Nhân nhanh sinh khối mô sẹo và rễ cây giảo cổ lam gynostemma pentaphyllum và nâng cao khả năng tích lũy hàm lượng saponin

HCM Ứ Ể Ệ Ệ BÁO CÁO NGHIỆM THU NHÂN NHANH SINH KHỐI MÔ SẸO VÀ RỄ CÂY GIẢO CỔ LAM (Gynostemma pentaphyllum) VÀ NÂNG CAO KHẢ Ă Í LŨY LƢỢNG SAPONIN ThS Phạm Cao Khải CN Kha Nữ Tú Uyên Th nh ph Ch inh, h n 01/2017 BAN QU N LÝ KHU NÔNG NGHI P CÔNG NGH CAO TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đ ng nghiệm thu) NHÂN NHANH SINH KHỐI MÔ SẸO VÀ RỄ CÂY GIẢO CỔ LAM (Gynostemma pentaphyllum) VÀ NÂNG CAO KHẢ Ă Í LŨY ƠQ Ủ TRÌ (Ký tên, đóng dấu xác nhận) Th nh ph Ch LƢỢNG SAPONIN CHỦ NHIỆ ĐỀ TÀI (Ký tên) inh, h n 01/2017 TÓM TẮT Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) thuốc quý hiếm, đƣợc dân gian sử dụng thời gian dài điều trị bệnh Tuy nhiên, bảo tồn khai thác loài dƣợc liệu chƣa đƣợc quản lý chặt chẽ nghiên cứu công nghệ sinh học lồi cịn Ứng dụng cơng nghệ tế bào bảo tồn phát triển loài dƣợc liệu quý mang tính cấp thiết Các đốt thân in vitro đƣợc cấy môi trƣờng MS bổ sung BA (1,0 mg/l) kết hợp NAA (0,1 mg/l) cho số chồi cao (6,8 chồi/mẫu cấy) Môi trƣờng MS ½ phù hợp cho tăng trƣởng chồi với chiều cao, số lá, số rễ chiều dài rễ lần lƣợt đạt 5,2 cm, lá, 6,4 rễ, 7,6 cm Các mẫu in vitro đƣợc cấy môi trƣờng MS bổ sung 2,4-D 1,0 mg/l cho tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo cao (86,67%) Môi trƣờng phù hợp cho tăng sinh mô sẹo MS + 1,0 mg/l 2,4-D + 30 mg/l sucrose + 100 ml nƣớc dừa cho hệ số tăng sinh 3,84 Môi trƣờng SH bổ sung 0,5 mg/l IBA phù hợp cho trình nhân nhanh sinh khối rễ môi trƣờng lỏng, sinh khối rễ tƣơi đạt trọng lƣợng cao (5,33g/100ml) Việc bổ sung Methyl jasmonate không làm tăng khả tăng sinh rễ nhƣng có tác dụng làm tăng hàm lƣợng saponin, methyl jasmonate (10 mg/l) đƣợc bổ sung vào nuôi cấy trƣớc thu hoạch ngày cho hàm lƣợng saponin cao (44,67 mg/g) ABSTRACT Trang BM20-QT.QLKH Giao co lam (Gynostemma pentaphyllum) was a rarely valuable medicinal plant that people has been traditionally used for disease treatment in a long time However, conservation and exploiting this medicinal plant were not managed properly and studies of biotechnology on this medicinal plant were till limited Therefore, the application of plant cell biotechnology in conservation and development of Giao co lam is necessary In vitro internode segments of Giao Co Lam cultured on MS medium supplemented with 1.0 mg/l BA and 0.1 mg/l NAA gave the highest shoot induction (6.8 shoots/ explant) MS ½ medium was suitable for the growth of shoots with height, number of leaves, number of roots and root length reached 5.2 cm, leaves, 6.4 roots, and 7.6 cm, respectively In vitro leaf samples cultured on MS medium with 2,4-D 1.0 mg/l induced callus with the highest rate (86.67%) The suitable medium for proliferation of callus was MS + 1.0 mg/l 2,4-D + 30 mg/l sucrose + 100 ml coconut water (proliferation coefficient is 3.84) The SH medium with 0.5 mg/l IBA was suitable for proliferation of root biomass in liquid medium reached the highest fresh weight of root biomass (5.33g) The supplementation of methyl jasmonate into the cultures did not increase the proliferation of root biomass but it enhanced saponin content with the highest level (44.67 mg/g) when those cultures exposured with methyl jasmonate (10 mg/l) in days Trang BM20-QT.QLKH MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa i Tóm tắt đề tài ii Abstract iii Mục lục iv Danh sách chữ viết tắt .vi Danh sách bảng, đồ thị vii Danh sách hình viii ĐỀ TÀI .1 MỞ ĐẦU hƣơng - TỔNG QUAN TÀI LI U 1.1 Sơ lƣợc đối tƣợng nghiên cứu 1.1.1 Phân loại 1.1.2 Đặc tính sinh học .5 1.1.3 Tác dụng y học 1.2 Các nghiên cứu nƣớc 1.2.1 Các nghiên cứu Giảo cổ lam Gynostemma pentaphyllum .7 1.2.2 Các nghiên cứu nhân sinh khối kích thích tổng hợp saponin hƣơng – NỘ D VÀ ƢƠ Á Ê ỨU 13 2.1 Nghiên cứu nhân nhanh in vitro Giảo cổ lam 13 2.1.1 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ BA kết hợp với NAA đến khả nhân chồi Giảo cổ lam 13 2.1.2 Khảo sát ảnh hƣởng mơi trƣờng khống đến khả sinh trƣởng phát triển chồi Giảo cổ lam 14 Trang BM20-QT.QLKH 2.2 Khảo sát ảnh hƣởng mơi trƣờng khống, chất điều hòa sinh trƣởng thành phần hữu đến q trình tạo nhân sinh khối mơ sẹo Giảo cổ lam 15 2.2.1 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ IAA, NAA 2,4-D đến khả tạo mô sẹo Giảo cổ lam 15 2.2.2 Khảo sát ảnh hƣởng thành phần hữu đến trình nhân sinh khối mô sẹo Giảo cổ lam 15 2.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng mơi trƣờng khống, chất điều hịa sinh trƣởng đến trình tạo nhân nhanh rễ bất định Giảo cổ lam .16 2.3.1 Khảo sát ảnh hƣởng mơi trƣờng khống đến khả tạo rễ bất định Giảo cổ lam 16 2.3.2 Khảo sát ảnh hƣởng chất điều hịa sinh trƣởng đến q trình nhân nhanh sinh khối rễ bất định môi trƣờng lỏng 17 2.4 Nghiên cứu ảnh hƣởng elicitor đến tích lũy hàm lƣợng saponin rễ bất định .18 2.5 hƣơng pháp thu thập xử lý số liệu 19 hƣơng - KẾT QU VÀ TH O LUẬN 20 3.1 Nghiên cứu nhân nhanh in vitro Giảo cổ lam 20 3.2 nh hƣởng mơi trƣờng khống, chất điều hịa sinh trƣởng thành phần hữu đến trình tạo nhân sinh khối mơ sẹo Giảo cổ lam 24 3.3 nh hƣởng môi trƣờng khống, chất điều hịa sinh trƣởng đến q trình tạo nhân nhanh rễ bất định Giảo cổ lam .29 3.4 nh hƣởng methyl jasmonate đến tích lũy hàm lƣợng saponin rễ bất định .24 hƣơng - KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 4.1 Kết luận .37 4.2 Đề nghị 37 TÀI LI U THAM KH O 38 PHỤ LỤC 43 Trang BM20-QT.QLKH DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Thuật ngữ tiếng Việt Đ Đối chứng TN Thí nghiệm NT Nghiệm thức BA - Benzyl adenine KIN Kinetin 2,4-D 2,4-Dichloropheonoxyacetic acid IAA Indole-3-acetic acid NAA Naphthalene acetic acid IBA Indole – butyric acid MS Môi trƣờng MS (Murashige & Skoog, 1962) SH Môi trƣờng SH (Schenk Hilderbrant) B5 Gamborg (1968) medium TLT Trọng lƣợng tƣơi MJ Methyl jasmonate Ctv Cộng tác viên Trang BM20-QT.QLKH DANH SÁCH BẢNG, ĐỒ THỊ Số Tên bảng Trang 2.1 Khảo sát nồng độ BA NAA đến khả nhân chồi Giảo cổ lam 13 2.2 Khảo sát mơi trƣờng khống đến khả sinh trƣởng phát triển chồi Giảo cổ lam 14 2.3 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ mô sẹo Giảo cổ lam 15 2.4 Khảo sát ảnh hƣởng hàm đƣờng sucrose nƣớc dừa đến trình nhân sinh khối mô sẹo 16 2.5 Khảo sát ảnh hƣởng mơi trƣờng khống đến khả tạo rễ bất định 16 2.6 Khảo sát nồng độ IBA NAA thích hợp cho q trình nhân nhanh rễ Giảo cổ lam môi trƣờng lỏng 17 2.7 Khảo sát ảnh hƣởng methyl jasmonate đến tích lũy hàm lƣợng saponin mô sẹo rễ bất định 18 3.1 nh hƣởng BA NAA đến nhân chồi Giảo cổ lam sau tuần nuôi cấy 20 3.2 nh hƣởng mơi trƣờng khống đến khả sinh trƣởng chồi in vitro sau tuần nuôi cấy 23 3.3 nh hƣởng nồng độ IAA, NAA 2,4-D đến khả tạo mô sẹo Giảo cổ lam 24 3.4 nh hƣởng hàm đƣờng sucrose nƣớc dừa đến q trình nhân sinh khối mơ sẹo Giảo cổ lam 27 3.5 nh hƣởng mơi trƣờng khống đến khả tạo rễ bất định 29 3.6 Khảo sát nồng độ IBA NAA thích hợp cho trình nhân nhanh rễ Giảo cổ lam mơi trƣờng lỏng 31 3.7 Khảo sát ảnh hƣởng methyl jasmonate đến tích lũy hàm lƣợng saponin rễ bất định 35 đến khả tạo Trang BM20-QT.QLKH DANH SÁCH HÌNH Tên hình ảnh Số Trang 3.1 Sự cảm ứng đốt thân Giảo cổ lam môi trƣờng bổ sung BA kết hợp NAA nồng độ khác sau tuần nuôi cấy 22 3.2 Sự cảm ứng đốt thân Giảo cổ lam môi trƣờng bổ sung BA kết hợp NAA nồng độ khác sau tuần nuôi cấy 22 3.3 Sự sinh trƣởng chồi Giảo cổ lam môi trƣờng bổ sung khống khác sau tuần ni cấy 24 3.4 Sự cảm ứng mẫu Giảo cổ lam môi trƣờng bổ sung loại auxin với nồng độ khác sau tuần nuôi cấy 26 3.5 nh hƣởng hàm đƣờng sucrose nƣớc dừa đến q trình nhân sinh khối mơ sẹo Giảo cổ lam sau tuần nuôi cấy 28 3.6 Sự cảm ứng mẫu Giảo cổ lam mơi trƣờng khống khác bổ sung 0,5 mg/l IBA sau tuần nuôi cấy 30 3.7 Sự tăng sinh rễ môi trƣờng SH bổ sung auxin nồng độ khác 32 3.8 Động thái sinh trƣởng rễ thứ cấp Giảo cổ lam môi trƣờng SH bổ sung 0,5 mg/l IBA giai đoạn khác 33 Trang BM20-QT.QLKH Ề ĐỀ Ứ ên đề tài: Nhân nhanh sinh khối mô sẹo rễ Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) nâng cao khả tích lũy hàm lƣợng saponin Thời gian thực hiện: Từ tháng 01/2016 đến tháng 12/2016 Tổng kinh phí: 177,946,000 Đ, đó: a Từ ngân sách nghiệp khoa học thành phố: 177,946,000 V Đ b Từ nguồn khác ( gân sách hà ƣớc): V Đ hƣơng trình đăng ký: nghiên cứu thường xuyên a Tự đề xuất:  b Đặt hàng nghiên cứu: (ghi rõ công văn đặt hàng) Chủ nhiệm đề tài nghiên cứu: Chủ nhiệm  Họ tên: Phạm Cao Khải  ăm sinh: 01/01/1987  Học vị: Thạc sĩ Giới tính: Nam Chun ngành: Cơng nghệ sinh học ăm đạt học vị: 2014  Chức vụ: Phó phịng Quản lý Khoa học Chuyển giao Cơng nghệ  ên quan công tác: Trung tâm Nghiên cứu Phát triển NNCNC Tp.HCM  Địa quan: Ấp 1, xã Phạm Văn ội, huyện Củ Chi, Tp HCM  Điện thoại quan: (08) 8862726 Fax: (08) 37990500  Địa nhà riêng: 173/21 Đƣờng 138, tổ 3, 4, phƣờng Tân Phú, quận 9, TP HCM  Điện thoại: 0919116766 E-mail: pcaokhai@gmail.com Chủ nhiệm  Họ tên: Kha Nữ Tú Uyên  ăm sinh: 1985  Học vị: Cử nhân Giới tính: Nữ Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học ăm đạt học vị: 2009  Chức vụ: Chuyên viên  ên quan công tác: Trung tâm Nghiên cứu Phát triển NNCNC Tp.HCM BM.05 – QT.QLKH [21] Kim Y.S., Hahn E.J., Murthy H.N., Paek K.Y (2004), Adventitious root growth and ginsenoside accumulation in Panax ginseng cultures as affected by methyl jasmonate, Biotechnol Lett., 26, p 1619–1622 [22] Khalafalla M M., Daffalla H M., El-Shemy H A., and Abdellatef E (2009), Establishment of in vitro fast growing normal root culture of Vernonia amygdalina-a potent African medicinal plant, African Journal of Biotechnology, Vol.8 (21), pp 5952-5957 [23] Linsmaier E.M and Skoog F (1965), Organic growth factor requirements of tobacco tissue cultures Physiol Plant., 18, p 100–127 [24] Lin R., Cao Y., Hu Z (2003), Adventitious root formation in cutting of Gynostemma pentaphyllum, Journal of Fujian Agricultural University (Natural Science) [25] Li Y.C (2003), Initial study on cell culture of Gynostemma Pentaphyllum (Thunb.) Makino [26] Mulabagal V., Tsay H.S (2004), Plant Cell Cultures An Alternative and Efficient Source for the Production of Biologically Important Secondary Metabolites, Int J Appl Sci Eng., (1), p 29-48 [27] Norberg A., Hoa N.K., Liepinsh E., Van Phan D., Thuan N.D., Jörnvall H., Sillard R., Ostenson C.G (2004), A novel insulin-releasing substance, phanoside, from the plant Gynostemma pentaphyllum J Biol Chem., 279 (40), p 41361-7 [28] Nandagopal S and Ranjitha Kumari B D (2007), Effectiveness of auxin induced in vitro root culture in Chicory, Central European Agricultural Journal, (1), pp.73-80, 2007 [29] Pretova A (1974), The influence of the osmotic potential of the cultivation medium on the development of excised flax embryos, J Biol Plant 16 (1), pp 14–20 [30] Polikarpochkina R T., Gamburg K Z., Khavin E.E (1979), Cell-suspension culture of maize (Zea mays L.) Z.P flanzenphysiol., 95: 57-67 [31] San José M C., Romero L., Janeiro L.V (2012), Effect of indole-3-butyric acid on root formation in Alnus glutinosa microcuttings Silva Fennica, 46(5): 643654 [32] Shi X.G (2007), Fast propagation and polyploidy induction of Gynostemma Pentaphyllum (Thunb.) Makino BM.05 – QT.QLKH [33] Schenk R.U and Hildebrandt A.C (1972), Medium and techniques for induction and growth of monocotyledonous and dicotyledonous plant cell cultures, Can J Bot, 50, p 199–204 [34] Staniszewska I., Krolicka A., Mali E., Ojkowska E., Szafranek J (2003), Elicitation of secondary metabolites in in vitro cultures of Ammi majus L, Enzyme Microbiol Technol., 33, p 565–8 [35] Schwambach J., Fadanelli C., Fett-Neto A.G (2005) Mineral nutrition and adventitious rooting in microcutting of Eucalyptus globules Tree Physiol., 25: 487-494 [36] Soffer H., Burgur D W (1988), Effects of dissolved oxygen concentrations in aero hydroponics on the formation and growth of adventitious roots, J Am Soc Hort Sci., 113: 218-221 [37] Tiberiapop, Doru P., Catherine B (2001), Auxin Control in the Formation of Adventitious Roots, Not Bot Hort Agrobot Cluj., 39(1):307-316 [38] Wei X., Wei J., Jiang Y., Tang H., Li F., Ye W (2005), Study on the cultivation of Gynostemma pentaphyllum with plantlets of tissue culture, Journal of Guangxi Academy of Sciences [39] Wang L., Yang M., Li K (1992), Tissue culture and cytohistology studies in Gynostemma pentaphyllum (Thunb) Makino Journal of Beijing University (Natural Science) [40] Yu K.W., Gao W., Hahn E.J., Paek K.Y (2002), Jasmonic acid improves ginsenoside accumulation in adventitious root culture of Panax ginseng C.A Meyer, Biochem Eng J., 3, 596:1–5 [41] Yu T A., Yeh S D., Cheng Y H., Yang J S (2000), Efficient rooting for establishment of papaya plantlets by micropropagation, Plant Cell Tiss Org Cult., 61(1): 29-35 [42] Zhang Z.H., Liu H., Zhao L.H., Han X.Z (1989), Clonal propagation of Gynostemma pentaphyllum (Thumb.) Makino in test tubes, Article in Chinese, 4(6), p 335-6, 382 Tài liệu internet [43] https://en.wikipedia.org/wiki/Gynostemma_pentaphyllum BM.05 – QT.QLKH PHỤ LỤC Phụ lục 1: ui trình đề nghị ni cấy in vitro mơ sẹo Giảo cổ lam Cây thực sinh vƣờn ƣơm (Cây khỏe phát triển bình thƣờng) Đốt thân Khử trùng với Javel 50% 20 phút cấy môi trƣờng – 10 tháng MS + 1,0 mg/l BA + 0,1 mg/l NAA Chồi in vitro Môi trƣờng MS ½ Cây in vitro Mẫu in vitro Môi trƣờng MS + 1,0 mg/l 2,4-D Mô sẹo sơ cấp Môi trƣờng MS + 1,0 mg/l 2,4-D + 30 g/l đƣờng sucrose + 100 ml/l nƣớc dừa) Sinh khối mơ sẹo BM.05 – QT.QLKH Phụ lục 2: ui trình đề nghị nuôi cấy in vitro rễ bất định Giảo cổ lam Cây thực sinh vƣờn ƣơm (Cây khỏe phát triển bình thƣờng) Đốt thân Khử trùng với Javel 50% 20 phút cấy môi trƣờng – 10 tháng MS + 1,0 mg/l BA + 0,1 mg/l NAA Chồi in vitro Môi trƣờng MS ½ Cây in vitro Mẫu in vitro Môi trƣờng SH + 0,5 mg/l IBA (thạch) Rễ bất định Môi trƣờng SH + 0,5 mg/l IBA (lỏng) Sinh khối rễ Môi trƣờng SH + 0,5 mg/l IBA + 10 mg/l methyl jasmonate trƣớc thu hoạch ngày Kích thích tổng hợp saponin BM.05 – QT.QLKH Phụ lục 3: Xử lý thống kê Title: Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với NAA đến khả nhân chồi Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) Function: ANOVA-1 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to 21 Variable (tỷ lệ mẫu tạo chồi %) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 20 25541.429 1277.071 184.955 0.000 Within 42 290.000 6.905 Total 62 25831.429 Coefficient of Variation = 4.06% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 128.000 42.667 3.06 1.52 3.00 149.000 49.667 4.51 1.52 3.00 259.000 86.333 4.73 1.52 3.00 241.000 80.333 4.04 1.52 3.00 160.000 53.333 4.04 1.52 3.00 125.000 41.667 2.52 1.52 3.00 119.000 39.667 2.52 1.52 3.00 289.000 96.333 2.08 1.52 3.00 300.000 100.000 0.00 1.52 10 3.00 236.000 78.667 3.51 1.52 11 3.00 154.000 51.333 2.08 1.52 12 3.00 107.000 35.667 1.15 1.52 13 3.00 229.000 76.333 1.53 1.52 14 3.00 240.000 80.000 2.00 1.52 15 3.00 266.000 88.667 1.53 1.52 16 3.00 148.000 49.333 1.15 1.52 17 3.00 137.000 45.667 1.53 1.52 18 3.00 139.000 46.333 2.08 1.52 19 3.00 234.000 78.000 2.00 1.52 20 3.00 242.000 80.667 1.53 1.52 21 3.00 178.000 59.333 1.53 1.52 -Total 63.00 4080.000 64.762 20.41 2.57 Within 2.63 Bartlett's test Chi-square = 37.913 Number of Degrees of Freedom = 20 Approximate significance = 0.009 Error Mean Square = 6.905 Error Degrees of Freedom = 42 No of observations to calculate a mean = BM.05 – QT.QLKH Duncan's Multiple Range Test LSD value = 5.789 s_ = 1.517 at alpha = 0.010 x Original Order Ranked Order Mean = 42.67 HI Mean = 100.0 A Mean = 49.67 FG Mean = 96.33 A Mean = 86.33 BC Mean 15 = 88.67 B Mean = 80.33 CD Mean = 86.33 BC Mean = 53.33 F Mean 20 = 80.67 CD Mean = 41.67 HIJ Mean = 80.33 CD Mean = 39.67 IJ Mean 14 = 80.00 D Mean = 96.33 A Mean 10 = 78.67 D Mean = 100.0 A Mean 19 = 78.00 D Mean 10 = 78.67 D Mean 13 = 76.33 D Mean 11 = 51.33 FG Mean 21 = 59.33 E Mean 12 = 35.67 J Mean = 53.33 F Mean 13 = 76.33 D Mean 11 = 51.33 FG Mean 14 = 80.00 D Mean = 49.67 FG Mean 15 = 88.67 B Mean 16 = 49.33 FG Mean 16 = 49.33 FG Mean 18 = 46.33 GH Mean 17 = 45.67 GHI Mean 17 = 45.67 GHI Mean 18 = 46.33 GH Mean = 42.67 HI Mean 19 = 78.00 D Mean = 41.67 HIJ Mean 20 = 80.67 CD Mean = 39.67 IJ Mean 21 = 59.33 E Mean 12 = 35.67 J ======================================================================= Variable (số chồi/mẫu) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 20 189.549 9.477 221.140 0.000 Within 42 1.800 0.043 Total 62 191.349 Coefficient of Variation = 7.60% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 1.700 0.567 0.06 0.12 3.00 3.000 1.000 0.20 0.12 3.00 12.500 4.167 0.21 0.12 3.00 9.000 3.000 0.10 0.12 3.00 8.100 2.700 0.20 0.12 3.00 1.800 0.600 0.10 0.12 3.00 1.800 0.600 0.00 0.12 3.00 13.200 4.400 0.20 0.12 3.00 20.400 6.800 0.30 0.12 10 3.00 9.000 3.000 0.00 0.12 11 3.00 4.500 1.500 0.10 0.12 12 3.00 1.500 0.500 0.10 0.12 BM.05 – QT.QLKH 13 3.00 9.000 3.000 0.17 0.12 14 3.00 11.400 3.800 0.20 0.12 15 3.00 15.500 5.167 0.25 0.12 16 3.00 5.400 1.800 0.26 0.12 17 3.00 3.200 1.067 0.21 0.12 18 3.00 8.200 2.733 0.25 0.12 19 3.00 9.500 3.167 0.31 0.12 20 3.00 16.200 5.400 0.36 0.12 21 3.00 6.600 2.200 0.26 0.12 -Total 63.00 171.500 2.722 1.76 0.22 Within 0.21 Bartlett's test Chi-square = 44.142 Number of Degrees of Freedom = 20 Approximate significance = 0.000 Error Mean Square = 0.04300 Error Degrees of Freedom = 42 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.4568 s_ = 0.1197 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 0.5667 1.000 4.167 3.000 2.700 0.6000 0.6000 4.400 6.800 3.000 1.500 0.5000 3.000 3.800 5.167 1.800 1.067 2.733 3.167 5.400 2.200 Ranked Order JK IJ CD E E IJK IJK C A E GH K E D B FG HI E E B F Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 20 15 14 19 13 10 18 21 16 11 17 12 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 6.800 5.400 5.167 4.400 4.167 3.800 3.167 3.000 3.000 3.000 2.733 2.700 2.200 1.800 1.500 1.067 1.000 0.6000 0.6000 0.5667 0.5000 A B B C CD D E E E E E E F FG GH HI IJ IJK IJK JK K Title: Ảnh hưởng mơi trường khống đến khả sinh trưởng phát triển chồi Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) Function: ANOVA-1 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to BM.05 – QT.QLKH Variable (chiều cao) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 5.634 1.878 56.743 0.000 Within 0.232 0.033 Total 10 5.865 Coefficient of Variation = 4.17% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 10.200 3.400 0.20 0.11 3.00 15.500 5.167 0.21 0.11 3.00 14.400 4.800 0.10 0.11 2.00 7.900 3.950 0.21 0.13 -Total 11.00 48.000 4.364 0.77 0.23 Within 0.18 Bartlett's test Chi-square = 0.926 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.900 ======================================================================= Variable (số lá) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 3.061 1.020 66.951 0.000 Within 0.107 0.015 Total 10 3.167 Coefficient of Variation = 3.79% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 8.400 2.800 0.10 0.07 3.00 12.100 4.033 0.15 0.07 3.00 9.900 3.300 0.10 0.07 2.00 5.400 2.700 0.14 0.09 -Total 11.00 35.800 3.255 0.56 0.17 Within 0.12 Bartlett's test Chi-square = 0.444 Number of Degrees of Freedom = BM.05 – QT.QLKH Approximate significance = 0.973 ======================================================================= Variable (chiều dài rễ) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 19.747 6.582 258.374 0.000 Within 0.178 0.025 Total 10 19.925 Coefficient of Variation = 2.87% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 13.500 4.500 0.17 0.09 3.00 22.900 7.633 0.15 0.09 3.00 16.300 5.433 0.12 0.09 2.00 8.500 4.250 0.21 0.11 -Total 11.00 61.200 5.564 1.41 0.43 Within 0.16 Bartlett's test Chi-square = 0.456 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.972 ======================================================================= Variable (số rễ) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 23.501 7.834 373.873 0.000 Within 0.147 0.021 Total 10 23.647 Coefficient of Variation = 3.18% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 9.600 3.200 0.10 0.08 3.00 19.300 6.433 0.21 0.08 3.00 15.600 5.200 0.10 0.08 2.00 5.600 2.800 0.14 0.10 -Total 11.00 50.100 4.555 1.54 0.46 Within 0.14 Bartlett's test Chi-square = 1.230 BM.05 – QT.QLKH Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.837 ======================================================================= Title: Ảnh hưởng nồng độ IAA, NAA 2,4-D đến khả tạo mô sẹo Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) Function: ANOVA-1 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to 13 Variable (tỷ lệ mẫu cảm ứng mô sẹo) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 12 49965.513 4163.793 913.374 0.000 Within 26 118.526 4.559 Total 38 50084.039 Coefficient of Variation = 4.77% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.000 0.000 0.00 1.23 3.00 0.000 0.000 0.00 1.23 3.00 0.000 0.000 0.00 1.23 3.00 0.000 0.000 0.00 1.23 3.00 0.000 0.000 0.00 1.23 3.00 190.000 63.333 3.34 1.23 3.00 216.660 72.220 1.92 1.23 3.00 233.340 77.780 1.92 1.23 3.00 210.000 70.000 3.33 1.23 10 3.00 223.330 74.443 1.93 1.23 11 3.00 260.000 86.667 3.34 1.23 12 3.00 213.330 71.110 1.92 1.23 13 3.00 200.000 66.667 3.34 1.23 -Total 39.00 1746.660 44.786 36.30 5.81 Within 2.14 Bartlett's test Chi-square = 125.361 Number of Degrees of Freedom = 12 Approximate significance = 0.000 ======================================================================= Title: Khảo sát ảnh hưởng thành phần hữu đến q trình nhân sinh khối mơ sẹo Function: ANOVA-1 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (hệ số tăng sinh) BM.05 – QT.QLKH A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 11.929 1.491 97.794 0.000 Within 18 0.274 0.015 Total 26 12.204 Coefficient of Variation = 4.47% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 7.660 2.553 0.13 0.07 3.00 9.580 3.193 0.17 0.07 3.00 5.840 1.947 0.16 0.07 3.00 8.020 2.673 0.06 0.07 3.00 11.520 3.840 0.08 0.07 3.00 6.380 2.127 0.08 0.07 3.00 8.200 2.733 0.10 0.07 3.00 11.280 3.760 0.14 0.07 3.00 6.140 2.047 0.14 0.07 -Total 27.00 74.620 2.764 0.69 0.13 Within 0.12 Bartlett's test Chi-square = 2.711 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.951 ======================================================================= Title: Ảnh hưởng mơi trường khống đến khả tạo rễ bất định Giảo cổ lam Function: ANOVA-1 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (tỷ lệ mẫu tạo rễ %) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 496.259 165.420 10.515 0.0038 Within 125.852 15.731 Total 11 622.111 Coefficient of Variation = 4.41% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE BM.05 – QT.QLKH 3.00 263.330 87.777 5.09 2.29 3.00 246.670 82.223 5.09 2.29 3.00 300.000 100.000 0.00 2.29 3.00 270.000 90.000 3.33 2.29 -Total 12.00 1080.000 90.000 7.52 2.17 Within 3.97 Bartlett's test Chi-square = 26.354 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 ======================================================================= Variable (số rễ/mẫu) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 52.255 17.418 304.606 0.0000 Within 0.457 0.057 Total 11 52.713 Coefficient of Variation = 4.20% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 12.900 4.300 0.22 0.14 3.00 10.230 3.410 0.10 0.14 3.00 26.570 8.857 0.15 0.14 3.00 18.600 6.200 0.39 0.14 -Total 12.00 68.300 5.692 2.19 0.63 Within 0.24 Bartlett's test Chi-square = 3.115 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.362 ======================================================================= Variable (trọng lượng tươi rễ) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 25234.060 8411.353 630.851 0.0000 Within 106.667 13.333 Total 11 25340.726 Coefficient of Variation = 6.29% Var V A R I A B L E Number Sum BM.05 – QT.QLKH No Average SD SE -1 3.00 50.500 16.833 1.26 2.11 3.00 39.500 13.167 0.96 2.11 3.00 370.000 123.333 6.51 2.11 3.00 236.800 78.933 2.91 2.11 -Total 12.00 696.800 58.067 48.00 13.86 Within 3.65 Bartlett's test Chi-square = 6.780 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 ======================================================================= Title: Ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng đến q trình nhân nhanh sinh khối rễ bất định môi trường lỏng Function: ANOVA-1 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (trọng lượng tươi g) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 14.170 2.834 188.027 0.0000 Within 12 0.181 0.015 Total 17 14.351 Coefficient of Variation = 3.17% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 12.190 4.063 0.14 0.07 3.00 16.000 5.333 0.12 0.07 3.00 11.850 3.950 0.10 0.07 3.00 6.970 2.323 0.17 0.07 3.00 10.560 3.520 0.08 0.07 3.00 12.070 4.023 0.11 0.07 -Total 18.00 69.640 3.869 0.92 0.22 Within 0.12 Bartlett's test Chi-square = 1.202 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.973 ======================================================================= Variable (trọng lượng khô g) BM.05 – QT.QLKH A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 1.222 0.244 121.835 0.0000 Within 12 0.024 0.002 Total 17 1.246 Coefficient of Variation = 3.54% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 3.790 1.263 0.03 0.03 3.00 5.180 1.727 0.03 0.03 3.00 3.580 1.193 0.07 0.03 3.00 2.580 0.860 0.05 0.03 3.00 3.470 1.157 0.04 0.03 3.00 4.140 1.380 0.04 0.03 -Total 18.00 22.740 1.263 0.27 0.06 Within 0.04 Bartlett's test Chi-square = 1.744 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.931 Title: Ảnh hưởng methyl jasmonate đến tích lũy hàm lượng saponin rễ bất định Function: ANOVA-1 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to 13 Variable (trọng lượng khô g) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 12 1.680 0.140 27.395 0.0000 Within 26 0.133 0.005 Total 38 1.813 Coefficient of Variation = 5.09% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 5.640 1.880 0.08 0.04 3.00 4.980 1.660 0.06 0.04 3.00 4.630 1.543 0.08 0.04 3.00 4.360 1.453 0.07 0.04 3.00 4.520 1.507 0.04 0.04 3.00 4.250 1.417 0.05 0.04 3.00 4.050 1.350 0.07 0.04 BM.05 – QT.QLKH 3.00 4.200 1.400 0.05 0.04 3.00 3.790 1.263 0.06 0.04 10 3.00 3.670 1.223 0.09 0.04 11 3.00 3.960 1.320 0.07 0.04 12 3.00 3.430 1.143 0.09 0.04 13 3.00 3.240 1.080 0.09 0.04 -Total 39.00 54.720 1.403 0.22 0.03 Within 0.07 Bartlett's test Chi-square = 2.514 Number of Degrees of Freedom = 12 Approximate significance = 0.998 ======================================================================= Variable (hàm lượng saponin mg/g) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 12 1597.016 133.085 32.417 0.000 Within 26 106.740 4.105 Total 38 1703.756 Coefficient of Variation = 6.73% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 74.600 24.867 2.42 1.17 3.00 97.200 32.400 1.51 1.17 3.00 81.400 27.133 0.83 1.17 3.00 71.200 23.733 1.63 1.17 3.00 134.000 44.667 1.60 1.17 3.00 109.600 36.533 1.82 1.17 3.00 75.500 25.167 0.78 1.17 3.00 108.800 36.267 1.42 1.17 3.00 96.000 32.000 1.11 1.17 10 3.00 67.800 22.600 1.65 1.17 11 3.00 100.000 33.333 5.13 1.17 12 3.00 91.100 30.367 0.60 1.17 13 3.00 66.300 22.100 1.65 1.17 -Total 39.00 1173.500 30.090 6.70 1.07 Within 2.03 Bartlett's test Chi-square = 14.146 Number of Degrees of Freedom = 12 Approximate significance = 0.291 BM.05 – QT.QLKH