EtOAc 40 Biểu đồ 4.1 : Phương trình đường chuẩn 68 Biểu đồ 4.2 : Phần trăm ức chế theo nồng độ chất ức chế Os03 69 DANH MỤC CÁC HÌNH HÌNH: Trang Hình 1.1: Cây hương nhu tía Hình 1.2: Lá hương nhu tía Hình 1.3: Cụm hoa hương nhu tía Hình 1.4: Quả hương nhu tía Hình 2.1: Sắc ký lớp mỏng 33 Hình 2.2: Sắc ký cột 33 Hình 3.1: Nguyên liệu cắt nhỏ trước chiết với EtOH 35 Hình 3.2: Sắc kí lớp mỏng cao EtOAc hương nhu tía 39 Hình 3.3: Tinh chế Os01: (a): Trước, (b): Sau 41 Hình 3.4: Tinh chế Os03: (a) Trước, (b) sau 42 Hình 3.5: Mẫu ức chế nồng độ 44 Hình 3.6: Mẫu thử hoạt tính 44 Hình 4.1 : Hợp chất Os01 47 Hình 4.2 : Sắc kí lớp mỏng Os01 47 Hình 4.3: Hợp chất Os02 53 Hình 4.4: Sắc kí lớp mỏng Os02 53 Hình 4.5 : Hợp chất Os03 59 Hình 4.6 : Sắc kí lớp mỏng Os03 59 Hình 4.7: Sắc kí lớp mỏng Os03 ursolic acid 64 Hình 4.8: Hợp chất Os04 66 Hình 4.9 : Sắc kí lớp mỏng Os04 66 MỤC LỤC: Trang Lời mở đầu Chương 1: Tổng quan 1.1.Đại cương hương nhu tía - 1.1.1 Mô tả 1.1.1.1 Khái quát 1.1.1.2 Mô tả - 1.1.2 Phân bố sinh thái - 1.2 Các nghiên cứu hương nhu tía - 1.2.1 Tác dụng dược lý 1.2.1.1 Các nghiên cứu nước - 1.2.1.2 Các nghiên cứu nước - 1.2.2 Thành phần hóa học 13 1.2.2.1 Các nghiên cứu nước - 13 1.2.2.2 Các nghiên cứu nước - 13 Chương II: Các phương pháp 30 2.1 Phương pháp chiết ngâm dầm 31 2.2 Phương pháp sắc kí lớp mỏng - 32 2.3 Phương pháp sắc kí cột - 32 2.4 Phương pháp thử hoạt tính kháng tiểu đường - 33 Chương III: Thực nghiệm - 35 3.1 Nguyên liệu-Hóa chất- Thiết bị - 35 3.1.1 Nguyên liệu 35 3.1.2 Hóa chất - 36 3.1.3 Thiết bị - 36 3.2 Chiết xuất cao - 37 3.2.1 Chiết xuất cao EtOH 37 3.3 Phân lập hoạt chất từ cao 39 3.3.1 Cô lập 39 3.3.2 Tinh chế 40 3.3.2.1 Os01 41 3.3.2.2 Os02 41 3.3.2.3 Os03 42 3.3.2.4 Os04 42 3.4 Xác định cấu trúc hợp chất cô lập 42 3.5 Thử hoạt tính kháng tiểu đường chất phân lập - 42 3.5.1 Pha hóa chất 42 3.5.2 Tiến hành 42 Chương IV: Kết thảo luận - 46 4.1 Kết chiết xuất cao 46 4.1.1 Chiết xuất cao EtOH 46 4.2 Kết cô lập tinh chế 46 4.2.1 Os01 47 4.2.1.1 Các đặc tính Os01 47 4.2.1.2 Nhận danh cấu trúc Os01 47 4.2.2 Os02 52 4.2.2.1 Các đặc tính Os02 52 4.2.2.2 Nhận danh cấu trúc Os02 53 4.2.3 Os03 60 4.2.3.1 Các đặc tính cuả Os03 61 4.2.3.2 Nhận danh cấu trúc Os03 61 4.2.4 Os04 66 4.2.4.1 Các đặc tính Os04 66 4.2.4.2 Nhận danh cấu trúc Os04 66 4.3 Kết thử hoạt tính - 70 Chương V: Kết luận kiến nghị 72 5.1 Các kết đạt 72 5.2 Kiến nghị - 74 Tài liệu tham khảo 75 LỜI MỞ ĐẦU Thiên nhiên cung cấp cho nhân loại nguồn nguyên liệu lớn để tạo phương thuốc chữa bệnh Từ nhiều kỷ trước, loại thảo mộc sử dụng để chữa bệnh Theo tổ chức y tế Thế giới (WHO), khoảng 80% dân số giới dựa vào y học cổ truyền để thực việc chăm sóc sức khỏe thơng thường Hiện nay, bệnh đái tháo đường bệnh mãn tính, gây tử vong cao, đứng hàng thứ ba giới sau bệnh tim mạch ung thư Đái tháo đường ngày trở nên vấn đề lớn giới y khoa cộng đồng Vì vậy, địi hỏi phải tìm loại thuốc hiệu bệnh đái tháo đường Theo kinh nghiệm dân gian, có nhiều dược liệu dùng làm thuốc cho bệnh đái tháo đường Trong đó, có hương nhu tía Hương nhu tía (Ocimum sanctum L.) biết đến hàng ngàn năm với nhiều văn minh giới Loại thảo mộc xem biểu tượng thiêng liêng đạo Hindu Khoa học nghiên cứu đặc tính chữa bệnh hương nhu tía phát triển từ kỉ XX Những năm gần đây, hương nhu tía biết đến với nhiều công dụng kháng khuẩn, kháng viêm, chống mẫn cảm, làm lành vết thương, giảm nguy ung thư, tăng cường sức khỏe… Vì vậy, chúng tơi thực đề tài “Khảo sát thành phần hóa học hương nhu tía” Trong luận văn này, chúng tơi trình bày số kết chiết tách, lập, xác định cấu trúc đồng thời khảo sát hoạt tính kháng tiểu đường hợp chất lập Qua đó, góp phần làm sáng tỏ thêm thành phần hóa học tác dụng dược lý hương nhu tía