Nghiên cứu quy trình đánh giá tác động ức chế hmg coa reductase in vitro và in vivo ứng dụng để khảo sát tác động của curcumin

ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HCM TRUNG TÂM KHOA HỌC CƠNG NGHỆ DƯỢC SÀI GỊN (SAPHARCEN) CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ NGHIÊN CỨU QUI TRÌNH ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG ỨC CHẾ HMG-CoA REDUCTASE IN VITRO VÀ IN VIVO - ỨNG DỤNG ĐỂ KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG CỦA CURCUMIN Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Khoa học Cơng nghệ Dược Sài Gịn (SAPHARCEN) Chủ nhiệm nhiệm vụ: PGS.TS Trần Mạnh Hùng THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 5/2019 ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HCM TRUNG TÂM KHOA HỌC CÔNG NGHỆ DƯỢC SÀI GỊN (SAPHARCEN) CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ NGHIÊN CỨU QUI TRÌNH ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG ỨC CHẾ HMG-CoA REDUCTASE IN VITRO VÀ IN VIVO - ỨNG DỤNG ĐỂ KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG CỦA CURCUMIN (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu) (5/2019) Chủ nhiệm nhiệm vụ: PGS.TS Trần Mạnh Hùng Trung tâm Khoa học Cơng nghệ Dược Sài gịn PGS.TS Trần Cát Đơng TRUNG TÂM KHOA HỌC CƠNG NGHỆ DƯỢC SÀI GỊN (SAPHARCEN) CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Tp HCM, ngày tháng năm 200 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KH&CN I THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Nghiên cứu quy trình đánh giá tác động ức chế HMG-CoA reductase in vitro in vivo - Ứng dụng để khảo sát tác động Curcumin Thuộc: Chương trình/lĩnh vực: Vật liệu Cơng nghệ Dược Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Trần Mạnh Hùng Ngày, tháng, năm sinh: 26/4/1969 Nam/ Nữ: Nam Học hàm, học vị: PGS.TS Chức danh khoa học: Giảng viên cao cấp Chức vụ: Trưởng môn Điện thoại: Tổ chức: 028-38295641 Mobile: 0937746596 Fax: 028-38225435 tranmanhhung@uphcm.edu.vn E-mail: Tên tổ chức công tác: Khoa Dược, Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Địa tổ chức: 41 Đinh Tiên Hoàng, phường Bến nghé, quận 1, Tp HCM Địa nhà riêng: 102A Nguyễn Đình Chiểu, phường Đakao, quận 1, Tp HCM Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Khoa học Cơng nghệ Dược Sài gịn Điện thoại: 028-38295641 Fax: 028-38225435 Địa chỉ: 41 Đinh Tiên Hoàng, phường Bến nghé, quận 1, Tp HCM Họ tên thủ trưởng tổ chức: PGS.TS Trần Cát Đông Số tài khoản: 3713.0.3017044.00000  Kho bạc: Nhà nước Quận – TP HCM Tên quan chủ quản đề tài: Sở Khoa học Cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng 5/2017 đến tháng 5/2019 - Thực tế thực hiện: từ tháng 5/2017 đến tháng 5/2019 - Gia hạn: Không gia hạn Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 490.000.000 đồng, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học: 490.000.000 đồng + Kinh phí từ nguồn khác: 0.0 đồng b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT Theo kế hoạch Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 5/2017 245 5/2018 196 5/2019 49 Thực tế đạt Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 9/2017 245 12/2018 196 - Ghi (Số đề nghị toán) 245 196 c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Số TT Nội dung khoản chi Trả công lao động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác Tổng cộng Theo kế hoạch NSKH Nguồn khác 235.05 235.05 Đơn vị tính: Triệu đồng Thực tế đạt Tổng NSKH Nguồn khác 235.05 235.05 184.68 184.68 184.68 184.68 70.27 490 70.27 490 70.27 490 70.27 490 Tổng - Lý thay đổi (nếu có): Khơng thay đổi Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ công đoạn xét duyệt, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì nhiệm vụ (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số TT Số, thời gian ban hành văn 807/QĐ-SKHCN, 09/11/2016 2545/GM-SKHCN, 09/11/2016 69/2017/HĐSKHCN, 19/5/2017 18/7/2017, Sapharcen 18/7/2017, Sapharcen Tên văn Quyết định thành lập hội đồng xét duyệt nhiệm vụ KHCN Giấy mời họp hội đồng xét duyệt nhiệm vụ KHCN Hợp đồng thực nhiệm vụ nghiên cứu Khoa học Công nghệ Văn đề xuất chỉnh sửa tên nhiệm vụ KHCN Văn đề xuất chỉnh sửa tên nhiệm vụ KHCN Ghi Đính kèm danh sách hội đồng Gửi Chủ tịch HĐ xét duyệt Gửi Phòng KHTC, Sở KHCN 10 11 12 63/2017/PLHĐPhụ lục hợp đồng việc điều chỉnh tên SKHCN, 14/8/2017 nhiệm vụ KHCN 474/SKHCN-QLKH Thông báo tốn kinh phí nộp báo cáo giám định 280/QĐ-SKHCN, Quyết định phê duyệt kế hoạch lựa chọn nhà 12/4/2018 thầu gói thầu nhiệm vụ KHCN 371/QĐ-SKHCN, Quyết định thành lập Hội đồng giám định 03/5/2018 nhiệm vụ KHCN 958/GM-SKHCN, Giấy mời họp Hội đồng giám định nhiệm vụ 03/5/2018 KHCN 24/10/2018 Quỹ Thẩm tra toán Nhiệm vụ KHCN nằm Phát triển KHCN – 2017 Sở KHCN 02/QĐ-SPHC Quyết định thành lập Hội đồng nghiệm thu sở nhiệm vụ KHCN Đính kèm phụ lục Đính kèm danh sách HĐ Tổ chức chủ trì nhiệm vụ QĐ + danh sách HĐ Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Số TT Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Tên tổ chức tham gia thực Trung tâm Khoa học Cơng nghệ Dược Sài gịn Bộ mơn Sinh hóa, Khoa Dược, ĐH YD Tp HCM Bộ mơn Hóa lý, Khoa Dược, ĐH YD Tp HCM Phòng nghiên cứu tế bào gốc, ĐH Quốc gia Tp HCM Trung tâm Khoa học Cơng nghệ Dược Sài gịn Bộ mơn Sinh hóa, Khoa Dược, ĐH YD Tp HCM Bộ mơn Hóa lý, Khoa Dược, ĐH YD Tp HCM Phòng nghiên cứu tế bào gốc, ĐH Quốc gia Tp HCM Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt Toàn nội dung Các sản phẩm theo hợp đồng 1,2 Quy trình 7,8 Quy trình 5,7 Quy trình Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân đăng ký theo Thuyết minh Trần Mạnh Hùng Huỳnh Ngọc Trinh Đỗ Thị Hồng Tươi Trần Thủy Tiên Vũ Bích Ngọc Nguyễn Trường Sinh Đỗ Thanh Hảo Tên cá nhân tham gia thực Trần Mạnh Hùng Huỳnh Ngọc Trinh Đỗ Thị Hồng Tươi Trần Thủy Tiên Đỗ Thanh Hảo Trần Kim Hạnh Nội dung tham gia Đề cương, 1,2,7,8 3,8 3,4,6,7,8 2,3,4,6,7,8 Nuôi thú Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* Báo cáo Qui trình, báo Qui trình Qui trình Qui trình - Lý thay đổi ( có): Thay đổi 02 cá nhân Vũ Bích Ngọc Nguyễn Trường Sinh thành Trần Thủy Tiên để tiện lợi bố trí thí nghiệm Tình hình hợp tác quốc tế: khơng có Số TT Theo kế hoạch (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Theo kế hoạch Số (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa TT điểm ) - Nội dung: qui trình tạo dịch đồng thể enzym phương pháp xác định hoạt tính HMG-CoA reductase - Thời gian: 6/2018 - Kinh phí: triệu đồng - Địa điểm: Khoa dược, ĐH Y Dược Tp HCM - Nội dung: ứng dụng qui trình tạo dịch đồng thể enzym phương pháp xác định hoạt tính HMG-CoA reductase để sàng lọc thuốc ức chế HMG-CoA reductase - Thời gian: 3/2019 - Kinh phí: triệu đồng - Địa điểm: Khoa dược, ĐH Y Dược Tp HCM Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm ) - Nội dung: qui trình tạo dịch đồng thể enzym phương pháp xác định hoạt tính HMG-CoA reductase - Thời gian: 7/2018 - Kinh phí: triệu đồng - Địa điểm: Khoa dược, ĐH Y Dược Tp HCM - Nội dung: ứng dụng qui trình tạo dịch đồng thể enzym phương pháp xác định hoạt tính HMG-CoA reductase để sàng lọc thuốc ức chế HMG-CoA reductase - Thời gian: 3/2019 - Kinh phí: triệu đồng - Địa điểm: Khoa dược, ĐH Y Dược Tp HCM Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): khơng Tóm tắt nội dung, cơng việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Số TT Các nội dung, công việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Thời gian (Bắt đầu, kết thúc - tháng … năm) Theo kế hoạch Thực tế đạt Tạo dịch đồng thể enzym chứa 5/2017-8/2017 HMG-CoA reductase từ gan chuẩn hóa dịch đồng thể enzym Khảo sát bước xác định hoạt tính 8/2017-12/2017 HMG-CoA reductase Đạt Xây dựng quy trình đánh giá tác động 11/2017-2/2018 ức chế HMG-CoA reductase in vitro dịch đồng thể enzym Đạt Đạt Người, quan thực Huỳnh Ngọc Trinh, Đỗ Thanh Hảo, Khoa Dược Huỳnh Ngọc Trinh, Đỗ Thanh Hảo, Khoa Dược Đỗ Thị Hồng Tươi, Trần Thủy Tiên, Đỗ Thanh Hảo, Khoa Dược So sánh kết với KIT thương 12/2018-3/2018 mại hãng Sigma Đạt Xây dựng quy trình đánh giá tác động 3/2018-6/2018 ức chế tổng hợp cholesterol in vitro dòng tế bào gan Đạt Xây dựng quy trình đánh giá tác động 6/2018-9/2018 ức chế HMG-CoA reductase in vivo chuột nhắt Khảo sát tác động ức chế HMG-CoA 9/2018-12/2018 reductase in vitro Curcumin Đạt Khảo sát tác động ức chế HMG-CoA reductase in vivo Curcumin 11/2018-1/2019 Đạt Viết báo cáo tổng kết – nghiệm thu 2/2019-4/2019 Đạt - Lý thay đổi (nếu có): Khơng Đạt Trần Thủy Tiên, Đỗ Thanh Hảo, Khoa Dược Trần Thủy Tiên, Trung tâm nghiên cứu TB gốc, ĐH quốc gia Tp HCM Trần Thủy Tiên, Đỗ Thanh Hảo, Khoa Dược Huỳnh Ngọc Trinh, Đỗ Thị Hồng Tươi, Trần Thủy Tiên, Đỗ Thanh Hảo, Khoa Dược, Trung tâm nghiên cứu TB gốc, ĐH quốc gia Tp HCM Huỳnh Ngọc Trinh, Đỗ Thị Hồng Tươi, Trần Thủy Tiên, Đỗ Thanh Hảo, Khoa Dược Trần Mạnh Hùng, Khoa dược III SẢN PHẨM KH&CN CỦA NHIỆM VỤ Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Không đăng ký Số TT Tên sản phẩm tiêu chất lượng chủ yếu Đơn vị đo Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt - Lý thay đổi (nếu có): b) Sản phẩm Dạng II: Số TT Yêu cầu khoa học cần đạt Theo kế hoạch Tên sản phẩm Báo cáo tổng hợp đề tài Qui trình tạo dịch đồng thể enzym Quy trình đánh giá tác động ức chế HMG-CoA reductase in vitro dịch đồng thể enzym Quy trình đánh giá tác động ức chế tổng hợp cholesterol in vitro dòng tế bào gan HepG2 Quy trình đánh giá tác động ức chế HMG-CoA reductase in vivo chuột nhắt Kết khảo sát tác động ức chế HMG-CoA reductase tác động cholesterol lipid huyết Curcumin Đạt yêu cầu báo cáo khoa học, Đảm bảo yêu cầu Sở KH&CN Sơ đồ thực chi tiết (giống chuột nhắt, cách lấy gan, thông số nghiền đồng thể, thơng số ly tâm) Quy trình chi tiết, có đầy đủ thơng số lượng protein enzym, pH, thời gian phản ứng, nồng độ chất, nồng độ đồng yếu tố thích hợp phản ứng chuyển HMG-CoA thành mevalonat với hoạt tính enzym cần đạt > UI/mg protein Quy trình chi tiết, có đầy đủ thơng số điều kiện ni cấy, dịng tế bào sử dụng, IC50 thuốc đối chứng dương Quy trình chi tiết, hoạt tính HMG CoA reductase tăng 50% nhóm gây bệnh so với nhóm chứng Atorvastatin phải thể tác động ức chế HMG CoA reductase từ 30-50% Số liệu đầy đủ, có phân tích thống kê, so sánh với thuốc đối chứng Atorvastatin - Lý thay đổi (nếu có): khơng Thực tế đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Ghi c) Sản phẩm Dạng III: Số TT Tên sản phẩm Bài báo khoa học Yêu cầu khoa học cần đạt Theo Thực tế kế hoạch đạt 02 đăng Đạt Tạp chí chun ngành Số lượng, nơi cơng bố (Tạp chí, nhà xuất bản) 02: - Tạp chí Y học TP HCM - International Journal of Pharmacological research - Lý thay đổi (nếu có): Khơng d) Kết đào tạo: Số TT Cấp đào tạo, Chuyên ngành đào tạo Thạc sỹ Tiến sỹ Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt 01 02 00 00 Ghi (Thời gian kết thúc) - Lý thay đổi (nếu có): Khơng đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu công nghiệp: Không Số TT Tên sản phẩm đăng ký Kết Theo kế hoạch Thực tế đạt Ghi (Thời gian kết thúc) - Lý thay đổi (nếu có): e) Thống kê danh mục sản phẩm KHCN ứng dụng vào thực tế Số TT Tên kết ứng dụng Quy trình tạo dịch đồng thể enzym Quy trình đánh giá tác động ức chế HMG-CoA reductase in vitro chuột nhắt Quy trình đánh giá tác động ức chế HMG-CoA reductase in vivo chuột nhắt Thời gian Địa điểm (Ghi rõ tên, địa nơi ứng dụng) - Bộ môn dược lý Khoa Dược, ĐH Y Dược Tp HCM - Trung tâm Sâm Dược liệu Tp HCM - Bộ môn dược lý Khoa Dược, ĐH Y Dược Tp HCM - Trung tâm Sâm Dược liệu Tp HCM - Bộ môn dược lý Khoa Dược, ĐH Y Dược Tp HCM - Trung tâm Sâm Dược liệu Tp HCM Kết sơ Đăng báo khoa học Đăng báo khoa học Đăng báo khoa học Đánh giá hiệu nhiệm vụ mang lại: a) Hiệu khoa học công nghệ: (Nêu rõ danh mục công nghệ mức độ nắm vững, làm chủ, so sánh với trình độ cơng nghệ so với khu vực giới…) b) Hiệu kinh tế xã hội: (Nêu rõ hiệu làm lợi tính tiền dự kiến nhiệm vụ tạo so với sản phẩm loại thị trường…) Tình hình thực chế độ báo cáo, kiểm tra nhiệm vụ: Số TT I II III IV Nội dung Báo cáo tiến độ Lần Lần Báo cáo giám định Nghiệm thu sở Nghiệm thu cấp Sở Chủ nhiệm đề tài (Họ tên, chữ ký) Thời gian thực 12/2017 12/2018 5/2018 4/2019 4/2019 Ghi (Tóm tắt kết quả, kết luận chính, người chủ trì…) Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Thủ trưởng tổ chức chủ trì (Họ tên, chữ ký đóng dấu) 37 Jung MA, Lee SY, Han SH (2015) Hypocholesterolemic effects of Curcuma longa L with Nelumbo nucifera leaf in an in vitro model and a high cholesterol diet-induced hypercholesterolemic mouse model Journal Animal cells and systems; 19(2): 133-143 38 Kang OH, Kim SB, Seo YS (2013) Curcumin decreases oleic acid-induced lipid accumulation via AMPK phosphorylation in hepatocarcinoma cells European Review for Medical and Pharmacological Sciences; 17: 2578-2586 39 Kita T, Brown MS, Goldstein JL (1980) Feedback Feedback regulation of 3-Hydroxy3-Methylglutaryl Coenzyme A Reductase in Livers of Mice Treated with Mevinolin, a Competitive Inhibitor of the Reductase J Clin Invest; 66(5): 1094-1100 40 Krohn RI (2011) The colorimetric detection and quantitation of total protein Curr Protoc Cell Biol; Appendix 3: 3H 41 Kuroda M, Tanzawa K, Tsujita Y, Endo A (1977) Mechanism for elevation of hepatic cholesterol synthesis and serum cholesterol levels in triton WR-1339-induced hyperlipidemia Lipids and Lipid Metabolism; 489(1): 119-125 42 Kwon EB, Kang MJ, Kim SY (2018) Zanthoxylum ailanthoides suppresses oleic
acidinduced lipid accumulation through an activation of LKB1/AMPK pathway in HepG2 cells Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine; 2018: 3140267, https://doi.org/10.1155/2018/3140267 43 Levine S, Saltzman A (2007) A procedure for inducing sustained hyperlipemia in rats by administration of a surfactant Journal of Pharmacological and Toxicological methods; 55(2): 224-226 44 Li X, Chunli Liu, Zhenwen Duan, and Shuren Guo (2013) HMG-CoA Reductase Inhibitors from Monascus-Fermented Rice Journal of Chemistry; 2013: 872056 45 Lin SH, Huang KJ, Weng CF, Shiuan D (2015) Exploration of natural product ingredients as inhibitors of human HMG-CoA reductase through structure-based virtual screening Drug Des Devel Ther; 9: 3313-3324 46 Liscum L, Finer-Moore J, Stroud RM, Luskey KL, Brown MS, Goldstein JL (1985) Domain structure of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase, a glycoprotein of the endoplasmic reticulum J Biol Chem; 260(1): 522-530 47 Listenberger LL, Han X, Lewis SE (2003) Triglyceride accumulation protects against fatty acid-induced lipotoxicity PNAS; 100(6): 3077-3082 48 Ma X, Wang Z, Li S, Shen Q, Yuan Q (2006) Effect of CaCl2 as activity stabilizer on purification of heparinase I from Flavobacterium heparinum J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci; 843(2): 209-215 49 Mihaylova B, Emberson J, Blackwell L, Keech A, Simes J, Barnes EH, Voysey M, Gray A, Collins R, Baigent C (2012) The effects of lowering LDL cholesterol with statin therapy in people at low risk of vascular disease: meta-analysis of individual data from 27 randomised trials Lancet; 380: 581-590 50 Mohn KL, Laz TM, Hsu JC, Melby AE Bravo R, Taub R (1991) The immediate-early growth response in regenerating liver and insulin-stimulated H-35 cells: comparison with serum-stimulated 3T3 cells and identification of 41 novel immediate-early genes Mol Cell Biol; 11(1): 381-390 51 Omede A, Atanu FO, Suleiman MS (2018) Lipid-lowering effect of Vernonia amygdalina leaf extracts on Triton WR 1339 – induced hyperlipidaemia in the rats The Journal of Phytopharmacology; 7(3): 292-297 52 Orsonneau JL, Douet P, Massoubre C, Lustenberger P, Bernard S (1989) An improved pyrogallol red-molybdate method for determining total urinary protein Clin Chem; 35(11): 2233-2236 53 Panteghini M (2008) Standardization in Clinical Enzymology: the IFCC efforts Clin Chem; 39: 795 54 Patel HD, Shah GB, Trivedi V (2011) Investigation of HMG Co A Reductase Inhibitory Activity of Antihyperlipidemic Herbal Drugs In Vitro Study Asian J Exp Biol Sci; 2(1): 63-68 55 Patel TP, Tushar P, Rawal, Komal (2016) Swertiamarin ameliorates oleic acid induced lipid accumulation and oxidative stress by attenuating gluconeogenesis and lipogenesis in hepatic steatosis Biomed Pharmacother; 83: 785-791 56 Reddy VP., Ahmed F and Urooj A (2012) inhibition of 3-hydroxy-3methylglutaryl coenzyme A (HMG Co-A) reductase in liver microsomes by Moringa oliefera L polyphenol International Pharmaceutical Sciences Research; 3(7): 2510-2516 57 Ricchi M, Odoardi MR, Carulli L, Loria L (2009) Differential effect of oleic and palmitic acid on lipid accumulation and apoptosis in cultured hepatocytes Journal of Gastroenterology and Hepatology; 24(5): 830-840 58 Rudney H, Kawachi T (1970) Solubilization and Purification of 3-Hydroxy-3methylglutaryl Coenzyme A Reductase from Rat Liver Biochemistry 9: 1700-1705 59 Sahebkar A (2014) Low-density lipoprotein is a potential target for curcumin: novel mechanistic insights Basic Clin Pharmacol Toxicol; 114(6): 437-438 60 Shaikh J, Ankola DD, Beniwal V (2009) Nanoparticle encapsulation improves oral bioavailability of curcumin by at least 9-fold when compared to curcumin administered with piperine as absorption enhancer European Journal of Pharmaceutical Sciences; 37: 223–230 61 Shapiro DJ, Nordstrom JL, Mitschelen JJ, Rodwell VW, Schimke RT (1974) Micro assay for 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase in rat liver and in L-cell fibroblasts Biochim Biophys Acta; 370(2): 369-377 62 Shechter JR (1983) Regulation of Rat Liver 3-Hydroxy-3-methylglutarylC oenzyme A Reductase J Biol Chem; 259(2): 870-877 63 Sheikh AA, Khan TZ, Sheik SR (2016) Evaluation of antihyperlipidemic activity of HMG-CoA reductase inhibitor and curcumin in combination on diet induced hyperlipidemic rats Der Pharmacia Lettre; 8(14): 109-118 64 Shin SK, Ha TY, McGregor RA, Choi MS (2011) Long-term curcumin administration protects against atherosclerosis via hepatic regulation of lipoprotein cholesterol metabolism Mol Nutr Food Res; 55(12): 1829-1840 65 Sigma Aldrich (2018) HMG CoA reductase assay KIT Technical Bulletin, Product information 66 Sigma-Aldrich (2007) HMG-CoA Reductase (HMGR) Assay Kit BioFiles; 7, Sigma-Aldrich (2007) Total Protein Kit, Micro Pyrogallol Red Method 67 Siperstein MD, Guest MJ (1960) Studies on the site of the feedback control of cholesterol synthesis J Clin Invest; 39: 642-652 68 Stone NJ, Robinson JG, Lichtenstein AH, Merz CNB, Blum CB, Eckel RH, Goldberg AC, Gordon D, Levy D, Lloyd-Jones DM, McBride P, Schwartz JS, Shero ST, Smith SC, Watson K, Wilson PWF (2014) ACC/AHA Guideline on the Treatment of Blood Cholesterol to Reduce Atherosclerotic Cardiovascular Risk in Adults Circulation; 129: S1-S45 69 Sun LP, Seemann J, Goldstein JL, Brown MS (2007) Sterol-regulated transport of SREBPs from endoplasmic reticulum to Golgi: Insig renders sorting signal in Scap inaccessible to COPII proteins Proc Natl Acad Sci USA; 104(16): 6519-6526 70 Sun Y, Peng ML (2014) Recent advances in curcumin and its derivatives for treatment of liver diseases Yao Xue Xue Bao; 49(11): 1483-1490 71 Tai MH, Chen PK, Chen PY (2014) Curcumin enhances cell-surface LDLR level and promotes LDL uptake through downregulation of PCSK9 gene expression in HepG2 cells Molecular Nutrition & Food Research; 58(11): 2133-2145 72 Taylor F, Huffman MD, Macedo AF (2013) Statins for the primary prevention of cardiovascular disease The Cochrane database of systematic reviews; 1: CD004816 73 Touiss I, Khatib S, Bekkouch O (2017) Phenolic extract from Ocimum basilicum restores lipid metabolism in Triton WR-1339-induced hyperlipidemic mice and prevents lipoprotein-rich plasma oxidation Food Science and Human Wellness; 6: 2833 74 Tu SP, Jin H (2011) Curcumin induces the differentiation of myeloid-derived suppressor cells and inhibits their interaction with cancer cells and related tumor growth American Association for Cancer Research; 5(2): 205–215 75 Wan Y, Liu LY, Hong ZF, Peng J (2014) Ethanol extract of Cirsium japonicum attenuates hepatic lipid accumulation via AMPK activation in human HepG2 cells Experimental and Therapeutic Medicine; 8: 79-84 76 Wilce PA, Kroon PA (1992) In Lipoprotein Analysis – a Practical Approach (Converse CA, Skinner ER, eds.) Oxford Univ Press, Oxford, pp 207-211 77 Yadav SK, Sah AK, Jha RK, Sah P, Shah DK (2013) Turmeric (curcumin) remedies gastroprotective action Pharmacogn Rev; 7(13): 42-46 78 Yang KY, Lin LC, Tseng TY, Wang SC (2007),” Oral bioavailability of curcumin in rat and the herbal analysis from Curcuma longa by LC-MS/MS” J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci; 853: 183-189 79 Yang T, Wright ME, Espenshade OJ, Brown MS (2002) Crucial step in cholesterol homeostasis: sterols promote binding of SCAP to INSIG-1, a membrane protein that facilitates retention of SREBPs in ER Cell; 110(4): 489-500 80 Yao HR, Liu J, Plumeri D, Cao YB, He T, Lin L, Li Y, Jiang YY, Li J, Shang J (2011) Lipotoxicity in HepG2 cells triggered by free fatty acids Am J Transl Res; 3(3): 284291 81 Zarzecki MS, Araujo SM, Bortolotto VC (2014) Hypolipidemic action of chrysin on Triton WR-1339-induced hyperlipidemia in female C57BL/6 mice Toxicology Reports; 1: 200208 82 Zingg JM, Hasan ST, Meydani M (2013) Molecular mechanisms of hypolipidemic effects of curcumin Biofactors; 39(1):101-121 83 Ibrahim AY, Hendawy SF, Elsayed AA, Omer EA (2016) Evaluation of hypolipidemic Marrubium vulgare effect in Triton WR-1339-induced hyperlipidemia in mice Asian Pac J Trop Med; 9(5):453-459 doi: 10.1016/j.apjtm.2016.03.038 84 Xie ZQ, Liang G, Zhang L, Wang Q, Zhang J, Wang H, Zhao GP, Zhang QH (2009) Molecular mechanisms underlying the cholesterol-lowering effect of Ginkgo biloba extract in hepatocytes: a comparative study with lovastatin Acta Pharmacol Sin; 30(9):12621275 85 Chung Thị Mỹ Duyên, Châu Lam Linh, Nguyễn Thị Thu Hương: Tác động ức chế enzym HMG-CoA reductase số cao chiết từ dược liệu điều trị rối loạn lipid máu Tạp chí Dược liệu, 24(1): 34-40, 2019 PHỤ LỤC Số liệu thực nghiệm NỘI DUNG Kết xây dựng đường tuyến tính BSA chuẩn để định lượng protein Nồng độ BSA(mg/ml) STT OD ODi – OD0 0,000 0,096 0,146 0,228 0,296 0,339 0,419 0,391 0,487 0,537 0,619 0,697 0,720 0,810 Kết định lượng protein mẫu dịch đồng thể enzym Lô OD Lần 0.1885 0.2401 0.2591 0.2201 0.2148 0.2738 0.1803 0.2601 OD Lần 0.1873 0.2387 0.2495 0.2298 0.2201 0.2803 0.1854 0.2529 OD Lần 0.1821 0.2392 0.2498 0.2052 0.2081 0.2735 0.1718 0.2599 Độ lệch chuẩn 0.003402 0.000709 0.005458 0.012391 0.006014 0.003842 0.00687 0.0041 Mật độ quang trung bình 0,1859  0,0034 0,2393  0,0007 0,2528  0,0054 0,2184  0,0123 0,2143  0,0060 0,2758  0,0038 0,1792  0,0068 0,2576  0,0041 Hàm lượng protein (mg/ml) 2,53 3,32 3,52 3,01 2,95 3,86 2,43 3,59 Kết khảo sát ảnh hưởng tốc độ ly tâm đến hoạt tính enzym Thơng số ly tâm 11500 G x 20 phút 10000 G x 20 phút 5000 G x 20 phút 2000 G x 20 phút 11500 G x 15 phút 10000 G x 15 phút 5000 G x 15 phút 2000 G x 15 phút Hoạt tính enzym Lần Lần Lần 6.52 6.91 6.15 7.03 5.68 10.88 11.54 9.36 10.03 9.02 8.02 10.88 5.98 6.78 5.51 8.81 9.05 8.02 11.92 12.36 12.56 8.02 7.67 6.57 Độ lệch chuẩn 0.380044 0.75 1.11 1.45139 0.642106 0.538919 0.327414 0.76 TB Hoạt tính enzym (μmol/phút/mgP) 6,53 ± 0, 38 6,54 ± 0, 75 10,31 ± 1,11 9,31 ± 1,45 6,09 ± 0,64 8, 62 ± 0,53 11,28 ± 0,33 7,42 ± 0,76 Kết khảo sát ảnh hưởng việc xử lý gan đến hoạt tính enzym Lơ Xử lý gan Khơng xử lý gan Hàm lượng protein enzym (mg/ml) 3.58 TB  SD: 2.95 3,21 ± 0,32 (n = 3) 3.12 5.03 TB  SD: 6.24 5,71 ± 0,62 5.87 (n = 3) Hoạt tính enzym (μmol/phút/mgP) 11.72 TB  SD: 9.98 10,88 ± 0,87 (n = 3) 10.94 9.21 TB  SD: 8.12 8,73 ± 0,55 8.87 (n = 3) Số liệu thực nghiệm NỘI DUNG Ảnh hưởng lượng protein đến hoạt tính HMG-CoA reductase Lượng protein enzym (mg) 0,2 0,5 1,5 Hoạt tính enzym Lần Lần 8.72 11.08 9.01 9.75 9.92 10.48 8.07 7.99 8.14 6.79 Độ lệch chuẩn 1.20 1.26 1.03 1.22 0.73 Lần 10.31 11.46 11.92 10.15 7.94 Hoạt tính enzym (TB  SD) (μmol/phút/mgP) 10,04  1,20 10,07  1,26 10,78  1,03 8,74  1,22 7,62  0,73 Ảnh hưởng khoảng thời gian phản ứng đến hoạt tính HMG-CoA reductase Thời gian phản ứng 10 15 20 25 30 Hoạt tính enzym Lần Lần 10,42 10,45 8,43 7,96 4,53 5,46 4,21 3,73 3,07 2,05 1,24 0,86 Lần 10,68 8,26 4,99 3,97 3,02 1,04 Độ lệch chuẩn 0,42 0,26 0,47 0,24 0,96 0,19 Hoạt tính enzym (TB  SD) (μmol/phút/mgP) 11,17  0,42 8,38  0,26 4,99  0,47 3,98  0,24 3,96  0,96 1,02  0,19 Ảnh hưởng pH đến hoạt tính HMG-CoA reductase pH 6,0 7,5 9,0 Hoạt tính enzym Lần Lần Lần 2.52 1.74 1.82 10.04 11.14 11.32 1.31 1.03 2.68 Độ lệch chuẩn Hoạt tính enzym (TB  SD) (μmol/phút/mgP) 2,02 ± 0,43 10,83 ± 0,69 1,67 ± 0,88 0.43 0.69 0.88 Ảnh hưởng nồng độ chất HMG-CoA đến hoạt tính HMG-CoA reductase HMG-CoA (M) 30 60 120 Hoạt tính enzym Lần Lần Lần 9.68 10.71 10.88 10.62 11.24 11.89 11.67 10.83 11.07 Độ lệch chuẩn 0.65 0.64 0.43 Hoạt tính enzym (TB  SD) (μmol/phút/mgP) 10,42 ± 0,65 11,25 ± 0,64 11,19 ± 0,43 Ảnh hưởng nồng độ NADPH đến hoạt tính HMG-CoA reductase Nồng độ NADPH (M) 10 20 50 100 Hoạt tính enzym Lần Lần Lần 9.65 8.92 8.94 10.67 11.43 10.97 11.23 9.89 10.24 9.89 11.33 11.4 Độ lệch chuẩn 0.42 0.38 0.69 0.85 Hoạt tính enzym (TB  SD) (μmol/phút/mgP) 9,17 ± 0,42 11,02 ± 0,38 10,45 ± 0,69 10,87 ± 0,85 Ảnh hưởng thời gian bảo quản đến hoạt tính enzym Thời gian bảo quản (tuần) 12 Dạng dịch Lần 11.04 7.63 4.22 1.95 1.31 Lần 10.95 8.72 4.79 2.52 0.72 Lần 12.01 8.92 6.51 1.56 1.12 Dạng cắn Lần Lần Lần 10.33 11.03 10.05 9.22 11.48 10.76 9.36 8.7 9.89 9.05 9.35 7.96 Trung bình oạt tính enzym (μmol/phút/mgP) Dạng dịch Dạng cắn 11,33 ± 0,89 8,42 ± 1,11 10,57 ± 0,82 5,17 ± 0,55 10,28 ± 1,07 2,01 ± 1,18 9,59 ± 0,40 1,05 ± 0,82 8,63 ± 0,63 Số liệu thực nghiệm NỘI DUNG Ảnh hưởng nồng độ atorvastatin hoạt tính enzym Atorvastatin (ng/ml) (mẫu chứng) 0,1 10 15 20 30 50 100 1000 Lần 10.16 10.26 9.03 8.87 6.09 3.72 2.09 0.94 0.091 -0.2 0.001 Lần 10.58 10.92 9.81 8.02 6.81 4.11 1.48 1.31 0.08 -1.7 0.02 Lần 11.11 9.68 10.16 10.25 6.82 3.72 2.77 0.61 0.24 0.2 0.002 Hoạt tính enzym (μmol/phút/mgP) 10,62 ± 0,47 10,29 ± 0,62 9,66 ± 0,59 9,05 ± 1,13 6,58 ± 0,42 3,85 ± 0,22 2,11 ± 0,64 0,93 ± 0,35 0,13 ± 0,09 -0,56 ± 1,01 0,00 ± 0,00 Số liệu thực nghiệm NỘI DUNG Ảnh hưởng acid oleic đến tỷ lệ sống tế bào HepG2 Mẫu Chứng TB SEM % chứng 0,141 0,175 0,148 0,186 0,151 0,133 0,156 0,008 Acid béo 50 µM 0,163 0,145 0,147 0,125 0,171 0,132 0,147 0,007 94,54 OD570 Acid béo Acid béo 100 µM 200 µM 0,125 0,115 0,148 0,133 0,145 0,132 0,133 0,098 0,112 0,111 0,138 0,138 0,134 0,121 0,005 0,006 85,76 77,84 Acid béo 500 µM 0,125 0,089 0,117 0,127 0,114 0,135 0,118 0,007 75,70 Acid béo 1mM 0,091 0,111 0,099 0,106 0,115 0,118 0,107 0,004 68,52 Acid béo mM 0,078 0,056 0,048 0,073 0,061 0,051 0,061 0,005 39,29 Ảnh hưởng acid oleic đến nồng độ cholesterol, triglycerid tế bào HepG2 Mẫu Chứng Acid béo 50 µM TB 6 6 5,33 5,17 TB 13 14 11 12 15 11 12,67 15 15 13 16 12 13 14,00 Acid béo Acid béo 100 µM 200 µM Cholesterol (mg/dL) 6 7 7 6,33 6,83 Triglycerid (mg/dL) 16 17 17 18 17 20 14 19 15 19 18 20 16,17 18,83 Acid béo 500 µM Acid béo 1mM Acid béo mM 10 10 8,83 11 11 12 10 10,17 12 10 13 11 10 14 11,67 22 24 27 25 23 28 24,83 36 34 31 37 39 35 35,33 39 33 37 40 33 36 36,33 Nồng độ cholesterol, triglycerid mơ hình gây tăng cholesterol tế bào HepG2 Mẫu Chứng TB SEM 6 6 5,33 0,42 Acid oleic mM + Atorvastatin 10 M Cholesterol (mg/dL) 11 11 9 12 8 10 10,17 7,5 0,60 0,56 Acid oleic mM Chứng 13 14 11 12 15 11 12,67 0,67 Acid oleic + Atorvastatin 10 M Triglycerid (mg/dL) 36 17 34 18 31 13 37 15 39 10 35 19 35,33 15,33 1,12 1,38 Acid oleic mM Số liệu thực nghiệm NỘI DUNG Chỉ số Cholesterol (Chol), triglycerid (Tri) HDL huyết hoạt tính HMGCoA reductase dịch đồng thể lô tyloxapol Lô chứng TB± SEM [Chol] (mg/dl) [Tri] (mg/dl) [HDL] (mg/dl) 106.46 72.82 114.65 113.87 85.03 124.46 102.88 ± 8.08 113.57 95.28 188.03 93.73 91.68 105.78 114.68 ± 15.06 98.73 47.98 65.25 62.29 39.24 57.09 61.76 ± 8.36 Hoạt tính enzym (μmol/phút/mgP) 5.36 5.36 3.43 2.14 4.72 8.25 4.88 ± 0.85 Chỉ số Cholesterol (Chol), triglycerid (Tri) HDL huyết hoạt tính HMGCoA reductase dịch đồng thể lô tyloxapol Lô chứng TB± SEM [Chol] (mg/dl) [Tri] (mg/dl) [HDL] (mg/dl) 406.17 453.39 330.17 394.48 467.62 394.48 426.37 580.77 431.68 ± 25.96 1377.12 2364.00 2150.39 1792.05 1853.96 1917.92 2032.31 2524.31 2001.51 ± 126.09 29.94 29.55 24.28 29.94 29.75 31.18 36.18 54.52 33.17 ± 3.26 Hoạt tính enzym (μmol/phút/mgP) 15.01 15.65 18.22 13.72 28.19 14.04 16.61 16.93 17.3 ± 1.64 Chỉ số Cholesterol (Chol), triglycerid (Tri) HDL huyết hoạt tính HMGCoA reductase dịch đồng thể lô atorvastatin Lô chứng [Chol] (mg/dl) TB ± SEM 351.93 328.35 274.63 335.04 309.78 374.80 355.05 259.30 323.61 ± 14.2 [Tri] (mg/dl) [HDL] (mg/dl) 1720.71 1675.19 1759.66 1816.65 1750.23 1949.49 1716.61 1615.33 1750.48 ± 35.36 49.25 68.24 54.97 33.58 51.14 47.82 48.08 40.80 49.24 ± 3.58 Hoạt tính enzym (μmol/phút/mgP) 8.75 5.54 10.82 5.07 6.32 8.25 7.29 6.25 7.29 ± 1.90 Số liệu thực nghiệm NỘI DUNG Độ giảm độ hấp thu dãy nồng độ atorvastatin Atorvastatin (ng/ml) Trắng 0,1 10 20 30 50 100 1000 OD 0,02 0,088 0,074 0,069 0,048 0,041 0,033 0,019 0,017 0,008 OD 0,01 0,092 0,073 0,072 0,046 0,035 0,031 0,020 0,013 -0,001 OD 0,05 0,095 0,080 0,068 0,040 0,034 0,036 0,024 0,014 0,001 OD TB 0,003 0,092 0,076 0,070 0,045 0,037 0,033 0,021 0,015 0,003 SEM 0,001 0,002 0,002 0,001 0,002 0,002 0,001 0,002 0,001 0,003 Độ giảm độ hấp thu dãy nồng độ curcumin Curcumin (g/ml) Trắng 10 25 50 100 OD -0,002 0,101 0,096 0,084 0,062 0,061 0,052 0,032 OD 0,001 0,095 0,096 0,079 0,065 0,059 0,038 0,026 OD 0,005 0,097 0,091 0,075 0,076 0,052 0,042 0,046 OD TB 0,001 0,098 0,094 0,079 0,068 0,057 0,044 0,035 SEM 0,002 0,002 0,002 0,003 0,004 0,003 0,004 0,006 Độ giảm độ hấp thu dãy nồng độ nano curcumin Nano curcumin (g/ml) trắng OD 0,009 0,105 OD 0,001 0,098 OD 0,004 0,114 OD TB 0,005 0,106 SEM 0,002 0,005 0,095 0,089 0,097 0,086 0,108 0,082 0,100 0,086 0,004 0,002 10 25 50 100 0,074 0,066 0,050 0,028 0,060 0,054 0,058 0,033 0,069 0,057 0,036 0,040 0,068 0,059 0,048 0,034 0,004 0,004 0,006 0,003 Tác động ức chế tổng hợp lipid curcumin, nano curcumin tế bào HepG2 Mẫu Sinh lý Chol (mg/dl) Tri (mg/dl) Acid béo Chol 1mM Tri Atorvastatin Chol 10 M Tri Curcumin Chol g/ml Tri Curcumin 15 Chol g/ml Tri Nano Chol curcumin Tri g/ml Nano Chol curcumin Tri 15 g/ml TB SEM 6 5,67 0,38 14 12 37 11 13 35 24 15 10 39 17 11 34 11 28 13 12 34 10 12 13 30 12 23 10 11 13 33 14 15 29 10 27 12 13 11 35 13 11 31 30 12 13 37 11 16 12 34 29 10 13,00 11,83 35,83 8,17 13,83 12,50 32,17 9,83 26,83 9,17 0,53 0,44 0,83 0,86 0,86 0,57 0,93 0,55 1,04 0,68 28 25 26 27 24 21 25,17 0,93 11 10 7,83 0,86 22 20 13 14 14 18 16,83 1,38 Số liệu thực nghiệm NỘI DUNG Nồng độ lipid máu độ giảm độ hấp thu lơ chuột thí nghiệm Lơ Sinh lý TB SEM Tyloxapol TB SEM Atorvastatin TB Cholesterol (mg/dl) 132 142 112 116 152 110 127,3 7,09 Triglycerid (mg/dl) 126 126 119 116 135 134 126,0 3,13 HDL-C (mg/dl) 100,7 105,8 82,4 77,4 120,5 72,7 93,3 7,63 LDL-C (mg/dl) 59,8 56,8 63,4 71,9 52,4 61,2 60,9 2,69 0,075 0,088 0,065 0,067 0,080 0,079 0,076 0,004 420 742 55,7 132,6 0,111 378 321 389 336 374 369,7 14,72 188 196 214 209 178 703 655 735 633 690 693,0 17,62 480 521 546 491 436 48,6 52,1 57 44,6 60,4 53,1 2,37 66,2 59,4 70 55,6 54,8 101,9 95,6 140,8 125,5 124,8 120,2 7,23 70,2 81,4 75,6 67,9 72,5 0,134 0,118 0,129 0,130 0,144 0,128 0,005 0,092 0,084 0,110 0,103 0,122 210 199,2 517 498,5 72,1 63,0 84,8 75,4 0,081 0,099 OD Nồng độ lipid máu độ giảm độ hấp thu lơ chuột thí nghiệm Lơ Sinh lý TB SEM Bệnh TB SEM Atorvastatin TB SEM Curcumin 100 mg/kg TB SEM Curcumin 500 mg/kg Cholesterol (mg/dl) 137 118 120 142 139 153 126 148 135,55 4,54 401 394 307 424 388 438 315 366 379,11 16,81 182 232 153 210 262 218 190 194 205,19 11,76 296 329 298 333 346 405 335 362 337,97 12,34 378 286 299 309 342 370 353 Triglycerid (mg/dl) 111 91 86 117 107 132 92 122 107,45 5,81 720 628 645 762 689 796 695 669 700,78 20,17 492 528 472 405 543 486 436 487 481,24 15,85 518 633 550 610 582 621 536 524 571,94 16,17 695 552 558 605 649 638 658 HDL-C (mg/dl) 82,6 77,5 79,3 90,7 91,2 110,8 72,5 99,5 88,02 4,49 54,6 39,7 44,5 56,2 53,7 60,2 42,6 43,8 49,41 2,69 67,9 74,8 69,2 63,8 78,2 71,3 62,0 80,6 70,97 2,33 47,4 58,1 44,3 55,6 51,4 60,7 48,2 46,9 51,57 2,10 62,5 57,9 55,6 52,9 68,2 60,7 74,3 LDL-C (mg/dl) 44,4 46,6 50,2 66,7 62,4 74,6 55,6 67,8 58,53 3,89 128,9 118,5 128,1 132,7 134,5 142,0 112,6 108,6 125,74 4,06 72,3 78,3 70,6 68,9 85,2 82,4 66,0 83,6 75,91 2,61 109,8 122,2 114,5 119,4 98,2 117,0 105,6 101,3 110,99 3,08 113,4 90,8 97,4 100,6 111,7 96,7 105,7 TB SEM Curcumin 1000 mg/kg TB SEM Nano curcumin 100 mg/kg TB SEM Nano curcumin 500 mg/kg TB SEM Nano curcumin 1000 mg/kg TB SEM 392 341,26 13,86 262 343 227 248 257 332 375 302 293,27 18,68 303 318 296 348 265 316 330 327 312,96 8,94 309 342 370 353 392 341,26 13,86 262 343 227 637 623,99 17,48 462 586 478 458 491 516 607 582 522,38 21,36 605 480 427 555 433 537 592 525 519,17 23,86 605 649 638 658 637 623,99 17,48 462 586 478 59,5 61,46 2,45 54,5 66,4 50,6 54,6 60,2 63,6 72,5 73,8 62,03 3,03 63,3 65,1 57,2 52,8 52,2 61,0 65,6 53,4 58,82 1,98 52,9 68,2 60,7 74,3 59,5 61,46 2,45 54,5 66,4 50,6 93,8 101,26 2,92 87,5 115,2 84,2 92,2 108,3 99,5 86,2 119,3 99,04 4,86 100,2 109,2 92,7 92,7 88,5 102,7 123,5 86,9 99,56 4,34 100,6 111,7 96,7 105,7 93,8 101,26 2,92 87,5 115,2 84,2 305 199 285 376 250 580 380 503 555 424 74,5 69,4 65,7 79,2 70,8 90,3 84,6 86,3 125,7 95,6 324 327 259 290,52 19,44 539 579 412 496,38 28,32 62,8 65,7 76,2 70,53 2,03 72,5 112,8 99,2 95,86 5,95 PHỤ LỤC Phương pháp bào chế Công thức bào chế Curcumin Dầu Triglycerid rắn Polyoxylglycerid Phospholipid Môi trường thân nước vừa đủ a% 20 g 10 g xg yg 100 g Quy trình bào chế - Pha dầu: Đun chảy 10 g triglycerid rắn 20 g dầu 70 oC tạo hỗn hợp lipid đồng nhất, trì 70 oC, thêm từ từ curcumin vào, khuấy đến curcumin tan hoàn toàn - Pha nước: Phân tán chất HĐBM gồm x (g) polyoxylglycerid y (g) phospholipid, vào hỗn hợp môi trường thân nước 60oC, khuấy Ultra-turrax tốc độ 8.000 vòng/phút tới chất HĐBM phân tán hoàn toàn - Nâng tốc độ khuấy Ultra-turrax lên 10.000 vòng/phút, phối hợp pha dầu từ từ vào pha nước 60 - 70 oC - Giảm kích thước tiểu phân Ultra-turrax tốc độ 15.000 vòng/phút, 10 phút nhiệt độ 60 - 70 oC thu hệ phân tán thô Sau đó, đồng hóa áp suất cao 800 bar với 10 chu kỳ nhiệt độ 50 oC Để nguội hệ phân tán nhiệt độ phòng thu hệ phân tán nano curcumin - Đóng chai, dán nhãn hệ phân tán nano curcumin Đặc tính lý hóa hệ phân tán nano curcumin Chỉ tiêu đánh giá Chỉ tiêu cần đạt Thể chất lỏng, màu vàng, đồng nhất, có mùi đặc trưng, dễ Cảm quan dàng phân tán vào mơi trường nước Tiều phân hình cầu kích thước đồng nhỏ Hình thể vi học Nằm khoảng 100 – 300 nm KTTP trung bình (nm) đỉnh Kiểu phân bố Nhỏ 800 nm Dải phân bố kích thước 5,0 – 7,0 Ph Đạt theo tiêu DĐVN VI Độ nhiễm khuẩn Dương tính với curcumin I Định tính Hàm lượng curcumin I 90 – 110 % so với hàm lượng ghi nhãn (HPLC) Tiêu chuẩn sở nano curcumin uống 3.1 Tiêu chuẩn kỹ thuật Tính chất Sản phẩm dạng lỏng, vàng, đồng nhất, dễ dàng phân tán mơi trường nước, khơng có tượng khơng bền kết bông, kem, sa lắng hay tách pha Kích thước phân bố kích cỡ Dải phân bố kích cỡ tiểu phân khơng lớn 800 nm, kiểu phân bố đỉnh Kích thước trung bình tiểu phân từ 100 - 300 nm pH Sản phẩm có pH từ 5,0 - 7,0 Cấu trúc tiểu phân Tiểu phân dạng hình cầu, Định tính Sản phẩm có phản ứng định tính curcumin I Định lượng Sản phẩm phải chứa từ 90,0 – 110,0% curcumin I so với hàm lượng nhãn Độ nhiễm khuẩn Đạt theo DĐVN IV 3.2 Phương pháp thử Tính chất Tiến hành: Quan sát mắt thường, đánh giá thể chất, màu sắc, độ đồng nhất, khả phân tán mơi trường nước Đánh giá kết quả: Kết tính chất cảm quan đánh giá đạt hệ phân tán lỏng, màu trắng đục, đồng tượng bền Kích thước phân bố kích cỡ Tiến hành: Xác định dải phân bố kích cỡ tiểu phân theo phương pháp nhiễu xạ tia laser Nhiệt độ phân tích 25 °C Thời gian phân tích 90 giây Chuẩn bị mẫu: Sản phẩm pha lỗng 150 lần nước cất Tồn mẫu cho vào cốc đo tiến hành đo mẫu Đánh giá kết quả: Dựa vào biểu đồ, xác định kiểu phân bố kích cỡ (tốt kiểu phân bố đỉnh), kích thước trung bình tiểu phân pH Tiến hành: Cân xác khoảng g sản phẩm cho vào túi thẩm tích với lỗ màng 6.000 – 8.000 Da, đưa vào becher chứa 50 ml nước cất, khuấy vòng tốc độ 100 vòng/phút Lấy dịch đo pH Lặp lại thí nghiệm lần Đánh giá kết quả: Ghi nhận kết lần thử nghiệm, tính kết trung bình Cấu trúc tiểu phân nano Lưới đồng tráng với lớp carbon máy phủ carbon JEE – 420 Pha loãng mẫu 50 lần nước cất, trải mẫu pha loãng lên lưới đồng phủ lớp carbon Đặt lưới đồng vào đĩa petri cho vào bình hút ẩm để làm khơ mẫu 24 Quan sát mẫu TEM Hình ảnh tiểu phân phóng đại nhờ thấu kính từ ghi nhận lại huỳnh quang Sau đó, camera kết nối với phần mềm điều khiển máy tính nhận tín hiệu chuyển hình ảnh máy tính Ghi nhận kết Định tính Tiến hành: Tiến hành phương pháp HPLC Đánh giá kết quả: Thời gian lưu phổ UV đỉnh sắc ký đồ dung dịch thử phải tương ứng với thời gian lưu phổ UV đỉnh curcumin I dung dịch chuẩn Định lượng Tiến hành: định lượng curcumin I HPLC Điều kiện sắc ký - Máy HPLC Shimadzu LC - 20A - Cột: Kyatech C18 (250 x 4,6 mm), cỡ hạt: μm Tiền cột: Phenomenex - Bơm: LC-8A - Pha động: ACN – H2O (48 : 52), thêm giọt H3PO4 1% 100 ml - Detector: SPD-20A - Bước sóng phát hiện: 428 nm - Tốc độ dịng: 0,9 ml/phút - Thể tích tiêm mẫu: 20 μl Cách pha dung dịch thử, dung dịch chuẩn mẫu trắng - Dung dịch chuẩn Cân xác khoảng 1,0 mg curcumin I chuẩn cho vào bình định mức 25 ml Hịa tan methanol thêm methanol đến vạch vừa đủ 25 ml, lắc đều, thu dung dịch mẹ có nồng độ khoảng 40 µg/ml Pha loãng dung dịch mẹ đến nồng độ cần thiết Lọc qua màng lọc Millipore có kích thước lỗ lọc 0,22 µm trước bơm mẫu qua hệ thống HPLC - Dung dịch thử Cân xác khoảng 50 mg mẫu thử cho vào bình định mức 10 ml, thêm ml methanol, siêu âm 15 phút, để nguội Bổ sung methanol đến vạch vừa đủ 10 ml Lọc mẫu qua màng lọc Millipore có kích thước lỗ lọc 0,22 µm - Mẫu trắng: Cân tá dược có khối lượng tương đương với lượng tá dược có mẫu thử theo công thức bào chế Tiến hành trình xử lý mẫu tương tự dung dịch thử Đánh giá kết quả: Sản phẩm phải chứa từ 90,0 – 110,0% curcumin I so với hàm lượng lý thuyết Độ nhiễm khuẩn Tiến hành đánh giá kết quả: theo DĐVN IV Kết thử độc tính (LD50 có) Ở liều tối đa thử nghiệm chuột, chưa thấy xuất độc tính nên chưa xác định LD50 KẾT QUẢ KIỂM NGHIỆM SẢN PHẨM NANOCURCUMIN 5% Mẫu thử Ngày sản xuất Lô sản xuất Tiêu chuẩn Trình bày : Hệ phân tán nanocurcumin : 100617 Ngày lấy mẫu : 010617 Hạn dùng : Tiêu chuẩn sở : Lọ 100 g sản phẩm CHỈ TIÊU Tính chất Thế zêta pH Độ nhớt Hình thể vi học Kích thước tiểu phân Định tính Định lượng MỨC CHẤT LƯỢNG Hệ phân tán lỏng màu vàng, thể chất mịn, dễ dàng phân tán vào nước Trị tuyệt đối nằm khoảng – 10 mV 5,0 - 6,0 Không vượt 2000 cP Các tiểu phân hình cầu, đồng đều, phần lớn tiểu phân phải nhỏ 500 nm Kích thước trung bình khoảng 50 – 400 nm, kiểu phân bố đỉnh Phải cho phép thử định curcumin Hàm lượng curcumin: 4,50 – 5,50% : 11/06/17 : 300619 KẾT QUẢ Đạt Đạt (-6,1 mV) Đạt (5,15 ) Đạt (876,3 cP) Đạt Đạt (164,4 nm, đỉnh) Đúng Đạt (5,08 ± 0,11 %) Độ nhiễm khuẩn Theo Tiêu chuẩn DĐVN IV Đạt Kiểm mẫu Phịng thí nghiệm đạt tiêu chuẩn GLP QC Danapha Người thực hiện: Trần Ngọc Khuê Trương Công Trị