Hoàn thiện qui trình công nghệ sản xuất vắc xin viêm gan b tái tổ hợp

Bộ khoa học công nghệ y tế Chơng trình khoa học công nghệ phục vụ chăm sóc bảo vệ sức khoẻ cộng đồng Báo cáo tóm tắt Dự án sản xuất thử nghiệm cấp nhà nớc Hoàn thiện qui trình công nghệ sản xuất vắcxin viêm gan B tái tổ hợp M số KC.10-DA06 5971 10/8/2006 Hà Nội-2004 Dự án sản xuất thử nghiệm cấp nhà n−íc KC.10-DA.06 Hoàn thiện qui trình công nghệ sản xuất vắcxin viêm gan B tái tổ hợp Cố vÊn khoa häc: GS.TSKH Ngun Thu V©n Chđ nhiƯm dù ¸n: TS.Ng« Thïy Anh C¸c c¸n bé tham gia: KS Trịnh Tuấn Việt Cn Vũ Vân Quỳnh Cn Vũ Hồng Nga Cn Đinh Minh Tuấn Cn Quách Minh Tuân Ts Đỗ Thủy Ngân Ts Vũ Hồng Cơng Các quan tham gia: - Công ty vắcxin sinh phẩm số 1- Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ơng - Trung tâm Quốc gia Kiểm định vắcxin chế phẩm sinh học - Trung tâm y tế dự phòng - Thanh Hóa mục lục Đặt vấn đề CHƯƠNG I: Vật liệu phơng pháp Hoàn thiện qui trình công nghệ sản xuất vắcxin viêm gan B tái tổ hợp. 2 Xây dựng tiêu chuẩn Quốc gia cho vắcxin viêm gan B tái tổ hợp sản xuất Việt Nam 2.1 An toàn chung 2.2 KiĨm tra v« khn 2.3 Xác định hàm lợng HBsAg 2.4 KiĨm tra chÊt g©y sèt 2.5 KiĨm tra chÊt hÊp phơ Al(OH)3 2.6 Kiểm tra hàm lợng Merthiolat 2.7 Kiểm tra hàm lợng Formaldehyt 2.8 Kiểm tra hàm lợng protein toàn phÇn 2.9 KiĨm tra c«ng hiƯu 2.10 Thư nghiƯm nhËn d¹ng Ph−¬ng pháp đánh giá tính an toàn đáp ứng miễn dịch vắcxin viêm gan B tái tổ hợp thực địa lâm sàng 3.1 Đối tợng nghiên cứu 3.2 Vật liệu nghiên cứu 3.3 Phơng pháp nghiên cứu CHƯƠNG II : Kết bµn luËn .… … Hoàn thiện quy trình sản xuất vắcxin viêm gan B tái tổ hợp 1.1 Kết kiểm tra chđng s¶n xt KM71-47-1 1.2 Kết kiểm tra trình nhân lên tế bào nấm men 1.3 Kết kiểm tra trình biến nạp 1.4 KiĨm tra tÕ bµo 1.5 Kiểm tra trình tinh chế HBsAg 1.6 Pha chế vắcxin đóng ống 12 Xây dựng tiêu chuẩn Quốc gia cho vắcxin viêm gan B tái tổ hợp sản xuất Việt Nam 12 2.1 Xây dựng tiêu chuẩn thành phần hoá học 12 2.2 Xây dựng số sinh học 13 Kết đánh giá tính an toàn đáp ứng miễn dịch vắcxin viêm gan B tái tổ hợp RecomBvax thực địa lâm sàng 14 3.1 Kết đánh giá tính an toàn 14 3.2 Các kết đánh giá khả đáp ứng miễn dịch sau tiêm vắcxin theo phác đồ tháng 0-1-2 15 Chơng III Kết luận …… 18 Tài liệu tham khảo 21 mục lục Đặt vấn đề ……………… Ch−¬ng I: Tæng quan … Nh÷ng hiĨu biÕt hiƯn vỊ virót viªm gan B … 1.1 Thông tin đại cơng virút viêm gan B 1.2 Lịch sử virút viêm gan B 1.3 CÊu tróc sinh häc ph©n tư cđa virót B…………………………… 1.4 BƯnh lý häc 12 1.5 Dịch tễ học virút viêm gan B 12 1.6 Chẩn đoán viêm gan B 13 1.7 Các thể lâm sàng 14 1.8 §iỊu trÞ 15 1.9 Dù phßng 16 1.10 ChiÕn lợc loại trừ lây truyền viêm gan virút B . 17 1.11 Phòng nhiễm virút viêm gan B 18 1.12 Globulin miễn dịch phòng viêm gan B (HBIG) 18 Các loại vắcxin viêm gan B nghiên cứu vắcxin viêm gan B 18 2.1 Các loại vắcxin phòng viêm gan B xu hớng phát triển 18 2.2 Tính an toàn vắcxin viêm gan B 20 2.3 Tính sinh miễn dịch vắcxin viêm gan B 21 2.4 Các yếu tố ảnh hởng đến tính sinh miễn dịch vắcxin phòng viêm gan B 23 Sử dụng công nghệ tái tổ hợp ADN để biểu thị kháng nguyên 26 3.1 Các hệ biểu thị khác 26 3.2 BiĨu thÞ ë nÊm men 26 3.3 Biểu thị tế bào động vật 27 3.4 HƯ biĨu thÞ ë Pichia pastoris 27 CHƯƠNG II: Vật liệu phơng pháp 31 Hoàn thiện qui trình công nghệ sản xuất vắcxin viêm gan B tái tổ hợp. 31 1.1 Chủng sản xuất 31 1.2 M«i tr−êng ……………………………………………………… 31 1.3 CÊy chđng ………………………………………………………… 33 1.4 Nh©n chủng 33 1.5 Biến nạp nội bào 33 1.6 Gặt tế bào 34 1.7 Tách chiết HBsAg 34 1.8 Tinh chÕ HBsAg…………………………………………………… 34 1.9 BÊt ho¹t virót……………………………………………………… 35 1.10 Pha chế vắcxin 35 1.11 So sánh qui trình sản xuất vắcxin viêm gan B tái tổ hợp đà đợc hoàn thiện với qui trình sản xuất qui mô phòng thí nghiệm 35 Xây dựng tiêu chuẩn Quốc gia cho vắcxin viêm gan B tái tổ hợp sản xuất Việt Nam 37 2.1 An toàn chung 37 2.2 KiĨm tra v« khn 37 2.3 Xác định hàm lợng HBsAg 38 2.4 KiĨm tra chÊt g©y sèt 38 2.5 KiĨm tra chÊt hÊp phơ Al(OH)3 38 2.6 Kiểm tra hàm lợng Merthiolat 39 2.7 Kiểm tra hàm lợng Formaldehyt 39 2.8 Kiểm tra hàm lợng protein toàn phÇn 40 2.9 KiĨm tra c«ng hiƯu 40 2.10 Thư nghiƯm nhËn d¹ng 40 Ph−¬ng pháp đánh giá tính an toàn đáp ứng miễn dịch vắcxin viêm gan B tái tổ hợp thực địa lâm sàng 40 3.1 Đối tợng nghiên cứu 40 3.2 Vật liệu nghiên cứu 41 3.3 Phơng pháp nghiên cứu 41 CHƯƠNG III: KếT QUả Và bàn luËn 46 Hoµn thiện quy trình sản xuất vắcxin viêm gan B tái tổ hợp 46 1.1 Kết kiểm tra chđng s¶n xt KM71-47-1 46 1.2 Kết kiểm tra trình nhân lên tế bào nấm men 46 1.3 Kết kiểm tra trình biến nạp 48 1.4 KiĨm tra tÕ bµo 50 1.5 KiÓm tra trình tinh chế HBsAg 50 1.6 Pha chế vắcxin đóng ống 58 Xây dựng tiêu chuẩn Quốc gia cho vắcxin viêm gan B tái tổ hợp sản xuất Việt Nam 59 2.1 Xây dựng tiêu chuẩn thành phần hoá học 59 2.2 Xây dựng số sinh học 64 Kết đánh giá tính an toàn đáp ứng miễn dịch vắcxin viêm gan B tái tổ hợp RecomBvax thực địa lâm sàng 68 3.1 Kết đánh giá tính an toàn 68 3.2 Các kết đánh giá khả đáp ứng miễn dịch sau tiêm vắcxin theo phác đồ tháng 0-1-2 74 Chơng IV Kết luận 78 Tµi liƯu tham kh¶o 81 chữ viết tắt aa Amino acid (axÝt amin) ADN Desoxyribonucleic acid (axÝt desoxyribonucleic) ARN Ribonucleic acid (axÝt ribonucleic) AH Aluminium hydroxide (nh«m hydroxit) Anti-HBc Antibody against Hepatitis B core antigen (kháng thể kháng kháng nguyên lõi virót viªm gan B) Anti-HBe Antibody against Hepatitis B e antigen (kháng thể kháng kháng nguyên e virút viêm gan B) Anti-HBs Antibody against Hepatitis B surface antigen (kh¸ng thĨ kháng kháng nguyên bề mặt virút viêm gan B) Au Australia antigen (kháng nguyên Australia) CHO Chinese hamster ovary (tế bào trứng chuột đất vàng) CTTCMR Chơng Trình Tiêm Chủng Më Réng CDC Centers for Disease Control and Prevention (Trung tâm kiểm soát bệnh tật dự phòng- Mỹ) D Dalton DR Double repeat (lặp lại kép) ĐƯMD Đáp ứng miƠn dÞch ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay (thư nghiƯm miƠn dÞch gắn enzym) FDA Food and Drug Administration (cơ quan quản lý thuèc vµ thùc phÈm) GMP Good manufacturing practice (thùc hành sản xuất tốt) GMT Geometric mean titer (hiệu giá trung bình nhân) GP Glycoprotein (glycoprotein) HBV Hepatitis B virus (virút viêm gan B) HBcAg Hepatitis B core antigen (kháng nguyªn lâi virót viªm gan B) HBeAg Hepatitis B e antigen (kháng nguyên e virút viêm gan B) HBsAg Hepatitis B surface antigen (kháng nguyên bề mặt virút viêm gan B) HBx Hepatitis B x antigen (kháng nguyên x virút viêm gan B) HBIg Hepatitis B immunoglobulin (globulin miễn dịch phòng viêm gan B) HLKN Hàm lợng kháng nguyên HT HuyÕt HT1 (n) HuyÕt lÊy lÇn thø nhÊt (hoặc lần thứ n) HLA kháng nguyên bạch cầu ngời IU International unit (đơn vị quốc tế) IFN interferon- IFN interferon- IFN interferon- kb kilobase (kilôbazơ) kD kilodalton (kilôdalton) KN Kháng nguyên KT Kháng thể LD50 Lethal dose 50% (liều gây chết 50%) LHBs Large hepatitis B surface antigen (kháng nguyên bề mặt virút viêm gan B loại lớn) LH3E Lactalbumin hydrolysate Egle MHBs Medium hepatitis B surface antigen (kháng nguyên bề mặt virút viêm gan B loại trung bình) MLD Minimal lethal dose (liều gây chết tối thiĨu) MSV Master seed virus (Chđng gèc gièng) NMWL Nominal Molecular Weight Limit ( Kích cỡ giới hạn trọng lợng phân tử ) OD Optical density (mật độ quang) ORF Open reading frame (khung ®äc më) P Protein PCR Polymerase chain reaction - Phản ứng toàn thân hầu nh không xảy ra, gặp từ 2-3 trẻ sốt nhẹ 37,50C380C hết sốt vào ngày hôm sau sau lần tiêm Kết sau tiêm vắc xin r-HBvax 15 phút cho thấy: - Phản ứng chỗ : Chỉ có biểu đau sau tiêm (43,04% sau mũi tiêm đầu, 33% sau mũi tiêm thứ 25,21% sau mũi tiêm thứ 3) - Phản ứng toàn thân: biểu sau tiêm, trừ mũi tiêm đầu có trẻ khóc kéo dài Khi theo dõi liên tục sau tiêm vắcxin 15 ngày, tập trung vào ngày đầu sau tiêm mũi, kết rằng: - Phản ứng chỗ : Chỉ có biểu đau sau tiêm với tỉ lệ thấp - Phản ứng toàn thân gặp từ 1-2 trẻ sốt nhẹ 37,50C- 380C hết sốt vào ngày hôm sau Không có tợng shock phản vệ thời gian 24 đầu sau tiêm tất trẻ So sánh tính an toàn vắcxin viêm gan B tái tổ hợp RecomBvax với vắcxin đối chứng r-HBvax xem có khác biệt không? Biểu sau tiêm vắcxin 15 phút: - Phản ứng chỗ : Chỉ có biểu đau sau tiêm nhóm tiêm vắcxin RecomBvax r-HBvax, khác biệt hai nhóm sau lần tiêm (p>0,05) - Phản ứng toàn thân: Chỉ có biểu trẻ khóc nhiều, xảy sau mũi tiêm lần lần Sự khác biệt nhóm ý nghĩa thống kê (p>0,05) Bảng 10 cho thấy : Biểu sau tiêm vắcxin 15 ngày: - Phản ứng chỗ : Chỉ có biểu đau sau tiêm nhóm tiêm vắcxin RecomBvax r-HBvax khác biệt sau lần tiêm (p>0,05) - Phản ứng toàn thân: Chỉ xảy sốt nhẹ số cháu ngày sau tiêm Cả nhóm nghiên cứu khác biệt có ý nghĩa thống kê phản ứng phụ chỗ toàn thân (p>0,05) Kết cho thấy mức độ an toàn sau tiêm mũi vắcxin nhóm tiêm vắcxin RecomBvax Công ty VABIOTECH sản xuất vắcxin r-HBvax (Hàn Quốc) nh Chúng ta biết tất loại vắcxin đợc sản xuất lu hành giới dù nguồn gốc từ huyết tơng ngời hay tái tổ hợp có phản ứng phụ nhng thờng nhẹ nhanh theo thời gian ngắn thờng khoảng 24-28 sau tiêm Các phản ứng HBsAg gây mà thờng gây bëi chÊt hÊp phơ Al(OH)3, chÊt b¶o qu¶n cã thành phần vắcxin 3.2 Các kết đánh giá khả đáp ứng miễn dịch sau tiêm vắcxin theo phác đồ tháng 0-1-2 3.2.1 Tỉ lệ đáp ứng miễn dịch sau tiêm đủ mũi vắcxin viêm gan B tái tổ hợp nhóm (nhóm tiêm RecomBvax nhóm tiêm r-HBvax) - Tỉ lệ trẻ có đáp ứng kháng thể sau tiêm đủ mũi vắcxin RecomBvax đạt 91,85% vắcxin r-HBVax 90% - Tỉ lệ bảo vệ loại vắcxin khác ý nghĩa thống kê với p> 0,05 15 Bảng 5: Tỉ lệ đáp ứng miễn dịch sau tiêm đủ mũi vắcxin viêm gan B tái tổ hợp nhóm (ngỡng bảo vƯ > 10 mIU/ml) V¾cxin RecomBvax 319 293 91,85 26 8.15 p>0,05 Kết sau tiêm vắcxin Số ngời tiêm vắcxin Số có đáp ứng Tỉ lệ (%) Số đáp ứng Tỉ lệ (%) So sánh r-HBvax 230 207 90,00 13 10,00 3.2.2 Tỉ lệ đáp ứng kháng thể mức độ sau tiêm đủ mũi vắcxin viêm gan B tái tổ hợp nhóm (nhóm tiêm RecomBvax nhóm tiêm r-HBvax) Bảng 6: Tỷ lệ đáp ứng kháng thể mức độ sau tiêm đủ mũi vắcxin nhóm Mức độ đáp ứng kháng thể Mức kháng thể bảo vệ (> 10 - 100 - 1000 mIU/ml) So sánh Cộng So sánh Vắcxin RecomBvax 45 15,36% r-HBvax 28 13,52% p>0,05 202 68,94% 149 71,98% p>0,05 46 15,70% 30 14,50% p>0,05 293 (100%) 207 (100%) p>0,05 KÕt qu¶ ë b¶ng cho thÊy: - Trong tỉng sè 293 trẻ tiêm vắcxin RecomBvax, số trẻ có đáp ứng kháng thể mức cao cao 248 trẻ, chiếm 84,64% 45 trẻ đạt mức kháng thể bảo vệ, chiếm 15,36% - Trong tổng số 207 trẻ tiêm vắcxin r-HBvax, số trẻ có đáp ứng kháng thể mức cao cao 179 trẻ, chiếm 86,48% 28 trẻ đạt mức kháng thể bảo vệ, chiếm 13,52% - Tỷ lệ đáp ứng kháng thể mức độ nhóm tiêm vắcxin khác biệt mặt thống kê học, với p>0,05 3.2.3 Hiệu giá kháng thể trung bình GMT sau tiêm đủ mũi vắcxin viêm gan B tái tổ hợp nhóm (nhóm tiêm RecomBvax nhóm tiêm r-HBvax) 16 Hiệu giá kháng thể trung bình nhân GMT sau tiêm vắcxin nhóm vắcxin khác biệt ý nghĩa thống kê p> 0,05 Bảng 7: Hiệu giá kháng thể trung bình GMT sau tiêm mũi vắcxin nhóm Hiệu giá kháng thể trung bình-GMT (mIU/ml) Vắcxin RecomBvax r-HBvax Số ngời Trớc tiêm tháng sau tiêm mũi 0 350,6 315,7 319 230 Nh vậy, vắcxin RecomBvax sản xuất công ty VABIOTECH đạt đợc tính đáp ứng miễn dịch tơng đơng so với vắcxin r-HBvax -Hàn Quốc (vắcxin đối chứng) Theo MemaHo I B.J Wainn Right R.B công bố, hiệu giá kháng thể trung bình cao hay thấp ý nghĩa lắm, điều quan trọng phải 10 mIU/ml để đủ có khả bảo vệ, theo thời gian hiệu giá kháng thể giảm dần chí nồng độ anti-HBs máu không phát đợc cần liều vắcxin tiêm nhắc lại, hầu hết ngời có hàm lợng anti-HBs giảm máu tăng nhanh chóng 17 Chơng III Kết luận Hoàn thiện quy trình sản xuất vắcxin viêm gan B tái tổ hợp - Chủng P.pastoris KM71-47-1 đợc sử dụng làm chủng sản xuất - Mức ®é biĨu thÞ HBsAg cao nhÊt sau 72 giê biÕn nạp Methanol nồi lên men 10 lít với môi trờng BMGY/BMMY - Quy trình tách chiết tinh chế HBsAg khỏi tế bào nấm men P.pastoris đợc thùc hiƯn sau hÊp thơ Aerosil giê 370C phản hấp đệm Borax 0,01M 56oC Sau lần siêu li tâm dung dịch KBr gradient, lần siêu li tâm dung dịch CsCl gradient lần siêu li tâm dung dịch sucrose gradient, HBsAg thu đợc đạt độ tinh khiết cao - loạt vắcxin RecomBvax ( 011103, 021203, 030104, 040404, 050504, 060604) đà đợc sản xuất, đạt 100 239 lọ (loại 20 àg/ml) tơng đơng với 200 478 liều trẻ em So với dự kiến đề (200 000 liều /2năm), vợt 478 liều Xây dựng tiêu chuẩn Quốc gia cho vắcxin viêm gan B tái tổ hợp sản xuất Việt Nam - Chất lợng loạt vắcxin RecomBvax đợc sản xuất năm 2003-2004 theo quy trình đạt yêu cầu tối thiểu TCYTTG đề đà đợc TTKĐQG cÊp giÊy phÐp xt x−ëng - KÕt hỵp víi kÕt thu đợc từ kiểm tra chất lợng loạt vắcxin RecomBvax sản xuất năm 2002, thấy tất loạt đạt yêu cầu thành phần hoá học, vô khuẩn, chất gây sốt Về an toàn, chuột khoẻ mạnh tăng trọng bình thờng thời gian theo dõi Công hiệu tơng đơng với vắcxin chuẩn Các thông số nghiên cứu có độ lệch chuẩn thấp, tơng đối đồng loạt chứng tỏ ổn định chất lợng vắcxin RecomBvax Sự ổn định cho thấy thực hành qui trình sản xuất tốt nh khẳng định qui trình sản xuất vắcxin viêm gan B tái tổ hợp Công ty VABIOTECH (Viện VSDTTƯ) đà đợc hoàn thiện - Trên sở đó, đề nghị xây dựng tiêu chuẩn Quốc gia cho vắcxin viêm gan B tái tổ hợp RecomBvax nh sau: + Tiêu chuẩn thành phần hoá học: * Protein toàn phần 50 àg/ml * Merthiolat ≤ 0,01 g% * Formaldehyt ≤ 0,012 g% +++ 500 àg/ml * Al * pH 5,4-7,4 + Tiêu chuẩn số sinh học: * Vô khuẩn: Không phát nấm tạp khuẩn sau 14 ngày theo dõi vắcxin viêm gan B đợc cấy môi trờng Thioglycolate nhiệt độ 35-37oC Soybean nhiệt độ 20-22oC 18 * An toàn chung: - Trên chuột lang: Chuột dùng để kiểm tra phải cân nặng khoảng từ 300- 350 g, biểu bệnh lý, khỏe mạnh tăng trọng bình thờng thời gian cách ly ngày Thử nghiệm đạt yêu cầu chuột khỏe mạnh, tăng trọng bình thờng sau tiêm theo dõi thời gian ngày - Trên chuột nhắt: Chuột nhắt dùng để kiểm tra tuần tuổi, biểu bệnh lý, khỏe mạnh tăng trọng bình thờng thời gian cách ly ngày Thử nghiệm đạt yêu cầu chuột khỏe mạnh, tăng trọng bình thờng sau tiêm theo dâi thêi gian Ýt nhÊt lµ ngµy * Chất gây sốt: Thỏ có cân nặng 1,5 kg Không dùng thỏ có thân o nhiệt > 39,8 C Không cho thỏ ăn mà cho uống nớc vòng 16 trớc tiêm kết thúc thử nghiệm Tiêu chuẩn chấp thn: Thư nghiƯm sè Tỉng sè thá tÝch lịy 3 Thử nghiệm đạt tổng nhiệt độ không 1o3 3o0 4o9 Thử nghiệm không đạt tổng nhiệt độ 1o3 3o0 4o9 *Công hiệu: ED50 vắcxin thử nghiệm phải tơng đơng với ED50 vắcxin mẫu * Thử nghiệm nhận dạng: Bằng phơng pháp ELISA kính hiển vi điện tử: HBsAg dơng tính Đánh giá tính an toàn đáp ứng miễn dịch vắcxin viêm gan B tái tổ hợp RecomBvax thực địa lâm sàng Vắcxin RecomBvax đảm bảo tính an toàn cho trẻ em sử dụng, phản ứng phụ, phản ứng chỗ có biểu đau sau tiêm (45,45% sau tiêm mũi 1, 37,6% sau tiêm mũi 29,7% sau tiêm mũi 3) Không có phản ứng đỏ, sng, ngứa, phù nề Không có shoch phản vệ biểu phản ứng toàn thân sau tiêm Không có khác biệt so với vắcxin Hàn Quốc tính an toàn Tỷ lệ chuyển dịch huyết thời điểm tháng sau mũi tiêm thứ (ngỡng bảo vệ 10 mIU/ml) 91,85% So với vắcxin dùng làm đối chứng, tỷ lệ chuyển dịch huyết khác biệt Về hiệu giá kháng thể trung bình nhân (GMT): sau tiêm đủ mũi vắcxin tái tổ hợp Công ty VABIOTECH sản xuất khác biệt so với nhóm tiêm vắcxin viêm gan B tái tổ hợp Hàn Quốc sản xuất Cụ thể GMT đạt đợc RecomBvax 350,6 mIU/ml; tơng ứng với GMT sau tiêm vắcxin tái tổ hợp Hàn Quốc 315,7 mIU/ml Dự án đà mở rộng sản xuất quy mô bán công nghiệp, đầu t thêm trang thiết bị, đào tạo củng cố nhân lực 19 - Các trang thiết bị đợc bổ sung dự án là: + Máy ủ, lắc để nuôi cấy tế bào, biên độ lắc 25 mm, 230 V, 50-60 Hz, lu thông nhiệt/ lạnh + Máy phá tÕ bµo cì lín l/giê, 30 000 psi/ 000 bar + HƯ thèng nåi lªn men 10 lÝt, điều khiển, máy nén khí, cảm biến phụ kiện - Đào tạo: Trong trình thực dự án, đà đào tạo đợc thạc sĩ chuyên ngành vi sinh vật đơn vị sản xuất với chuyên viên công nghệ có đủ trình độ lực để sản xuất vắcxin viêm gan B tái tổ hợp qui mô lớn Quy trình sản xuất vắcxin RecomBvax cho hiệu suất cao, có giá trị mặt thực tiễn, kinh tế so với vắcxin nhập ngoại Giá bán 28 000 đ/lọ=14 000 đ/liều trẻ em Cơ quan chủ trì dự án Chủ nhiệm dự án TS Ngô Thùy Anh 20 Tài liệu Tham Khảo Tiếng Việt Châu Hữu Hầu Tìm hiểu viêm gan virút B Nhà xuất Y học, 2001 Hoàng Ngọc Hiển, Nguyễn Đình Bảng, Bùi Đại, Nguyễn Kim Nữ Hiếu, Nguyễn Anh Tuấn Thuyết trình virút viêm gan vắcxin phòng viêm gan B Hà Nội, 4/1997 Nguyễn Thu Vân Viêm gan virút B vắcxin dự phòng Nhà xuất Y học, 2002 Nguyễn Thu Vân Nghiên cứu tiếp thu chuyển nhợng kỹ thuật để xây dựng qui trình công nghệ sản xuất vắcxin viêm gan A vắcxin viêm gan B tái tổ hợp ADN Đề tài nghiên cứu khoa học công nghệ nhà nớc, 2001 Tiếng Anh American Academy of Pediatrics and American college of obsterics and gynecology Guideleines for prenatal care 3rd et Elk Grove Village IL: American Academy of Pediatrics, 1991 Achek N., Bartenschlager R., Kuhn C., and Schaller H Phosphorylation and rapid turnover of hepatitis B virus X-protein expressed in HepG2 cell from a recombinant vaccinia virus Oncogene, 6, 1735-1744, 1991 Alter M.J., Hadler S.C., Margolis H.S., et al The changing epidemiology of hepatitis B in the United States: need for alternative vaccination strategies JAMA., 263, 1218-1222, 1990 Alter H.J., Purcell R.H., Gerin J.L et al Transmission of hepatitis B surface antigen-positive saliva and semen Infect Immun, 16, 928-933, 1992 Albin C and Robinson W.S Protein kinase activity in hepatitis B virus J Virol., 34, 297-302, 1980 10 Almeida J.D., Rubenstein D and Stott E.J New antigen-antibody system in Australia-antigen-positive hepatitis Lancet, ii, 1225-1227, 1971 11 Bavand M.R and Laub O Two proteins with reverse transcriptase activities associated with hepatitis B virus-like particles J Virol., 62, 626-628, 1988 12 Bond W.W., Fevero M.S., Petersen N.J., Gravelle C.R., Ebert J.W., Maynard J.E Survival of hepatitis N virus after drying and storage for one week Lancet, 1, 550551, 1989 13 Bartenschlager R and Schaller H Hepadnaviral assembly is initiated by polymerase binding to the encapsidation signal in the viral RNA genome EMBO., 7, 4185-4192, 1992 14 Barnabas S., hai T and Adrisani O.M The hepatitis B virus X protein enehnces the DNA binding potential and transcription efficacy of bZip transcription factors J Biol Chem., 272(33), 20684-20690, 1997 15 Blumberg B.S., Gerstley B.S.J., Hungerford D.A., London W.T., and Sutnick A.J A serum Antigen (Australia Antigen) in Down’s Syndrome, Leukemia and Hepatitis Annals of Internal Medicine 66, 924-231, 1967 21 16 Blum A.L., Stutz R., Haemmerli V.P., Schmid P and Grady G F Fortuitously controlled study of steroid therapy in acute viral hepatitis I Acute Disease Am J Med., 47, 82-89, 1969 17 Burns., Miska S., Chassot S and Will H Enhancement of hepatitis B virus infection by non-infectious subviral particles J Virol, 72, 1462-1468, 1990 18 Bancroft W.H., Mundon F.K and Russell P.K Detection of additional antigenic determinants of hepatitis B antigen J Immuno, 109, 985-992, 1972 19 Bock C.T., Tillmann H.L., Maschek H.J., Manns M.P., and Trautwein C A PreS mutation isolated from a patient with chronic hepatitis B infection leads to virus retention and misassembly Gatroenterology, 113(6), 1976-1982 20 Bruss V and Ganem D Mutational analysis of hepatitis B surface antigen particle assembly and secretion J Virol, 65, 3813-3820, 1991 21 Bruss V and Vieluf K Functions of the internal pre-S domain of the large surface protein in hepatitis B virus particle morphogenesis J Virol., 69, 6652-6657, 1995 22 Birnbaum F and Nassal M Hepatitis B virus nucleocapsid assembly: primary structure requirements in the core protein J Virol., 64, 3319-3330, 1990 23 Bruss V and Gerlich W.H Formation of transmembranous hepatitis B e-antigen by contranslational in vitro processing of the viral precore protein Virology, 163, 268275, 1988 24 Budkowska A., Bedossa P., Groh F., Louise A and Pillot J Fibronectin of human liver sinusoids binds hepatitis B virus: Identification by an anti-idiotypic antibody bearing the internal image of the pre-S2 domaun J Virol 69, 840-848, 1995 25 Brierley R.A., Bussineau C., Kosson R., Melton A., and Siegel R.S Fermentation development of recombinant Pichia pastoris expressing the heterologous gene : bovine lysozyme Biochemical Engineering VI, Ann NY Acad Sci 589, 530-363, 1990 26 Bertino-J.S., Tirrell-P., Greenberg-R.N., Keyserling-H.L., Poland-G.A., KumarM.L., Ramsey-K A compatative trial of standard or high-dose S submit recombinant hepatitis B vaccine versus a vaccine containing S submit, pre-S1 and pre-S2 particles revaccination of healthy adult nonresponders J-Infect-Dis Mar: 175(3), 678-681, 1997 27 Clarke B.E and Sangar D.V Processing and assembly of foot-and-mouth disease virus proteins using subgenomic RNA J Gen Virol 69, 2313-2325, 1988 28 Chen D.S Control of hepatitis B in Asia: mass immunization program in Taiwan In: Hollinger F.B., Lemon S.M., Margolis H.S., eds Viral hepatitis and liver disease Baltimore: Williams& Wilkins, 716-719, 1991 29 CDC Public health service inter-agency guidelines for screening donors of blood, plasma, organs, tissues and semen for evidence of hepatitis B and hepatitis C MMWR, 40, 5-6, 1991.Moyer K.A., Alter M.J., Favero M.S Hemodialysisassociated hepatitis B: revised recommendations for serologic screening Semin dialysis, 3, 201-204, 1990 30 CDC Protection against viral hepatitis : Recommendations of thr immunization practices advisory committee (ACIP) MMWR, 39, 5-22, 1990 22 31 Couderc R., and Barratti J Oxidation of methanol by the yeast Pichia pastoris: purification and properties of alcohol oxidase Agric Biol Chem 44, 2279-2289, 1980 32 Cooksley G.Vial hepatitis Liver update 97, 25-28 Nov 1997, Malaysia, 39-42 33 Chen H.S., Kew M.C., Hornbucke W.E et al The precore gene of the woodchuck hepatitis virus genome is not essential forviral replication in the natural host J Virol., 66, 5682-5684, 1992 34 Cheng K.C., Smith L and Moss B Hepatitis B virus large surface protein is not secreted but is immunogenic when selectively expressed by recombinamt vaccinia virus J Virol 60, 337-344, 1986 35 Conjeevaram H., Balow J.E., Austin H., Hoofngale J.H and DiBisceglie A.M long term follow up of hepatitis V virus (HBV) related glomerulonephritis treated with alpha interferon [Abstract] Hepatology, 18, 146A, 1993 36 Coleman P.J., Shaw F.E.Jr./ Serovich J., Hadler S.C., Margolis H.S Intradermal hepatitis B vaccination in a large hospital employee population Vaccine, 9, 723727, 1991 37 Cregg J.M Genetics of methylotrophic yeasts, in Proceedings of the Fifth International Symposium on Microbial Growth on C1 compounds (Duine J.A and van Verseveld H.W., eds.), Marinus Nijhoff, Dordrecht The Nertherlands, 158-167, 1997 38 Cregg J.M., Tschopp J.F., Stillman C., Siegel R., Akong M., Craig W.S., Buckholz R.G., Madden K.R., kellaris P.A., Davis G.R., Smiley B.L., Cruze J., Torregrossa R., Velicelebi G., abd Thill G.P high level expression nad efficient assembly of hepatitis B surface antigen in Pichia pastoris Bio/Technology 5, 470-485, 1987 39 Cregg J.M and Madden K.R Development of the methylotrophic yeast, Pichia pastoris, as a host system for the production of foreign proteins, Dev Ind Microbiol 29, 33-41, 1988 40 Chiruvolu V., Cregg J.M and Meagher M.M Recombinant protein production in an alcohol oxidase -defective satrain of Pichia pastoris in fed-batch fermentations Enzyme Microb Technol 21, 277-283, 1997 41 Dane D.S., Cameron C.H and Briggs M Virus-like Particles in serum of patients with Australia-Antigen-Associated hepatitis Lancet 1, 695-698, 1970 42 Davison F., Alexander G.J.M., Trowbridge R., Fagan E.A and Williams R Detection of hepatitis B virus DNA in spermatozoa, urine, saliva and leucocytes of chronic HBsAg carriers Hepatology, 4, 37-44, 1987 43 Eble B.E., Lingappa V.R and Ganem D Hepatitis B surface antigen : An unusual secreted protein initially synthesized as a transmembrane polypeptide Mol And Cell Biology, 6, 1454-1463, 1986 44 Ellis R.W Hepatitis B vaccines in Clinical Practice New York: Marcel Dekker, 1993 45 Evans T.G., Schiff M., Graves B., Agosti J., Barrit M.L., Garner D., Holley J.L The safety and efficacy of GM-CSF as an adjuvant in hepatitis B vaccination of chronic hemodialysis patients who have failed primary vccination Clin-Nephrol 2000, Aug, 54(2), 138-142 23 46 Franco A., Paroli M., Testa U., Benvenuto R., Peschle C., Balsano F and Barnaba V Transferrin receptor mediates uptake and presentation of hepatitis B envelope antigen by T lymphocytes J Exper Med., 175, 1195-1205, 1992 47 Frick C.E and Hogle J.M The cell-induced conformation changes of poliovirus: externalazation of amino terminus of VP1 is resposible for liposome binding J Virol., 199 48 Fukai K., Takada S., Yokosuka O., Saisho H., Omata M., and Koike K Characterization of a specific region in the hepatitis B virus enhencer I for the efficient expression of X Gene in the hepatic cell Virol., 236(2), 279-287, 1998 49 Gonzalez M.L., Usandizaga M., Alomar P., et Al Intradermal and intramuscular route of hepatitis B vaccination against hepatitis B vaccine, 8, 402-405, 1990 50 Grabow W.O.K., Prozesky O.W., Applebaum P.C and Lecatsas G Absence of hepatitis B antigens from fecec and sewage as a result of enzymatic destruction J Infect Dis, 131, 658-664, 1975 51 Grotto I., Mandel Y., Ephros M., Ashkenazi I And Shemer J Major adverse reactions to yeast-derived hepatitis B vaccines—A review Vaccine, 16, 329-334, 1998 52 Gallina A., Bonelli F., Zentilin L., Rindi G., Muttini M and Milanesi G A recombinant hepatitis B core antigen polypeptide with the protamine-like domain deleted self-assembles into capsid particles but fails to bind nucleic acids J Virol., 63, 4645-4653, 1989 53 Guo J-T and Pugh J.C Topoloygy of the large envelope protein of duck hepatitis B virus suggests a mechanism for membrane translocation during particle morphogenesis J Virol, 71, 1107-1114, 1996 54 Gimson A.E.S., White Y.S., Eddleston A.L.W.F et al Clinical and prognostic differences in fulminant hepatitis type A, B, and non-A, non-B Gut., 24, 1194, 1983 55 Gleeson M.A and Sudbery P.E The methylotrophic yeasts Yeast 4, 1-5, 1988 56 Hadchouel M., Pasquinelli C., Fournier J.G., et al Detection pf mononuclear cells expressing hepatitis B virus in peripheral blood from HBsAg positive and Negative patients by in situ hybridization J med Virol., 24, 27-32, 1988 57 Hauser P Thomas H.C., Waters J et al Induction of neutralizing antibodies in chimpanzees and in humans by a recombinant yeast-derived hepatitis B surface antigen particle In: Zuckerman A.J., ed Viral hepatitis and liver disease New York: Alan R Liss, 1031-1037, 1988 58 Hoofnagle J.H Antiviral treatment of chronic type B hepatitis Ann Intern Med., 107, 414-415, 1987 59 Hurie M.B., Mast E.E., Davis J.P Horizontal transmission of hepatitis B virus infection to United States-born children of Hmong refugees Padiatrics, 1992 60 Hadler S.C., Fields H.A Hepatitis delta virus In: Belshe R.B., ed Textbook of human virology St Louis: Mosby Year Book, 749-766, 1991 61 Heermann K.H., Goldmann U., Schwartz W., Seyffarth T., Baumgarten H and Gerlich W.H Large surface proteins of hepatitis B virus containing the pre-S sequence J Virol 52, 396-402, 1984 24 62 Heermann K.H., Goldmann U., Schwartz W., Seyffarth T., Baumgarten H., and Gerlich W.H Large surface protein of hepatitis B virus containing the pre-S sequence J Virol., 52, 396-402, 1984 63 Heermann K.H and Gerlich W.S Surface protein of hepatitis B viruses In: McLachlan A.(Ed.) Molecular Biology of hepatitis B viruses CRC Press, Boca Raton, 109-144, 1991 64 Hollinger F.B and Dienstag J.L Hepatitis B and D viruses In: Murray P.R., Baron E.J., Pfaller M.A., Tenover F.C., and Yolken R.H (Eds,) Manual of clinical microbiology, 6th ed Washigton D.C., ASM Press, 1033-1049, 1995 65 Hwang L-Y.,Lee C.Y., Beasley R.P Five year follow-up of HBV vaccination with plasma derived vaccine in neonates Evaluation of immunogenicity and efficacy against perinatal transmission In: Hollinger F.B., Lemon S.M., Margolis H.S., eds Viral hepatitis and liver disease Baltimore: Williams& Wilkins, 759-761, 1991 66 Hazeu W and Donker R.A A continuous culture study of methanol and formate utilization by the yeast Pichia pastoris Biotechnol Ltt.5, 399-404, 1981 67 Heineman T.C., Clements-Mann M.L., Poland G.A., Jacobson R.M., Izu A.E., Sakamoto D., Eiden J., Van-Nest G.A., Hsu H.H A randomized, controlled study in adults of the immunogenicity of a novel hepatitis B vaccine containing MF 59 adjuvant Vaccine Jul 16, 17(22), 2769-2778, 1999 68 Hsu H.M., Lee S.C., Wang M.C., Lin S.F., Chen D.S Efficacy of a mass hepatitis B immunization program after switching to recombinant hepatitis B vaccine: a population-based study in Taiwan Related Articles, Books, Linkout Vaccine, Apr 6, 19 (20-22), 2825-2829, 2001 69 Joshi N., Kumar A., Sreenivas D.V., Palan S., Nagarjuna-Kumar Y.R Safety and immunogenicity of indigenous recombinant hepatitis B vaccine (Shanvac-B) in comparison with commercially available vaccine India-Gastroenterol AprJun,19(2), 71-73, 2000 70 Kaplan P.M., Greenman R.L., Gerin J.L., Purcell R.H and Robinson W.S DNA polymerase associated with humna hepatitis B antigen J Virol 12, 995-1005, 1973 71 Kim C.M., Koike K., Saito I., Miyamura T and Jay G HBx gene of hepatitis B virus induces liver cancer in transgenic mice Nature, 351, 317-320 72 Klavinskis L.S., Whitton J.L and Oldstone M.B.A Molecularly engineered vaccine which express an immunodominant T-cell epitope induces T lymphocytes that confer protection from lethal virus infection J Virol 63, 4311-4316, 1989 73 King J.W., Taylor E.M., Crow S.D., et Al Comparison of the immunogenicity of hepatitis B vaccine administered intradermally and intramuscularly Rev Infect Dis., 12, 1035-1043, 1990 74 Klein N.P and Schneider R.J Activation of Src family kinase by hepatitis B virus HBx protein and coupled signaling to Ras Mol Cell biol., 17(11), 6427-6436, 1997 75 Laure F., Zagury D., Saimot A.G., Gallo R.C., Hahn B.H and Brechot C Hepatitis B virus DNA sequences in lympjoid cells from patients with AIDS and AIDSrelated complex Science, 229, 561-563, 1985 25 76 Lie-Injo L.E., Balasegaram M., Lopez C.G and Herrera A.R Hepatitis B virus DNA large surface protein via induction of stress in the endoplasmic reticulum J Virol., 71 (10), 7387-7392, 1997 77 Lee Y.I., Lee S., Lee Y., Bong Y.S., Hyun S.W., Yoo Y.D., Kim S.J., Kim Y.W and Poo H.R The human hepatitis B virus transactivator X gene product regulates Sp1 mediated transcription of an insulin-like growth factor II promoter Oncogenen, 16, 2367-2380, 1998 78 Le Bouvier G.L., McCollum R.W., Bierholzer W.J.J., Irwin G.R., Krugman S and Giles J.P Subtypes of Australia antigen and hepatitis B virus J Am Med Assoc., 222, 928-930, 1972 79 MacCallum F.O Homologus serum jaundice Lancet 2, 691-692, 1974 80 Mehdi H., Kaplan M.J., Anlar F.Y., Yang X., Bayer R., Sutherland K and Peeples M.E Hepatitis B virus surface antigen binds to apolipoprotein H J Viro., 68, 2415.2424, 1994 81 Mehdi H., Yang X and Peeples M.E An altered form of apolipoprotein H binds hepatitis B virus surface antigen most efficiently Virol., 217, 58-66, 1996 82 Mehta A., Lu X., Block T.M., Blumberg B.S and Dwek R Hepatitis B virus envelope glycoproteins vary drastically in their sensitivity to glycan processing: Evidence that alteration of a single N-linked glycosylation site can regulate HBV secretion Proc Natl Acad Sci USA, 94, 1822-1827, 1997 83 Mosley J.W The epidemiology of viral hepatitis: an overview Am J med Sci., 270, 253-270, 1975 84 Miller R.H Evolutionary relationship between hepadnaviruses and retro viruses In: McLachlan A (Ed.) Molecular biology of the hepatitis B virus CRC press, Boca Raton, 227-244, 1991 85 Melegari M., Scaglioni P.P and Wands J.R the small envelope protein is required for secretion of a naturally occuring hepatitis N virus mutant with pre-S1 deleted J virol, 71, 5449-5454, 1997 86 Margolis H.S., Alter M.J., Hadler S.C Hepatitis B: evolving epidemiology and implications for control Semin liver Dis., 11, 84-92, 1991 87 Moyer L.A., Shapiro C.N., Shulman G., Brugliera P A survey of hepatitis B surface antigen pisitive blood donors: degree of understanding and action taken after notification In: Hollinger F.B., Lemon S.M., Margolis H.S., eds Viral hepatitis and liver disease Baltimore: Williams& Wilkins, 728-729, 1991 88 Nagaraju K., Naik S.R and Naik S Funtional implications of hepatitis B surface antigen (HBsAg) in the T cells of Chronic HBV carriers J Viral Hepat., 4(4), 221230, 1997 89 Nevens F., Main J., Honkoop P., Tyrrell D.L., Barber J., Sullivan M.T., Fevery J., De Man R.A and Thomas H.C Lamivudine therapy for chronic hepatitis B: A sixmonth randomized dose-ranging study Gastroenterology, 113(4), 1258-1263, 1997 90 Neurath A.R., Strick N and Sproul P Search for hepatitis B virus cell receptors reveals binding sites for interleukin on the virus envelope protein J Exp Med., 175, 461-169, 1992 91 Noonan C.A., Yoffe B., Mansell P.W.A., Melnick J.L and Hollinger F.B 26 92 Extrachromosomal sequences of hepatitis B virus DNA in peripheral blood mononuclear cells of acquired immune deficiency syndrom patients Proc Natl Acad Sci USA., 83, 5698-5702, 1986 93 Okochi K and Murakami S Observations on Australia antigen in Japanese Vox Sang 15, 374-385, 1968 94 OSHA Occupational Exposure and bloodborne pathogens: Final Rule Dept of Labor, 29, CFR part 1910, 1030 Federal register, 56, 64175-64182, 1991 95 Ostros D.G., Goldsmith J., Kalish S.B., Chmiel J.S., Hadler S.C and Phair J.P Nonresponse to hepatitis B vaccine in homosexual men Transm Dis., 14, 92-97, 1987 96 Poisson F., Severac A., Hourious C., Goudeau A and Roingeard P Both Pre-S1 and S domains of hepatitis B virus envelope proteins interact with the core particle Virol., 228, 115-120, 1997 97 Prince A.M An antigen detected in the blood during the incubation period of serum hepatitis Proc Natl Acad Sci USA, 60, 814-821,1996 98 Peters M Mechanism of action of interferons Semin Liv Dis., 9, 235-239, 1989 99 Robinson W.S and Greenman R.L DAN polymerase in the core of thr human hepatitis B virus candidate J Virol., 13 1231-1236, 1974a 100 Robinson W.S., Clayton D.A and Greenman R.L DNA of human hepatitis B virus camdidate J Virol., 14, 384-391, 1974b 101 Romet-Lemonne J.L., McLane M.F., Elfassi E., Haseltine W.A., Azocar J and Essex M Hepatitis B virus infection in cultured human lymphoblastoid celss Science, 221, 667-669, 1983 102 Seeger C and Maragos J Identification and characterization of the woodchuck hepatitis virus origin of DNA replication J Virol, 64, 16-23, 1990 103 Stirk H.J., Thorton J.M and Howard C.R A topological model for hepatitis B surface antigen Intervirol., 33, 148-158, 1992 104 Swameye I And Schaller H Dual topology of the large envelope protein of duck hepatitis B virus: Determinants preventing pre-S translocation and glycosylation J Virol., 71, 9434-9441, 1997 105 Shen H.D., Choo K.B., lee S.D., Tsai Y.T and Han S H Hepatitis B virus DNA in leukocytes of patients with hepatitis B virus-associated liver disease J Med Virol., 18, 201-211, 1986 106 Sherlock S and Walshe V.M The post-hepatitis syndrome Lancet 11, 482, 1996 107 Stapleton J.T., Jansen R.W and Lemon S.M Neutralizing antibody to hepatitis A virus in immune serum globulin and in the sera of human recipients of immune serum globulin Gastroenterology 89, 637-642, 1985 108 Seeger C and Maragos J Identification of a signal necessary for initiation of reverse transcription of the hepadnavirus genome J Virol., 65, 5190-5195, 1991 109 Schlicht H.J., Bartenschlager R and Schaller H Biosynthesis and enzymatic functions of hepadnaviral reverse transcriptase In McLachlan A (Ed.) Molecular Biology of the hepatitis B virus CRC Press, Boca raton, 171-180, 1991 110 Seeger C., Summers J and Mason W.S Viral DNA synthesis Current topics in microbiology and immunology, 168, 41-60, 1991 27 111 Sureau C., Romet-Lemonne J.l., Mullins J.I and Essex M Production of hepatitis B virus by a differentiated human hepatoma cell line after transfection with cloned circular HBV DNA Cell, 47, 37-47, 1986 112 Schiff L The use of steroids in liver disease Medicine (Baltimore), 45, 565-573, 1966 113 Seifer M., Hohne M., Schaefer S and Gerlich W.S in vitro tumorigenicity of hepatitis B virus DNA and HBx protein J Hepatology, 13(suppl.), S61-S65, 1992 114 Shaul Y Regulation of hepadnaviruses transcription In: McLachlan A (Ed.) Molecular biology of the hepatitis B virus CRC press, Boca Raton, 193-212, 1991 115 Swartz J.R and Cooney C.L Metanol inhibition in continuous cultures of Hansenula polymorpha Appl Environ Microbiol 41, 1206-1213, 1981 116 Sreekrishna K., Nelles L., Potenz R., Cruze J., Mazzaferro P., Fish W., Fuke M., Holden K., Phelps D., Wood P., and Parker K High-level expression, purification, and characterization of recombinant human tumor necrosis factor synthesized in the methylotrophic yeast Pichia pastoris Biochemistry 28, 4117-4125, 1989 117 Tabor E Guilain-Barre syndrome and other neurological syndromes in hepatitis A, B, non-A, non-B J Med Virol., 21, 207, 1987 118 Tiollais P., Charnay P and Vyas G.N Biology of hepatitis B virus Science, 213, 406-411, 1981 119 Tavis J.E., Massey B., and Gong Y The duck hepatitis B virus polymerase is activated by its RNA packaging signal, epsilon J Virol., 72, 5789-5796, 1998 120 Urban M., McMillan D.J., Canning G., Newell A., Brown E., Mills J.S and Jupp R In vitro activity of hepatitis virus polymerase: Requirement for distinct metal ions and the viral epsilon stem-loop J Gen Virol., 79, 1121-1131, 1998 121 Wu J.Y., Zhou Z.Y., Judd A., Cartwright C.A and Robinson W.S The hepatitis B virus-encoded transcriptional transactivator HBx appears to be a novel protein serin/threonine kinase Cell, 63, 687-695, 1990 122 World Health Organization Viral hepatitis reports of WHO scientific group WHO Technical Report Series 512, Geneva:WHO 123 Wong V.C.W., Ip, H.M.M., Reesink H.W et al Prevention of HBsAg carrier State in newborn infants of mothers who are chronic carriers of HBsAg and HBeAg by Administration of hepatitis-B vaccine and hepatitis-B Immunoglobulin DoubleBlind randomised placebo-controlled study Lancet, 1, 921-926, 1984 124 Werr M and Prange R Role for calnexin and N-linked glycosylation in the assenbly and secretion of hepatitis B virus middle envelope protein particles J Virol., 72, 778-782, 1997 125 Xu Z., Jensen G and Yen T.S Activation of hepatitis B virus S promoter by the viral in liver and white blood cells pf patients with hepatome DNA, 2, 301-308, 1983 126 Xu Z., Bruss V and Yen T.S.B Formation of intracellular particles by hepatitis B virus large surface protein J Virol., 71, 5487-5494, 1997 127 Yersushalmi-B., Raz-R., Blondheim-O., Shumov-E., Koren-R., Dagan-R Safety and imunogenicity of a novel mammalian cell-derived recombinant hepatitis B vaccine containing pre-S1 and pre-S2 antigen in neonatess Pediatr-Infect-Dis-J Jun, 16(6), 587-592, 1997 28 128 Yoffe B., Noonan C.A., Melnick J.L and Hollinger F.B Hepatitis B virus DNA in Mononuclear cells and analysis of cell subsets for the presence of replicative intermediates of viral DNA I Infect Dis., 153, 471-477, 1986 29