Khuêch đại gen vi khuẩn mycoplama hominis bằng kỹ thuật pcr

-ãc ô4 ugc V Hl -ãc ô4 ugc V Hl LÒI CẢM ON Lời em xin bày to lơng biết ơn sáu sầc tói Th.s Nguyền Minh Hoan tận tinh chi báo diu dắt, truyền đạt cho em nhũng kiến thức quý báu hướng dẩn em toàn thành tốt nghiên cúu Em xin chân thành cam ơn thầy cò Bộ mòn Vi sỉnh-Kỷ sinh trùng lãm sàng Khoa Kỳ thuật Y học-Trường Đại học Y Hã Nội dã tận tinh chi dạy, truyền đạt cho em nhùng kiến thức bỗ ích mịn học Em xin chán thành cam ơn đến PGS.TS.BS Trần vân Khánh đà tạo dien kiện cho em dược thực luận Trung tàm Nghiên cứu Gen-Protein Trường Đại hục Y Hà Nội Đồng thời em xin cam ơn anh chị cán nhãn viên Trung tàm Nghiên cúu Gen-Protein Trường Đại học Y Hà Nội dà tận tinh giúp dở dế em hoàn khoa luận Cuối cũng, em xin bày to lông biết ơn sâu sắc tới gia dinh, bạn bê nhùng người sát cánh, giúp đờ dộng viên dong hành em suốt q trinh hồn thành khóa luận Em xin chân thành câm ơn! Hà Nội tháng nảm2023 Sinh viên Phan Th Phng -ãc ô4 ugc V Hl Lềè CAM DOAN Eni Phan Thị Phương, sinh viên tổ 28 kip Y4XN Khoa Kỳ thuật Y học khóa 117 Trưởng Dại học Y Hà Nội em xin cam đoan: Dây lã khóa luận em trực tiếp thực hướng đản cùa ThS Nguyền Minh Hoan Cãc sổ liệu thông tin nghiên cứu lã xác trung thục khách quan chinh em thc hin Sinh viờn Phan Th Phng -ãc ô4 ugc V Hl MỤC LỤC LỜI CÁM ƠN DANH MỤC CHỮ VIẾT TÁT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HĨNH ÁNH TÓM TẤT KHÓA LUẬN DẬT VÁN DÊ CHƯƠNG 1: TỎNG QUAN 1.1 Vi khuân Mycoplasma homims 1.1.1 Hình thãi vã cẩu tạo 1.1.2 Đặc diem nuôi cấy 1.1.3 Đặc diem gen 1.1.4 Khá nàng đề kháng 1.1.5 Dường lây huyền 1.1.6 Kha nâng gây bệnh 1.1.7 Đặc diêm dịch te 1.1.8 Các phương pháp chân đoán nhiễm -V/ hommts 1.2 Kỳ thuật PCR 11 1.2.1 Nguyên tấc 11 1.2.2 Thảnh phần phân úng PCR 12 1.2.3 Các yếu tố anh hương đen phán ứng PCR 13 1.2.4 Tổi ưu hóa phan ủng PCR 15 CHƯƠNG 2: DỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỦƯ 17 2.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.2 DỊa điềm, thời gian nghiên cứu 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 ^H «4 ugc V Hl 2.3.1 Thiết kc nghiên cứu 17 2.3.2 Sơ đồ nghiên cứu .18 2.4 Trang thiết bị hóa chất 18 2.5 Quy trinh thực 19 2.5.1 Tách chiết DNA 19 2.5.2 Kiêm tra DNA sau tách chiết 21 2.5.3 Tỗi ưu hóa nhiệt độ gần mồi 22 2.5.4 Tối ưu hóa nồng độ DNA khuôn 24 2.5.5 Khảo sát điều kiện lỗi ưu mầu mô đúc nen 26 2.6 Đạo dírc nghiên cứu 26 CHƯƠNG 3: KÉT QUÀ NGHIÊN củt’ 27 3.1 Kct quã tách chiết DNA 27 3.3.1 Tách chiết DNA từ mẫu vi khuân nuôi cắy 27 3.3.2 Tách chiết DNA từ mẫu mỏ đúc nến 28 3.2 Kết qua tối ưu hóa nhiệt độ gắn mồi 30 3.3 Kct qua tối ưu hỏa nồng độ DNA khuôn 31 3.4 Kct qua kháo sát điểu kiện tối ưu mẫu mỏ đúc nen 32 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 33 4.1 Kiểm tra nồng độ độ linh DNA 33 4.2 Đặc diêm moi sư dụng 34 4.3 Tối ưu hóa phán ứng PCR 34 4.4 Ưu nhược diêm cùa mầu bệnh phàm đúc nen 36 4.5 Đánh giả kết qua khuếch đại gen vi khuân Mycoplasma homims trẽn mầu mỏ dúc nen 38 4.6 Nhừng nghiên cứu Mycoplasma hommis mầu mò đúc nến 40 KÉT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO ^H «4 ugc V Hl DANH MỤC CHỦ VIÉT TÁT Từ Viet tất Bp Base pair DNA Acid deoxyribonucleic dNTP Deoxynucleotide triphosphate NC M homims Tlềng việt Tỉềug anh Negative control Chúng âm Mycoplasma hommis OD Optical density Mật độ quang học PCR Polymerase Chain Reaction Phan úng khuếch đại gen PC Positive control RNA Acid ribonucleic Chứng dương T Temperature of Annealing Nhiệt độ gẳn mi Tm Temperature melting Nhit núng chay -ãc ô4 ugc V Hl H& DANH MỤC BÁNG Bang 2.1 Đặc diem cập mổi khuếch dại gen vi khuẩn Mycoplasma hommis 22 Bang 2.2 Thành phần phán úng PCR 23 Bang 2.3 Thành phần phẩn ứng PCR 25 Bang 3.1 Ket qua mật dộ quang cua 32 mầu DNA dược tách chict: 28 ^H «4 ugc V Hl DANH MỤC HÌNH ÁNH Hình 1.1 Sự phát triển cùa khuân lạc M hominis hình trúng ốp điên hình sau ni cấy thạch A7 Hĩnh 1.2 16S ribosomal RNA bộgen vi klniẩn .5 linh 1.3 Chu trinh PCR đưới dạngsơ đồ 12 Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cúu 1S I lình 2.2 Sơ đồ chu kỳ nhiệt 24 Hình 2.3 Sơ đổ chu kỳ nhiệt 25 Hĩnh 3.1: Minh hoạ kết qua OD mảy Nanodrop 2000c cua DNA tách chiết từ vi khuẩn Mycoplasma hommìS 27 Hinh 3.2 Khao sát nlũệt độ gắn PCR khuếch đại gen vi khuẩn Mycoplasma homims 30 Hình 3.3 Khao sát nồng độ DNA khuôn PCR khuếch đại gen vi khuân Mycoplasma homims 31 Hình 3.4 Khao sát điều kiện tồi ưu 32 mầu mô đúc nen 32 ^H «4 ugc V Hl TĨM ÁT KHÓA LUẬN Vi khuẩn Mycoplasma hominis tồn đường niệu sinh dục cua người khoe mạnh trường hợp định cỏ thê gây bệnh ca đường sinh dục sinh dục Lây truyền M hommis tử mẹ sang có the dần đen thai chết lưu sinh non gây nhiêm trùng huyết viêm màng não trỏ sơ sinh Nhiễm vi khuân dường sinh dục nam có the ánh hường tiêu cực đến chất lượng tinh dịch Theo nghiên cứu dịch tề Trung Quốc Mycoplasma homims chiếm 11.02% bệnh nhàn mắc bệnh lý phụ khoa, ty lệ dương tinh nữ cao dáng kê so với nam Tại Việt Nam theo Bùi Quang Hão (2015) ghi nhận tỳ lộ nhiễm Mycoplasma homims trẽn bệnh nhãn cỏ hội chứng tiết dịch niệu đạo âm đạo den khâm Bệnh viện Da liều Trung ương chiếm 3.75% Mục tiêu cùa nghiên cứu tói ưu hóa số diều kiện cua phan ứng PCR đê xác định vi khuân Mycoplasma hoimnis Nghiên cứu thực nghiệm tối ưu hỏa trẽn mầu vi khuân Mycoplasma homims khao sát diều kiện dà lỗi ưu 32 mầu bệnh phâm mô dúc ncn Kct xác định nhiệt độ gắn mồi tối ưu 56°c nồng độ DNA khuôn tối ưu ng/ul Áp dụng điều kiện tối mi thi ket qua khuếch đại PCR mầu mô đúc nen phát Mycoplasma homims Từ khóa: Mycoplasma homims Polymerase Chain Reaction, tồi ưu hóa «4 ugc V Hl 33 CHƯƠNG BÀN LUÂN 4.1 Kiểm tra nồng độ độ tinh DNA: Chat lượng sổ lượng DNA tách chici cô ánh hưởng den kct qua kỳ thuật sinh học phân tư Đê đám bao chất lượng DNA trinh tách chiết cần thực đúng, đàm bao nguyên tấc tránh nhiễm bân Mầu DNA tách chiết từ vi khuân M homnris cỏ nồng độ 18 ng/pl vã có độ tinh A26O2SO = 1.97 A.2(ứ2ìữ 2.11 nẩm khống chấp nhận Các thông so nồng độ độ tinh cua 32 mầu DNA tách từ màu mỏ đúc nên chúng tỏi thê Bang 3.1 Nồng độ DNA dao động từ 5.4 ng/pl đen 53.5 ng/pl Có mầu KV3 KV7, KV9 KVI6, KV22, KV26 KV27 sau tách chiết có nồng độ DNA thấp (