(Luận văn thạc sĩ) khảo sát thành phần hóa học của loài nấm cordyceps neovolkiana

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC BỘ MƠN HĨA HỌC HỮU CƠ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LOÀI NẤM CORDYCEPS NEOVOLKIANA GVHD: ThS Lê Thị Thu Hương ThS Dương Thúc Huy SVTH: Lê Tấn Lộc MSSV: K38.106.069 Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2016 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC BỘ MƠN HĨA HỌC HỮU CƠ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA LỒI NẤM CORDYCEPS NEOVOLKIANA GVHD: ThS Lê Thị Thu Hương ThS Dương Thúc Huy SVTH: Lê Tấn Lộc MSSV: K38.106.069 Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2016 NHẬN XÉT CỦA HỘI ĐỒNG LỜI CẢM ƠN Bằng tất trân trọng lòng biết ơn, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến với: Cô Lê Thị Thu Hương thầy Dương Thúc Huy – thầy đầy tâm huyết nhiệt tình Thầy, cô dạy cho em kiến thức chuyên môn với kinh nghiệm nghiên cứu quý báu mà giúp đánh thức niềm say mê nghiên cứu khoa học em suốt thời gian hướng dẫn Tất q Thầy khoa Hóa, trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh tận tình truyền đạt kiến thức quý báu suốt thời gian em theo học hoàn thành khóa luận Các anh chị học viên cao học bạn sinh viên mơn Hóa Hữu cơ, khoa Hóa học, trường Đại học Sư Phạm Thành phố Hồ Chí Minh động viên, giúp đỡ suốt trình thực đề tài Và cuối xin cảm ơn gia đình – chỗ dựa vững tinh thần suốt thời gian theo học thực đề tài trường Đại học Sư Phạm Thành phố Hồ Chí Minh i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, BẢNG BIỂU iv DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC PHỔ v LỜI MỞ ĐẦU vi CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CHI CORDYCEPS 1.1.1 Định nghĩa phân loại chi Cordyceps .1 1.1.2 Hoạt tính hợp chất có chi Cordyceps 1.2 NHỮNG NGHIÊN CỨU HĨA HỌC CỦA CÁC LỒI NẤM THUỘC CHI CORDYCEPS CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 2.1.1 Hóa chất .7 2.1.2 Thiết bị 2.2 NGUYÊN LIỆU 2.3 QUY TRÌNH THỰC NGHIỆM 2.3.1 Rửa tủa phân đoạn cao A1 2.3.2 Sắc ký cột phân đoạn cao A3 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 10 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT T3 10 3.2 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT TT1 12 CHƯƠNG : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 15 4.1 KẾT LUẬN 15 4.2 KIẾN NGHỊ 15 TÀI LIỆU THAM KHẢO 16 PHỤ LỤC ii MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 13 C-NMR : Carbon Nuclear Magnetic Resonance H-NMR Ac : Proton Nuclear Magnetic Resonance : Acetone AcOH : Acetic acid C : Chloroform COSY : Homonuclear shift correlation spectroscopy d : dd Mũi đôi (Doublet) Mũi đôi đôi (Doublet of duoblet) DMSO : Dimethyl sulfoxide EA : Ethyl acetate H : Hexane HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Coherence HSQC : Heteronuclear Single Quantum Correlation J m : Hằng số tương tác spin-spin : Mũi đa (Multiplet) Me : Methanol NMR : Cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance) ppm : Part per million s : Mũi đơn (Singlet) t : Mũi ba (Triplet) UV : Tia cực tím (ultra violet) iii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, BẢNG BIỂU Hình 1.1: Polysaccharide xác định Yu cộng sự, 2009 .3 Hình 1.2: Các hợp chất lập từ lồi nấm thuộc chi Cordyceps Hình 3.1: Khung Ergostane 10 Hình 3.2: Tương quan HMBC phần aglycon hợp chất T3 11 Hình 3.3: Cấu trúc hợp chất T3 12 Hình 3.4: Cấu trúc hợp chất TT1 .13 Hình 4.1: Cấu trúc hợp chất T3 hợp chất TT1 15 Sơ đồ 2.1: Quy trình lập hợp chất T3 TT1 Bảng 2.1 : Phân đoạn cao methanol thô Bảng 3.3: Dữ liệu phổ NMR hợp chất T3, ergosterol 3-O-β-D-glucopyranoside, TT1 ergosterol .14 iv DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC PHỔ Phụ lục Phổ H-NMR hợp chất T3 dung môi DMSO-d6 Phụ lục Phổ 13 C hợp chất T3 dung môi DMSO-d6 Phụ lục Phổ HSQC hợp chất T3 dung môi DMSO-d6 Phụ lục Phổ HMBC hợp chất T3 dung môi DMSO-d6 Phụ lục Phổ COSY hợp chất T3 dung môi DMSO-d6 Phụ lục Phổ H-NMR hợp chất TT1 dung môi CDCl3 v LỜI MỞ ĐẦU Cùng với phát triển Y học nói chung Y học dân tộc nói riêng xu hướng quay sản phẩm thuốc có nguồn gốc từ tự nhiên, vừa mang lại hiệu cao vừa tác dụng phụ Nghiên cứu hợp chất thiên nhiên đóng góp thành tựu quý báu cho ngành Hóa học ngành Sinh học Y dược học Sự kết hợp chứng khoa học từ lĩnh vực nghiên cứu hợp chất thiên nhiên hoạt tính sinh học góp phần củng cố phát triển Y học cổ truyền Từ thời xa xưa loài nấm thuộc chi Cordyceps xem nguồn nguyên liệu quý, thuốc quý y học để giúp người chữa bệnh Phổ biến loại nấm Cordyceps sinensis (cịn gọi Đơng Trùng Hạ Thảo) Những nghiên cứu gần cho biết polysaccharide diện C sinensis thể đa dạng hoạt tính sinh học kháng oxi hóa, ức chế miễn dịch chống xơ vữa động mạch, nucleoside mang đa tác dụng macrophage cordycepin có hoạt tính ức chế phát triển khối u ức chế miễn dịch Vì thế, lồi nấm thu hút nhiều nhà nghiên cứu năm gần dựa giá trị dinh dưỡng dược học Tuy nhiên, nguồn cung cấp tự nhiên loài nấm giảm dần mơi trường sống khắc nghiệt khai thác mức nguồn nguyên liệu Gần đây, vài loài nấm thuộc chi Cordyceps chiết tách ni cấy phịng thí nghiệm [25] Tuy nhiên số nguyên cứu gần chứng tỏ có khác thành phần hàm lượng hợp chất hóa học nấm tự nhiên nấm nuôi cấy Xuất phát từ ứng dụng Y học quý giá kế thừa kết nghiên cứu ngồi nước chi Cordyceps, chúng tơi tiến hành nghiên cứu thành phần hóa học lồi nấm Cordyceps neovolkiana vi Khóa Luận Tốt Nghiệp Lê Tấn Lộc CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CHI CORDYCEPS 1.1.1 Định nghĩa phân loại chi Cordyceps Các lồi nấm thuộc chi Cordyceps gồm có C sinensis, C militaris, C pruinosa C ophioglossoides nguồn nguyên liệu quý dược học Thành phần dược liệu loài nấm khô thuộc chi Cordyceps phát triển ấu trùng Trong đó, phổ biến lồi nấm Cordyceps sinensis, gọi với tên Đông Trùng Hạ Thảo (Tiếng Trung Quốc, Dong-Chong-Xia-Cao hay Tochukaso, tiếng Nhật) Tên gọi bắt nguồn từ thay đổi theo mùa Vào mùa đông, ấu trùng nhiễm nấm chuyển thành sâu sống đất gọi Đông Trùng Khi sang hè, stroma phát triển đầu ấu trùng có hình dáng giống cỏ nên gọi Hạ Thảo Ở Trung Quốc, vị thuốc có nguồn gốc hàng ngàn năm [22] 1.1.2 Hoạt tính hợp chất có chi Cordyceps Thành phần hóa học chi Cordyceps tìm thấy gồm có cordycepin (30deoxyadenosin) dẫn xuất, ergosterol, polysaccharide, glycoprotein peptides có chứa thành phần aminoisobutyric acid Các hợp chất có hoạt tính sinh học kháng ung thư, kháng đột biến (anti-metastatic), ức chế miễn dịch (immunomodulatory), kháng oxy hóa, kháng viêm, diệt sâu bọ (insecticidal), kháng khuẩn, hạ lipit máu, hạ đường huyết, chống lão hóa, bảo vệ hệ thần kinh thận Những nghiên cứu gần cho biết polysaccharide diện C sinensis thể đa dạng hoạt tính sinh học : chống oxy hóa, ức chế miễn dịch, chống xơ vữa động mạch, nucleoside mang đa tác dụng macrophage cordycepin có hoạt tính ức chế phát triển khối u ức chế miễn dịch 1.2 NHỮNG NGHIÊN CỨU HÓA HỌC CỦA CÁC LOÀI NẤM THUỘC CHI CORDYCEPS Các hợp chất Cordycepin (3’-deoxyadenosine), 3’-amino-3’deoxyadenosine, homocitrullyl aminoadenosine, adenine, cordycepic acid Dmannitol lập từ lồi nấm thuộc chi Cordyceps từ năm 1950