Khảo sát một số yếu tố môi trường và trọng lượng rễ ban đầu ảnh hưởng đến sự tăng trưởng và tích lũy hoạt chất saponin của sinh khối rễ giảo cổ lam gynostemma pentaphyllum nhằm ứng dụng trong nuôi cấy bioreactor

HCM BÁO CÁO NGHI M THU ƢỜNG VÀ TRỌNG KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ LƢỢNG RỄ B ƢỞ ĐẦU Ả Í LŨY ƢỞ ĐẾN SỰ Ă ẠT CHẤT SAPONIN CỦA SINH KHỐI RỄ GIẢO CỔ LAM (Gynostemma pentaphyllum) NHẰM NG DỤNG TRONG NUÔI CẤY BIOREACTOR ThS Vương Thị Hồng Loan ThS Phạm Cao Khải Th nh ph Hồ Ch Minh, h ng 01/2019 BAN QU N LÝ KHU NÔNG NGHI P CÔNG NGH CAO TP.HCM TRUNG TÂM NGHIÊN C U VÀ PHÁT TRI N NÔNG NGHI P CÔNG NGH CAO BÁO CÁO NGHI M THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu) ƢỜNG VÀ TRỌNG KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ LƢỢNG RỄ B ƢỞ ĐẦU Ả Í LŨY ƢỞ ĐẾN SỰ Ă ẠT CHẤT SAPONIN CỦA SINH KHỐI RỄ GIẢO CỔ LAM (Gynostemma pentaphyllum) NHẰM NG DỤNG TRONG NUÔI CẤY BIOREACTOR ƠQ Ủ TRÌ (Ký tên, đóng dấu xác nhận) CHỦ NHI ĐỀ TÀI (Ký tên) ƣơng hị Hồng Loan Th nh ph Hồ Ch Minh, h ng 01/2019 Phạm Cao Khải TÓM TẮT Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) loại dƣợc liệu quý hiếm, đƣợc dân gian sử dụng thời gian dài cho việc điều trị bệnh Theo nghiên cứu y học đại, Giảo cổ lam thể nhiều thuộc tính dƣợc học nhƣ: kháng viêm, chống oxy hóa, điều hịa chuyển hóa lipid, ức chế khối u, bảo vệ thần kinh, chống căng thẳng Tuy nhiên, việc bảo tồn khai thác loài dƣợc liệu chƣa đƣợc quản lý chặt chẽ nghiên cứu ứng dụng cơng nghệ sinh học lồi cịn hạn chế Ứng dụng cơng nghệ tế bào bảo tồn, phát triển nhân sinh khối đối tƣợng quy mô lớn phục vụ cho ngành công nghiệp dƣợc cần thiết Qua kết nghiên cứu xác định đƣợc: Môi trƣờng lỏng SH bổ sung 0,5mg/l IBA 0,5 mg/l NAA phù hợp cho tăng sinh khối rễ đạt trọng lƣợng cao (5,87 g) Nồng độ oligochitosan thích hợp cho việc sinh tổng hợp tích lũy saponin triterpene nuôi cấy rễ bất định Giảo cổ lam mg/l Trọng lƣợng rễ ban đầu tối ƣu cho tăng sinh rễ bất định g/400 ml môi trƣờng (tƣơng ứng với 10 g/1 môi trƣờng) hệ thống bioreactor thể tích lít sau tuần ni cấy Trang ii BM20-QT.QLKH ABSTRACT Giao co lam (Gynostemma pentaphyllum) was a rarely valuable medicinal plant that people has been traditionally used for disease treatment in a long time Modern medical research has also shown that it exhibits a variety of pharmacological properties, including anti-inflammatory, antioxidative, lipid metabolism regulatory, antiproliferative, neuroprotectiveand anxiolytic activities However, conservation and exploiting this medicinal plant were not managed properly and studies of biotechnology on this medicinal plant were till limited Therefore, the application of plant cell biotechnology in conservation, development and biomass proliferation of Giao co lam in large scale for providing materials in pharmaceutical industry is extremely necessary The results obtained in this study showed that: The SHliquid mediumadded with 0.5mg/L IBA and0.5mg/L NAAis appropriate for the proliferation of the adventitious root biomass with highest weight (5.87 g) The concentration of oligochitosan suitable for the biosynthesis and triterpene saponin accumulationin the adventitious rootculture of Giao co lam is mg/L The initial fresh weight of root optimum for the biomass proliferation was g/400 mL medium (corresponding to 10 g/1 L medium) in the liter bioreactor system after weeks of culture Trang iii BM20-QT.QLKH MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa i Tóm tắt đề tài ii Abstract iii Mục lục iv Danh sách chữ viết tắt vi Danh sách bảng, đồ thị vii Danh sách hình viii THÔNG TIN ĐỀ TÀI MỞ ĐẦU Chƣơng - TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lƣợc đối tƣợng nghiên cứu 1.1.1 Phân loại 1.1.2 Đặc tính sinh học 1.1.3 Tác dụng y học 1.2 Các nghiên cứu nƣớc 1.2.1 Các nghiên cứu nhân sinh khối kích thích tổng hợp hoạt chất thứ cấp 1.2.2 Ứng dụng bioreactor nuôi cấy tế bào thực vật Chƣơng - NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Khảo sát ảnh hƣởng kết hợp IBA NAA lên tăng sinh khối 12 2.2 Khảo sát ảnh hƣởng số elicitor lên tích lũy saponin 13 2.3 Khảo sát ảnh hƣởng trọng lƣợng rễ ban đầu lên tăng sinh khối tích lũy saponin ni cấy hệ thống bioreactor lít 13 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 14 2.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu 15 Chƣơng - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 16 3.1 Ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi cấy lên tăng sinh khối rễ 16 3.1.1 Ảnh hƣởng kết hợp IBA NAA lên tăng sinh khối 16 3.1.2 Ảnh hƣởng số elicitor lên tích lũy saponin sinh khối rễ bất định Giảo cổ lam 19 Trang iv BM20-QT.QLKH 3.2 Ảnh hƣởng trọng lƣợng rễ ban đầu lên tăng sinh khối tích lũy hàm lƣợng saponin ni cấy hệ thống bioreactor thể tích lít 22 Chƣơng - KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 27 4.1 Kết luận 27 4.2 Đề nghị 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 PHỤ LỤC 38 Trang v BM20-QT.QLKH DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Thuật ngữ tiếng Việt ĐC Đối chứng TN Thí nghiệm NT Nghiệm thức BA - Benzyl adenine KIN Kinetin 2,4-D 2,4-Dichloropheonoxyacetic acid IAA Indole-3-acetic acid NAA Naphthalene acetic acid IBA Indole – butyric acid MS Môi trƣờng MS (Murashige & Skoog, 1962) SH Môi trƣờng SH (Schenk Hilderbrant) B5 Gamborg (1968) medium TLT Trọng lƣợng tƣơi TLK Trọng lƣợng khô MJ Methyl jasmonate Ctv Cộng tác viên Vvm Thể tích khơng khí/thể tích mơi trƣờng/phút O-chi Oligo-chitosan Trang vi BM20-QT.QLKH DANH SÁCH BẢNG, ĐỒ THỊ Số Tên bảng Trang 2.1 Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng đến tăng sinh khối rễ Ảnh hƣởng trọng lƣợng rễ ban đầu đến tăng sinh khối Ảnh hƣởng trọng lƣợng rễ ban đầu đến tăng sinh khối rễ 12 2.2 3.1 14 17 Giảo cổ lam sau tuần nuôi cấy 3.2 Ảnh hƣởng nồng độ Oligo-chitosan lên tích lũy sinh 21 khối hàm lƣợng saponin rễ bất định Giảo cổ lam sau tuần nuôi cấy 3.3 Ảnh hƣởng trọng lƣợng rễ ban đầu lên tăng sinh khối tích lũy hàm lƣợng saponin ni cấy hệ thống bioreator thể tích lít 23 Trang vii BM20-QT.QLKH DANH SÁCH HÌNH Số Tên hình ảnh Trang 3.1 Sự tăng trƣởng hình thái rễ mơi trƣờng SH bổ sung auxin phối thức khác Ảnh hƣởng nồng độ Oligo-chitosan lên tích lũy sinh khối hàm lƣợng saponin rễ bất định Giảo cổ lam sau tuần nuôi cấy 18 3.3 Rễ bất định Đảng sâm với mật độ nuôi cấy khác bioreactor sau tuần nuôi cấy 24 3.4 Ảnh hƣởng trọng lƣợng rễ ban đầu lên tăng sinh khối tích lũy hàm lƣợng saponin ni cấy hệ thống bioreator thể tích lít sau tuần ni cấy 25 3.2 22 Trang viii BM20-QT.QLKH THÔNG TIN CHUNG VỀ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU Tên đề tài: Khảo sát số yếu tố môi trƣờng trọng lƣợng rễ ban đầu ảnh hƣởng đến tăng trƣởng tích lũy hoạt chất saponin sinh khối rễ Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum) nhằm ứng dụng nuôi cấy bioreactor Thời gian thực hiện: Từ tháng 02/2018 đến tháng 12/2018 Kinh phí sử dụng: 149.051.500 VNĐ Chƣơng trình đăng ký: nghiên cứu thường xuyên a Tự đề xuất:  b Đặt hàng nghiên cứu: (ghi rõ công văn đặt hàng) Chủ nhiệm đề tài nghiên cứu: Chủ nhiệm  Họ tên: Vƣơng Thị Hồng Loan  Năm sinh: 1982  Học vị: Thạc sĩ Giới tính: Nữ Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Năm đạt học vị: 2013  Chức vụ: Trƣởng xƣởng SXSHTN  Tên quan công tác: Trung tâm Nghiên cứu Phát triển NNCNC Tp Hồ Chí Minh  Địa quan: Ấp 1, xã Phạm Văn Cội, huyện Củ Chi, Tp Hồ Chí Minh  Điện thoại quan: (028) 8862726 Fax: (08) 37990500  Địa nhà riêng:  Điện thoại: 0983904599 E-mail: hongloanvuong@gmail.com Chủ nhiệm  Họ tên: Phạm Cao Khải  Năm sinh: 01/01/1987  Học vị: Thạc sĩ Giới tính: Nam Chun ngành: Cơng nghệ sinh học Năm đạt học vị: 2014  Chức vụ: Phó phịng Quản lý Khoa học Chuyển giao Công nghệ  Tên quan công tác: Trung tâm Nghiên cứu Phát triển NNCNC Tp Hồ Chí Minh  Địa quan: Ấp 1, xã Phạm Văn Cội, huyện Củ Chi, Tp Hồ Chí Minh  Điện thoại quan: (028) 8862726 BM.05 – QT.QLKH Fax: (08) 37990500 Trang ginseng adventitious root (Panax ginseng C.A Meyer) Korean J Plant Biotechnol, 32:111–116 [40] Kiong A.L., Mahmood M., Fodzillan N.M., Daud S.K (2005), Effects of precursor supplementation on the production of triterpenes by Centella asiatica callus culture, Pak J Biol Sci., 8:1160–1169 [41] Kollárová, Lisková, Kákoniová, Lux (2004), Effect of auxins on Karwinskia humboldtiana root cultures, Plant Cell Tissue Organ Cult., 79: 213–221 [42].Komaraiah P., Naga A.R., KaviKishor P., Ramakrishna S.(2002),Elicitor enhanced production of plumbagin in suspension cultures of Plumbago roseaL Enzyme Microb Technol 31: 634–639 [43].Kranner I., Minibayeva F.V., Beckett R.P., Seal C.E (2010), What is stress? Concepts, definitions and applications in seed science.New Phytol 188, 655–673 [44].Lee andShuler (2000),The effect of inoculum density and conditioned mediumon the production of ajmalicine and catharanthine from immobilized Catharanthus roseus cells, Biotechnol Bioeng 67: 61–71 [45] Lei C., Ma D., Pu G., Qiu X., Du Z., Wang H., Li G., Ye H., Liu B.(2011), Foliarapplication of chitosan activates artemisinin biosynthesis in Artemisia annuaL Ind.Crops Prod 33: 176–182 [46] Li W., Koike K., Asada Y., Yoshikava T., Nikaido T.(2005), Rosmarinic acidproduction by Coleus forskohlii hairy root cultures Plant Cell Tissue Organ Cult.,80: 151–155 [47] Liang S.Z., Zhong J.J., Yoshida T., (1991),Review of plant cell culture technology forproducing useful products (Part I) Ind Microbiol.21: 27–31 [48] Malayaman V., Sisubalan N., Senthilkumar R.P., Ranjithkumar R., Basha M.J.(2017), Chitosan mediated enhancement of hydrolysable tannin in Phyllanthus debilisKlein exWilld via plant cell suspension culture Int J Biol Macromol., 104: 1656–1663 [49] Malik S., Hossein Mirjalili M., Fett-Neto A.G., Mazzafera P., Bonfill M.(2013), Livingbetween two worlds: two-phase culture systems for producing plant secondary metabolites Crit Rev Biotechnol., 33: 1–22 BM.05 – QT.QLKH Trang 32 [50] Martin K.P., Zhang C.L., Hembrom M.E., Slater A., Madassery J.(2008), Adventitious root induction in Ophiorrhiza prostrata: a tool for the production of camptothecin (an anticancer drug) and rapid propagation Plant Biotechnol Rep., 2: 163–169 [51] McClelland M.T., Smith M.A.L (1990), Vessel type, closure, and explants orientation influence in vitro performance of five woody species Hortscience 25: 797–800 [52] Min, Jung, Kang, Kim, Kang, Park, Prasad, Choi (2007), Production of tropane alkaloids by small-scale bubble column bioreactor cultures of Scopolia parviflora adventitious roots, Bioresour Technol 98: 1748–1753 [53] Mulabagal V., Tsay H.S (2004), Plant Cell Cultures An Alternative and Efficient Source for the Production of Biologically Important Secondary Metabolites, Int J Appl Sci Eng., (1): 29-48 [54] Murthy H.N., Kim Y.S., Jeong C.S., Kim S.J., Zhong J.J., Paek K.Y (2014a), Production of ginsenosides from adventitious root cultures of Panax ginseng In: Paek K.Y., Murthy H.N., Zhong J.J (eds), Production of biomass and bioactive compounds using bioreactor technology, Springer, Dordrecht, pp 625–654 [55] Murthy H.N., Wu C.H., Cui Y.Y., Paek K.Y (2014b), Production of caffeic acid derivatives from adventitious root cultures of Echinacea purpurea (L.)Moench In: Paek K.Y., Murthy H.N., Zhong J.J (eds), Production of biomass and bioactive compounds using bioreactor technology, Springer, Dordrecht, pp 167– 184 [56] Murthy H.N., Lee E.J., Paek K.Y (2014c), Production of secondary metabolites from cell and organ cultures: strategies and approaches for biomass improvement and metabolite accumulation, Plant Cell Tissue Organ Cult, 118:1–16 [57] Nandagopal S and Ranjitha Kumari B D (2007), Effectiveness of auxin induced in vitro root culture in Chicory, Central European Agricultural Journal, (1): 73-80 [58] Narayani M., Srivastava S (2017), Elicitation: a stimulation of stress in in vitro plant cell/ tissue cultures for enhancement of secondary metabolite production Phytochem Rev., 16: 1227–1252 BM.05 – QT.QLKH Trang 33 [59] Norberg A., Hoa N.K., Liepinsh E., Van Phan D., Thuan N.D., Jörnvall H., Sillard R., Ostenson C.G (2004), A novel insulin-releasing substance, phanoside, from the plant Gynostemma pentaphyllum J Biol Chem., 279 (40): 41361-7 [60].Pitta-Alvarez S.I., Spollansky T.C., Giulietti A.M.(2000), The influence of differentbiotic and abiotic elicitors on the production and profile of tropane alkaloids inhairy root cultures of Brugmansia candida Enzyme Microb Technol., 26: 252–258 [61].Praveen N., Manohar S.H., Nayak P.M., Nayeem A., Jeong J.H., Murthy H.N.(2009), Production of androghrapholide from adventitious root cultures of Andrographis paniculata Curr Sci., 96: 5–10 [62].Praveen N., Murthy H.N.(2010), Production of withanolide A from adventitious rootcultures of Withania somnifera Acta Physiol Plant., 32: 1017–1022 [63] Rao S R and Ravishanakar G.A (2002), Plant cell cultures: chemical factories of secondary metabolites, Biotechnol Adv J., 20: 101 – 153 [64] Reis, Borges, Chierrito, de Souto, de Souza, Iacomini, de Oliveira, Gonc alves (2011), Establishment of adventitious root culture of Stevia rebaudiana Bertoni in a roller bottle system, Plant Cell, Tissue Organ Cult., 106: 329–335, [65].Rhee, H.S., Cho, H.Y., Son, S.Y., Yoon, S.H., Park, J.M.(2010),Enhanced accumulation of decursin and decursinol angelate in root cultures and intact roots of Angelica gigas Nakai following elicitation Plant Cell Tissue Organ Cult., 101: 295–302 [66] Saini, Sharma, Kaur, Pati (2013) Auxin, A master regulator in plant root development, Plant Cell Rep., 32: 741–757 [67] Sajc L., Grubiscic D., and Vunjak-Novakovic G (2000), Bioreactors for plant engineering: an outlook for further research Biochem Eng J., 4:89 – 99 [68] Sakurai M., Mori T., Seki M and Furusaki S.(1996), Changes of anthocyanin composition by conditioned medium and cell inoculum size using strawberry suspension culture, Biotechnol Lett., 18: 1149-1154 BM.05 – QT.QLKH Trang 34 [69] Sathiyabama M., Bernstein N., Anusuya S.(2016), Chitosan elicitation for increasedcurcumin production and stimulation of defence response in turmeric (Curcuma longaL.) Ind Crops Prod 89: 87–94 [70] Schenk R.U and Hildebrandt A.C (1972), Medium and techniques for induction and growth of monocotyledonous and dicotyledonous plant cell cultures, Can J Bot, 50: 199–204 [71] Shohael A.M., Murthy H.N., Paek K.Y (2014), Pilot-scale culture of somatic embryos of Eleutherococcus senticosus in airlift bioreactors for the production of eleutherosides Biotechnol Lett, 36:1727–1733 [72].Silja P.K., Gisha G.P., Satheeshkumar K (2014), Enhanced plumbagin accumulation in embryogenic cell suspension cultures of Plumbago roseaL following elicitation Plant Cell Tissue Organ Cult., 119 (3): 469–477 [73] Sivakumar G., Yu K.W., Paek K.Y (2005a), Production of biomass and ginsenosides from adventitious roots of Panax ginseng in bioreactor cultures Eng Life Sci, 5:333–342 [74] Sivakumar G., Kim S.J., Hahn E.J., Paek K.Y (2005b), Optimizing environmental factors for large-scale multiplication of chrysanthemum (Chrysanthemum grandiflorum) in balloon-type bioreactor culture In Vitro Cell Dev Biol-Plant 41: 822–825 [75].Sivanandhan G., Arun M., Mayavan S., Rajesh M., Jeyaraj M., Dev G.K., Manickavasagam M., Selvaraj N., Ganapathi A.(2012),Optimization of elicitation conditions with methyl jasmonate and salicylic acid to improve the productivity of withanolides in the adventitious root culture of Withania somnifera (L.) Dunal Appl Biochem Biotechnol., 168: 681–696 [76] Sorin, Bussell, Camus, Ljung, Kowalczyk, Geiss, McKhann, Garcion, Vaucheret, Sandberg, Bellini (2005), Auxin and light control ofadventitious rooting in Arabidopsis require ARGONAUTE1, Plant Cell, 17: 1343–1359 [77] Staniszewska I., Krolicka A., Mali E., Ojkowska E., Szafranek J (2003), Elicitation of secondary metabolites in in vitro cultures of Ammi majus L, Enzyme Microbiol Technol., 33: 565–8 BM.05 – QT.QLKH Trang 35 [78] Thanh N.T., Murthy H.N., Paek K.Y (2014), Optimization of ginseng cell culture in airlift bioreactors and developing the large-scale production system Ind Crops Prod, 60:343–348 [78].Trejo-Tapia G., Arias-Castro C., Rodríguez-Mendiola M.(2003),Influence of theculture medium constituents and inoculum size on the accumulation of blue pigment and cell growth of Lavandula spica Plant Cell Tissue Organ Cult., 72: 7–12 [79] Van Gulik W.M., Nuutila A.M., Vinke K.L., ten Hoppen H.J.G and Heijnen J.J (1994), Effects of carbon dioxide, air flow rate and inoculation density on the batch growth of Catharanthus roseus cell suspensions in stirred fermentors Biotechnol.Prog., 10: 335-339 [80].Wiesman Z., Riov J., Epstein E.(1988), Comparison of movement and metabolism of indole-3-acetic acid and indole-3-butyric acid in mungbean cuttings Physiol Plant., 74, 556–560 [81].Wu C.H., Dewir Y.H., Hahn E.J., Paek K.Y.(2006)Optimization of culturingconditions for the production of biomass and phenolics from adventitious roots of Echinacea angustifolia J Plant Biol.,49: 193–199 [82] Wu C.H., Murthy H.N., Hahn E.J., Paek K.Y (2007d), Enhanced production of caftaric acid, chlorogenic acid and cichoric acid in suspension cultures of Echinacea purpurea by the manipulation of incubation temperature and photoperiod Biochem Eng J, 36:301–303 [83] Yoo N.H., Kim O.T., Kim J.B., Kim S.H., Kim Y.C., Bang K.H., Hyun D.Y., Cha S.W., Kim M.Y., Wang B.H.(2011), Enhancement of centelloside production from cultured plants of Centella asiatica by combination of thidiazuron and methyl jasmonate, Plant Biotechnol Rep., 5: 283–287 [84] Yu K.W., Gao W., Hahn E.J., Paek K.Y (2002), Jasmonic acid improves ginsenoside accumulation in adventitious root culture of Panax ginseng C.A Meyer, Biochem Eng J., 3: 596:1–5 [85] Zhang Y.H and Zhong J.J.(1997), Hyperproduction of ginseng saponin and polysaccharide by high density cultivation of Panax notoginseng cells Enzym Microb Technol., 2: 59-63 BM.05 – QT.QLKH Trang 36 [86] Zhao J., Davis L.C., Verpoorte R (2005), Elicitor signal transduction leading to production of plant secondary metabolites, Biotechnology Advances, 23: 283-333 [87] Zhao J.L., Zhou L.G., Wu J.Y., (2010), Effects of biotic and abiotic elicitors on cell growthand tanshinone accumulation in Salvia miltiorrhiza cell cultures Appl Microbiol Biotechnol., 87: 137–144 Tài liệu internet [88] https://en.wikipedia.org/wiki/Gynostemma_pentaphyllum BM.05 – QT.QLKH Trang 37 PHỤ LỤC Phụ lục 1:Xử lý thống kê Ảnh hưởng trọng lượng rễ ban đầu đến tăng sinh khối rễ Giảo cổ lam sau tuần nuôi cấy Function: ANOVA-1 Data case no to 31 One way ANOVA grouped over variable (lll) with values from to 10 Variable (tlt) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 38.010 4.223 116.450 0.0000 Within 20 0.725 0.036 Total 29 38.736 Coefficient of Variation = 4.22% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 4.171 1.390 0.13 0.11 3.00 12.153 4.051 0.07 0.11 3.00 14.810 4.937 0.13 0.11 3.00 14.290 4.763 0.33 0.11 3.00 13.672 4.557 0.33 0.11 3.00 17.619 5.873 0.21 0.11 3.00 14.862 4.954 0.08 0.11 3.00 14.131 4.710 0.11 0.11 3.00 15.110 5.037 0.14 0.11 10 3.00 14.508 4.836 0.17 0.11 -Total 30.00 135.326 4.511 1.16 0.21 Within 0.19 Bartlett's test Chi-square = 8.419 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.509 Error Mean Square = 0.03600 Error Degrees of Freedom = 20 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.4408 s_ = 0.1095 at alpha = 0.010 x BM.05 – QT.QLKH Trang I Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 = = = = = = = = = = 1.390 4.051 4.937 4.763 4.557 5.873 4.954 4.710 5.037 4.836 Ranked Order D C B B B A B B B B Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 = = = = = = = = = = 5.873 5.037 4.954 4.937 4.836 4.763 4.710 4.557 4.051 1.390 A B B B B B B B C D ======================================================================= Variable (tlk) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 0.811 0.090 61.302 0.0000 Within 20 0.029 0.001 -Total 29 0.841 Coefficient of Variation = 6.17% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 0.658 0.219 0.03 0.02 3.00 1.482 0.494 0.06 0.02 3.00 2.169 0.723 0.03 0.02 3.00 1.988 0.663 0.05 0.02 3.00 1.819 0.606 0.06 0.02 3.00 2.650 0.883 0.03 0.02 3.00 2.079 0.693 0.03 0.02 3.00 1.774 0.591 0.02 0.02 3.00 2.076 0.692 0.02 0.02 10 3.00 1.945 0.648 0.01 0.02 -Total 30.00 18.640 0.621 0.17 0.03 Within 0.04 Bartlett's test Chi-square = 9.493 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.377 Error Mean Square = 0.001000 Error Degrees of Freedom = 20 BM.05 – QT.QLKH Trang II No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.07347 s_ = 0.01826 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 = = = = = = = = = = 0.2193 0.4940 0.7230 0.6627 0.6063 0.8833 0.6930 0.5913 0.6920 0.6483 Ranked Order E D B BC C A B C B BC Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 = = = = = = = = = = 0.8833 0.7230 0.6930 0.6920 0.6627 0.6483 0.6063 0.5913 0.4940 0.2193 A B B B BC BC C C D E Ảnh hưởng nồng độ Oligo-chitosan lên tích lũy sinh khối hàm lượng saponin rễ bất định Giảo cổ lam sau tuần nuôi cấy Function: ANOVA-1 Data case no to 13 One way ANOVA grouped over variable (lll) with values from to Variable (tlt) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 0.645 0.215 11.353 0.0030 Within 0.151 0.019 Total 11 0.796 Coefficient of Variation = 2.50% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 15.345 5.115 0.06 0.08 3.00 17.140 5.713 0.18 0.08 3.00 16.935 5.645 0.18 0.08 3.00 16.545 5.515 0.08 0.08 -Total 12.00 65.965 5.497 0.27 0.08 Within 0.14 Bartlett's test Chi-square = 2.452 Number of Degrees of Freedom = BM.05 – QT.QLKH Trang III Approximate significance = 0.534 Error Mean Square = 0.01900 Error Degrees of Freedom = No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.3776 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 5.115 5.713 5.645 5.515 Ranked Order B A A A Mean Mean Mean Mean = = = = 5.713 5.645 5.515 5.115 A A A B Variable (tlk) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 0.051 0.017 11.064 0.0032 Within 0.012 0.002 Total 11 0.063 Coefficient of Variation = 5.43% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 1.959 0.653 0.04 0.02 3.00 2.484 0.828 0.02 0.02 3.00 2.128 0.709 0.02 0.02 3.00 2.080 0.693 0.06 0.02 -Total 12.00 8.651 0.721 0.08 0.02 Within 0.04 Bartlett's test Chi-square = 3.360 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.301 Error Mean Square = 0.002000 Error Degrees of Freedom = No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.1225 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean Mean Mean = = = 0.6530 0.8280 0.7093 BM.05 – QT.QLKH B A B Mean Mean Mean = = = 0.8280 0.7093 0.6933 A B B Trang IV Mean = 0.6933 B Mean = 0.6530 B Ảnh hưởng trọng lượng rễ ban đầu lên tăng sinh khối tích lũy hàm lượng saponin nuôi cấy hệ thống bioreator thể tích lít Function: ANOVA-1 Data case no to 16 One way ANOVA grouped over variable (lll) with values from to Variable (tlt) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 2345.199 586.300 137.812 0.0000 Within 10 42.543 4.254 Total 14 2387.743 Coefficient of Variation = 6.25% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 38.355 12.785 0.43 1.19 3.00 81.105 27.035 0.50 1.19 3.00 99.735 33.245 1.83 1.19 3.00 135.690 45.230 3.79 1.19 3.00 140.120 46.707 1.78 1.19 -Total 15.00 495.005 33.000 13.06 3.37 Within 2.06 Bartlett's test Chi-square = 8.817 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.066 Error Mean Square = 4.254 Error Degrees of Freedom = 10 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 5.337 s_ = 1.191 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 12.78 27.03 33.24 45.23 46.71 BM.05 – QT.QLKH D C B A A Mean Mean Mean Mean Mean Ranked Order = = = = = 46.71 45.23 33.24 27.03 12.78 A A B C D Trang V Variable (tlk) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 48.585 12.146 143.858 0.0000 Within 10 0.844 0.084 Total 14 49.429 Coefficient of Variation = 6.13% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 5.470 1.823 0.07 0.17 3.00 11.600 3.867 0.08 0.17 3.00 14.475 4.825 0.17 0.17 3.00 19.570 6.523 0.56 0.17 3.00 20.020 6.673 0.27 0.17 -Total 15.00 71.135 4.742 1.88 0.49 Within 0.29 Bartlett's test Chi-square = 8.690 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.069 Error Mean Square = 0.08400 Error Degrees of Freedom = 10 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.7500 s_ = 0.1673 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 1.823 3.867 4.825 6.523 6.673 BM.05 – QT.QLKH Ranked Order D C B A A Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 6.673 6.523 4.825 3.867 1.823 A A B C D Trang VI Variable (gi) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 7.914 1.978 24.074 0.0000 Within 10 0.822 0.082 -Total 14 8.735 Coefficient of Variation = 4.94% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 19.180 6.393 0.21 0.17 3.00 20.280 6.760 0.12 0.17 3.00 16.630 5.543 0.31 0.17 3.00 16.960 5.653 0.48 0.17 3.00 14.010 4.670 0.18 0.17 -Total 15.00 87.060 5.804 0.79 0.20 Within 0.29 Bartlett's test Chi-square = 3.595 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.464 Error Mean Square = 0.08200 Error Degrees of Freedom = 10 No of observations to calculate a mean = Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.7410 s_ = 0.1653 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 6.393 6.760 5.543 5.653 4.670 BM.05 – QT.QLKH Ranked Order AB A C BC D Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 6.760 6.393 5.653 5.543 4.670 A AB BC C D Trang VII Phụ lục 2: kết phân tích BM.05 – QT.QLKH Trang VIII BM.05 – QT.QLKH Trang IX