Yêu cầu chủng công nghệ Công nghệ lên men cnshduoc@gmail.com Cơng nghệ lên men Định nghĩa: q trình biến đổi vi sinh vật thực điều kiện yếm khí hay hiếu khí z Sản phẩm z z z z z z Sinh khối vi sinh vật Enzym – protein vi sinh vật Sản phẩm trao đổi chất: sơ cấp + thứ cấp Các biopolymer biosurfactant Sản phẩm tái tổ hợp gen Chủng vi sinh vật 1: Không gây bệnh cho người, động vật môi trường (GRAS - Generally Recognized As Safe) 2: Có thể gây khó chịu cho người, động vật môi trường 3: Gây bệnh, truyền bệnh có cách chữa trị 4: Gây bệnh, truyền bệnh nhanh chưa có cách chữa trị Thu nhận chủng z Phân lập từ môi trường z z z “săn lùng” (shotgun) có định hướng (objective) Ngân hàng chủng z z Nhanh, tốn Khơng có tính cạnh tranh Ổn định di truyền Sản xuất hiệu sản phẩm mong muốn, đường sinh tổng hợp sản phẩm khảo sát kỹ Không cần hay cần bổ sung vitamin yếu tố tăng trưởng Sử dụng chất phổ biến rẻ tiền Có thể biến đổi di truyền An tồn, khơng gây bệnh, khơng sản xuất chất độc, trừ sản phẩm Dễ dàng thu hoạch từ trình lên men Dễ dàng phá vỡ tế bào sản phẩm nội bào Ít tạo sản phẩm phụ để thuận tiện cho việc tinh chế sản phẩm Cải tạo chủng Tái tổ hợp tự nhiên z Gây đột biến z z z Đột biến ngẫu nhiên Đột biến nhân tạo - cảm ứng z z z z Sử dụng base tương đồng Thay đổi hóa học base Chiếu xạ Gây đột biến transposon Lai ghép tế bào trần biến nạp gen z Thao tác di truyền vi sinh vật z Chiến lược thao tác di truyền z z z z z Sàng lọc gen từ tế bào nguồn Cơ lập gen quan tâm: tạo dịng Thực biến đổi cần thiết Đưa gen trở lại tế bào đích Kiểm tra sàng lọc chủng Sàng lọc thể đột biến z z z z z z z Kiểu hình quan sát Khuyết dưỡng: cấy môi trường tối thiểu Tổng hợp gây chết Kháng chất chuyển hóa Khóm vệ tinh Quang ứng động, hóa ứng động Khác biệt tỷ trọng: ly tâm phân đoạn Làm giàu thể khuyết dưỡng penicillin Tiêu chí chọn thành phần môi trường z Gây đột biến: UV, HNO2,… Rửa phân tán mật độ 107/ml Nuôi cấy h mơi trường hồn chỉnh z Thêm 100 U/ml penicillin Ủ h môi trường glucose không chứa nitơ z Nuôi cấy 2-20 h z Loại bỏ penicillin Pha loãng đến 50100 tế bào/hộp z Nhân z Mơi trường hồn chỉnh Mơi trường tối thiểu Mơi trường hoàn chỉnh Bảo quản giống vi sinh vật z Ngân hàng tế bào z z Ngân hàng gốc (master cell bank) Ngân hàng làm việc (working cell bank) Cấy chuyền z Làm khô z Đông khô z Đông lạnh z z Nguồn carbon z z z z z z z z z Môi trường lên men z Cung cấp chất dinh dưỡng để tế bào phát triển z z z Chất dinh dưỡng Yếu tố tăng trưởng Cung cấp chất cần thiết để thu sản phẩm z z z z Giá thành khả cung cấp Dễ xử lý, vận chuyển, bảo quản với chi phí thấp Khơng gây khó khăn cho q trình tiệt trùng khơng bị biến chất Có thuộc tính vật lý độ nhớt, khả trộn lẫn, … không ảnh hưởng đến công thức chung, việc vận hành nồi xứ lý sau lên men Giúp đạt nồng độ sản phẩm đích với tốc độ hình thành suất sản phẩm gam chất cao Nồng độ loại tạp chất khả tạo sản phẩm phụ thấp không làm ảnh hưởng đến q trình tách sản phẩm sau Có tính an toàn tốt Ycarbon (g/g) = Sinh khối tạo (g) / Nguồn carbon sử dụng (g) Mật mía Cao chiết mạch nha Tinh bột dextrin Nước thải sulfit Cellulose Bã sữa chua Alkane alcol Chất béo dầu Nguồn nitơ Nước thải ngâm bắp z Cao nấm men z Peptone z Bã đậu nành z Sinh khối Chất chuyển hóa sơ cấp Chất chuyển hóa thứ cấp Chất cảm ứng Các loại môi trường lên men Các thành phần khác Mơi trường tổng hợp: mơi trường có thành phần hóa học xác mặt định tính định lượng z Mơi trường phức bán tổng hợp: người ta biết thành phần xác vài hợp chất (về mặt định lượng chất cần quan tâm yếu tố tăng trưởng, thành phần khác dựa theo kinh nghiệm) z Môi trường công nghiệp: nguyên liệu phức ban đầu chủ yếu bắt nguồn từ sản phẩm nông nghiệp từ sữa chúng rẻ tương đối dồi z z z z z z z z z z Nước Khoáng chất Vitamin yếu tố tăng trưởng Các tiền chất Các chất cảm ứng kích thích Các chất ức chế Chất thay đổi tính thấm tế bào Oxi Chất chống bọt Biện pháp kiểm soát bọt Các phương thức lên men Thay đổi công thức môi trường z Phá bọt học z Các chất phá bọt: thường chất hoạt động bề mặt: z z z z z z z z z Nhanh chóng phân tán tác động nhanh Tác động mạnh với liều thấp Có tác động kéo dài Khơng độc vi sinh vật lên men, người hay thú Giá rẻ Bền nhiệt Tương thích với thành phần mơi trường qui trình Hệ thống lên men Cảm biến pH, nhiệt độ, oxi, bọt, mức z Cung cấp oxi, chất dinh dưỡng, chất kiểm soát pH, z Cánh khuấy z Cổng thu hoạch z Kiểu vận hành z z z Lên men gián đoạn Lên men bổ sung dinh dưỡng gián đoạn Lên men liên tục Độ kín hệ thống z z z Lên men hở Lên men vơ trùng Sự thơng khí z z z Lên men hiếu khí Lên men kỵ khí Kiểu thiết bị sử dụng z z z Lên men Lên men chìm Lên men bề mặt Khí thải vơ trùng Lọc tiệt trùng Cổng phụ Nước/hơi nước Trục khuấy Đĩa khuấy Vỏ Rọ cản Nước/hơi nước vào Khí vơ trùng Bộ phun khí Cổng thu hoạch Khí vào 1-Giá đựng khay ; 2-Khay ; 3-Cửa cho không khí vào buồng ; 4-Cửa cho không khí ; 5-Quạt ; 6-Chỗ phun nước ; 7-Bộ phận xả nóng để điều chỉnh nhiệt độ buồng Lên men chìm Nguyên liệu Chuẩn bị môi trường lên men Chuẩn bị môi trường nhân giống Nhân giống cấp I Không khí Nhân giống cấp II, III LÊN MEN Không khí nén, lọc Các thiết bị ni cấy khác Không khí Tách làm sản phẩm Giám sát q trình lên men Các cảm biến in situ z Các phân tích trực tuyến z z z z z z flow injection analysis sequential injection analysis khối phổ (mass spectrometry - MS) lỏng hiệu cao (HPLC) sắc ký khí (GC)