(Luận văn thạc sĩ) khảo sát thành phần hóa học của loài địa y parmotrema sp thu hái ở bình thuận

ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HÓA HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP h KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA LỒI ĐỊA Y PARMOTREMA sp THU HÁI Ở BÌNH THUẬN GVHD : Th.s HỒ XUÂN ĐẬU SVTH : PHẠM THỊ NGỌC OANH MSSV : 35106037 TP Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2013 MỤC LỤC MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ ĐỊA Y 1.2 MƠ TẢ LỒI ĐỊA Y CHƯA XÁC ĐỊNH PARMOTREMA sp 1.3 CÁC NGHIÊN CỨU HÓA HỌC CỦA ĐỊA Y THUỘC CHI PARMOTREMA CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 16 2.1 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 16 2.2 ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO 16 CHƯƠNG 3: NGHIÊN CỨU VÀ KẾT QUẢ 19 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT PAR 19 h 3.2 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT Par 21 3.3 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT Par-H1 23 3.4 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT Par-H2 24 KẾT LUẬN 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO 27 LỜI MỞ ĐẦU Ngay từ thời trung đại, nhiều người làm nghề y sử dụng loài địa y làm thuốc chữa bệnh như: Lobaria pulmonaria chữa bệnh phổi, Parmelia sulcata chữa bệnh sọ não[1], …Ngày địa y sử dụng làm số loại thuốc dân gian Người da đỏ Florida người Trung Quốc sử dụng số loại địa y khác làm thuốc, đặc biệt thuốc long đờm[1] Ahmadjian Nilsson[2] công bố địa y Cetraria islandica bán rộng rãi tiệm bào chế thuốc Thụy Điển dùng để điều trị bệnh đái tháo đường, bệnh phổi bệnh viêm mũi Peltigera canina sử dụng Ấn Độ dược phẩm làm giảm đau gan[1] Ngồi cơng dụng chữa bệnh, địa y sử dụng làm thực phẩm, mỹ phẩm, xà phòng, nước hoa Các loại hợp chất khác dẫn suất depside chiết từ chi Evernia, Parmelia Ramalina, số có mùi hương hấp dẫn dùng xà phòng nước hoa Đặc biệt, địa y xem chất thị sinh học cho ô nhiễm môi trường Với cơng dụng đó, địa y nhiều nhà hóa dược nghiên cứu, nhiều hợp chất h tự nhiên cô lập số xác định có hoạt tính kháng khuẩn, kháng ung thư, kháng virut, giảm đau, hạ sốt[3,4] , … Địa y thực vật bậc thấp, kết cộng sinh tảo nấm Nhờ dạng sống này, địa y sống nhiều nơi đất, đá, thân cây, điều kiện khác nghiệt khô hạn vùng nhiệt đới Ở Việt Nam, người ta dễ dàng tìm thấy có mặt địa y nơi quen thuộc với phân bố phong phú đa dạng Vậy mà từ trước đến Việt Nam chưa có tác giả nghiên cứu hóa học ứng dụng địa y Để góp phần vào phát triển khoa học Việt Nam, lựa chọn loại địa y thuộc chi Parmotrema thu hái huyện Hàm Thuận Nam, tỉnh Bình Thuận CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ ĐỊA Y Địa y, dạng thực vật bậc thấp đặc biệt, kết cộng sinh nấm (mycobiont) thành phần quang hợp (photobiont) thường tảo (green alga) hay vi khuẩn lam (cyanobacterium) Khoảng 17.000 loài địa y biết Địa y thường chia làm ba dạng chính: dạng khảm (crustose), dạng phiến (foliose) dạng sợi (frucose) Xanthoria sp., địa y khảm đá núi lửa miệng núi lửa Idaho, USA Xanthoparmelia cf lavicola, Địa y sợi Hypogymnia cf địa y phiến, đá bazan tubulosa với Bryoria sp Tuckermannopsis sp miền núi Canada h Hình 1: Ba dạng địa y Thành phần tảo địa y sản sinh carbohydrate trình quang hợp, thành phần nấm sản sinh hợp chất tự nhiên (để chống tia UV, ngăn chặn sâu bọ loài động vật ăn cỏ, …), cung cấp nước khoáng chất Kết từ cộng sinh giúp địa y sinh trưởng sống sót điều kiện khắc nghiệt, chủ yếu vùng vĩ độ cao, vùng nhiệt đới, diện khắp nơi đá, đất, cây, thân cây, kim loại, thủy tinh 1.2 MÔ TẢ LỒI ĐỊA Y CHƯA XÁC ĐỊNH PARMOTREMA sp • Địa y mọc đá núi Tà Cú, độ cao 1.000 mét so với mực nước biển, huyện Hàm Thuận Nam, tỉnh Bình Thuận.(Hình 1) Trang Hình 2:Tản địa y Parmotrema sp • Tên khoa học địa y xác định thuộc chi Parmotrema chưa xác định loài Mẫu gửi thạc sĩ Võ Thị Phi Giao tiến sĩ Harrie J M Sipman để giúp xác định tên khoa học • Mẫu ký hiệu US-B026, lưu tiêu thực vật, mơn Hóa hữu cơ, khoa Hóa, trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên TP.HCM 1.3 HOẠT TÍNH CỦA CÁC HỢP CHẤT TỪ ĐỊA Y 1.3.1 Hoạt tính điều tiết tăng trưởng thực vật bậc cao[5] Địa y hợp chất địa y Barbatic acid, 4-Odemethylbarbatic acid, diffractaic acid, evernic acid, lecanoric acid, β-orcinolcarboxylic acid, orsellinic acid Ức chế tăng trưởng rau diếp h Ergochrome AA (secalonic acid A) Hoạt tính Gây độc cho thực vật Evernic acid Giảm nồng độ chất diệp lục rau bina Lecanoric acid Nguyên nhân gây bất thường cho gốc Allium cepa Các hợp chất phenol đơn vịng Hoạt tính ức chế độc chất thực vật Các quinone từ Pyxine sp Ức chế nguyên phân rễ Allium cepa Usnic acid Ức chế mầm phát triển Lepidium sativum 1.3.2 Hoạt tính kháng virus hợp chất địa y[5] Hợp chất Virus enzyme virus Depsidone: virensic acid dẫn xuất Hệ enzyme đặc hiệu đính thể nguyên thực khuẩn vào nhiễm sắc thể virus HIV Butyrolactone acid: protolichesterinic acid Sao chép ngược HIV Trang (+)-Usnic acid depside khác Virus Epstein-Barr (EBV) Emodin, 7-Cloroemodin, 7Chloro-1-O-methylemodin, 5,7Dichloroemodin, Hypericin HIV, cytomegalovirus virus khác 1.3.3 Hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm hợp chất địa y[5] Hợp chất Usnic acid dẫn xuất Vi khuẩn Vi khuẩn gram (+), Bacteroides spp., Clostridium perfringens, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus spp., Enterococcus spp., Mycobacterium aurum Helicobacter pylori Methyl orsellinate, Ethyl orsellinate, Methyl β-orsellinate, Methyl haematommate Epidermophyton floccosum, Microsporum canis, M gypseum, Trichophyton rubrum, T mentagrophytes, Verticillium achliae, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Candida albicans Alectosarmentin Staphylococcus aureus, Mycobacterium smegmatitis h Protolichesterinic acid 1´-Chloropannarin, Pannarin Leishmania spp Emodin, Physcion Bacillus brevis Pulvinic acid dẫn xuất Drechslera rostrata, Alternaria alternata Vi khuẩn hiếu khí vi khuẩn kỵ khí Leprapinic acid dẫn xuất Vi khuẩn Gram (+) Gram (-) 1.3.4 Các loại enzyme bị ức chế hợp chất địa y[5] Hợp chất địa y Enzyme bị ức chế Atranorin Trypsin, Pankreaselastase, Phosphorylase Baeomycesis acid 5-Lipoxygenase Bis-(2,4-dihydroxy-6-npropylphenyl)methane, Divarinol, cao chiết từ Cetraria juniperina, Hypogymnia physodes Letharia vulpina Tyrosinase Chrysophanol Glutathione reductase Trang Confluentic acid, 2β-OMethylperlatolic acid Monoaminoxidase B 4-O-Methylcryptochlorophaeic acid Prostataglandinsynthetase (+)-Protolichesterinic acid 5-Lipoxygenase (Sao chép ngược HIV) Vulpinic acid Phosphorylase Norsolorinic acid Monoamino oxidase Physodic acid Arginine decarboxylase Usnic acid Ornithine decarboxylase 1.3.5 Hoạt tính kháng ung thư kháng đột biến hợp chất địa y[5] Hoạt tính loại tế bào (-)-Usnic acid Kháng ung thư phổi Lewis, ung thư bạch cầu P388, ức chế phân bào, có hoạt tính chống lại tế bào sừng hóa HaCaT Protolichesterinic acid Có hoạt tính chống lại tế bào ung thư bạch cầu K-562 khối u rắn Ehrlich Pannarin, 1-Chloropannarin, Sphaerophorin Gây độc cho trình tái tạo lympho bào Naphthazarin Có hoạt tính chống lại dịng tế bào sừng hóa Scabrosin ester dẫn xuất, Euplectin Gây độc chống lại tế bào murine P815 mastocytoma dòng tế bào khác Hydrocarpone, Salazinic acid, Stitic acid Có hoạt tính với nhân tế bào gan chuột Psoromic acid, Chrysophanol, Emodin dẫn xuất Có hoạt tính chống lại tế bào ung thư bạch cầu 1.3 h Hợp chất CÁC NGHIÊN CỨU HÓA HỌC CỦA ĐỊA Y THUỘC CHI PARMOTREMA Các hợp chất theo qui trình sinh tổng hợp polyketid Các acid béo Năm 2001, Sassaki GL[6] lập acid béo số lồi địa y thuộc chi Parmotrema 9-oxodecanoic acid (1), Trang 9-metyltetradecanoic acid (2), 6- metyltetradecanoic acid (3), 3-hydroxydecanoic acid (4), nonanedioic acid (5) decanedioic acid (6) Các acid béo vòng Năm 1990, F David[7] cộng cô lập praesoredioic acid (7) protopraesorediosic acid (8) từ Parmotrema praesorediosum Ngồi ra, từ chi Parmotrema cịn phân lập lichesterinic acid (9) protolichesterinic acid (10) Các hợp chất phenol đơn vòng Cũng năm này, Irma S Rojas[8] cơng bố có mặt orcinol (11), metyl-βorsellinate (12) metyl haematommate (13) Parmotrema tinctorum (Nyl.) Hale Năm 2000, từ địa y Parmotrema stuppeum (Nyl.) Hale, Javaprakasha G K.[9] cô lập orsenillic acid (14) metyl orsenillate (15) Depside Năm 1999, Laily B Din[10] cơng bố lồi địa y thuộc chi Parmotrema có chứa hàm lượng lớn hợp chất bậc hai bao gồm depside h loại ester tạo thành liên kết hai hay nhiều phân tử phenolcarboxylic acid atranorin (16) cloroatranorin (17) Năm 2002, Alcir Teixeira Gomes cộng sự[12] cô lập lecanoric acid (18) từ Parmotrema tinctorum (Nyl.) Hale Depsidone Trong lồi địa y thuộc chi Parmotrema có mặt depsidone[6,10,12,13] sau malonprotocetraric acid (19), protocetraric acid (20), furmaprotocetraric acid (21), succinprotocetraric acid (22), salazinic acid (23), consalazinic acid (24), α-collatolic acid (25), dehydrocollatolic acid (26), alectoronic acid (27), norstictic acid (28), hypostitic acid (29) Xanthone Theo N K Honda cộng cô lập xanthone lichenxanthone (30) secalonic acid (31) Parmotrema dilatatum, Parmotrema lichnxanthonium Parmotrema sphaerospora[14] Trang 10 Các hợp chất theo qui trình sinh tổng hợp mevalonic acid Năm 1993, Bazyli Czeczuga[16] nhận danh 17 carotenoid có mặt Parmotrema tinctorum dựa vào kỉ thuật HPLC so sánh với phổ IR α-carotene (33), βcarotene (34), β-eryptoxanthin (35), lutein (36), 3’-epilutein (38), zeaxanthin (39), luteinepoxide (40), antheraxanthin (41), violaxanthin (42), mutatoxanthin (43), flavoxanthin (44), echinenone (45), canthaxanthin (46), astaxanthin (47), neoxanthin (48), capsochrome (49), β-citraurin (50) Các hợp chất tạo nên trình sinh tổng hợp tảo Năm 2005, Elaine R.Carbonero[16], nhà hóa học Brazil, định danh hai glucan với tên nigeran [(1 → 3), (1 → 4) - α - glucan] lichenan [(1 → 3), (1 → 4) - β glucan] Parmotrema austrosinense, Parmotrema delicatulum, mantiqueirense, Parmotrema schindleri Parmotrema tinctorum h Trang 11 Parmotrema Công thức hóa học hợp chất O 14 13 11 COOH 10 CH3 COOH - Oxodecanoic acid (2) - Metyltetradecanoic acid (1) CH3 14 13 11 10 COOH COOH OH - Metyltetradecanoic acid (3) HO OC - Hydroxydecanoic acid (4 ) COOH HOOC O COOH Praesorediosic acid (7) O (CH2)14 COOH Protopraesorediosic acid (8) COOH H3C COOH H2C (CH2)14 O Decanedioic acid (6) COOH O COOH Nonanedioic acid (5) H3C COOH H2C h O O (CH2)12 O CH3 (CH2)12 O Protolichesterinic acid (10) Lichesterinic acid (9) CH3 CH3 COOCH3 HO COOCH3 OH HO OH CHO CH3 Metyl β - orcinol carboxylat ( 12) Metyl haematommate (13) CH3 CH3 CH3 COOCH3 COOH HO CH3 OH HO OH HO OH CH3 Orsellinic acid (14) Orcinol (11) Trang 12 Metyl orsellinate (15) 6.83 s 10.59 s 2.43 s 4.60 s 2.40 s / 112.4 161.2 111.8 163.8 118.6 152.0 164.0 191.7 21.3 116.6 155.0 117.6 144.5 141.7 129.4 170.1 52.9 14.3 3, 4, 6.83(s) 3,4 1,5,6 10.58(s) 2.42(s) 2’,3’,4’ 1’,5’,6’ 4.60 2.40 3.22 112.5 161.5 112.5 164.4 117.6 152.3 164.6 192.0 21.8 116.5 155.9 116.3 146.0 142.6 131.4 170.8 62.8 15.0 57.9 3,4,8 3,4 1,5,6 2’,3’,4’,10’ 1’,5’,6’ 8’` 2/ 3/ 4/ h 5/ 6/ 7/ 8/ 9/ 10/ 3.3 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT Par-H1 Phổ 1H-NMR (phụ lục 8) Biện luận cấu trúc Phổ 1H-NMR thấy có tín hiệu proton thuộc vòng thơm δ 6.51 , δ 6.40 (1H, s, 5-H 5’-H) Trang 23 Ngồi phổ 1H-NMR cịn cho thấy tín hiệu proton aldehyd [δ 10.36 (1H, s)], nhóm proton nhóm metoxy [δ 3.98 (3H, s)], nhóm hydroxy kiềm nối [δ 12.53, 12.47 11.91 (1H , s, 4-OH, 2-OH 2’-OH)] nhóm metyl [2.69 (3H, s), 2.54 (3H, s), 2.09 (3H, s) Từ kết thu theo tài liệu tham khảo[10], cấu trúc hợp chất Par-H1 đề nghị atranorin CH3 O CH3 O OCH3 O OH CH3 OH HO CHO atranorin 3.4 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA HỢP CHẤT Par-H2 Hợp chất Par-H2 cô lập từ phân đoạn T , chất rắn không màu Phổ 1H-NMR (phụ lục 9) h Biện luận cấu trúc Phổ 1H-NMR thấy có tín hiệu proton thuộc vòng thơm δ 6.29(1H, s, 5-H) Ngồi phổ 1H-NMR cịn cho thấy tín hiệu proton aldehyd [δ 10.34 (1H, s), 3CH=O], nhóm metoxy [δ 3.96 (3H, s), -OCOCH ], nhóm hydroxy kiềm nối [δ 12.86 (s, 2-OH), 12.40 (s, 4-OH)] Từ kết thu theo tài liệu tham khảo[8], cấu trúc hợp chất Par-H2 đề nghị methyl haematommate CH O OCH HO OH CHO methyl haematommate Bảng 3: Số liệu phổ hợp chất Par-H1 Par-H2 Vị trí Hợp chất Par-H1 Hợp chất Par-H2 δH δH Trang 24 10 1/ 2/ 3/ 4/ 5/ 6/ 7/ 8/ 9/ 10/ 4-OH 2-OH 2/-OH 6.40 s 6.29 s 10.36 s 2.69 s 10.34 s 2.53 s 3.96 s 6.51 s 2.09 s 2.54 s 3.98 s 12.52 s 12.48 s 11.91 s h Trang 25 12.85 12.40 KẾT LUẬN Từ mẫu địa y Parmotrema sp thu hái núi Tà Cú, huyện Hàm Thuận Nam, tỉnh Bình Thuận, Việt Nam Sau làm sạch, phơi khô, xay nhuyễn thu 1kg mẫu Tiến hành điều chế cao metanol thô Sử dụng phương pháp ngâm dầm dung môi metanol, giải ly đơn dung môi với độ phân cực tăng dần thu loại cao như: cao eter dầu hỏa, cao ethyl acetate, cao cloroform, cao methanol Tiến hành sắc ký cột cao methanol thu thu phân đoạn phần dịch phần tủa Từ phân đoạn tủa (10g) sắc kí cột thu ba phân đoạn( T -T -T ) Tiếp tục thực sắc kí cột silica phân đoạn T , thu hai chất kí hiệu Par-H1 Par- H2 Với phân đoạn T thực sắc ký lớp mỏng điều chế thu hai chất kí hiệu Par Par Sử dụng phương pháp quang phổ đại so sánh với tài liệu tham khảo, xác định cấu trúc hai hợp chất hữu cô lập địa y Parmotrema sp hình h CH3 O CH3 O CH2OH O HO OH O CHO O HO Acid protocetraric OH O CHO COOH H 3C CH2OCH3 H 3C COOH Acid 8’-O-methylprotocetraric CH3 O CH3 O CH3 O CH3 HO OH CHO OCH3 O OH HO O CH3 CHO Methyl haematomme atranorin HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO CỦA ĐỀ TÀI Trang 26 Vì điều kiện thời gian vật chất không cho phép, nên phạm vi đề tài này, khảo sát cao methanol Trong thời gian tới, có điều kiện tiến hành khảo sát hợp chất lại cao lại Đồng thời tiến hành thử nghiệm số hoạt tính sinh học loại cao hợp chất cô lập TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] E J W Barrington, Arthur J.Willis, The biology of lichens: Contemporary biology, 2nd edition, Edward Arnold, London (1974) [2] Ahmadjian V.; Nilsson S, Swedish Lichens.Yb Am Swed Hist Fdn (1963) [3] B C Behera, Neerja Verma, Anjari Sonone, Urmila Markhija, “Antioxidant and antibacterial properties of some cultured lichens”, Bioresource Technology, 99, 776-784 (2008) [4] Muhammad I Choudhary, Azizuddin Saima Jalil, Atta-ur-Rahman, “Bioactive phenolic compounds from a medicinal lichen, Usnea longissima”, Phytochemistry, 66, 2346-2350 (2005) h [5] Yit Heng Choi (2008), Generic potential of lichen-forming fungi in Polyketide biosynthesis, A thesis for Doctor of Philosophy, RMIT University [6] N K Honda, F R Pavan, R G Coelho, S R De AndradeLeite, A C Micheletti, T I B Lopes, M Y Misutsu, A Beatriz, R L Brum, C Q F Leite, Antibacterial activity of lichen substances, Phytomedicine, 1-5 (2009) [7] F David, J.A Elix and M.W.Binsamsudin, Two new aliphatic acids from the lichen Parmotrema praesorediosum (Nyl.) Hale, Aust J Chem, 43, 1297-1300 (1990) [8] Irma S.Rojas, Blas Lotina-Hennsen, Rachel Mata, “Effect of lichen metabolites on thylakoid electron transport and photophosphorylation in isolated spinach chloroplasts”, J Nat Prod, 63, 1396-1399 (2002) [9] Marion Millot, Sophie Tomasi, Sourisak Sinbandhit, Joel Boustie, Phytochemical investigation of Tephromela atra: NMR studies of collatolic acid derivatives, Phytochemistry Letters, 1, 139-143 (2008) Trang 27 [10] Porntep C., Suthep W., Nongluksna S., Nattaya N., Aromatase inhibitory, radical scavenging, and antioxidant activities of depsidones and diaryl ethers from endophytic fungus Corynespora cassiicola L36, Phytochemistry, 70, 407-413 (2009) [11] Lai Yeap Foo, David J Galloway, Pseudodepsidones and other constituents from Xanthoparmelia scabrosa, Phytochemistry, 18, 1977-1980 (1979) [12] Peter Fiedler, Vicente Gambaro, Juan A Garbarino, Wanda Wilhot, Epiphorellic acids and 2, two diaryl ethers from the lichen Cornicularia epiphorella, Phytochemistry, 25, 461-465 (1986) PAR H1-CDCL3-1H [13] Changon Seo, Jae Hak Sohn, Jong Seog Ahn, Joung Han Yim, Hong Kum Lee, Hyuncheol Oh, Protein tyrosine phosphatase 1B inhibitory effects of depsidones and pseudodepsidone metabolites from the Antarctic lichen Stereocaulon apinum, Bioorganic & CH3 O Medicinal Chemistry Letters, 19,CH 2801-2803 (2009) O O O CH2OCH3 CH2OCH3 [14] Vo Thi Phi Giao (2003), Crustose lichens in Binh Chau-Phuoc Buu Nature HO O OH OH Reserive: taxonomy and HO ecology, Biological master dissertation,CHO University of Natural O CHO Sciences Ho Chi Minh city, Vietnam H 3C COOH H 3C COOH h [15] Elaine R Carbonero, Anderson V Montai, Caroline G Mellinger, Sionara Eliasaro, Guiherme L.Sassaki, Philip A.J.Gorin and Marcello lacomini (2005), “ Glucans of lichenized fungi: significance for taxonomy of the genera Parmotrema and Rimelia”, Phytochemistry, 66, 929-934 [16] Alcir Teixeira Gomes, Neli K Honda, Fernanda Mesquita Roese, Rozanna M Muzzi, Maria Rita Marques (2002), “Bioactive derivatives obtained from lecanoric acid, a constituent of the lichen Parmotrema tinctorum (Nyl.) Hale”, Rev Bras.Farmacogn., 12, 74-75 [17] John A Elix and Judith H Wardlaw, 1999 The Structure of Chalybaeizanic Acid and Quaesitic Acid, Two New Lichen Depsidones Related to Salazinic Acid, Aust J Chem., 52, 713–715 [18] Thiago I B Lopes, Roberta G Coelho, Nídia C Yoshida, Neli K Honda, Radicalscavenging activity of orsellinates, Chem Pharm Bull., 56, 1551-1554, 2008 Trang 28 CH3 O O HO O CHO H 3C CH2OH OH COOH h Phụ lục 1: Phổ 1H-NMR hợp chất Par CH3 O O HO O CHO H 3C CH2OH OH COOH h Phụ lục 2: Phổ 1C-NMR hợp chất Par CH3 O O HO OH O H 3C COOH h CHO CH2OH Phụ lục 3: Phổ HSQC hợp chất Par CH3 O O HO O CHO OH COOH h H 3C CH2OH Phụ lục 4: Phổ HMBC hợp chất Par CH3 O O HO O CHO H 3C CH2OCH3 OH COOH h Phụ lục 5: Phổ 1H-NMR hợp chất Par CH3 O O HO O CHO H 3C CH2OCH3 OH COOH h Phụ lục 6: Phổ 13C-NMR hợp chất Par CH3 O O HO OH O CHO CH2OCH3 COOH h H 3C Phụ lục 7: Phổ HMBC hợp chất Par PAR H2-CDCL3-1H CH3 O CH3 HO OH CHO h Phụ lục 9: Phổ 1H-NMR hợp chất Par-H2 PAR H1-CDCL3-1H CH3 O CH3 O OCH3 O HO OH OH CH3 CHO h Phụ lục 8: Phổ 1H-NMR hợp chất Par H1