(Luận văn) khảo sát thành phần hóa học của loài nấm cordyceps neovolkiana

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC BỘ MƠN HĨA HỌC HỮU CƠ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP lu an n va tn to p ie gh KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA LỒI NẤM CORDYCEPS NEOVOLKIANA d oa nl w nf va an lu ThS Dương Thúc Huy z at nh oi lm ul GVHD: ThS Lê Thị Thu Hương SVTH: Lê Tấn Lộc MSSV: K38.106.069 z co l gm @ m Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2016 an Lu n va ac th si TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC BỘ MƠN HĨA HỌC HỮU CƠ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP lu an n va p ie gh tn to KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA LỒI NẤM CORDYCEPS NEOVOLKIANA d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul GVHD: ThS Lê Thị Thu Hương ThS Dương Thúc Huy SVTH: Lê Tấn Lộc z m co l gm @ MSSV: K38.106.069 an Lu n va Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2016 ac th si NHẬN XÉT CỦA HỘI ĐỒNG lu an va n to gh tn p ie w oa nl d lu nf va an lm ul z at nh oi z gm @ l m co an Lu n va ac th si LỜI CẢM ƠN Bằng tất trân trọng lòng biết ơn, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến với: Cô Lê Thị Thu Hương thầy Dương Thúc Huy – thầy cô đầy tâm huyết nhiệt tình Thầy, khơng dạy cho em kiến thức chuyên môn với kinh nghiệm nghiên cứu quý báu mà giúp đánh thức niềm say mê nghiên cứu khoa học em suốt thời gian cô hướng dẫn Tất quý Thầy khoa Hóa, trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh tận tình truyền đạt kiến thức quý báu suốt thời gian em theo học hồn thành khóa luận lu Các anh chị học viên cao học bạn sinh viên mơn Hóa Hữu cơ, khoa an n va Hóa học, trường Đại học Sư Phạm Thành phố Hồ Chí Minh động viên, giúp đỡ Và cuối xin cảm ơn gia đình – chỗ dựa vững tinh thần gh tn to suốt trình thực đề tài p ie suốt thời gian theo học thực đề tài trường Đại học Sư Phạm Thành phố Hồ d oa nl w Chí Minh nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va i ac th si MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, BẢNG BIỂU iv DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC PHỔ v LỜI MỞ ĐẦU vi CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN lu an 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CHI CORDYCEPS n va 1.1.1 Định nghĩa phân loại chi Cordyceps tn to 1.1.2 Hoạt tính hợp chất có chi Cordyceps .1 ie gh 1.2 NHỮNG NGHIÊN CỨU HÓA HỌC CỦA CÁC LOÀI NẤM THUỘC CHI CORDYCEPS .1 p CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM nl w 2.1 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ oa 2.1.1 Hóa chất d 2.1.2 Thiết bị lu nf va an 2.2 NGUYÊN LIỆU 2.3 QUY TRÌNH THỰC NGHIỆM lm ul 2.3.1 Rửa tủa phân đoạn cao A1 .8 z at nh oi 2.3.2 Sắc ký cột phân đoạn cao A3 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .10 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT T3 10 z @ 3.2 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT TT1 12 l gm CHƯƠNG : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 15 4.1 KẾT LUẬN 15 co m 4.2 KIẾN NGHỊ 15 an Lu TÀI LIỆU THAM KHẢO 16 PHỤ LỤC n va ii ac th si MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 13 C-NMR : Carbon Nuclear Magnetic Resonance H-NMR : Proton Nuclear Magnetic Resonance Ac : Acetone AcOH : Acetic acid C : Chloroform COSY : Homonuclear shift correlation spectroscopy d : Mũi đôi (Doublet) Mũi đôi đôi (Doublet of duoblet) dd lu an n va DMSO : Dimethyl sulfoxide EA : Ethyl acetate H : Hexane to : Heteronuclear Multiple Bond Coherence gh tn HMBC HSQC ie : Mũi đa (Multiplet) w : Methanol oa nl Me m : Hằng số tương tác spin-spin p J : Heteronuclear Single Quantum Correlation : Cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance) ppm : Part per million s : Mũi đơn (Singlet) t : Mũi ba (Triplet) UV : Tia cực tím (ultra violet) d NMR nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va iii ac th si DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, BẢNG BIỂU Hình 1.1: Polysaccharide xác định Yu cộng sự, 2009 Hình 1.2: Các hợp chất lập từ lồi nấm thuộc chi Cordyceps Hình 3.1: Khung Ergostane 10 Hình 3.2: Tương quan HMBC phần aglycon hợp chất T3 11 Hình 3.3: Cấu trúc hợp chất T3 .12 Hình 3.4: Cấu trúc hợp chất TT1 13 Hình 4.1: Cấu trúc hợp chất T3 hợp chất TT1 15 lu Sơ đồ 2.1: Quy trình lập hợp chất T3 TT1 an n va Bảng 2.1 : Phân đoạn cao methanol thô tn to Bảng 3.3: Dữ liệu phổ NMR hợp chất T3, ergosterol 3-O-β-D-glucopyranoside, TT1 ergosterol 14 p ie gh d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va iv ac th si DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC PHỔ Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất T3 dung môi DMSO-d Phụ lục Phổ 13C hợp chất T3 dung môi DMSO-d Phụ lục Phổ HSQC hợp chất T3 dung môi DMSO-d Phụ lục Phổ HMBC hợp chất T3 dung môi DMSO-d Phụ lục Phổ COSY hợp chất T3 dung môi DMSO-d Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất TT1 dung môi CDCl lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va v ac th si LỜI MỞ ĐẦU Cùng với phát triển Y học nói chung Y học dân tộc nói riêng xu hướng quay sản phẩm thuốc có nguồn gốc từ tự nhiên, vừa mang lại hiệu cao vừa tác dụng phụ Nghiên cứu hợp chất thiên nhiên đóng góp thành tựu quý báu cho ngành Hóa học ngành Sinh học Y dược học Sự kết hợp chứng khoa học từ lĩnh vực nghiên cứu hợp chất thiên nhiên hoạt tính sinh học góp phần củng cố phát triển Y học cổ truyền Từ thời xa xưa loài nấm thuộc chi Cordyceps xem nguồn nguyên liệu quý, thuốc quý y học để giúp người chữa bệnh Phổ biến loại nấm lu Cordyceps sinensis (còn gọi Đông Trùng Hạ Thảo) Những nghiên cứu gần an n va cho biết polysaccharide diện C sinensis thể đa dạng hoạt tính to sinh học kháng oxi hóa, ức chế miễn dịch chống xơ vữa động mạch, gh tn nucleoside mang đa tác dụng macrophage cordycepin có hoạt tính ức chế phát p ie triển khối u ức chế miễn dịch Vì thế, lồi nấm thu hút nhiều nhà nghiên cứu năm gần dựa giá trị dinh dưỡng dược học Tuy nhiên, nguồn nl w cung cấp tự nhiên loài nấm giảm dần mơi trường sống khắc nghiệt d oa khai thác mức nguồn nguyên liệu Gần đây, vài loài nấm thuộc chi an lu Cordyceps chiết tách ni cấy phịng thí nghiệm[25] Tuy nhiên số nf va nguyên cứu gần chứng tỏ có khác thành phần hàm lượng hợp chất hóa học nấm tự nhiên nấm nuôi cấy lm ul Xuất phát từ ứng dụng Y học quý giá kế thừa kết nghiên z at nh oi cứu nước chi Cordyceps, tiến hành nghiên cứu thành phần hóa học lồi nấm Cordyceps neovolkiana z m co l gm @ an Lu n va vi ac th si Khóa Luận Tốt Nghiệp Lê Tấn Lộc CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CHI CORDYCEPS 1.1.1 Định nghĩa phân loại chi Cordyceps Các lồi nấm thuộc chi Cordyceps gồm có C sinensis, C militaris, C pruinosa C ophioglossoides nguồn nguyên liệu quý dược học Thành phần dược liệu lồi nấm khơ thuộc chi Cordyceps phát triển ấu trùng Trong đó, phổ biến lồi nấm Cordyceps sinensis, gọi với tên Đông Trùng Hạ Thảo (Tiếng Trung lu an Quốc, Dong-Chong-Xia-Cao hay Tochukaso, tiếng Nhật) Tên gọi bắt nguồn từ n va thay đổi theo mùa Vào mùa đơng, ấu trùng nhiễm nấm chuyển thành sâu trùng có hình dáng giống cỏ nên gọi Hạ Thảo Ở Trung Quốc, vị thuốc gh tn to sống đất gọi Đông Trùng Khi sang hè, stroma phát triển đầu ấu p ie có nguồn gốc hàng ngàn năm [22] 1.1.2 Hoạt tính hợp chất có chi Cordyceps oa nl w Thành phần hóa học chi Cordyceps tìm thấy gồm có cordycepin (30deoxyadenosin) dẫn xuất, ergosterol, polysaccharide, glycoprotein peptides có d ung thư, kháng va kháng an lu chứa thành phần aminoisobutyric acid Các hợp chất có hoạt tính sinh học đột biến (anti-metastatic), ức chế miễn dịch ul nf (immunomodulatory), kháng oxy hóa, kháng viêm, diệt sâu bọ (insecticidal), kháng oi lm khuẩn, hạ lipit máu, hạ đường huyết, chống lão hóa, bảo vệ hệ thần kinh thận z at nh Những nghiên cứu gần cho biết polysaccharide diện C sinensis thể đa dạng hoạt tính sinh học : chống oxy hóa, ức chế miễn dịch, chống xơ z vữa động mạch, nucleoside mang đa tác dụng macrophage cordycepin có gm @ hoạt tính ức chế phát triển khối u ức chế miễn dịch CORDYCEPS Các hợp chất Cordycepin m co l 1.2 NHỮNG NGHIÊN CỨU HÓA HỌC CỦA CÁC LOÀI NẤM THUỘC CHI (3’-deoxyadenosine), 3’-amino-3’- an Lu deoxyadenosine, homocitrullyl aminoadenosine, adenine, cordycepic acid D- n va mannitol lập từ lồi nấm thuộc chi Cordyceps từ năm 1950 ac th si Khóa Luận Tốt Nghiệp Lê Tấn Lộc 7.5 Hz, chứng tỏ hai proton vị trí nhị trục giúp xác định đơn vị đường β-Dglucopyranose Phổ HSQC, HMBC kết hợp với phổ COSY giúp xác định vị trí lại phần đường β-D-glucopyranose Từ liệu phổ so sánh với liệu phổ ergosterol 3-O-β-Dglucopyranoside [31] Hợp chất T3 xác định ergosterol 3-O-β-D-glucopyranoside H CH3 H3C CH3 H CH3 lu OH an H H O va H O n HO HO H to H tn HO H H ie gh p Hình 3.3: Cấu trúc hợp chất T3 w nl 3.2 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT TT1 d oa Hợp chất TT1 (700.0 mg) thu được từ phân đoạn A1 có đặc điểm an lu sau: va  Chất bột vơ định hình màu trắng ul nf  Bắt UV, hình với thuốc thử vanillin/H SO cho vết màu tím oi lm  Phổ 1H-NMR (DMSO-d ) Phụ lục z at nh  Biện luận cấu trúc hợp chất phổ TT1 Phổ 1H-NMR cho thấy tín hiệu nhóm methyl H -18 (δ H 0.63, s), H -19 (δ H z 0.95, s), H -26 (δ H 0.83, d, 7.5 Hz), H -27 (δ H 0.84, d, 7.0 Hz), H -28 (δ H 0.92, d, 6.5 l cao đặc trưng cho khung sườn ergostane [1] gm @ Hz), H -21 (δ H 1.03, d, 6.5 Hz) Trong nhóm H -18 chuyển dịch vùng từ trường m co So sánh liệu phổ 1H-NMR TT1 với T3 cho thấy liệu phổ hai hợp an Lu chất hoàn toàn tương đồng với ngoại trừ biết phân tử đường β-Dglucopyranose vùng từ 3.00 ppm đến 5.00 ppm proton H-3 dịch chuyển vùng n va từ trường thấp Điều chứng tỏ hợp chất TT1 phần aglycon hợp chất T3 ac th 12 si Khóa Luận Tốt Nghiệp Lê Tấn Lộc Từ kiện phổ so sánh với liệu phổ ergosterol [7], hợp chất T1 kết luận ergosterol H CH3 H3C CH3 H HO CH3 H lu H an n va Hình 3.4: Cấu trúc hợp chất TT1 p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 13 si Khóa Luận Tốt Nghiệp Lê Tấn Lộc Bảng 3.1: Dữ liệu phổ NMR hợp chất T3, ergosterol 3-O-β-Dglucopyranoside[1],TT1 ergosterol[7] T3 N (*) δ H , J (Hz) lu an n va 3.56 (m) 5.52 (m) 5.33 (m) 0.57 (s) 0.86 (s) lu 135.3 (***) Ergosterol δ H , J (Hz) δ H , J (Hz) 3.64 (m) 3.63 (m) 5.57 (m) 5.38 (m) 5.57 (m) 5.39 (m) 0.63 (s) 0.95 (s) 0.82 (s) 0.84 (s) 2.26 (m) 1.04 (d) 5.17 (dd) 5.21 (dd) oi lm ul 0.83 (d, 7.5) 0.84 (d, 7.0) 0.92 (d, 6.5) z at nh 0.91 (d) 0.94 (d) 0.86 (d) z ghi DMSO; (**)ghi C5D5N5 (***)ghi CDCl3 m co l gm @ 42.0 32.5 19.7 19.6 17.3 100.9 73.5 76.7 70.1 76.7 61.1 61.1 (***) 1.03 (d, 6.5) 5.17 (dd , 15.0, 7.5) 5.23 (dd, 15.5, 7.5) nf 131.5 TT1 va an 0.80 (d, 7.0) 0.79 (d, 6.5) 0.87 (d, 7.0) 4.23 (d, 7.5) 2.98 (m) 3.07 (m) 3.12 (m) 3.00 (m) 3.63 (m) 3.40 (m) d 1.00 (d, 6.5) 5.17 (dd, 15.0, 8.0) 5.23 (dd, 15.5, 7.0) oa nl w (*) 24 25 26 27 28 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’A 6’B p 23 ie 22 gh tn to 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 δC 37.7 30.0 75.6 37.7 140.0 119.4 116.0 141.0 45.4 37.0 22.6 38.4 42.4 53.8 21.0 27.9 55.0 11.8 15.9 36.7 20.5 Ergosterol 3-O-β-D(**) glucopyranoside δ H , J (Hz) δC 38.0 30.6 4.06 (m) 76.8 38.0 140.2 6.64 (m) 120.1 6.46 (m) 117.0 141.0 46.4 37.5 21.3 39.3 43.0 54.8 23.4 28.7 55.8 0.66 (s) 12.2 0.95 (s) 16.4 40.8 1.09 (d, 6.8) 21.4 5.24 136.1 (dd, 15.6, 7.6) 5.30 132.5 (dd, 15.6, 7.6) 43.1 33.4 0.88 (d, 6.8) 19.9 0.89 (d, 6.8) 20.1 0.99 (d, 6.8) 17.9 5.05 (d, 7.3) 102.6 4.06 (m) 75.3 4.29 (m) 78.5 4.29 (m) 71.7 3.99 (m) 78.2 5.30 (m) 62.9 4.58 (m) 62.9 an Lu n va ac th 14 si Khóa Luận Tốt Nghiệp Lê Tấn Lộc CHƯƠNG : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 4.1 KẾT LUẬN Từ loài nấm Cordyceps neovolkiana, tiến hành điều chế thu cao ethanol thô Cao ethanol thơ hịa tan nhiều lần methanol, tách riêng phần kết tủa dịch methanol thơ Sau tiến hành phương pháp sắc ký cột sắc ký bảng mỏng cao methanol thô thu hợp chất T3 TT1 xác định ergosterol 3-O-β- lu D-glucopyranoside ergosterol an H CH3 va H3C H CH3 n H3C CH3 CH3 tn to H CH3 H gh OH H ie H O H p O HO HO H HO H H H H nl w HO H CH3 TT1 d oa T3 an lu Hình 4.1: Cấu trúc hợp chất T3 hợp chất TT1 oi lm ul nf va 4.2 KIẾN NGHỊ Vì điều kiện thời gian vật chất không cho phép, nên phạm vi đề tài z at nh này, khảo sát phân đoạn cao A1, A3 Trong thời gian tới, có điều kiện chúng tơi tiến hành khảo sát phân đoạn cao lại Đồng thời chúng z tiến hành thử nghiệm số hoạt tính sinh học loại cao hợp chất cô lập m co l gm @ an Lu n va ac th 15 si Khóa Luận Tốt Nghiệp Lê Tấn Lộc TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Ahmad V U., Basha A., “Spectroscopic data of steroid glycosides: Cholestanes, ergostanes, withanolides, stigmastane", Springer, New York, USA, pp 359–522, 2006 [2] Boros C., Hamilton S M., Katz B., Kulanthaivel P., “Comparison of balanol from Verticillium balanoides and ophiocordin from Cordyceps ophioglossoides”, J Antibiot (Tokyo), 47, 1010–1016, 1994 lu [3] Chatterjee R., Srinivasan K S., Maiti P C., “Cordyceps sinesis (Berkeley) an Saccardo: structure of cordycepic acid”, J Am Pharm Assoc Am Pharm Assoc n va (Baltimore), 46, 114–118, 1957 to tn [4] Cheung JK1, Li J., Cheung AW., Zhu Y., Zheng KY., Bi CW., Duan R., Choi ie gh RC., Lau DT., Dong TT., Lau BW., Tsim KW., “Cordysinocan, a polysaccharide isolated p from cultured Cordyceps, activates immune responses in cultured T-lymphocytes and Chun K Lob, Jerry K H Cheungb, Shang Q Zhub, Karl W K Tsimb, “A d [5] oa 61-8, 2009 nl w macrophages: signaling cascade and induction of cytokines”, J Ethnopharmacol., 124(1), lu va an polysaccharide isolated from Cordyceps sinensis, a traditional Chinese medicine, protects PC12 cells against hydrogen peroxide-induced injury, Life Sciences 73, 2503–2513”, nf oi lm [6] ul 2003 Cunningham K G., Manson W., Spring F S., Hutchinson S A., “Cordycepin, a 166, 949, 1950 z Huneck S., Yoshimura I., “Intendification of lichen substance”, Springer, Berlin, l [8] gm 391, 1997 @ [7] z at nh metabolic product isolated from cultures of Cordyceps militaris (Linn.) Link”, Nature, Isaka M., Kongsaeree P., Thebtaranonth Y., “Bioxanthracenes from the insect m co pathogenic fungus Cordyceps pseudomilitaris BCC 1620 II Structure elucidation.” , J an Lu Antibiot (Tokyo), 54, 36–43, 2001 n va ac th 16 si Khóa Luận Tốt Nghiệp [9] Lê Tấn Lộc Isaka M., Tanticharoen M., Kongsaeree P., Thebtaranonth Y., “Structures of cordypyridones A-D, antimalarial N-hydroxy- and N-methoxy-2-pyridones from the insect pathogenic fungus Cordyceps nipponica.”, J Org Chem., 66, 4803–4808, 2001 [10] Kaczka E A., Trenner N R., Arison B., Walker R W., Folkers K., “Identification of cordycepin, a metabolite of Cordyceps militaris, as 3’-deoxyadenosine”, Biochem Biophys Res Commun., 14, 456–457, 1964 [11] Kawaguchi N., Ohmori T., Takeshita Y., Kawanishi G., Katayama S., Yamada H., “Occurrence of Gal beta (1—3) GalNAc-Ser/Thr in the linkage region of polygalactosamine containing fungal glycoprotein from Cordyceps ophioglossoides”, lu an Biochem Biophys Res Commun., 140, 350–356, 1986 Kim K M., Kwon Y G., Chung H T., Yun Y G., Pae H O., Han J A., Ha K S., n va [12] tn to Kim T W., Kim Y M., “Methanol extract of Cordyceps pruinosa inhibits in vitro and in gh vivo inflammatory mediators by suppressing NF-kappaB activation”, Toxicol Appl Kim S W., Hwang H J., Xu C P., Sung J M., Choi J W., Yun J W., w [13] p ie Pharmacol., 190, 1–8, 2003 oa nl “Optimization of submerged culture process for the production of mycelial biomass and exo-polysaccharides by Cordyceps militaris C738”, J Appl Microbiol., 94, 120–126, d an Kim S W., Xu C P., Hwang H J., Choi J W., Kim C W., Yun J W., nf va [14] lu 2003 oi lm ul “Production and characterization of exopolysaccharides from an enthomopathogenic fungus Cordyceps militaris”, NG3 Biotechnol Progr., 19, 428–435, 2003 Krasnoff S B., Reátegui R F., Wagenaar M M., Gloer J B., Gibson D M., z at nh [15] “Cicadapeptins I and II: new Aib-containing peptides from the entomopathogenic fungus z Cordyceps heteropoda”, J Nat Prod 68: 5-50, 2005 @ Kneifel H., Konig W A., Loeffler W., Muller R., “Ophiocordin, an antifungal gm [16] Kredich N M., GuarinoA J., “Homocitrullyl amino adenosine, a nucleoside m co [17] l antibiotic of Cordyceps ophioglossoides Arch.”, Microbiol., 113, 121–130, 1977 isolated from Cordyceps militaris”, J Biol Chem., 236, 3300–3302, 1961 an Lu n va ac th 17 si Khóa Luận Tốt Nghiệp [18] Lê Tấn Lộc Li S P., Li P., Dong T T., Tsim K W., “Anti-oxidationactivity of different types of natural Cordyceps sinensis and cultured Cordyceps mycelia”, Phytomedicine, 8, 207– 212, 2001 [19] Li S P., Li P., Dong T T., Tsim K W., “Determination of nucleosides in natural Cordyceps sinensis and cultured Cordyceps mycelia by capillary electrophoresis”, Electrophoresis, 22, 144–150, 2001 [20] Li S P., Li P., Lai C M., Gong Y X., Kan K K., Dong T T., Tsim K W., Wang Y T., “Simultaneous determination of ergosterol, nucleosides and their bases from natural and cultured Cordyceps by pressurised liquid extraction and high-performance lu an liquid chromatography”, J Chromatogr A, 1036, 239–243, 2004 Liu J M., Zhong, Y R., Yang Z., Cui S L., Wang F H., “Chemical constituents n va [21] [22] Methacanon P., Madla S., Kirtikara K., Prasitsil M., “Structural elucidation of gh tn to of Cordyceps militaris (L.) Link.”, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 14, 608–609, 1989 Ng T B., Wang H X., “Pharmacological actions of Cordyceps, a prized folk w [23] p ie bioactive fungi-derived polymers”, Carbohydrate Polymers, 60, 199–203, 2005 [24] oa nl medicine”, Journal of Pharmacy and pharmacology, 57, 1509–1519, 2005 Rongmin Yu, Yin Yin, Wei Yang, Weili Ma, Lin Yang, Xiujuan Chen, Zhang d an lu Zhang, Bin Ye, Liyan Song, “Structural elucidation and biological activity of a novel oi lm [25] ul Polymers 75, 166–171, 2009 nf va polysaccharide by alkaline extraction from cultured Cordyceps militaris”, Carbohydrate Rukachaisirikul V., Pramjit S., Pakawatchai C., Isaka M., Supothina S “10- J Nat Prod., 67, 1953–1955, 2004 Wang J., Kan L., Nie S., Chen H., Cui S W., Phillips A O., Phillips G O., Li Y., z [26] z at nh membered macrolides from the insect pathogenic fungus Cordyceps militaris BCC 2816”, @ gm Xie M., “Comparison of chemical composition, bioactive components and antioxidant [27] m co Technology, 63, 2-7, 2015 l activity of natural and cultured Cordyceps sinensis”, LWT - Food Science and Wu Y L., Sun C R., & Pan Y J., “Studies on isolation and structural features of a an Lu polysaccharide from the mycelium of a Chinese edible fungus (Cordycepsm sinensis)”, n va Carbohydrate Polymers, 63, 251–256, 2006 ac th 18 si Khóa Luận Tốt Nghiệp [28] Lê Tấn Lộc Xiao J H., Chen D X., Wan W H., Hu X J., Qi Y., Liang Z Q., “Enhanced simultaneous production of mycelia and intracellular polysaccharide in submerged cultivation of Cordyceps jiangxiensis using desirability functions”, Process Biochemistry, 41, 1887–1893, 2006 [29] Yang M L., Kuo P C., Hwang T L., Wu T S., “Anti-inflammatory Principles from Cordyceps sinensis”, J Nat Prod., 74, 1996–2000, 2011 [30] Yu R M., Song L Y., Zhao Y., Bin W., Wang L., Zhang H.,et al., “Isolation and biological properties of polysaccharide CPS-1 from cultured Cordyceps militaris”, Fitoterapia., 75, 465–472, 2004 lu an [31] Yu R M., Wang L., Zhang H., Zhou C X., Zhao Y., “Isolation, purification and n va identification of polysaccharides from cultured Cordyceps militaris”, Fitoterapia., 75, [32] Yu R M., Yang W., Song L Y., Yan C Y., Zhang Z., Zhao Y., “Structural gh tn to 662–666, 2004 p ie characterization and antioxidant activity of a polysaccharide from the fruiting bodies of d oa nl w cultured Cordyceps militaris”, Carbohydrate Polymers, 70, 430–436, 2007 oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 19 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w PHỤ LỤC oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 4.6 4.4 4.2 4.0 3.8 3.6 3.4 m 4.8 o l.c 5.0 5.523 5.516 5.330 5.324 5.319 5.247 5.216 5.202 5.187 5.171 4.894 4.885 4.867 4.863 4.858 4.853 0.573 0.877 0.863 0.859 0.803 0.789 0.776 0.998 0.985 H H 18 Lu 3.2 3.0 f1 (ppm) an 2.8 2.6 2.4 2.2 H H HO HO O HO 2.0 1.8 1.6 H 19 1.4 1.2 1.0 0.8 2.78 26, 27 3.16 6.30 6.77 gm 1.29 22 1.32 1' @ 6'-OH 4.26 19 1.12 0.92 1.33 z 23 0.97 z at nh 5.2 1.15 oi lm ul nf 5.4 va 21 an 1.18 2.32 28 lu 2.05 d oa nl w 5.6 1.09 p ie gh tn to Phụ n lục Phổ H-NMR hợp chất T3 dung môi DMSO-d6 va 0.877 0.863 0.859 0.803 0.789 0.776 0.573 1.248 1.454 1.844 3.639 3.613 3.545 3.406 3.383 3.118 3.067 3.015 2.997 2.891 2.882 4.867 4.863 4.858 4.853 4.437 4.425 4.413 4.242 4.227 5.216 5.202 5.187 5.171 5.523 5.516 an 1.00 lu CS-T3-DMSO-1H H3C CH3 CH3 CH3 O OH H H H 26, 27 H 18 28 21 2' 0.6 n va ac th si m o l.c gm @ z z at nh oi lm ul nf va an lu d oa nl w p ie gh tn to nPhụ lục Phổ 13C hợp chất T3 dung môi DMSO-d6 va 24 13 42 145 140 22 23 135 130 125 12 10 40 38 120 36 115 20 34 110 32 105 30 100 25 16 11 28 26 24 f1 (ppm) 95 90 15 22 1' 85 26 20 28 21 18 16 2' Lu 75 80 f1 (ppm) 11.801 22.561 20.944 20.527 19.755 19.450 17.312 15.924 27.900 29.575 32.463 42.375 42.013 38.362 37.684 36.944 36.702 an 70 27 19 14 12 4' 65 HO HO 18 6' 17 60 55 H H O HO 14 50 45 40 35 30 20.944 20.527 19.755 19.450 17.312 15.924 11.801 45.421 42.375 42.013 38.362 37.684 36.944 36.702 32.463 29.575 27.900 54.956 53.793 61.065 76.654 75.557 73.489 70.096 100.869 115.998 119.378 an 140.459 139.707 135.321 131.484 lu CS-T3-DMSO-13C H 25 CH3 H3C CH3 H CH3 O OH H H H H H 10 3', 5' 20 15 10 n va ac th si lu an CS-T3-DMSO-HSQC n va 10 CH3 H3C 20 CH3 30 H CH3 40 50 OH H H H O HO HO 60 O 70 H 80 H HO H 90 H 100 110 120 130 140 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 an Lu 150 3.0 2.5 2.0 n va 3.5 f2 (ppm) 1.5 1.0 0.5 0.0 f1 (ppm) om l.c gm @ z z at nh oi lm ul nf va an lu d oa nl w p ie gh tn to Phụ lục Phổ HSQC hợp chất T3 dung môi DMSO-d6 H ac th si lu va 26, 27 n 19 om l.c gm @ z z at nh oi lm ul nf va an lu d oa nl w p ie gh tn to Phụ lục Phổ HMBC hợp chất T3 dung môi DMSO-d 3' 6'-OH 23 22 5' 1' 18 28 21 4' 2' 18 28 26 27 10 19 20 30 25 24 40 14 50 17 60 6' 4' 2' 70 3' 5' 80 90 100 1' H 23 CH3 H3C 22 H 110 CH3 120 CH3 130 H 150 O O HO HO H 160 H H HO 4.5 4.0 3.5 an Lu 5.0 170 H H 5.5 140 OH H 2.5 2.0 n va 3.0 f2 (ppm) 1.5 1.0 0.5 f1 (ppm) an CS-T3-DMSO-HMBC ac th si H CH3 H3C CH3 lu H CH3 an CS-T3-DMSO-COSY n H O H 3'-OH 2'-OH om l.c gm @ z z at nh oi lm ul nf va an lu d oa nl w p ie gh tn to Phụ lục Phổ COSY hợp chất T3 dung môi DMSO-d6 O HO HO H 4'-OH H HO H H 5' 3' 23 6'-OH 22 1' 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 2' 3.0 4' 6' 3.5 6' 4.0 4.5 5.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 an Lu 5.5 2.5 2.0 n va 3.0 f2 (ppm) 1.5 1.0 0.5 f1 (ppm) va OH H ac th si 22 5.2 5.0 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 3.8 3.6 m o l.c 5.4 gm 5.6 @ 3.4 Lu 3.2 3.0 f1 (ppm) an 2.8 2.6 1.13 z 23 1.10 z at nh 1.09 oi lm ul nf va an lu 2.31 d 2.310 2.307 2.283 2.255 2.491 2.487 2.482 2.477 2.463 2.458 2.454 2.449 oa nl w 5.580 5.575 5.569 5.564 5.395 5.389 5.384 5.378 5.373 5.248 5.217 5.203 5.194 5.179 5.148 p ie gh tn to Phụ lục Phổ 1H-NMR hợp chất TT1 dung môi CDCl3 1.03 n va 5.8 1.00 an HO 2.4 2.2 2.0 1.042 1.029 0.946 0.923 0.910 0.845 0.830 0.816 0.630 2.491 2.487 2.482 2.477 2.463 2.458 2.454 2.449 2.310 2.307 2.283 3.661 3.653 3.647 3.639 3.630 3.625 3.616 5.580 5.575 5.569 5.564 5.395 5.389 5.384 5.378 5.373 5.248 5.233 5.217 5.203 5.194 5.179 5.164 5.148 lu CS-TT1-CDCL3-13C H 1.8 CH3 H3C CH3 26 H 1.6 CH3 H 28 1.4 1.2 1.0 18 19 H 27 21 0.8 0.6 n va ac th si