Khảo sát và nghiên cứu tạo chế phẩm vi sinh dạng viên xử lý ao nuôi cá tra quy mô công nghiệp

Ủy ban Nhân dân TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ Viện Nghiên cứu NTTS II TRUNG TÂM CÔNG NGHỆ SAU THU HOẠCH BAÙO CAÙO NGHIỆM THU (ðã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu ngày 24 tháng 09 năm 2010) Tên Đề tài: KHẢO SÁT VÀ NGHIÊN CỨU TẠO CHẾ PHẨM VI SINH DẠNG VIÊN XỬ LÝ AO NUÔI CÁ TRA QUI MÔ CÔNG NGHIỆP Chủ nhiệm Đề tài: ThS NGUYỄN VĂN NGUYỆN Tp.HCM, Tháng 12 naêm 2010 MỤC LỤC Trang Mục lục………………………………………………………………………………… i Danh mục bảng………………………………………………………………………iv Danh mục hình đồ thị…………………………………………………………… vi Danh mục chữ viết tắt……………………………………………………………… vii Mở ñầu…………………………………….…………………………………………… 01 Chương ðIỀU TRA, KHẢO SÁT CHẾ PHẨM VI SINH DẠNG VIÊN, LỰA CHỌN CHỦNG VI SINH VẬT VÀ XÂY DỰNG QUI TRÌNH THU NHẬN SINH KHỐI VI SINH VẬT XỬ LÝ NƯỚC AO NUÔI CÁ TRA………………………….……………………………… … 04 1.1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.1 1.1.2 1.1.2.1 1.1.2.2 1.2 1.2.1 1.2.2 1.2.2.1 Vai trò vi sinh vật xử lý nước ao nuôi thủy sản [23, 39, 45, 48, 53] 04 Chế phẩm sinh học xử lý nước ao ni thuỷ sản…………… …… 07 Vai trị chế phẩm sinh học [47] [50]………………………… ……… 07 Các loại vi khuẩn chế phẩm sinh học ñặc ñiểm chúng [26, 47, 48, 53, 55]…………………………………………….…… … … 08 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU……………… ……………… 10 Vật liệu thiết bị nghiên cứu……………………………………… …… 10 Phương pháp nghiên cứu……………………… ………………………… 11 ðiều tra, khảo sát số loại chế phẩm vi sinh dạng viên, bột dùng xử lý nước ao nuôi cá tra…………………………………… …………… … 11 1.2.2.2 Các phương pháp phân tích, xác định tế bào VSV……………….……….… 11 1.2.2.3 Lựa chọn môi trường nuôi cấy giống…………………………………… ….11 1.2.2.4 Ảnh hưởng nhiệt ñộ lên sinh trưởng, phát triển vsv……….….… 11 1.2.2.5 Ảnh hưởng pH lên sinh trưởng phát triển vi sinh vật……… 12 1.2.2.6 Lựa chọn môi trường nuôi cấy cấp 1……………………………………… 12 1.2.2.7 Ảnh hưởng nguồn cacbon lên sinh trưởng phát triển vsv…… 12 1.2.2.8 Ảnh hưởng nguồn nitơ lên sinh trưởng phát triển vsv……… 13 1.2.2.9 Ảnh hưởng nồng ñộ muối lên sinh trưởng phát triển B Subtilis……………………………… …………………… … 13 1.2.2.10 Nghiên cứu thời gian thu nhận sinh khối chủng Bacillus spp……… … … 14 1.2.2.11 Nghiên cứu khả tạo bào tử chủng Bacillus…………………….… 14 1.2.2.12 Nghiên cứu thu nhận sinh khối vi sinh vật….……………………………… 15 1.3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN…………………………………… 16 1.3.1 ðiều tra, khảo sát số dạng chế phẩm sinh học dạng bột, dạng viên thị trường………………………………………………….…………………… 17 1.3.2 Nuôi cấy thu nhận sinh khối vi sinh vật…………………………….……… 19 1.3.2.1 Lựa chọn môi trường nuôi cấy tăng sinh…………………………………… 19 1.3.2.2 Ảnh hưởng nhiệt ñộ lên sinh trưởng phát triển Bacillus………20 1.3.2.3 Ảnh hưởng pH lên sinh trưởng phát triển Bacillus………… 21 i 1.3.2.4 Lựa chọn môi trường nuôi cấy cấp 1……………………………… …… 22 1.3.2.5 Lựa chọn môi trường nuôi cấy thay …………………………………… 22 1.3.2.5.1 Khảo sát, lựa chọn nguồn cacbon thích hợp mơi trường nuôi cấy Bacillus……………………………………………………………………… 22 1.3.2.5.2 Khảo sát, lựa chọn nguồn nitơ lên sinh trưởng phát triển Bacillus ………………………………………………………………………………………… 23 1.3.2.5.3 Ảnh hưởng hàm lượng muối lên sinh trưởng phát triển Bacillus……………………………………………………………… ………… 24 1.3.2.6 Xác ñịnh thời gian thu nhận sinh khối chủng Bacillus………………… 26 1.3.2.7 Khả tạo bào tử chủng Bacillus………………….………………… 26 1.3.2.8 Xây dựng qui trình thu nhận sinh khối Bacillus………….………………… 27 1.4 KẾT LUẬN…………………………………………………………………….28 Chương NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUI TRÌNH CƠNG NGHỆ TẠO VIÊN CHẾ PHẨM 29 2.1 TỔNG QUAN………………………………………………………………………29 2.1.1 2.1.2 2.1.3 Phân loại chế phẩm sinh học nuôi trồng thuỷ sản [48, 53]……… … 29 Một số ưu ñiểm chế phẩm dạng viên…………………………………… 30 Nguyên liệu sử dụng sản xuất chế phẩm sinh học dạng viên [29, 30, 35, 37]……………………………………………………………… 31 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU……………………….……… 33 Vật liệu nghiên cứu………………………………………………………… 33 Phương pháp phân tích hóa lý viên chế phẩm……………………………… 33 Khảo sát chất độn xây dựng qui trình tạo viên chế phẩm…… ………… 34 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 Nghiên cứu xác ñịnh chất ñộn vsv dùng ñể tạo viên 34 Thành phần hóa học số chất ñộn 34 Xác ñịnh loại nguyên liệu làm chất ñộn vi sinh vật 35 Khảo sát tỉ lệ phối trộn chất ñộn…………………………………………… 37 Khảo sát thành phần vi sinh vật chất ñộn……………… ………… 38 Thành phần vi sinh vật hỗn hợp chất ñộn khử trùng….……………… 38 Khảo sát tỉ lệ phối trộn sinh khối vi sinh vật với hỗn hợp chất ñộn…… 39 Khảo sát tỉ lệ phối trộn chất phụ gia………………………………………… 40 Xác ñịnh cấp ñộ nén viên chế phẩm………………………………………… 40 Qui trình sản xuất viên chế phẩm sinh học………………………………… 41 Xác ñịnh đặc tính lý, hóa vi sinh viên chế phẩm……….……… 42 Khảo sát nồng ñộ vi sinh vật theo thời gian lưu trữ……………… ……… 43 Qui trình cơng nghệ sản xuất viên chế phẩm sinh học…………… ……… 43 2.2 2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.3 2.3.1 2.3.1.1 2.3.1.2 2.3.1.3 2.3.2 2.3.3 2.3.4 2.3.5 2.3.6 2.3.7 2.3.8 2.3.9 2.3.10 2.4 KẾT LUẬN…………………………………………………………… ………… 46 Chương ðÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CHẾ PHẨM VI SINH DẠNG VIÊN……………………… 47 ii 3.1 3.1.1 3.1.2 3.1.3 3.2 3.2.1 3.2.2 3.2.3 3.2.4 3.3 3.3.1 3.3.1.1 3.3.1.2 3.3.2 TỔNG QUAN …………………………………………………………………… 47 Ô nhiễm từ hoạt ñộng nuôi cá tra ao……………………………….…… 47 Thực trạng môi trường từ hoạt động ni cá tra………………….……… 48 Các giải pháp xử lý môi trường nước nuôi………………………………… 50 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU………….……………… … 52 Phương pháp ño tiêu thủy hóa…………………………….………… 52 Khảo sát ảnh hưởng viên chế phẩm ñến nồng ñộ Bacillus ñặc tính thủy hóa nước qui mơ phịng thí nghiệm………………….…… 53 Ni in vivo đánh giá hiệu chế phẩm…………………… …………… 54 ðánh giá hiệu chế phẩm thông qua nuôi thử nghiệm ao nuôi… 56 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN……………………………………………… 59 Khảo sát ảnh hưởng viên chế phẩm ñến nồng ñộ Bacillus ñặc tính thủy hóa nước qui mơ phịng thí nghiệm……………………………….……59 Kết đo tiêu thủy lý, hóa…………………………………… … 59 Kết khảo sát mật ñộ Bacillus bể kính theo thời gian………… … 61 Ni in vivo ñánh giá hiệu chế phẩm……………… ………………… 63 3.3.2.1 3.3.2.2 3.3.3 Các tiêu thủy hóa……………………………………………… ……… 63 Các tiêu kỹ thuật nuôi bản…………………………………………… 67 ðánh giá hiệu chế phẩm thông qua thử nghiệm ao nuôi qui mô công nghiệp………………………………………………….…………………… 68 3.3.3.1 Hiệu sử dụng chế phẩm dạng viên mơi trường ao ni…… … 68 3.3.3.2 Hiệu sử dụng chế phẩm dạng viên ñến tiêu kỹ thuật tăng trưởng, tỷ lệ sống, FCR ……………….……………………………… 72 3.3.3.3 Qui trình sử dụng chế phẩm sinh học dạng viên nuôi cá tra qui mô công nghiệp………………………………………….……….………… 73 3.4 KẾT LUẬN………………………………………………….………… …… 74 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ……………………………………………………… ……75 KẾT LUẬN…………………………………………………………….……………… 75 KIẾN NGHỊ…………………………………………………………………………… 76 TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………….………………………… 77 PHỤ LỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Bảng 1.2 Khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon ñến sinh trưởng phát triển Bacillus spp 11 Khảo sát ảnh hưởng nguồn nitơ ñến sinh trưởng phát triển Bacillus spp 12 Bảng 1.3 Khảo sát ảnh hưởng nồng ñộ muối ñến sinh trưởng phát triển Bảng 1.4 Bảng 1.5 B Subtilis 13 Xác ñịnh thời gian thu nhận sinh khối chủng Bacillus spp 13 Các loại chế phẩm vi sinh dùng nuôi cá tra 15 Bảng 1.6 Chỉ tiêu chất lượng số viên chế phẩm vi sinh dạng viên 16 Bảng 1.7 Thành phần môi trường thay nuôi cấy Bacillus subtilis 24 Bảng 1.8 Thành phần môi trường thay nuôi cấy Bacillus licheniformis 24 Bảng 1.9 Bảng 1.10 Bảng 2.1 Thành phần môi trường thay nuôi cấy Bacillus megaterium 24 Kết tạo bào tử chủng Bacillus 25 Thành phần hóa học nguyên liệu 34 Bảng 2.2 Bảng 2.3 Bảng 2.4 Ảnh hưởng loại ngun liệu đến đặc tính vật lý viên chế phẩm35 Tỉ lệ phối trộn bột gạo, bột khoai mì khơ dầu đậu nành 36 Kết tổng số vi khuẩn hiếu khí nguyên liệu tạo viên nén 37 Bảng 2.5 Bảng 2.6 Bảng 2.7 Bảng 2.8 Bảng 2.9 Bảng 2.10 Bảng 2.11 Tổng số vi khuẩn hiếu khí hỗn hợp chất ñộn 37 Thành phần vi khuẩn hiếu khí chất độn ñã khử trùng 37 Ảnh hưởng ñộ ẩm hỗn hợp (sinh khối hổn hợp chất ñộn) ñến nồng ñộ VSV ñặc tính vật lý viên chế phẩm 38 Xác ñịnh tỉ lệ chất tinh bột sắn tạo viên chế phẩm 39 Ảnh hưởng cấp ñộ nén viên ñến ñặc tính vật lý viên chế phẩm 40 Các tiêu viên nén chế phẩm sinh học (Ricotab) 41 Kết phân tích vi sinh vật viên nén theo thời gian lưu trữ 42 Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.5: Tổng hợp tính chất nước ao nuôi cá Tra 48 Ước lượng chất thải phát sinh từ nuôi cá tra 48 Các tiêu phân tích thời gian phân tích 53 Loại thức ăn giai ñoạn phát triển cá 56 Số liệu tổng hợp kết tiêu mơi trường sau 15 ngày thí nghiệm 60 iv Bảng 3.6 Bảng 3.7 Bảng 3.8 Bảng 3.9 Bảng 3.10 Bảng 3.11 Bảng 3.12 Số liệu pH bể nuôi cá tra 62 Kết so sánh tiêu mơi trường lơ thí nghiệm nghiên cứu in vivo tính đến ngày thứ 56 62 Kết so sánh tỷ lệ sống (TLS, %) lơ thí nghiệm 66 So sánh thông số môi trường nghiệm thức ni đối chứng 68 Chi phí sử dụng chế phẩm RICOTAB ECOMARINE 70 Kết theo dõi tỷ lệ sống, tăng trưởng FCR lơ thí nghiệm 71 So sánh kết tổng hợp qua ñợt thí nghiệm 71 v DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ ðỒ THỊ Trang Sơ đồ chuyển hóa oxy, cacbon oxide dưỡng chất lồi vi sinh vật ao ni 06 Hình 1.2 Sơ ñồ qui trình thu nhận sinh khối 14 Hình 1.3 Sơ đồ qui trình thu nhận sinh khối chủng Bacillus 26 Hình 2.1 Sơ đồ thí nghiệm q trình tạo viên 33 Hình 2.2 Sơ đồ quy trình sản xuất viên chế phẩm 40 Hình 3.1 Sơ đồ bố trí bể ni 52 Hình 3.2 Sơ đồ qui trình sử dụng viên chế phẩm 72 ðồ thị 1.1 Lựa chọn môi trường nuôi cấy cho ba chủng Bacillus 19 ðồ thị 1.2 Ảnh hưởng nhiệt ñộ ñến khả sinh trưởng Bacillus 20 ðồ thị 1.3 Ảnh hưởng pH ñến khả sinh trưởng Bacillus 20 ðồ thị 1.4 Ảnh hưởng nguồn cacbon ñến sinh trưởng chủng Bacillus 21 ðồ thị 1.5 Ảnh hưởng nguồn nitơ ñến tốc ñộ sinh trưởng phát triển chủng Bacillus 22 ðồ thị 1.6 Ảnh hưởng NaCl lên sinh trưởng phát triển Bacillus subtilis 23 ðồ thị 1.7 ðồ thị ảnh hưởng thời gian ñến tốc ñộ sinh trưởng chủng Bacillus 25 ðồ thị 3.1 ðồ thị thể hàm lượng DO bể 58 ðồ thị 3.2 ðồ thị biểu kết ño NH3-N NO2 59 ðồ thị 3.3 ðồ thị biểu kết ño BOD5 COD 59 ðồ thị 3.4 Thay ñổi nồng ñộ vsv theo thời gian 61 ðồ thị 3.5 Kết BOD5 COD bể đối chứng khơng sử dụng chế phẩm 64 ðồ thị 3.6 Kết ño hàm lượng BOD COD bể ñối chứng sử dụng ECOMARINE 64 ðồ thị 3.7 Hàm lượng BOD COD NT1, NT2 NT3 65 ðồ thị 3.8 ðồ thị so sánh ñối chứng nghiệm thức 66 ðồ thị 3.9 ðồ thị so sánh số NH3-N nghiệm thức ni đối chứng 68 ðồ thị 3.10 ðồ thị so sánh số H2S nghiệm thức ni đối chứng 69 ðồ thị 3.11 ðồ thị so sánh số COD nghiệm thức ni đối chứng 69 ðồ thị 3.12 ðồ thị so sánh số BOD5 nghiệm thức ni đối chứng 70 Hình 1.1 vi CÁC CHỮ VIẾT TẮT TSB : Tripticase Soy Broth TCS : Triptycase Casein Soy TSA : Tripticase Soy agar LB : Luria – Bertani T-N : Total nitrogen TOC : Total Organic Cacbon DOC : Dissolve Organic Cacbon BOD : Biochemical Oxygen Demand COD : Chemical Oxygen Demand VSV : Vi Sinh Vật TSS : Total Suspended Solids OD : Optical Density CFU: Colony Forming Units NT: Nghiệm thức thí nghiệm DC: Mẫu đối chứng vii MỞ ðẦU Nghề ni cá tra phát triển mạnh mẽ năm qua ñối tượng thủy sản chủ lực với sản lượng xuất liên tục tăng từ khoảng 400.000 (2005) triệu năm 2009 (VASEP, 2010) Bên cạnh điểm tích cực mang lại từ xuất khẩu, phát triển nghề nuôi cá tra ñồng Nam Bộ ñã bộc lộ nhiều thách thức ñối với việc phát triển theo hướng hiệu bền vững Trong đó, nhiễm mơi trường, nguồn nước ni vấn đề thời ñang ñược nhiều ban, ngành liên quan ñặc biệt ý ðây xem tác nhân gây dịch bệnh (phát sáng, gan thận mủ, ñỏ thân, v.v ) có nguy lan rộng gây nhiều thiệt hại, ảnh hưởng nghiêm trọng ñến hiệu ni tốc độ tăng trọng, tỉ lệ sống thấp hệ số chuyển ñổi thức ăn (FCR) cao Mặt khác việc nhiễm nước ao ni cịn tác động ñến chất lượng thịt cá (mỡ, tỉ lệ thịt trắng cá, v.v ) nguyên nhân gây khó khăn giá chấp nhận thị trường tiêu thụ ðối với nghề nuôi cá tra, vấn ñề xử lý môi trường nước ao nuôi cá tra yếu tố then chốt xác định phương pháp xử lý chất lượng nước ao nuôi cá có vai trị định đến hiệu ni Một phương án tiếp cận giải vấn ñề ô nhiễm nguồn nước nuôi ứng dụng công nghệ sinh học xử lý nguồn nước ni đem lại thành ñáng kể trở thành hướng ñược lựa chọn ưu tiên hữu hiệu đặc tính ưu việt mà phương pháp ñem lại Việc ứng dụng vi sinh vật (VSV) enzym chúng để xử lý ao ni xem trình phân hủy sinh học, giúp xử lý làm giảm tích lũy bùn chất hữu đáy ao ni, giảm thiểu chất ñộc hại tăng cường oxi nước Các loại chế phẩm sinh học ñang ñược sử dụng phổ biến xử lý ao nuôi cá tra thường dạng bột dạng lỏng dễ sản xuất, giá thành thấp Chế phẩm sinh học dạng viên ñã ñang ngày ñược ưa chuộng ñược sử dụng rộng rãi xử lý ao nuôi tôm, cá trại sản xuất giống, trại nuôi cá kiểng số ưu ñiểm dạng so với dạng lỏng bột như: tiện lợi, dễ sử dụng, nồng ñộ VSV cao, chuyển VSV xuống đáy ao ni, đặc biệt ao ni có ñộ sâu mực nước cao (3 – 4m) Hiện nay, việc xử lý môi trường ao nuôi cá tra thực tế vấn ñề phức tạp lượng chất thải từ hoạt động ni cá lớn Nhiều ñề tài, dự án ñã ñang tập trung vào vấn ñề theo nhiều hướng tiếp cận khác Trong phạm vi nghiên cứu ñề tài, tiếp cận việc xử lý môi trường ao ni cá tra theo hướng góp phần nâng cao hiệu nuôi cá tra môi trường nuôi bền vững Thơng tin đề tài: - Tên đề tài: Khảo sát nghiên cứu tạo chế phẩm vi sinh dạng viên xử lý ao nuôi cá Tra qui mô công nghiệp - Chủ nhiệm ñề tài: ThS.Nguyễn Văn Nguyện - Cơ quan chủ trì: Trung Tâm Cơng Nghệ Sau Thu Hoạch - Thời gian thực hiện: từ tháng 10/2007 ñến tháng 04/2010 - Kinh phí duyệt: 500 triệu đồng Mục tiêu đề tài: a Xây dựng qui trình cơng nghệ tạo chế phẩm vi sinh dạng viên có tác dụng xử lý nước ao nuôi cá Tra b Xây dựng qui trình sử dụng chế phẩm vi sinh dạng viên để xử lý ao ni cá Tra giảm thiểu ô nhiễm chất thải Nội dung nghiên cứu ðể ñạt ñược mục tiêu trên, nội dung chủ yếu ñề tài ñược thực sau: ðiều tra, khảo sát số loại chế phẩm vi sinh dạng viên, bột dùng xử lý ao nuôi cá thị trường làm sở cho việc nghiên cứu tạo chế phẩm vi sinh dạng viên Lựa chọn, xác định chủng VSV có khả thích nghi xử lý nước ao nuôi cá Tra Xây dựng qui trình ni cấy tạo sinh khối xử lý ñể thu chế phẩm Xác ñịnh phụ gia tạo viên chế phẩm xây dựng qui trình công nghệ tạo viên chế phẩm ðánh giá khả xử lý nước ao nuôi cá Tra chế phẩm nghiên cứu thơng qua mơ hình ni qui mơ phịng thí nghiệm Khảo nghiệm, đánh giá hiệu chế phẩm thông qua nuôi thử nghiệm ao nuôi cá Tra cơng nghiệp Ngày đo Bể B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8 B9 B10 B11 B12 B13 B14 B15 6h 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 14h 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 6h 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 14h 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 6h 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 14h 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 6h 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 14h 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 6h 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 14h 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 6h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 14h 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 6h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 14h 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 6h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 14h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 6h 25.5 25.5 25.5 25.5 25.5 25.5 25.5 25.5 25.5 25.5 25.5 25.5 25.5 25.5 25.5 6h 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 14h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 6h 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 14h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 6h 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 14h 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 6h 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 14h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 6h 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 14h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 6h 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 18 14h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 20 6h 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 10 11 12 13 14 16 17 14h 14h 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 6h 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 14h 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 6h 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 14h 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 6h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 14h 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 6h 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 14h 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 6h 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 14h 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 6h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 14h 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 6h 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 14h 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 6h 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 14h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 6h 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 14h 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 6h 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 14h 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 6h 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 14h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 6h 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 14h 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 6h 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 14h 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 6h 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 14h 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 28.0 6h 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 40 14h 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 41 6h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 21 22 24 25 26 28 29 30 32 33 34 36 37 38 42 44 45 46 48 49 50 52 53 54 56 57 58 59 14h 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 6h 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 14h 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 30.0 6h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 14h 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 6h 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 14h 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 6h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 14h 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 6h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 14h 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 6h 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 26.5 14h 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 6h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 14h 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 6h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 14h 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 6h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 14h 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 6h 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 14h 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 6h 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 14h 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 29.5 6h 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 14h 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 6h 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 27.0 14h 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 29.0 6h 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 27.5 14h 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 28.5 10 Bảng 2.4 Số liệu tổng hợp nuôi in vivo N.T Ky hieu be SL tha (con) TL-tha (g) SLthu (con) TL-thu (g) TLtang (g) TLsong (%) TA-su dung (g) FCR TL.TBthu (g/con) TL.TBtha (g/con) DC_0 B1 25 829 18 895 298.1 72 1505.0 5.0 49.7 DC_0 B2 25 886 15 768 236.4 60 1602.7 6.8 51.2 DC_0 B3 25 889 21 1015 268.2 84 1674.6 6.2 DC_1 B4 25 823 23 1186 428.8 92 1347.7 DC_1 B5 25 846 20 1006 329.2 80 1183.0 DC_1 B6 25 868 19 1021 361.3 76 1264.1 NT_1 B7 25 798 25 1443 645.0 100 1583.7 2.5 57.7 NT_1 B8 25 820 23 1292 537.6 92 1534.6 2.9 56.2 NT_1 B9 25 855 23 1223 436.4 92 979.0 2.2 53.2 34.2 NT_2 B10 25 828 25 1396 568.0 100 1644.2 2.9 55.8 NT_2 B11 25 815 23 1191 441.2 92 1454.2 3.3 51.8 NT_2 B12 25 816 24 1593 809.6 96 1807.6 2.2 66.4 NT_3 B13 25 812 25 1514 702.0 100 1963.9 2.8 NT_3 B14 25 817 25 1438 621.0 100 1473.3 2.4 NT_3 B15 25 880 24 1240 395.2 96 1514.4 3.8 NH3 (g/ml) NO2 (g/ml) 33.2 0.88 0.07 6.5 35.4 0.47 0.09 6.6 48.3 35.6 0.59 0.08 6.5 3.1 51.6 32.9 0.49 0.06 6.9 3.6 50.3 33.8 0.27 0.06 7.0 3.5 53.7 34.7 0.33 0.06 6.9 31.9 0.12 0.05 6.8 32.8 0.39 0.04 7.0 0.13 0.05 6.9 33.1 0.10 0.03 6.9 32.6 0.09 0.03 6.8 32.6 0.10 0.03 6.9 60.6 32.5 0.10 0.02 6.9 57.5 32.7 0.32 0.03 7.0 51.7 35.2 0.07 0.02 7.0 Kết nuôi thử nghiệm 3.1 Kết thủy hóa Nhiệt độ pH DO Tháng A1 A2 A3 A4 A1 A2 A3 A4 A1 A2 A3 A4 10 11 12 Jan-10 Feb-10 TB 31.8 31.2 32 31.9 7.8 7.98 8.07 8.16 5.57 5.72 5.49 5.64 30.7 30.7 30.7 30.7 7.28 7.37 7.24 7.43 5.85 5.74 4.68 4.76 30 30 30 30 7.68 7.43 7.62 7.52 6.23 5.82 5.53 5.2 30 30.5 31.3 31 7.48 7.18 7.6 7.42 5.78 5.7 4.47 4.72 30 31 30 31 7.68 7.56 7.66 7.63 4.71 4.6 4.86 4.59 30.2 30.2 29.5 29.7 7.53 7.52 7.64 7.49 5.14 5.69 5.22 5.09 29.2 29.2 29.2 29.2 7.71 7.62 7.63 7.38 3.89 3.99 3.65 3.81 29 29 29 28.5 7.61 7.53 7.67 7.58 4.4 4.31 4.27 4.46 30.11 30.23 30.22 30.7 7.6 7.52 7.64 7.58 5.19 5.2 4.77 4.78 11 pH Tháng A1 COD (mg/l) A2 A3 10 11 12 Jan-10 Feb-10 6.68 6.90 6.81 6.46 3.62 3.79 3.48 3.13 7.49 7.07 7.31 7.06 4.05 3.92 3.79 3.56 7.84 7.50 8.05 7.81 4.29 4.25 4.18 4.09 8.17 8.27 8.49 8.28 4.72 4.57 4.34 4.52 8.71 8.70 8.91 8.98 4.49 5.05 4.60 4.88 8.90 9.35 9.86 9.17 4.98 6.25 4.69 4.80 9.04 10.02 10.05 9.47 5.04 5.14 5.03 4.90 9.49 10.24 10.01 9.77 5.25 5.62 5.27 5.05 A4 A1 H2S(mg/l) A2 A3 A4 NH3-N (mg/l) A2 A3 A4 A1 BOD (mg/l) A2 A3 A4 Tháng A1 10 11 12 Jan-10 Feb-10 0.082 0.076 0.075 0.068 0.02 0.04 0.03 0.04 0.365 0.39 0.424 0.452 0.13 0.14 0.19 0.2 0.477 0.46 0.495 0.515 0.16 0.17 0.22 0.22 0.525 0.513 0.557 0.573 0.13 0.16 0.25 0.23 0.604 0.59 0.656 0.686 0.18 0.175 0.28 0.29 0.641 0.656 0.793 0.815 0.16 0.21 0.33 0.31 0.713 0.686 0.879 0.911 0.2 0.23 0.37 0.36 0.742 0.686 0.867 0.952 0.22 0.19 0.36 0.37 3.2 Lượng thứcc ăn sử dụng nuôi thử nghiệm THÁNG 7th/2009 8th/2009 9th/2009 10th/2009 11th/2009 12th/2009 1st/2010 2nd/2010 3.3 A1 217 7458 14753 23959 30516 37653 50409 33455 A2 187 6698 14163 24694 30148 36429 50157 32250 A3 179 6264 13987 22130 28202 32292 45368 27060 A4 171 5636 12744 18936 24313 28736 40046 24611 TỔNG CỘNG 754.72 26056.35 55647.36 89718.88 113178.7 135110.5 185979.5 117375.7 Bảng tổng hợp 12 Ký hiệu ao DIỆN TÍCH (m2) ðỘ SÂU (m) THỂ TÍCH (m3) MẬT ðỘ (CON/m3) Số cá thả (con) TL TB Thả (g/con) Số cá thu (con) A1 3100 3.5 10850 15 160000 35 152000 A2 3000 3.5 10500 15 155000 35 144925 A3 2800 3.5 9800 15 145000 35 127600 A4 2600 3.5 9100 15 136000 35 111520 Ký hiệu ao TL TB thu (g/con) TL cá thu (Kg) Tỷ lệ sống (%) A1 875 133000 95 A2 880 127534 A3 864 A4 845 tăng trưởng TA sử dụng (g) FCR 840 198420 1.49 93.5 845 194726 1.53 110246 88 829 175481 1.59 94234 82 810 155193 1.65 g/con 13 QUI TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM DẠNG VIÊN NÉN Nguyên liệu (Bột gạo, bột khoai mì, bã dậu nành B-6 Nghiền mịn B-7 Chủng Bacillus B-1 Hoạt hóa giống B-2 Nhân giống cấp B-3 Phối trộn hỗn hợp chất ñộn B-8 Ni cấy sinh khối thíêt bị lên men B-4 Sấy lần B-9 B-5 Hỗn hợp chất ñộn ñã ñược khử trùng Thu nhận sinh khối chủng Bacillus B-10 Phối trộn lần Sấy lần B-11 Sấy lần B-12 Nén viên B-14 Viên chế phẩm Ricotab B-13 B-15 B-16 ðóng gói sản phẩm Bảo quản Thuyết minh quy trình cơng nghệ thu nhận sinh khối chủng Bacillus:
Bước (B-1) Các chủng Bacillus: bao gồm B.subtilis, B.licheniformis, B.megaterium lấy từ phịng thí nghiệm vi sinh thuộc Viện sinh học nhiệt ñới TP HCM Các chủng vsv bảo quản mơi trường thạch nghiêng tủ lạnh nhiệt ñộ 50C
Bước (B-2) Hoạt hóa giống : Ni chủng vi khuẩn Bacillus môi trường TCS (Bacillus subtilis) TSB (B.licheniformis B.megaterium) 300C, tốc ñộ lắc 120v/ph 24h
Bước (B-3) Nuôi cấy cấp 1: Nuôi chủng Bacillus subtilis môi trường TCS TSB (B.lichenformis B.megaterium) 300C, 24h, tốc ñộ lắc 120v/ph Sau 24h ni cấy nồng độ tế bào đạt tương ứng 5,5x1010 (CFU/ml), 2,0x108 (CFU/ml) 1,0x108 (CFU/ml)
Bước (B-4) Nuôi cấy thiết bị lên men: Sau chuẩn bị giống mơi trường đầy đủ, chuyển tất vào thiết bị lên men Các chủng Bacillus ni liên tục 48 mơi trường có thành phần dinh dưỡng thích hợp (bảng 3) ðiều kiện lên men: 300C, tốc ñộ khuấy 120v/ph + 50% dO2, tỷ lệ cấp giống 10% áp suất sục khí 1bar Nồng độ tế bào sau lên men tương ứng 5,0x1010 (CFU/ml), 1,5x1010 (CFU/ml) 1,1x1010 (CFU/ml) Hiệu suất tạo bào tử chủng vi sinh vật ñạt 50%, 47% 45%
Bước (B-5) Thu nhận sinh khối : Sinh khối sau ñược lên men tạo bào tử ñược lấy khỏi thiết bị lên men bắt đầu tiến hành ly tâm 1.500 vịng/phút thời gian 10 phút loại bỏ phần dịch bên
Bước (B-6) Song song với q trình lên men sinh khối bắt đầu chủng bị nguyên liệu làm chất ñộn (Bột gạo, bột khoai mì bã đậu nành)
Bước (B-7) Nghiền mịn: Các nguyên liệu vừa ñược nêu B-6 phải ñược nghiền mịn ray kỹ trước sử dụng làm chất ñộn
Bước (B-8) Phối trộn hỗn hợp chất ñộn: Các nguyên liệu bột gạo, bột khoai mì bột đậu nành phối trộn theo tỉ lệ ñã khảo sát với tỉ lệ 7:1:2 Hỗn hợp chất ñộn ñược trộn thật ñều với máy trộn với tốc độ ( 250 Vịng/phút )
Bước (B-9) Sấy lần 1: hỗn hợp chất ñộn ñược khử trùng 1000C 30 phút ñể giảm bớt vi sinh vật tạp nhiễm hỗn hợp, ñồng thời ñộ ẩm hỗn hợp ñạt khoảng 8%
Bước 10 (B-10) Phối trộn lần 1: phối trộn hỗn hợp chất ñộn hỗn hợp sinh khối 03 chủng Bacillus (B.subtilis, B.licheniformis, B.megaterium) ñể có độ ẩm khoảng 45% (tương đương với hỗn hợp chất ñộn bổ sung vào 74% so với khối lương hỗn hợp phối trộn 1) Hỗn hợp phối trộn (HHPT -1) ñược trộn ñều máy trộn bột ướt
Bước 11 (B-11) Sấy lần 2: HHPT-1 sau ñã ñược trộn ñều ñược ñem sấy nhiệt ñộ 500C cho ñến ñạt ñược ñộ ẩm