GI ỚI THIỆU VỀ CÂY MUỒNG HOÀNG YẾN [2]
Tên khoa học: Cassia fistula L thuộc họ Vang (Caesalpiniaceae)
Tên gọi khác: Muồng bò cạp, Bò cạp nước, Muồng hoàng hậu, Osaka, Hoa lồng đèn, Mai dây, Cây xuân muộn, Mai nở muộn hay Bò cạp vàng…
Tên nước ngoài: Indian laburnum, water senna, golden shower, purging fisyula, pudding pipe tree, purging cassia (Anh); canéficier, séné fistuleux, casse d'Inde, casse fistuleux (Pháp)
Hình 1.1: Hoa Muồng hoàng yến Hình 1.2: Cây Muồng hoàng yến h
Hình 1 3: Cây Muồng hoàng yến Hình 1 4: Cây Muồng hoàng yến
Hình 1.5: Quả Muồng hoàng yến Hình 1 6: Lá và hoa Muồng hoàng yến
Cây gỗ nhỡ cao từ 6-12m, với cành sum suê và tỏa rộng Lá của cây là lá kép long chim, mọc so le với trục dài từ 15-25cm, có 5-6 đôi lá chét hình lục lăng, dài từ 7-12cm và rộng 4cm.
8cm, mặt trên nhẵn, mặt dưới có long trắng nhạt, sau nhẵn, thường nhọn ở đầu hình góc rộng ở gốc, lá kèm sớm rụng, cuống lá dài 15-30cm
Cụm hoa mọc ở kẽ lá thành chum, dài từ 15-30cm, với lá bắc nhỏ và sớm rụng Hoa có màu vàng, đài hình bầu dục với 5 răng có lông ở mặt ngoài Tràng hoa gồm 5 cánh, có móng ngắn hẹp Cấu trúc nhị gồm 10 cái, trong đó có 3 cái rất dài, 4 cái trung bình và 3 cái rất nhỏ Bầu và vòi nhụy có lông.
Quả hình trụ dài từ 40-50cm, chứa nhiều hạt dẹp hình bầu dục màu nâu bóng Những hạt này được bao bọc bởi cơm và nằm trong các vách hóa gỗ mỏng Mùa hoa quả diễn ra từ tháng 5 đến tháng 10.
Muồng hoàng yến phân bố rộng rãi ở Ấn Độ, Srilanca, Malaysia, Indonesia,
Philippin, New Guinea, Thái Lan, Campuchia, Lào… Cây còn được trồng ở Ai Cập và
Trung Quốc Ở Việt Nam, Muồng hoàng yến phân bố chủ yếu ở các tỉnh Tây Ninh,
Bình Phước, Đồng Nai, Bình Dương, cùng với các tỉnh Nam Trung Bộ và Tây Nguyên là những vùng trồng cây quan trọng Ngoài ra, cây cũng được trồng tại một số thành phố lớn như Hà Nội và thành phố Hồ Chí Minh.
Muồng hoàng yến là cây gỗ nhỡ, thường mọc trong rừng thưa nửa rụng lá hoặc rừng thứ sinh Cây ưa sáng, có khả năng chịu bóng khi còn nhỏ, và thích nghi tốt với khí hậu nhiệt đới, với nhiệt độ trung bình năm khoảng 25°C, nhiệt độ tối thấp 20°C và tối cao 28-29°C Lượng mưa trung bình hàng năm dao động từ 1500-2500 mm, cây cũng có khả năng chịu hạn Những cây trồng ở Hà Nội đã thích nghi với nhiệt độ thấp và mùa đông kéo dài Cây trồng từ hạt sẽ bắt đầu ra hoa sau 4-6 năm và có khả năng tái sinh tốt từ hạt.
Muồng hoàng yến là cây gỗ được trồng xen kẽ trong rừng và tại các thành phố, không chỉ để tạo cảnh quan mà còn cung cấp bóng mát Gỗ của cây được sử dụng để sản xuất đồ gia dụng, trong khi vỏ cây là nguồn nguyên liệu quan trọng để chiết xuất tannin.
Quả, hạt, rễ và vỏ h
CÔNG D ỤNG
Quả Muồng hoàng yến có tác dụng chữa táo bón với liều 4-6 g để nhuận tràng và 10-20 g để tẩy Ngâm rượu từ quả giúp tiêu hóa, bổ dưỡng, làm tăng cảm giác thèm ăn và giảm đau lưng Cơm quả và hạt (1 kg) sắc với 1 lít nước, lọc và cô thành cao, có thể dùng để chữa đau lưng, đau mình, lỵ, tiêu chảy với liều 5-15 g Lá tươi giã nát vắt nước bôi trị hắc lào, hoặc sắc uống để chữa đau lưng và nhuận tràng với liều 15-20 lá Tại một số nước Đông Nam Á, vỏ quả chín và hạt Muồng hoàng yến cũng được sử dụng để nhuận tràng, trong khi vỏ rễ, lá và hoa có tác dụng yếu hơn Nước sắc rễ có thể sát trùng vết thương, trong khi vỏ thân được dùng ở Java để trị bệnh ngoài da và đắp lên vết thương do rắn hoặc bò cạp cắn ở Campuchia Tại Philippines, lá được dùng để trị nấm da.
Lan là một loại cây có nhiều công dụng trong y học, với thịt quả được sử dụng làm thuốc nhuận tràng và long đờm, hoa giúp hạ nhiệt và nhuận tràng, trong khi gỗ có tác dụng trừ giun, đặc biệt là giun đũa Trong y học hiện đại, cơm quả Muồng hoàng yến đôi khi được dùng cho trẻ em, nhưng cần thận trọng vì việc sử dụng lâu dài có thể dẫn đến quen thuốc Tại Trung Quốc, vỏ thân và quả được dùng làm thuốc, với vỏ thân trị đau răng và quả trị nhiệt bệnh, cam tích ở trẻ em và bí đại tiện ở người già Ở Ấn Độ, cây được gọi là “aragvadha”, nghĩa là “tiêu diệt bệnh”, và cao từ cơm quả thường được sử dụng để nhuận tràng, mặc dù ít khi dùng riêng Cao vỏ rễ đã được thử nghiệm và cho thấy hiệu quả trong điều trị sốt tiểu đen, trong khi vỏ thân có tác dụng trị bệnh ngoài da.
Quả trị đái tháo đường được sử dụng với liều 5g mỗi 8 giờ, dưới dạng bột hoặc thuốc sắc Quả Muống hoàng yến là thành phần trong một số bài thuốc cổ truyền Ấn Độ để điều trị bệnh gan và sỏi niệu Hoa của cây này cũng được dùng làm rau sống hoặc nấu canh, phổ biến ở nhiều vùng Ấn Độ Tại Nepal, người dân sử dụng cơm quả Muồng hoàng yến với liều 5g để làm phân mềm và trị tiểu tiện có lẫn máu, uống 4 thìa cà phê mỗi lần trong ngày.
Nước sắc vỏ than được sử dụng để súc miệng trị viêm họng Tại Haiti, người dân uống nước sắc lá hoặc quả Muồng hoàng yến để điều trị bệnh ký sinh trùng đường ruột Nước ngâm lá còn được dùng để tắm hoặc bôi xoa chữa bệnh ngoài da, trong khi nước sắc lá giúp chữa khó tiêu Ở Guatemala, vỏ cây Muồng hoàng yến được dùng để chữa bệnh đường tiết niệu Tại Panama, người dân sử dụng Muồng hoàng yến để điều trị bệnh đái tháo đường.
Cơm quả Muồng hoàng yến có tác dụng nhuận tràng nhờ vào lượng pectin và chất nhầy phong phú, cùng với các dẫn chất anthraquinone Đường trong glycosid giúp tăng độ hòa tan, cho phép thuốc dễ dàng di chuyển đến kết tràng Tại đây, vi khuẩn sẽ thủy phân glycosid thành anthraquinone, sau đó chuyển hóa thành anthron, chất này kích thích nhu động ruột tại đại tràng.
Hạt Muồng hoàng yến có khả năng diệt amip và kén Entamoeba histolytica cả trong ống nghiệm và trong cơ thể sống, giúp điều trị bệnh amip ruột và gan ở động vật thí nghiệm cũng như bệnh amip ruột ở người Ngoài ra, Muồng hoàng yến còn có tác dụng diệt côn trùng và giun.
Muồng hoàng yến có tác dụng giảm lipid toàn phần trong máu và gan, đồng thời làm giảm cholesterol đáng kể ở máu, lách, thận và tim Nồng độ triglyceride cũng được cải thiện rõ rệt, mặc dù có sự tăng trung bình phospholipids ở tất cả các cơ quan Ngoài ra, Muồng hoàng yến giúp giảm hoạt độ của GOT, GPT, phosphatase kiềm acid về mức ban đầu, và cải thiện các chỉ số như protein huyết thanh toàn phần, albumin, globulin, tỷ lệ A/G, acid amin tự do, acid uric và creatinin, đưa chúng trở về gần mức bình thường.
Muồng hoàng yến gây giảm đường máu ở chuột nhắt trắng, và gây tăng sự dung nạp của glucose [9], [22]
Cao nước và flavonoid từ lá, thân, vỏ rễ và cơm quả Muồng hoàng yến có tác dụng giảm đau, kháng viêm và hạ sốt, trong đó cao vỏ rễ thể hiện hoạt tính mạnh nhất Các flavonoid này giúp giảm độ thấm mao mạch nhờ vào khả năng co mạch trực tiếp Ngoài ra, vỏ thân và vỏ quả Muồng hoàng yến còn có tác dụng chống đái tháo đường trong các thí nghiệm trên động vật Cao chiết từ Muồng hoàng yến bằng chloroform, alcohol ethylic và nước cũng mang lại nhiều lợi ích sức khỏe.
Muồng hoàng yến có hoạt tính kháng nấm in vitro chống những nấm gây bệnh toàn thân và nhiều loại vi khuẩn [10], [11], [27]
THÀNH PH ẦN HÓA HỌC CỦA CÂY MUỒNG HOÀNG YẾN
1.3.1 Tình hình nghiên c ứu trên thế giới
Năm 1966, Murty và cộng sự đã cô lập hợp chất rhein (1), fistucasidin (2) và barbaloin (3) từ gỗ cây Muồng hoàng yến [11]
Cũng trong năm 1966, Kumar và cộng sự đã cô lập được kaempferol (4) và rhein
(1) từ cao ethanol của hoa Muồng hoàng yến [16]
Năm 1964, Kaji và cộng sự đã cô lập được sennoside A (5) và sennoside B (6) từ lá Muồng hoàng yến [8]
Năm 1969, Sircar và cộng sự đã cô lập thành công gibberellic acid từ cánh hoa và bao phấn của hoa Muồng hoàng yến, một hormon quan trọng trong việc kích thích sự sinh trưởng của thực vật.
Năm 1972, Agrawal và cộng sự đã cô lập được một anthraquinone acid là fistulic acid (8) từ hạt Muồng hoàng yến [10]
Vào năm 1984, Mahesh và các cộng sự đã thành công trong việc cô lập kaempferol cùng với ba anthraquinone, bao gồm chrysophanol, rhein và physicion, từ lá cây Muồng hoàng yến và lá của năm loài khác thuộc chi Cassia, cụ thể là Cassia grandis L và Cassia nodosa Hamilt.
Cassia renigera Wall, Cassia javanica L., và Cassia marginata Roxb) [9]
Năm 1988, Morimoto và cộng sự cô lập được (+) catechin (11), (-) epiafzelechin
(12), (-) epiafzelechin 3-O-β-D-glucopyranoside (13), (-) epicatechin (14) và procyanidin B2 (15) từ lá Muồng hoàng yến [20]
Năm 1996, Vaishnav và cộng sự đã cô lập được rhamnetin 3-O-gentiobioside
(16) từ rễ cây Muồng hoàng yến [20] h
Năm 1998, Meena Rani và cộng sự đã cô lập được hợp chất 3-formyl-1-hydroxy-
8-methoxyanthraquinone (17) từ hạt Muồng hoàng yến [10]
Năm 2001, Ching-Kuo Lee và cộng sự đã cô lập từ vỏ hạt Muồng hoàng yến 27 hợp chất gồm 1-hexacosanol (18), 1-octacosanol (19), palmitic acid (20), stearic acid
(21), oleic acid (22), linoleic acid (23), heptacosyl eicosanate (24), glyceryl-1- tetraeicosanoate (25); ba sterol, β-sitosterol (26), stigmasterol (27), β-sitosteryl-3-O-
D-glucopyranoside (28); một triterpene, lupeol (29); tám anthraquinone, chrysophanol
(9), emodin (30), physicion (10), citreorosein (31), rhein (1), rhein methyl ester (32), ziganein (33), 1,4,5-trihydroxyanthraquinone (34); hai coumarin, isoscopoletin (35), scopoletin (36); hai chromone, 2,5-dimethyl-7-hydroxychromone (37), 2,5-dimethyl-
7-methoxychromone (38); ba hợp chất vòng thơm, isovanillic acid (39), vanillic acid
In 2002, Yueh-Hsiung Kuo and colleagues isolated four new compounds from the seeds of Senna siamea: 5-(2-hydroxyphenoxymethyl)furfural, (2′S)-7-hydroxy-5-hydroxymethyl-2-(2′-hydroxypropyl)chromone, benzyl-2-hydroxy-3,6-dimethoxybenzoate, and benzyl 2-O-β-D-glucopyranosyl-3,6-dimethoxybenzoate, alongside four known compounds including 5-hydroxymethylfurfural, (2′S)-7-hydroxy-2-(2′-hydroxypropyl)-5-methylchromone, and two oxyanthraquinones: 1,8-dihydroxy-3-methylanthraquinone (chrysophanol) and 8-O-β-D-glucopyranosyl-1-hydroxyl-3-methyl-anthraquinone (chrysophanein).
1.3.2 Tình hình nghiên c ứu trong nước
Năm 2011, nhóm tác giả Lê Tiến Dũng, Nguyễn Hữu An đã cô lập hai flavone glycoside, astragalin (51), kaempferol-3-O-neohesperidoside (52) và một anthraquinone, 1,3,8-trihydroxyanthraquinone (53) [3]
Dưới đây là cấu trúc của một số hợp chất điển hình đã được cô lập từ cây Muồng hoàng yến h
CH 3 (CH 2 ) 18 COO(CH 2 ) 16 CH 3 h
ĐIỀU KIỆN THỰC NGHIỆM
Hạt silica gel cỡ hạt 0,04-0,06 mm dùng cho pha thường và RP-18 dùng cho pha đảo
Sắc kí lớp mỏng được thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn DC-Alufolien F254
(Merck) dùng cho pha thường và RP-18 F254s (Merck) dùng cho pha đảo
Dung môi dùng cho quá trình thí nghiệm gồm
+ Hexane sử dụng có nhiệt độ sôi 69°C
+ Chloroform sử dụng có nhiệt độ sôi 61°C
+ Ethyl acetate sử dụng có nhiệt độ sôi 78°C
+ Methanol sử dụng có nhiệt độ sôi 64,5°C
+ Ethanol sử dụng có nhiệt độ sôi 78,4°C
Thuốc thử hiện hình các vết chất hữu cơ trên bản mỏng: dùng 10%
2.1.2 Thi ết bị Đèn UV tử ngoại cầm tay, bước sóng 254 nm và 365 nm hiệu UVITEC
Máy cô quay chân không Buchi – 111
Bếp cách thủy Julabo 461 Water Bath
Thiết bị gia nhiệt hồng ngoại, hiệu SCHOTT
Cột sắc ký đường kính từ 2 cm – 5,5 cm
Cân phân tích AND HR 200 h
NGUYÊN LI ỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Lá cây Muồng hoàng yến (Cassia fistula L.) thuộc họ Vang (Caesalpiniaceae) được thu hái tại thành phố Hồ Chí Minh vào tháng 8 năm 2010 Sau khi thu hái, lá tươi được chọn lọc, loại bỏ lá sâu bệnh và vàng úa, sau đó rửa sạch, để ráo, sấy khô và nghiền thành bột để phục vụ cho nghiên cứu.
Sử dụng phương pháp ngâm dầm, trích kiệt bằng ethanol để trích ly các hợp chất ra khỏi nguyên liệu
Kỹ thuật sắc kí cột sử dụng silica gel pha thường và silica gel pha đảo RP-18, kết hợp với sắc kí lọc gel bằng gel sephadex LH-20, cùng với sắc kí lớp mỏng, giúp cô lập các chất tinh khiết hiệu quả.
Phát hiện chất bằng đèn tử ngoại ở hai bước sóng 254 nm và 365 nm hoặc dùng thuốc thử là dung dịch H2SO 4 /EtOH 10% hay FeCl 3 /EtOH 1%.
ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO
Bột lá khô của cây Muồng hoàng yến được ngâm trong ethanol 96 độ trong 24 giờ Sau đó, dung dịch được lọc và cô đặc để thu hồi dung môi Quá trình này được lặp lại nhiều lần cho đến khi lượng cao thu được không còn đáng kể, cuối cùng thu được cao ethanol.
2.3.2 Điều chế các loại cao
Cao ethanol được chiết xuất bằng phương pháp trích pha rắn SKC silica gel, sử dụng các dung môi giải ly lần lượt là hexane, chloroform, ethyl acetate và methanol Sau khi cô quay, các cao tương ứng được thu nhận Quy trình điều chế các loại cao được mô tả trong sơ đồ 2.1.
QUÁ TRÌNH CÔ L ẬP
Sử dụng SKC silica gel pha thường trên cao ethyl acetate, sau đó tiến hành
SKC silica gel pha thường, SKC silica gel pha đảo RP-18 và sắc kí cột sephadex LH-
Quá trình cô lập các hợp chất được thực hiện qua 20 lần trên các phân đoạn thu được Mọi bước trong quy trình này đều được theo dõi bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng, sử dụng dung dịch làm thuốc thử hiện hình.
H 2 SO 4 /EtOH 10%, dung dịch FeCl3/EtOH 1%, soi đèn UV
Sơ đồ 2.1: Sơ đồ điều chế cao và cô lập các hợp chất từ lá cây
- Ngâm, tận trích bằng ethanol
- Lọc cô quay thu hồi dung môi
- Trích pha rắn trên silica gel
- Cô quay thu hồi dung môi
2.4.1 Kh ảo sát cao ethyl acetat (41,4 g)
Cao EtOAc được SKC silica gel pha thường với các hệ dung môi rửa giải:
H:EtOAc và EtOAc:MeOH có độ phân cực tăng dần, các đoạn giống nhau trên SKLM được gom chung lại thành 5 phân đoạn, kí hiệu là EA1-EA5 Quá trình khảo sát cao
EtOAc được tóm tắt trong bảng 2.1.
B ảng 2.1: Sắc kí cột trên cao EtOAc (41,4 g)
EA1 H:EA 100:0-10:1 4,9 Nhiều vết Không khảo sát
EA2 H:EA 5:1-1:1 9,2 Nhiều vết Không khảo sát
EA3 EA 5,1 Vết vàng Khảo sát
EA4 EA:M 1:1 11,5 Nhiều vết Không khảo sát
EA5 M 8,7 Nhiều vết Không khảo sát
2.4.2 Kh ảo sát phân đoạn EA3
Cao EA3 được tiến hành SKC silica gel pha thường với hệ dung môi rửa giải là
H:EA 1:1, các đoạn giống nhau trên SKLM được gom chung lại thành 4 phân đoạn, kí hiệu là EA3.1-EA3.4
Phân đoạn EA3.2 được thực hiện bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng (SKC) trên silica gel pha thường, sử dụng dung môi rửa giải là CHCl3:MeOH theo tỷ lệ 10:1 Các đoạn tương đồng trên sắc ký lớp mỏng (SKLM) được gom lại thành 5 phân đoạn, được ký hiệu từ EA3.2.1 đến EA3.2.5.
Cao EA3.2.3 được SKC sephadex LH-20 với hệ dung môi rửa giải là CHCl3
:MeOH1:1, các phân đoạn giống nhau trên SKLM được gom chung lại thành 4 phân đoạn (V1-V4) Kết quả được tóm tắt trong bảng 2.2 sau: h
B ảng 2.2: Kết quả sắc kí cột tại phân đoạn EA3.2.3
Phân đoạn Tên mã hóa Khối lượng (mg) Kết quả SKLM Ghi chú
Không khảo sát Không khảo sát
2.4.3 Kh ảo sát phân đoạn V3 (m= 25.5mg)
Phân đoạn V3 được SKC sephadex LH-20 với hệ dung môi rửa giải MeOH-
CHCl 3 1:1, các đoạn giống nhau được gom chung thành 3 phân đoạn (V3.1-V3.3)
Phân đoạn V3.1 tiếp tục được SKC silica gel pha đảo RP-18 với hệ dung môi rửa giải MeOH:H2O thu được 3 phân đoạn (V3.1.1-V3.1.3) Tiếp tục SKC sephadex LH-
Hệ dung môi rửa giải CHCl3-MeOH 1:1 đã được áp dụng để phân đoạn V3.1.2, từ đó thu được hợp chất sạch mang ký hiệu CFA-V với khối lượng 2.0mg Quá trình phân lập CFA-V được tóm tắt chi tiết trong bảng 2.3.
B ảng 2.3: Kết quả sắc kí cột tại phân đoạn V3
Phân đoạn Tên mã hóa Kết quả SKLM Ghi chú
Khảo sát, thu được CFA-V (m=2.0mg)
2.4.4 Kh ảo sát phân đoạn V4 (m= 10.0 mg)
Hình 2 2: Hợp chất CFA-IV
Phân đoạn V4 được tách ra bằng SKC sephadex LH-20 với dung môi CHCl3 –MeOH 1:1, và các đoạn tương tự được gộp lại thành hai phân đoạn là V4.1 và V4.2 Phân đoạn V4.2 thu được là hợp chất sạch, được ký hiệu là CFA-IV với khối lượng 5.0 mg Quá trình cô lập CFA-IV được tóm tắt trong bảng dưới đây.
Bảng 2.4: Kết quả sắc kí cột tại phân đoạn V4
Phân đoạn Tên mã hóa Kết quả SKLM Ghi chú
Khảo sát, thu được CFA-IV (m=5.0mg) h
CÁC S Ố LIỆU THỰC NGHIỆM
Hợp chất CFA-IV thu được dạng bột màu vàng, nhiệt độ nóng chảy 276-278 o C
Phổ 1 H-NMR (500 MHz, CD 3 COCD 3 ), ( Phụ lục 1), δ (ppm), J (Hz): 12.16(1H, s, 5-OH); 9.76 (s OH); 9.09 (s, OH) 8.15 (2H, d, 9Hz, H-2’/ H-6’); 7.02 (2H, d, 9Hz,
Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3COCD3 ), (Phụ lục 2), δ (ppm): 176.6 (C-4);
Hợp chất CFA-V thu được dạng tinh thể trắng, nhiệt độ nóng chảy 209-211 o C
Phổ 1 H-NMR (500 MHz, CD 3 COCD 3 ), (Phụ lục 6), δ (ppm), J (Hz): 7.73 (1H, d, 8.5Hz, H-5); 7.40 (2H, d, 9.0Hz, H-2’/H-6’); 6.90 (2H, d, 8.0Hz, H-3’/ H-5’); 6.57
(1H, dd, 8.0Hz; 2.5Hz, H-6); 6.42 ( 1H, d, 2.5Hz, H-8); 5.46 (1H, dd, 13.0Hz; 3.0Hz,
H-2); 3.06 (1H, dd, 16.5Hz; 13Hz, H-3e); 2.69 (1H, dd, 16.5Hz; 3.0Hz, H-3a)
Phổ 13 C-NMR (125 MHz, CD 3 COCD 3 ), (Phụ lục 7), δ (ppm): 190.48 ( C-4);
GI ỚI THIỆU CHUNG
Trong khoá luận này, chúng tôi tiến hành khảo sát thành phần hóa học của cao ethyl acetate từ lá cây Muồng hoàng yến Cassia fistula L họ Vang (Caesalpiniaceae)
Silica gel SKC pha thường trên cao ethyl acetate đã được phân tách thành 5 phân đoạn Trong quá trình khảo sát, chúng tôi đã cô lập thành công các hợp chất trong phân đoạn 3, được ký hiệu lần lượt là.
CFA-IV, CFA-V Bằng các phương pháp phổ nghiệm, cấu trúc hóa học của các hợp chất được xác định lần lượt là kaempferol (4) và liquiritigenin (54)
KH ẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CÁC HỢP CHẤT
Hợp chất CFA-IV cô lập được ở dạng bột màu vàng có nhiệt độ nóng chảy 276-
278 o C, tan trong dung môi acetone Hợp chất này cho phản ứng dương tính với thuốc thử FeCl3/EtOH, chứng tỏ CFA-IV là một phenolic
Phổ 13 C-NMR của hợp chất CFA-IV xuất hiện 13 tín hiệu, trong đó có 2 tín hiệu ở δC 130.46ppm và δC 116.35ppm có cường độ gấp đôi Vậy trong công thức cấu tạo của hợp chất CFA-IV có tổng cộng 15 carbon, gồm 1 carbon carbonyl [δC 176.6 (C-
2 carbon olefin mang oxygen [δC 147.0 (C-2) và 136.6 (C-3)] Từ dữ liệu phổ 1 H
NMR, 13 C NMR và DEPT cho phép dự đoán CFA-IV có khung flavone (hình 3.1)
Phổ 1 H NMR còn sáu proton vòng thơm, trong đó, hai tín hiệu proton vòng thơm xuất hiện với cường độ gấp đôi [δH 8,15 (2H, d) và 7.02 (2H, d)], có hằng số ghép J 8,5 cho thấy đây là 2 cặp proton tương đương nằm ở vị trí ortho với nhau Tín hiệu proton tại δH 7.02 ppm cho tương quan với tín hiệu carbon tại δC 116.3 ppm và tín hiệu proton tại δH 8,15 ppm cho tương quan với tín hiệu carbon tại δC 130.4 ppm trên cả hai phổ HSQC và HMBC Điều này chứng tỏ bốn proton này cùng nằm trên vòng B có tính đối xứng
Tín hiệu δH 12,16 ppm trên phổ 1 H NMR khẳng định nhóm –OH phải gắn vào C-
Trên phổ HMBC, proton -OH kiềm liên kết với carbon vòng thơm mang oxygen [δC 162.3 ppm], carbon vòng thơm tứ h cấp [δC 104.1 ppm] và carbon vòng thơm mang hydrogen [δC 99.2 ppm], xác định các tín hiệu carbon lần lượt là C-5, C-10 và C-6 Proton H-6 [δH 6,26 ppm] ghép metha với proton [δH 6,53 ppm], cho thấy proton này là H-8 Đồng thời, hai proton H-6 và H-8 tương quan với carbon [δC 165.0 ppm], xác định carbon này là C-7 Carbon [δC 157.8 ppm] cũng tương quan với proton H-8, cho thấy carbon này là C-9 Tương quan HMBC trong vòng A được xác nhận.
CFA-IV được minh họa ở hình 3.2
Hình 3 2 : Tương quan HMBC trên vòng A của CFA-IV
Xét vòng B, trên phổ HMBC, tín hiệu proton δH 8,15 ppm cho tương quan với hai carbon sp 2 mang oxygen [δC 160.1 ppm và 147.0 ppm] và một carbon sp 2 tứ cấp
[δC 123.3 ppm] Tín hiệu proton δH 7.02 ppm cũng cho tương quan với hai trong ba carbon trên là δC 160.1 ppm và δC 123.3 ppm Do đó có thể suy ra tín hiệu proton [δH
8,15 ppm] ứng với H-2’ và H-6’, tín hiệu proton [δH 7.02 ppm] ứng với H-3’ và H-5’, ba carbon sp 2 δC 130.4 ppm; δC 147.0 ppm và δC 123.3 ppm lần lượt là C-6’, C-2 và
Trong khung flavone, chỉ còn lại tín hiệu carbon sp² tại δC 136.6 ppm, xác định carbon này là C-3 Hình 3.3 minh họa tương quan HMBC trong vòng B của CFA-IV.
Hình 3 3: Tương quan HMBC trên vòng B của CFA-IV
Từ các biện luận trên, kết hợp với tài liệu tham khảo [10] , chúng tôi kết luận hợp chất CFA-IV là kaempferol
Kaempferol có tác dụng tích cực trong việc chống ung thư và bệnh tim mạch
Nhiều nghiên cứu đã chỉ ra rằng kaempferol có nhiều tác dụng chữa bệnh, bao gồm khả năng chống động kinh, chống viêm, kháng khuẩn, chống oxy hóa, chống co thắt, điều trị đái tháo đường, giảm đau và làm giảm ho.
Bảng 3 1: Bảng so sánh số liệu phổ 1 H-NMR và 13 C-NMR của CFA-IV với số liệu phổ 1 H-NMR và 13 C-NMR của kaempferol [12]
Hợp chất CFA-IV thu được dạng tinh thể màu trắng Nhiệt độ nóng chảy 209-
211 o C, tan trong dung môi acetone Hợp chất CFA-V cho phản ứng dương tính với thuốc thử FECl3/EtOH, chứng tỏ CFA-V là một phenolic
Phổ 1 H-NMR (Acetone-d 6 ) cho thấy sự hiện diện của 7 proton vòng thơm, trong đó có 2 cặp proton đối xứng trên vòng benzene δ H [7.40 (2H; d; 9 Hz)] và δ H [6.90
(2H, d; 8.5 Hz)] và 3 proton thơm δ H [7.73 (1H; d; 8.5 Hz)]; 6.57 (1H; dd; 8.0 Hz, 2.5
Hz); 6.42 (1H; d; 2.5 Hz)], 2 proton của nhóm methylen và 1 proton của carbon sp 3
Phổ 13 C-NMR (Acetone- d 6 ) kết hợp với kỹ thuật DEPT cho 13 tín hiệu Trong đó, mỗi tín hiệu ở δC 128.92 ppm và δc 116.15 ppm có cường độ gấp đôi, tương ứng với 2 carbon Vậy trong công thức cấu tạo của hợp chất CFA-V có tổng cộng 15 carbon, gồm 1 carbon carbonyl [δC 190.48 (C-4)], 12 carbon vòng thơm [δC 165.37
(C-7); 129.45 (C-5); 164.54 (C-9); 128.92 (C-2’ và C-6’); 131.31 (C-1’); 116.15 (C-3’ và C-5’); 115.20 (C-10); 111.23 (C-6) và 103.70 (C-8)] và 1 carbon sp 3 mang oxygen
Dữ liệu phổ 1 H-NMR và 13 C-NMR chỉ ra rằng CFA-V là một flavonoid thuộc nhóm flavanone, với sự hiện diện của nhóm methylen Hai proton của nhóm methylen được ghi nhận tại δ H [3.06 (1H; dd; 16.5Hz; 13 Hz); 2.69 (1H; dd; 16.5 Hz; 3.0Hz)], tương ứng với H-3e và H-3a.
Phổ HSQC (Phụ lục 9) cho thấy C-3 có độ dịch chuyển hóa học δ C là 44.69 ppm H-3 có tương quan HMBC với một carbon bậc 3 nối oxy tại δ C 80.54 ppm, chỉ ra rằng đây là tín hiệu của C-2 Do đó, proton tại δ H 5.46 ppm được xác định là H-2 trên phổ HSQC.
Trên HMBC, proton δ H [7.73; d; 8.5 Hz] tương quan với carbon carbonyl (C-4), cho thấy đây là H-5 Proton ghép ortho với H-5 có δ H [6.57 (1H; dd; 8.0 Hz; 2.5 Hz)], được xác định là H-6, trong khi proton ghép meta với H-6 có δ H [6.42; d; 2.5 Hz], được xác định là H-8.
Như vậy nhóm thế -OH hẳn tại C-7 H-8 và H- 5 cho tương quan với hai carbon bậc bốn mang oxy δ C [165.37; 164.54], nên tín hiệu này lần lượt là C-7 và C-9
Proton H-6 và H-8 cho tương quan với một carbon bậc bốn δ C 115.20 ppm, nên tín hiệu này là C-10
Hình 3 5: Tương quan HMBC trong vòng A của hợp chất CFA-V
Các tín hiệu proton ghép ortho δ H [7.40; 2H; d; 9 Hz] và δ H [6.90; 2H; d; 8.5Hz] cho thấy chúng thuộc về vòng benzen 1,4 với cấu trúc đối xứng Điều này cho thấy vòng B có một nhóm thế -OH tại vị trí C-4’.
Trên phổ HMBC, tín hiệu proton [δH 7.40] cho tương quan với hai carbon sp 2 mang oxygen [δC 158.62] và một carbon sp 2 tứ cấp [δC 128.92] Tín hiệu proton [δH
6.90] cũng cho tương quan với hai carbon trên [δC 158.62 và 116.15] và carbon [δC
Tín hiệu proton δH 7.40 ppm tương ứng với H-2’ và H-6’, trong khi tín hiệu δH 6.90 ppm liên quan đến H-3’ và H-5’ Hai carbon sp² có giá trị δC lần lượt là 128.92; 158.62 và 131.31, tương ứng với C-2’, C-4’ và C-1’ Cuối cùng, tín hiệu δC 116.15 biểu thị cho C-3’.
13 tín hiệu carbon của khung flavone trên phổ 13 C NMR chỉ còn tín hiệu carbon δC h
Carbon có nồng độ 103.70ppm cho thấy đây là C-8 Tương quan HMBC trong vòng B của CFA-V được thể hiện qua hình 3.3 Phổ HMBC cho thấy mối liên hệ giữa H-2’/H-6’ và H-3’/H-5’, cùng với carbon bậc 4 mang oxy có δ c 158.62, xác định đây là C-4’.
Hình 3 6 : Tương quan HMBC trên vòng B của hợp chất CFA-V
Phân tích tín hiệu proton của nhóm methylen trên C-3, proton δ H [3.06 (1H; dd;
16 Hz; 13 Hz)] là proton H-3a, proton δ H [2.69 (1H; dd; 16.5Hz; 3.0Hz)] là proton H-
Với hằng số ghép J.0 (ghép aa) của H-3a và J=3.0 (ghép ae) của H-3e, H-2 chắc chắn nằm ở vị trí trục (ghép spin mạnh), trong khi vòng benzen ở vị trí xích đạo Do đó, cấu hình của C-2 là S.
Hình 3 7: S ự ghép spin giữa các proton trong vòng C của hợp chất CFA-V h
Từ các dữ liệu phổ và tài liệu tham khảo, có thể kết luận hợp chất CFA=V thu được là Liquiritigenin
Liquiritigenin có tác dụng chống lại sự nhiễm độc kim loại nặng (Cd) trong máu
Ngoài ra, liquiritigenin còn có khả năng bảo vệ gan, ngăn chặn ung thư gan
Bảng 3 2: Bảng so sánh số liệu phổ 1 H-NMR và 13 C-NMR của CFA-V với số liệu phổ 1 H-NMR và 13 C-NMR của liaquiritigenin [4]