Nghiên cứu hoàn thiện quy trình sản xuất hạt nano và micro chitosan và ứng dụng thử nghiệm làm tá chất cho vaccine cúm a h5n1

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN BÁO CÁO NGHIỆM THU NGHIÊN CỨU HOÀN THIỆN QUI TRÌNH SẢN XUẤT HẠT NANO VÀ MICRO CHITOSAN VÀ ỨNG DỤNG THỬ NGHIỆM LÀM TÁ CHẤT CHO VACCINE CÚM A/H5N1 CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: NGUYỄN ANH DŨNG CAO THỊ BẢO VÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 07/ 2017 ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN BÁO CÁO NGHIỆM THU NGHIÊN CỨU HOÀN THIỆN QUI TRÌNH SẢN XUẤT HẠT NANO VÀ MICRO CHITOSAN VÀ ỨNG DỤNG THỬ NGHIỆM LÀM TÁ CHẤT CHO VACCINE CÚM A/H5N1 CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI PGS.TS Nguyễn Anh Dũng CƠ QUAN QUẢN LÝ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) PGS.TS Cao Thị Bảo Vân CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 07/ 2017 TĨM TẮT Chitosan biopolymer có nguồn gốc tự nhiên, không độc, ứng dụng nhiều lĩnh vực y sinh học Đặc biệt lĩnh vực làm tá chất cho vaccine, chitosan có hiệu cảm ứng đặc hiệu kháng nguyên, kích thích miễn dịch tế bào Trước tình hình dịch cúm A/H5N1 cịn tiềm ẩn nhiều nguy cơ, kháng nguyên cúm A/H5N1 kích thích đáp ứng miễn dịch thấp động vật, nghiên cứu sử dụng hạt nano chitosan làm tá chất cho vaccin cúm A/H5N1 nghiên cứu cần thiết, có tính khoa học thực tiễn cao Từ thực tiễn đó, chúng tơi đề xuất đề tài: “Nghiên cứu hồn thiện quy trình sản xuất hạt nano micro chitosan ứng dụng thử nghiệm làm tá cahats cho vắc xin cúm A/H5N1” Nghiên cứu đạt kết sau Nghiên cứu thành công chế tạo hạt nano micro chitosan hai phương pháp: Tạo gel ion kết hợp sấy phun phương pháp sấy phun trực tiếp Qui trình gel ion kết hợp sấy phun: Nồng độ chitosan 0,1%; Khối lượng phân tử chitosan từ 130-1200 cps; tỷ lệ chitosan/TPP 6:1; Nồng độ TPP 0,25%; pH dung dịch chitosan 5,5; khuấy 900 vòng phút 60 phút; ly tâm 5000 vòng phút thu dịch sấy phun đầu phun từ 4,0 đến 7,0 micromet; tốc độ dòng 120 mL/h; nhiệt độ dầu vào 1200C, nhiệt độ dầu 80oC; áp suất nén 1,2 m3/phút Hạt nano chitosan có kích thước trung bình từ 278 -1020 nm, điện hạt đạt từ +45 mV đến +50 mV Hạt có hình dạng, cấu trúc ổn định Kích thước hạt, điện hạt phụ thuộc vào pH, tỷ lệ chitosan/TPP, thời gian tạo hạt điều kiện sấy phun Qui trình sấy phun trực tiếp: Nồng độ dung dịch chitosan đầu vào 0,025 đến 0,10%; KLPT chitosan từ 130-1200 cps; kích thước đầu phun 4,0 đến 7,0 micromet; tốc độ dòng 120 mL/h; nhiệt độ dầu vào 1200C, nhiệt độ dầu 80oC; áp suất nén 1,2 m3/phút Hạt nano micro chitosan có hình dạng trịn cầu, cấu trúc ổn định, đồng Kích thước hạt từ 95 – 335 nm, điện tích hạt khoảng cao + 40 đến +45 mV Kích thước điện tích hạt phụ thuộc vào nồng độ chitosan, khối lượng phân tử chitosan kích thước đầu phun Hạt micro chitosan có kích thước từ 1-5 µm, hình dạng trịn, cầu, đồng đều, hạt có cấu trúc ổn định, điện hạt + 30 mV điều kiện kích thước đầu phun 7,0 micromet, KLPT chitosan 1200 cps nồng độ chitosan đầu vào 0,1% Hiệu suất thu hồi hạt nano micro chitosan từ 60-62% Các đặc điểm tính i chất hạt nano micro chitosan đạt tiêu chuẩn, chất lượng theo yêu cầu sản phẩm đề tài Hồn thành quy trình sản xuất kháng ngun vi rút cúm A/H5N1 (chủng giảm độc lực NIBRG-14) tế bào Vero Kháng nguyên tinh chế đạt tiêu chí bất hoạt, tính vơ trùng (khơng có vi khuẩn, nấm, Mycoplasma hay tác nhân ngoại lai), nội độc tố, formaldehyde tồn dư, ADN tồn dư, độ pH protein tổng số đạt yêu cầu theo Dược điển Châu Âu Việt Nam IV, 2008 Kháng nguyên virus cúm A/H5N1 sau tinh chế phối trộn với hạt chitosan kích thước khác (95% Hiệu gây đáp ứng miễn dịch hạt nano chitosan kích thước