Nghiên cứu quy trình công nghệ tổng hợp dược chất anastrozole từ 3 5 bis 2 cyano 2 methylethyl toluene quy mô 100g mẻ

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆN HÀN LÂM KH VÀ CN VIỆT NAM VIỆN KHOA HỌC VẬT LIỆU ỨNG DỤNG BÁO CÁO NGHIỆM THU NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ TỔNG HỢP DƯỢC CHẤT ANASTROZOLE TỪ 3,5-BIS(2-CYANO-2METHYLETHYL)TOLUENE QUY MÔ 100G/MẺ CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: GS.TS NGUYỄN CỬU KHOA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 12/ 2016 ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu) NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CƠNG NGHỆ TỔNG HỢP DƯỢC CHẤT ANASTROZOLE TỪ 3,5-BIS(2-CYANO-2METHYLETHYL)TOLUENE QUY MÔ 100G/MẺ CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ TRÌ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 12/ 2016 TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Quy trình tổng hợp Anastrozole từ Ana-3 nghiên cứu cải tiến qua patent công bố với tác nhân để sử dụng cho phản ứng brom hóa Ana-3 Nbromsuccimide benzoyl peroxide dung mơi CCl4, CH2Cl2, CH3CN Sau đó, Anastrozole tổng hợp cách phản ứng Ana-4 thô với 1,2,4-sodium triazole dung mơi DMF Nhược điểm quy trình việc sử dụng dung mơi Clo hóa độc hại DMF Đồng thời, việc sử dụng tác nhân NBS dung môi acetonitril cho nhiều loại sản phẩm phụ Do đó, gây khó khăn cho q trình tách sắc ký cuối Ana-4 phản ứng trực tiếp với 1,2,4- sodium triazole mà không qua trình tinh chế khác Do đó, để tối ưu quy trình tổng hợp Anastrozole từ Ana-3, điều kiện khảo sát khác cho phản ứng tổng hợp Ana-4 từ Ana-3 phản ứng tổng hợp Anastrozole từ Ana-4 thực Cụ thể sau: a) Khảo sát phản ứng tổng hợp Ana-4 từ Ana-3 với điều kiện khác gồm: dung môi phản ứng, tỉ lệ tác chất, thời gian thực hiện, xúc tác tác nhân brom hóa b) Khảo sát phản ứng tổng hợp Anastrozole từ Ana-4 với điều kiện khác gồm: dung môi phản ứng, tỉ lệ tác chất sử dụng c) Khảo sát hỗ trợ vi sóng siêu âm phản ứng tổng hợp Ana-4 Anastrozole Đối với phản ứng tổng hợp Ana-4 từ Ana-3 NBS, kết khảo sát cho thấy acetonitril dung môi thay hữu hiệu cho dung mơi clo hóa với độ chuyển hóa hiệu suất thấp Việc sử dụng xúc tác acid sulfuric, độ chuyển hóa Ana-3 đẩy lên tối đa, nhiên số loại sản phẩm phụ tăng lên chuyển hóa monoacid diacid gốc CN tác động acid Bằng việc sử dụng hệ KBrO3/NaHSO3, tơi tìm điều kiện thích hợp để tổng hợp Ana-4 từ Ana-3 với độ chuyển hóa cao (>90%) đồng thời phản ứng tiến hành dung mơi ethyl acetate H2O, tránh việc sử dụng dung môi độc hại Hơn nữa, kết HPLC cho thấy có udy loại sản phẩm phụ sinh ra, trình tách sắc kí cột cuối để tinh chế Anastrozole thuận lới i Đối với phản ứng tổng hợp Anastrozole từ Ana-4, kết khảo sát cho thấy aceton dung môi phù hợp để thay cho DMF với hiệu suất cao, độ chuyển hóa tối đa, tỉ lệ TMTADMBA thấp Đồng thời, nhiệt độ sơi thấp, dung mơi dễ dàng loại bỏ khỏi phản ứng Từ kết trên, quy trình tổng hợp tối ưu Anastrozole từ Ana-3 đề xuất với hiệu suất khoảng 70% Đồng thời quy trình đề xuất đưa quy trình làm anastrozole đảm bảo tiêu chuẩn USP36 hàm lượng sản phẩm phụ Các thiết bị thông số thiết bị cần dùng cho quy trình tổng hợp pilot 50g Anastrozole đề xuất Các thiết bị thơng số thiết bị cần dùng cho quy trình tổng hợp pilot 100g Anastrozole đề xuất Các kết thu bước đầu cho thấy tổng hợp thành công chất trung gian sản phẩm cuối với hiệu suất độ tinh khiết cao Hiện tiếp tục nghiên cứu hồn thiện quy trình thực cơng việc khác đề cương đăng ký ii SUMMARY OF RESEARCH CONTENT The process for preparation of Anastrozole from 3,5-bis(2-cyanoprop-2-yl)Toluene (Ana-3) has been studied and published in recent patents which comprises: a) Bromination of Ana-3 in an organic solvent (CCl4, CH2Cl2, CH3CN) using Nbromosuccimide with a radical initiator (Benzoyl peroxide, AIBN); b) Reacting crude 3,5-bis(2-cyanoprop-2-yl)benzylbromide (Ana-4) with 1,2,4-sodium triazole in DMF The use of carcinogenic solvent like CCl4, DMF is disadvantageous with respect to industrial scale Beside, the use of NBS with acetonitrile as a alternate solvent gives more by-products Thus, the Ana-4 in the process is not isolated or further purified, but is directly converted to anstrozole in situ As the result, an impure final product is obtained To optimize the process for preparation of Anastrozole from Ana-3, different reaction conditions for the preparation of Ana-4 from Ana-3 and the prepartion of Anastrozole from Ana-4 were carried out Included: a) For the preparation of Ana-4 from Ana-3, parameters were selected including: 1) selection of solvent, 2) selection of brominating agent, 3) presence of sulfuric acid, 4) reaction time and 5) molar ratio of NBS toward Ana-3 b) For the preparation of Anastrozole from Ana-4, parameters were selected including: 1) selection of solvent, 2) molar ratio of 1,2,4-sodium triazole toward Ana-4 c) Preparion of Ana-4 with microwave and ultra sound assisted Based on the results, it was concluded that acetonitrile is not a good alternate solvent for the preparation of Ana-4 with NBS while the conversion of Ana-3 is low By using a small amount of sulfuric acid, the reaction was pushed to completed with higher conversion of ana-3 and higher yield However, more impurities were detected One of those are monoacid and diacid of Ana-3/Ana-4 formed under acidic solution A simple, regioselective, and economical method for preparation of 3,5-bis(2cyanoprop-2-yl)benzylbromide from 3,5-bis(2-cyanoprop-2-yl)toluene is reported By using brominating agent potassium bromate/ sodium bisulfite in two-phase solvent water/ ethyl acetate, the bromination can be carried out under medium temperature of 50oC, giving the higher yield of product and lower the number of by-products All the reaction parameters are optimized The conversion of more than 80% is achieved iii For the preparation of Anastrozole form Ana-4, it was concluded that acetone is a good alternate solvent for the reaction The conversion is completely and the yield is comparable to those reactions carried out in DMF Beside, the by-product TMTADMBA formed is much lower compared to other solvents like 2-propanol Due to low boiling point, acetone is more easily to remove from reaction than DMF An optimized process for preparation Anastrozole from Ana-3 is reported based on the optimized results above The overall yield is 70% Beside, a process for purify Anastrozole from isometric isomer is reported with the purified product of 99.9% All the equipments and their parameters for pilot-scale synthesis of 50g Anastrozole have been recommended All the equipments and their parameters for pilot-scale synthesis of 100g Anastrozole have been recommended The obtained results indicated that we had successfully synthesized all the intermediates and the final product with high yield and purity Presently, we are continuing to improve the synthetic methods iv MỤC LỤC Trang Tóm tắt nội dung nghiên cứu i Summary of research contnet ii Mục lục v Danh mục chữ viết tắt viii Danh mục bảng ix Danh mục hình xii Danh mục quy trình xv Danh mục sơ đồ xv Quyết tốn kinh phí năm 2014 (đợt 1) xvi Quyết tốn kinh phí năm 2015 (đợt 2) xvii PHẦN MỞ ĐẦU I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan bệnh ung thư vú Anastrozole 1.2 Các quy trình tổng hợp Anastrozole nghiên cứu 1.3 Các cơng trình nghiên cứu quy trình tổng hợp Anastrozole từ Ana-3 10 II NỘI DUNG NGHIÊN CỨU VÀ PHƯƠNG PHÁP THỰC HIỆN 15 2.1 Kiểm nghiệm tiêu chuẩn tiền chất theo USP 36 16 2.2 Hồn thiện quy trình tổng hợp Anastrozole từ 3, 5-Bis(2-cyano-2methylethyl)toluene quy mơ phịng thí nghiệm 17 Nội dung 2.2.1: Qui trình hồn chỉnh, tinh chế xác định thành phần cấu trúc tiền chất 17 Nội dung 2.2.2: Qui trình tổng hợp, tinh chế sản phẩm Anastrozole phịng thí nghiệm phân tích thành phần, cấu trúc sản phẩm thu 20 2.3 Xây dựng hệ thống sản xuất pilot 100g/mẻ 21 Nội dung 2.3.1: Xây dựng quy trình tổng hợp tiền chất (Ana-4) sản phẩm Anastrozole quy mô sản xuất 21 v Nội dung 2.3.2: Xây dựng qui trình làm sản phẩm 28 Nội dung 2.3.3: Lắp ráp, xây dựng hệ thống sản xuất Anastrozole tiến hành sản xuất thử nghiệm pilot 34 Lắp ráp, xây dựng hệ thống sản xuất Anastrozole 34 Tiến hành sản xuất thử nghiệm pilot 35 Tiến hành tinh chế sản phẩm 35 Nội dung 2.3.4: Xác định thành phần cấu trúc sản phẩm 36 Nội dung 2.3.5: Xác định hiệu suất, độ độ ổn định sản phẩm 37 Nội dung 2.3.6: Đánh giá độ ổn định thời gian bảo quản phương pháp lão hóa cấp tốc 39 2.4 Xây dựng tiêu chuẩn sở sản phẩm Anastrozole 40 2.5 Bước đầu đánh giá hiệu kinh tế 43 III KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 44 3.1 Kiểm nghiệm tiêu chuẩn tiền chất theo USP 36 44 3.2 Hồn thiện quy trình tổng hợp Anastrozole từ 3, 5-Bis(2-cyano-2methylethyl)toluene quy mơ phịng thí nghiệm 45 Nội dung 3.2.1: Qui trình hồn chỉnh, tinh chế xác định thành phần cấu trúc tiền chất 45 Nội dung 3.2.2: Qui trình tổng hợp, tinh chế sản phẩm Anastrozole phịng thí nghiệm phân tích thành phần, cấu trúc sản phẩm thu 53 3.3 Xây dựng hệ thống sản xuất pilot 100g/mẻ 56 Nội dung 3.3.1: Xây dựng quy trình tổng hợp tiền chất (Ana-4) sản phẩm anastrozole quy mô sản xuất 56 Nội dung 3.3.2: Xây dựng qui trình làm sản phẩm 66 Nội dung 3.3.3: Lắp ráp, xây dựng hệ thống sản xuất Anastrozole tiến hành sản xuất thử nghiệm pilot 71 Lắp ráp, xây dựng hệ thống sản xuất Anastrozole 71 Tiến hành sản xuất thử nghiệm pilot 73 Tiến hành tinh chế sản phẩm 73 vi Nội dung 3.3.4: Xác định thành phần cấu trúc sản phẩm 74 Nội dung 3.3.5: Xác định hiệu suất, độ độ ổn định sản phẩm 79 Nội dung 3.3.6: Đánh giá độ ổn định thời gian bảo quản phương pháp lão hóa cấp tốc 84 3.4 Xây dựng tiêu chuẩn sở sản phẩm Anastrozole 85 3.5 Bước đầu đánh giá hiệu kinh tế 93 IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 95 4.1 Kết luận 95 4.2 Đề nghị 96 TÀI LIỆU THAM KHẢO 97 * Đính kèm PHỤ LỤC Sản phẩm khoa học công nghệ đề tài Dạng kết III, IV Quy trình tổng hợp Anastrozole từ 3, 5-Bis(2-cyano-2methylethyl)toluene quy mơ phịng thí nghiệm Quy trình tổng hợp Anastrozole từ 3, 5-Bis(2-cyano-2methylethyl)toluene quy mơ pilot 100g/mẻ Báo cáo kết nghiên cứu độ ổn định thời gian bảo quản sản phẩm Anastrozole Bài báo khoa học Sở hữu trí tuệ Dạng kết I, II Hình ảnh sản phẩm Anastrozole PHỤ LỤC Kết HPLC hình ảnh phổ PHỤ LỤC Các văn liên quan Thuyết minh đề tài Hợp đồng khoán nghiên cứu khoa học phát triển cơng nghệ Thẩm tra tốn năm 2014 Thẩm tra toán năm 2015 vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ana-3 3,5-bis(2-cyanoprop-2-yl)Toluene Ana-4 3,5-bis(2-cyanoprop-2-yl)benzylbromide BPO Benzoyl peroxide CCl4 Carbon tetrachloride DCM Dichloromethane DMF N,N-Dimethylformamide EtOAc Ethyl acetate GC Gas chromatography, sắc kí khí Hex Hexane HPLC High pressure liquid chromatography, sắc kí lỏng cao áp MS Mass spectrometry, phổ khối lượng NBS N-Bromosuccimide NMR Nuclear magnetic resonance, phổ cộng hưởng từ hạt nhân RRT Thời gian lưu TBAB Tetrabutylammonium bromide TLC Thin layer chromatography, sắc kí lớp mỏng TMTAMBDA α,α,α’,α’-tetramethyl-5-(4H-1,2,4-triazol-4-ylmethyl)-1,3benzendiacetonitrile viii 5.0 3.56 74.13 01:03 20.0 16.18 84.21 01:03 120 99,5 82.91 01:03 Đánh giá độ ổn định quy trình tinh chế Kết đánh giá chất lượng sản phẩm theo HPLC Quy trình phản ứng sau thực lặp lại lần, kết chất lượng sản phẩm phân tích thiết bị HPLC thể độ qua bảng 41 sắc ký đồ: Bảng 41 Kết phân tích HPLC sản phẩm lần lập lại Thí nghiêm Lần Lần Lần Lần Lần TB Độ tinh khiết thô HPLC (%) 97,73 98,06 98,69 97,69 96,19 98,47 ± 1,00 83 Nội dung 3.3.6: Đánh giá độ ổn định thời gian bảo quản phương pháp lão hóa cấp tốc Độ ổn định lão hóa cấp tốc nguyên liệu Anastrozole, số lô: Anas_20160806 Kết Chỉ tiêu Lần đầu tháng tháng tháng Cảm quan: Bột kết tinh Trắng Trắng Trắng màu trắng đến trắng ngà Nước Định lượng (%) 101.75 100.9 98.38 Độ ổn định lão hóa cấp tốc nguyên liệu Anastrozole, số lô: Anas_20160815 Kết Chỉ tiêu Lần đầu tháng tháng tháng Cảm quan: Bột kết tinh Trắng Trắng Trắng màu trắng đến trắng ngà Nước Định lượng (%) 99.26 98.29 97.27 Độ ổn định lão hóa cấp tốc nguyên liệu Anastrozole, số lô: Anas_20160825 Kết Chỉ tiêu Lần đầu tháng tháng tháng Cảm quan: Bột kết tinh Trắng Trắng Trắng màu trắng đến trắng ngà 84 Nước Định lượng (%) 100.03 99.15 97.83 Kết luận Nghiên cứu độ ổn định vật lý nguyên liệu Anastrozole chứng tỏ cảm quan nguyên liệu không bị biến đổi sau tháng điều kiện lão hoá cấp tốc nhiệt độ 400C ± 20C /độ ẩm tương đối 75% ± 5% Căn vào số liệu kết nghiên cứu độ ổn định nguyên liệu Anastrozole điều kiện lão hóa cấp tốc (nước, định lượng) xác định tuổi thọ chế phẩm nhiều tháng kể từ ngày sản xuất Hiện chờ kết tháng để có kết luận cuối 3.4 Xây dựng tiêu chuẩn sở sản phẩm Anastrozole 3.4.1 Tính chất 3.4.1.1 Cảm quan Bảng 42 Kết cảm quan Anastrozole Tính chất Kết - Bột tinh thể màu trắng, không mùi Đạt - Tan tự acetone, ethanol, methanol, tan tốt acetonitrile Đạt - Nhiệt độ nóng chảy 82-83oC Đạt 3.4.1.2 Định tính Thời gian lưu peak anastrozole sắc kí đồ (RT=3.132) trùng với thời gian lưu anastrozole chuẩn USP (RT=3.131) với điều kiện sắc kí thực mơ tả mục định lượng Hình 55 Sắc kí đồ Anastrozole mẫu thử 85 Hình 56 Sắc kí đồ Anastrozole USP 3.4.2 Tiêu chuẩn nguyên liệu 3.4.2.1 Hàm lượng nước Hàm lượng nước TB từ 0.21-0.24 %, đạt tiêu chuẩn nguyên liệu Bảng 43 Kết phân tích hàm lượng nước Anastrozole Mẻ Khối lượng cân (g) Thể tích Combititrant sử dụng (ml) Mẻ Mẻ Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu 0.30025 0.30018 0.30021 0.30018 0.29998 0.30002 0.125 0.118 0.109 0.137 0.152 0.128 Hệ số F 5.15 mg/mL Hàm lượng nước trung bình (%) 0.21 0.21 0.24 Kết luận Đạt Đạt Đạt 3.4.2.2 Hàm lượng cắn sau nung Hàm lượng cắn sau nung cao 0.024%, đạt tiêu chuẩn nguyên liệu Bảng 44 Kết phân tích hàm lượng cắn sau nung Mẻ Khối lượng bì (g) Mẻ Mẻ 32.24627 33.43206 34.24568 Khối lượng mẫu (g) 1.00021 1.00038 1.00009 Khối lượng bì + mẫu sau nung (g) 32.24645 32.43218 34.24592 86 Hàm lượng cắn (%) 0.018 0.012 0.024 Đạt Đạt Đạt Kết luận 3.4.2.3 Hàm lượng kim loại nặng Không phát kim loại nặng Pb, Hg, As Cd hàm lượng cắn Anastrozole sau nung Nguyên liệu đạt tiêu chuẩn tiêu kim loại nặng Bảng 45 Kết phân tích hàm lượng cắn sau nung Pb (LOD=1) Hg (LOD=1) As (LOD=1) Cd (LOD=1) Kết luận Mẻ KPH KPH KPH KPH Đạt Mẻ KPH KPH KPH KPH Đạt Mẻ KPH KPH KPH KPH Đạt Bảng 46 Kết phân tích ẩm độ kim loại nặng Anastrozole TT Chỉ tiêu phân tích Đơn vị Kết 0,21 Độ ẩm % As ppm Hg ppm Pb ppm Cd ppm Ghi chú: Phương pháp phân tích KPH (LOD=0,005) KPH (LOD=0,0005) KPH (LOD=0,005) KPH (LOD=0,002) Quang phổ hấp thu nguyên tử (AAS) KPH: Không phát LOD: Giới hạn phát 3.4.2.4 Tạp chất liên quan Tổng tạp chất tương cận sản phẩm Anastrozole không phát Nguyên liệu đủ chuẩn làm dược chất Bảng 47 Phân tích tạp chất tương cận sản phẩm Anastrozole Tạp chất Thời gian lưu (min) Diện tích đỉnh Mẻ Mẻ Mẻ Iso Anastrozole 2.468 KPH KPH KPH Tạp chất vòng 16.5 KPH KPH KPH Ana-3 11.0 KPH KPH KPH 87 Ana-4 11.8 KPH KPH KPH Tạp chất khác KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH Tổng tạp chất Anastrole chuẩn tạp 2.131 40.15 Kết luận Đạt Đạt Đạt 3.4.2.5 Định lượng Bảng 48 Định lượng Anastrozole chế phẩm Mẻ Diện tích đỉnh mẫu thử Mẻ Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu 326 323 329 331 335 336 Diện tích đỉnh mẫu chuẩn 330.3 Hàm lượng nước Hàm lượng Anastrozole chế phẩm Mẻ 0.21 98.91 0.21 97.79 99.82 100.21 0.24 101.66 101.73 Hàm lượng trung bình 98.3 100.0 101.7 Kết luận Đạt Đạt Đạt 3.4.3 Xây dựng tiêu chuẩn sở  Định tính - Anastrozole tinh thể màu trắng đồng nhất, không mùi - Hàm lượng nước TB: 0.21-024% - Hàm lượng cắn sau nung TB: 0.018% - Độ ẩm sản phẩm TB: 0.21% - Tổng tạp chất: không phát - Khả tan dung môi: Tan tự acetone, ethanol, methanol, tan tốt acetonitril - Nhiệt độ nóng chảy 82-83oC, - Khơng phát kim loại nặng Pb, Cd, As, Hg - Độ phải đạt > 98% (HPLC) - Tiêu chuẩn phân tích cấu trúc: 88 Phổ IR ( max, cm-1): 3439, 3103, 3048, 2985, 2948, 2888, 2236, 1606, 1503,1474, 1427, 1391, 1359, 1273, 1204, 1138, 1013, 955, 926, 877, 763, 713, 680, 664, 632, 525, 488 Phổ 1H NMR (500MHz, CDCl3, δH ppm) δH 1.71 (s, 12H, CH3), 5.39 (2H, s, CH), 7.32 (2H, m, ArH), 7.52 (1H, m, ArH), 7.99 (1H, s, C2H2N3) and 8.18 (1H, s, C2H2N3) Phổ 13C NMR (125 MHz, CDCl3, δC ppm) δC 29.04 (CH3), 37.27 (C), 53.06 (CH2), 122.14 (CH), 123.77 (C), 124.29 (CH), 136.67 (C), 143.3 (C), 143.47 (CH) and 152.40 (CH) GC-MS: m/z 209 ((M )+, 100%) Khối phổ HRMS: ESI-MS (ES+) 294.1700 C17H20N5 requires 294.1713 Hình 57 Phổ IR Anastrozole 89 Hình 58 Phổ 13C NMR Anastrozole 90 Hình 59 Phổ 1H NMR Anastrozole Hình 60 Sắc ký đồ GC-MS 91 Hình 61 Khối phổ ESI-MS Anastrozole  Định lượng Độ tinh khiết sản phẩm (theo HPLC) Mẫu pha dung môi methanol để xác định độ tinh khiết máy HPLC Agilent Technologies 6120; cột C18 150mmx4.5mmx5.0mM Tiêm mẫu: 20 µL Tốc độ dịng: 1mL/phút Pha động dung dịch 2mmol/L amonium acetate acetonitrile/nước = 1/1 Dung môi pha mẫu: acetonitril/nước = 7/3 Nồng độ mẫu: 200 ppm Bước sóng phân tích 210 nm Cho thời gian lưu: Anastrozole: 5.777 đồng phân: 4.104 Độ tinh khiết > 98% đồng phân: < 2.0% 92 Hình 62 HPLC anastrozole 3.5 Bước đầu đánh giá hiệu kinh tế Nhằm làm rõ ý nghĩa đề tài, bước đầu đánh giá hiệu kinh tế việc sản xuất Anastrozole quy mô pilot tiến hành 93 STT Loại Anastrozole Giá nguyên vật liệu (VNĐ) Chi phí khác (VNĐ) Giá thành phẩm (VNĐ)/mg Giá thương mại (VNĐ)/mg Anastrozole Related Compound A code:1034818 - - - 229.950 (tại Việt Nam) Anastrozole code:1034807 - - - AnastrozoleTCR-Canada - - - AnastrozoleTrung Quốc - - - Chế phẩm Arimidex - - - (*) (*) Tác chất + Sản phẩm dung môi + xúc đề tài tác + hóa chất tinh chế = 2.037 điện-nước + nhân công + khấu hao thiết bị = 1.520 3.557 139.000 (tại Việt Nam) 16.000 (tại xứ) 9.000 (tại xứ) 77.500 (tại Việt Nam) - Nếu giảm trừ loại chi phí trình sản xuất kinh doanh, thấy, sản xuất nước giảm giá thành đáng kể cho loại thuốc điều trị ung thư vú này, góp phần giảm chi phí điều trị cho bệnh nhân Việt Nam lớn 94 IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Sau thời gian thực đề tài, nhóm nghiên cứu chúng tơi đạt kết sau: - Đã thực tiêu chuẩn kiểm nghiệm nguyên liệu Anastrozole theo USP 36 mẫu nguyên liệu đạt tiêu chuẩn đề - Đã tổng hợp 2,2'-(5-(bromomethyl)-1,3-phenylene)bis(2-methylpropanenitrile) với hiệu suất >90% - Đã khảo sát phản ứng thay đổi tác nhân brom hóa (KBrO3/NaHSO3 hiệu NBS), điều kiện siêu âm, vi sóng - Đã khảo sát thay đổi tỷ lệ tác chất phản ứng, nhiệt độ phản ứng, dung môi phản ứng (dung môi thích hợp dùng cho q trình Brom hóa EtOAc/H2O) - Đã xây dựng hệ thống phản ứng tổng hợp tiền chất quy mô lớn - Thiết kế hệ thống khung đỡ, bơm chân khơng, bình phản ứng - Thực phản ứng tổng hợp tiền chất - Lặp lại phản ứng điều kiện tối ưu (tỉ lệ Ana-3: KBrO3/ NaHSO3= 1:3; nhiệt độ phản ứng: 32-34oC; thời gian phản ứng: 180-190 phút) - Tinh chế xác định thành phần chất lượng sản phẩm HPLC - Đánh giá độ ổn định quy trình tổng hợp tinh chế sản phẩm trung gian + Tính tổng lượng tạp chất nguyên liệu đo nhiệt độ nóng chảy + Xác định lượng kim loại nặng (khơng phát Pb, Cd, As, Hg tiền chất tổng hợp) + Xác định cấu trúc độ tinh khiết nguyên liệu phổ nghiệm IR, NMR, HPLC, + Thử độ hịa tan dung mơi bản: methanol, ethanol, THF, acetonitril, tiền chất tan tốt MeOH, EtOH, EtOAc… - Đã thiết kế thiết bị phản ứng tổng hợp Anastrozole qui mô 100g/mẻ - Thực phản ứng tổng hợp Anastrozole từ Ana-4 - Đánh giá độ ổn định quy trình tổng hợp Anastrozole + Tính tổng lượng tạp chất sản phẩm đo nhiệt độ nóng chảy (82-83oC) + Xác định lượng kim loại nặng (không phát Pb, Cd, As, Hg tiền chất tổng hợp) 95 + Xác định cấu trúc độ tinh khiết sản phẩm phổ nghiệm IR, NMR, HPLC, + Thử độ tan dung môi bản: methanol, ethanol, THF, acetonitrile, - Đã xây dựng hệ thống thiết bị tinh chế Anastrozole - Đã kiểm định sản phẩm Anastrozole (kết phổ IR, HR-ESI-MS, 1H 13C NMR, HPLC…) - Đã xây dựng tiêu chuẩn sở Anastrozole + Tiêu chuẩn màu sắc, hình dạng, độ tan, độ tinh khiết (>98%) + Lập phổ phân tích cấu trúc đo HPLC với điều kiện dung môi thời gian lưu khác - Đã sản xuất thành công 0,1 kg tiền chất Ana-4 (lặp lại lần) - Đã sản xuất thành công 0,1 kg sản phẩm Anastrozole (lặp lại lần) 4.2 Đề nghị - Tiếp tục nâng cấp cỡ lô tổng hợp quy mô lớn - Tiếp tục theo dõi độ ổn định dài hạn sản phẩm điều kiện bảo quản - Sản xuất thc dạng bào chế thích hợp viên nén, viên nang, … - Dăng ký bảo hộ quyền chuyển giao công nghệ 96 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tuấn, T N V (2009) "Đánh giá kết điều trị hỗ trợ Anastrozole bệnh nhân ung thư vú giai đoạn II,III mãn kinh có thụ thể nội tiết dương tính.", Y học thực hành 664: Edwards, P N and M S Large (1990) (Substituted aralkyl) heterocyclic compounds, US patent 4935437 A Gaitonde, A., et al (2006) Process for the preparation of anastrozole, US Patent CA 2547979 A1 2010 Wohl-Ziegler Bromination Comprehensive Organic Name Reactions and Reagents 680:3067–3072 Pathi, S L., et al (2010) Process for the Preparation of Pure Anastrozole, US Patent 2010/0099887 A1 Reddy, Y R., et al (2009) "LC and LC-MS/MS study of forced decomposition behavior of anastrozole and establishment of validated stability-indicating analytical method for impurities estimation in low dose anastrozole tablets." J Pharm Biomed Anal 50(3): 397-404 Sitaram, C., et al (2011) "Determination and characterization of degradation products of anastrozole by LC-MS/MS and NMR spectroscopy." J Pharm Biomed Anal 56(5): 962-968 Kikuchi, D., et al (1998) "An Alternative Method for the Selective Bromination of Alkylbenzenes Using NaBrO3/NaHSO3 Reagent." The Journal of Organic Chemistry 63(17): 6023-6026 Raju, T., et al (2005) "A simple and regioselective α-bromination of alkyl aromatic compounds by two-phase electrolysis." Tetrahedron Letters 46(41): 7047-7050 10 Szirovicza, L and E Boga (1998) "The kinetics of the bromate-sulfite reaction system." International Journal of Chemical Kinetics 30(12): 869-874 11 Hsieh, H Y and C P Wei (2008) Process for Preparation of Anastrozole, US 2008/0177081 A1 12 Alnabari, M., et al (2006) Novel processes for preparing substantially pure anastrozole, US Patent 2006/0035950 A1 13 Hiriyanna, S G and K Basavaiah (2008) "Isolation and characterization of process related impurities in anastrozole active pharmaceutical ingredient." Journal of the Brazilian Chemical Society 19(3): 397-404 97