Chọn lọc khảo nghiệm và trình diễn một số dòng khổ qua lai f1 phù hợp với điều kiện đông nam bộ

ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM VIỆN NGHIÊN CỨU CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CHỌN LỌC, KHẢO NGHIỆM VÀ TRÌNH DIỄN MỘT SỐ DỊNG KHỔ QUA LAI F1 PHÙ HỢP VỚI ĐIỀU KIỆN VÙNG ĐÔNG NAM BỘ Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Viện Nghiên cứu Cơng nghệ Sinh học Môi trường, Trường Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh Chủ nhiệm nhiệm vụ: TS Phan Đặng Thái Phương i ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM VIỆN NGHIÊN CỨU CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MƠI TRƯỜNG CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CHỌN LỌC, KHẢO NGHIỆM VÀ TRÌNH DIỄN MỘT SỐ DỊNG KHỔ QUA LAI F1 PHÙ HỢP VỚI ĐIỀU KIỆN VÙNG ĐÔNG NAM BỘ Chủ nhiệm nhiệm vụ: (ký tên) TS Phan Đặng Thái Phương Cơ quan chủ trì nhiệm vụ (ký tên đóng dấu) TS Lê Thị Diệu Trang Thành phố Hồ Chí Minh- 2022 ii LỜI CAM ĐOAN Đề tài “ Chọn lọc, khảo nghiệm trình diễn số dòng khổ qua lai F1 phù hợp với điều kiện vùng Đơng Nam bộ” cơng trình nghiên cứu nhóm nghiên cứu Các số liệu đề tài hồn tồn trung thực Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng nhóm nghiên cứu chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác TS Phan Đặng Thái Phương iii VIỆN NGHIÊN CỨU CƠNG NGHỆ CỘNG HỒ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG Độc lập - Tự - Hạnh phúc _ Tp.HCM, ngày 19 tháng 04 năm 2022 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KH&CN I THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Chọn lọc, khảo nghiệm trình diễn số dòng khổ qua lai F1 phù hợp với điều kiện vùng Đơng Nam Thuộc: Chương trình/lĩnh vực (tên chương trình/lĩnh vực): Nơng lâm Ngư nghiệp Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Phan Đặng Thái Phương Ngày, tháng, năm sinh: 06/02/1982 Nam/ Nữ: nữ Học hàm, học vị: Tiến sĩ Chức danh khoa học: Chức vụ: Giảng viên Điện thoại: Tổ chức: Nhà riêng: Mobile: 0792187879 Fax: E-mail: thaiphuong@hcmuaf.edu.vn Tên tổ chức công tác: Bộ môn Công nghệ Sinh học, Khoa Khoa học Sinh học, Trường Đại học Nông Lâm Tp HCM Địa tổ chức: Khu phố 6, Phường Linh Trung, Quận Thủ Đức, Tp Hồ Chí Minh Địa nhà riêng: Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Viện Nghiên cứu Cơng nghệ Sinh học Môi trường Điện thoại: 84-028-38961712 Website: ribe.hcmuaf.edu.vn Địa chỉ: Khu phố 6, Phường Linh Trung, Quận Thủ Đức, Tp Hồ Chí Minh Họ tên thủ trưởng tổ chức: TS Lê Thị Diệu Trang iv Số tài khoản: 3713.0.9075068.00000 Kho bạc: Kho bạc nhà nước Quận Thủ Đức, Tp Hồ Chí Minh Tên quan chủ quản đề tài: Sở Khoa học Công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: 36 tháng từ 05/ 2019 đến 05/2022 - Thực tế thực hiện: từ 36 tháng từ 05/ 2019 đến 05/2022 - Được gia hạn (nếu có): - Lần từ tháng… năm… đến tháng… năm… - Lần … Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 1.640 tr.đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học: 1.640 tr.đ + Kinh phí từ nguồn khác: tr.đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số Theo kế hoạch Thực tế đạt Ghi Thời gian Kinh phí Thời gian Kinh phí (Số đề nghị (Tháng, năm) (Tr.đ) (Tháng, năm) (Tr.đ) toán) 05/2019 820 05/2019 820 820 12/2020 656 04/2022 656 656 04/2022 164 04/2022 161.200 161.200 TT c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Đơn vị tính: đồng S ố Nội dung T T khoản Theo kế hoạch Tổng NSKH v Thực tế đạt Nguồ n khác Tổng NSKH Nguồ n khác chi Trả công lao động (khoa học, phổ thông) 800.806.800 800.806.800 693.067.900 693.067.900 Nguyên , vật liệu, lượng 721.195.000 721.195.000 721.195.000 721.195.000 Thiết bị, máy móc 0 0 0 Xây dựng, sửa chữa nhỏ 0 0 0 117.998.200 117.998.200 61.737.100 61.737.100 1.640.000.000 1.640.000.000 1.476.000.000 1.476.000.000 Chi khác Tổng cộng - Lý thay đổi (nếu có): vi Đối với dự án: Đơn vị tính: Triệu đồng Số Nội dung TT khoản chi Thiết bị, máy móc mua Nhà xưởng xây dựng mới, cải tạo Kinh phí hỗ trợ cơng nghệ Chi phí lao động Ngun vật liệu, lượng Thuê thiết bị, nhà xưởng Khác Theo kế hoạch Tổng NSKH Nguồn khác Thực tế đạt Tổng NSKH Nguồn khác Tổng cộng - Lý thay đổi (nếu có): Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ công đoạn xét duyệt, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì nhiệm vụ (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số TT Số, thời gian ban hành văn Tên văn Số: 379/QĐSKHCN, 9/5/2019 Quyết định việc phê duyệt nhiệm vụ nghiên cứu khoa học công nghệ Số: 19/2019/HĐQPTKHCN, 27/05/2019 Hợp đồng thực nhiệm vụ nghiên cứu khoa học công nghệ vii Ghi Số: 584/QĐSKHCN, 02/07/2019 Quyết định việc lựa chọn nhà thầu nhiệm vụ Ngày 08/01/2020 Báo cáo tình hình thực đề tài, định kỳ 06 tháng lần Ngày 18/06/2020 Báo cáo tình hình thực đề tài, định kỳ 06 tháng lần Số: 0907/QĐCNSH&MT, 09/07/2019 Quyết định việc phê duyệt kế hoạch lựa chọn nhà thầu phần cơng việc giao khốn nhiệm vụ Ngày 14/09/2020 Thẩm tra toán nhiệm vụ nghiên cứu KH&CN năm 2019 Ngày 18/06/2021 Báo cáo tình hình thực đề tài, định kỳ 06 tháng lần Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Số TT Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Tên tổ chức tham gia thực Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân đăng ký theo Thuyết minh Tên cá nhân tham gia thực Phan Đặng Thái Phương Phan Đặng Thái Phương viii Nội dung tham gia Nội dung 1: Làm dịng khổ qua bố mẹ triển vọng tạo vật liệu lai ban đầu Sản phẩm chủ yếu đạt Quy trình đánh giá độ thị phân tử khổ qua Ghi chú* Nội dung 2: Lai tạo chọn lọc tổ hợp lai triển vọng từ 30 tổ hợp lai 06 dòng bố mẹ Vũ Văn Ba Vũ Văn Ba Phan Đặng Thái Phương Phan Đặng Thái Phương Trần Thị Thu Hà Nội dung 3: Trồng đánh giá khảo sát 3-5 Trần Thị Thu Hà tổ hợp lai triển vọng điều kiện đồng ruộng thí nghiệm 1-2 tổ hợp có ưu lai đánh giá thành công Phan Đặng Thái Phương Phan Đặng Thái Phương Nội dung 4: Trồng trình diễn hội thảo đầu bờ Vũ Văn Ba cho nơng dân Trần Thị Thu Hà 01 giống khổ qua lai F1 vùng trồng rau màu chuyên canh Tp Hồ Chí Minh, tỉnh Đồng Nai, tỉnh Bà Rịa Vũng Tàu tỉnh Bình Dương Trồng trình diễn thành cơng 03 hội thảo đồng ruộng Nội dung 5: Đăng ký chứng nhận DUS giống khổ qua F1 lai tạo Đăng ký chứng nhận DUS giống khổ qua F1 lai tạo Nội dung 6: Lai tạo chế biến hạt giống khổ qua lai F1 phục vụ nhằm hướng 2-3 kg hạt giống khổ qua F1 Vũ Văn Ba Trần Thị Thu Hà Phan Đặng Thái Phương Phan Đặng Thái Phương Vũ Văn Ba Vũ Văn Ba Phan Đặng Thái Phương Phan Đặng Thái Phương Vũ Văn Ba Vũ Văn Ba ix 3-5 tổ hợp triền vọng lai tạo thành cơng Hồn thành kết bổ sung cho khảo nghiệm DUS khổ qua đến thương mại - Lý thay đổi ( có): Tình hình hợp tác quốc tế: Số TT Theo kế hoạch Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đồn, số lượng người tham gia ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Số TT Theo kế hoạch Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm ) (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, cơng việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Thời gian Số TT (Bắt đầu, kết thúc Các nội dung, công việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) - tháng … năm) Nội dung 1: Làm dòng khổ qua bố mẹ triển vọng tạo vật liệu x Theo kế hoạch Thực tế đạt 5/20198/2020 5/20198/2020 Người, quan thực Phan Đặng Thái Phương, Dạng III: Bài báo; Sách chuyên khảo; sản phẩm khác Số TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học cần đạt 01 Bài báo khoa học Chấp nhận đăng (01-02 bài) 161 Dự kiến nơi cơng bố (Tạp chí, Nhà xuất bản) Trong nước Đánh giá kết đề tài - 01 tham gia hội nghị đăng ngày 18/11/2020, The 3rd International Conference on Sustainable Agriculture and Environment 2020 ((kèm theo minh chứng sản phẩm) - 01 đăng tạp chí Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, Bộ Khoa học Công nghệ, phản biện chấp nhận ngày 17 tháng 05 năm 2022 (kèm theo minh chứng sản phẩm) Dạng IV:Kết tham gia đào tạo sau đại học Số TT Cấp đào tạo Số lượng Học viên cao học 01 Đánh giá Chuyên ngành đào tạo kết đề tài Hướng dẫn 01 thạc sỹ chuyên ngành Công nghệ Sinh học, tốt nghiệp T2/2022 (kèm theo minh chứng sản phẩm) Sản phẩm dự kiến đăng ký bảo hộ quyền sở hữu công nghiệp, quyền giống trồng: Số TT 01 Tên sản phẩm 01 giống khổ qua lai F1 Yêu cầu khoa học cần Đánh giá kết đạt đề tài - 01 mẫu đơn chấp Khảo nghiệm DUS nhận đăng ký bảo hộ 01 giống khổ qua lai F1 NLU đến Cục Trồng trọt Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn, ngày 26 tháng năm 2022 (kèm theo minh chứng sản phẩm) - Đã gửi mẫu hạt giống F1 NLU 0122 đến Trung tâm khảo kiểm nghiệm giống, sản phẩm trồng Nam Bộ ngày 28 tháng 04 năm 2022 tiến hành khảo nghiệm DUS 162 theo hợp đồng thực số 19-31/HĐTKCNSH 2022 ngày 28/04/2022 (kèm theo minh chứng sản phẩm) Thành phố Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2022 Chủ nhiệm nhiệm vụ TS Phan Đặng Thái Phương MINH CHỨNG KÈM THEO CỦA CÁC DẠNG SẢN PHẨM Dạng I: 02 kg hạt giống khổ qua lai F1, mô tả chi tiết đặc tính giống khổ qua lai F1 sau: - Giống khổ qua lai F1 NLU có suất đạt 26 vụ Đông Xuân trồng vùng Đông Nam bộ, suất/cây cao ĐC 24-31% (Santa - ĐC) thương mại phổ biến thị trường vùng Đơng Nam - Mơ tả đặc tính giống khổ qua lai F1 NLU + Độ sạch: ≥ 99% + Tỉ lệ nảy mầm: ≥ 90% + Thời gian thu hoạch thương mại: 35-40 ngày sau gieo + Cây sinh trưởng phát triển mạnh, phân nhiều cành nhánh 163 + Kích thước vừa, vỏ xanh vừa, bóng đẹp, thuôn đều, suất/cây cao ĐC 24-31% (Santa - ĐC), kháng bệnh phấn trắng sương mai mức độ trung bình, kháng ruồi đục mức trung bình 164 Dạng II: Quy trình đánh giá độ thị phân tử khổ qua Quy trình đánh giá dịng thị phân tử khổ qua Lời nói đầu Quy trình đánh giá dòng thị phân tử khổ qua Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh biên soạn Hội đồng đánh giá quy trình Sở Khoa học Cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh tổ chức thực đồng ý nghiệm thu quy trình vào ngày 26 tháng 05 năm 2022 Phạm vi áp dụng Quy trình quy định yêu cầu kỹ thuật dịng/giống khổ qua thuộc lồi Momordica charantia L Tài liệu viện dẫn TCVN 8550:2011, Giống trồng – Phương pháp kiểm định ruộng giống 165 Rogers, S.O A J B Bendich (1988) Extraction of DNA from plant tissues Plant molecular Biology Manual Kluwer Academic Publishers, Volume 6: 1-10 Saxena S., Singh A., Archak S., Behera TK., John JK., Meshram SU., Gaikwad AB., 2014 Development of Novel Simple Sequence Repeat Markers in Bitter Gourd (Momordica charantia L.) Through Enriched Genomic Libraries and Their Utilization in Analysis of Genetic Diversity and Cross-Species Transferability Appl Biochem Biotechnol 175 (1): 93 – 118 Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học Môi trường (2017) Nghiên cứu lai tạo giống khổ qua F1 suất phục vụ cho vùng Đông Nam Đề tài nghiên cứu Sở Khoa học Công nghệ Tp HCM, chủ nhiệm đề tài Phan Đặng Thái Phương, 70 trang Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học Mơi trường (2022) Chọn lọc, khảo nghiệm trình diễn số dòng khổ qua lai F1 phù hợp với điều kiện vùng Đông Nam Đề tài nghiên cứu Sở Khoa học Công nghệ Tp HCM, chủ nhiệm đề tài Phan Đặng Thái Phương, 176 trang Yêu cầu kỹ thuật 3.1 Yêu cầu ruộng giống 3.1.1 Yêu cầu đất Ruộng thử nghiệm trồng hạt giống khổ qua cần đánh giá độ cần kiểm tra trước gieo Ruộng phải cỏ dại, vụ trước khơng trồng thuộc họ Bầu bí 3.1.2 Yêu cầu hạt giống khổ qua Hạt giống khổ qua cần đánh giá độ kiểm tra độ nảy mầm theo TCVN 8548:2011 - Hạt giống trồng - Phương pháp kiểm nghiệm 3.2 Yêu cầu thiết bị, dụng cụ hóa chất sử dụng phịng thí nghiệm sinh học phân tử 166 Thiết bị dụng cụ sử dụng quy trình gồm: Máy gelDoc, máy ủ heat block techne, máy ly tâm lạnh Centrifuge, máy PCR (Model MasterCycler gradient), PCR (Model T100™ Thermal Cycler), máy Vortex, Pipet đa kênh tự động điện tử (Model Eline), điện di DNA Power Pac 200, cân phân tích, tủ đơng sâu – 40 oC, tủ lạnh – 20 oC, eppendorf 1,5 ml; 0,2 ml dụng cụ chuyên dùng khác Hóa chất ly trích DNA theo phương pháp CTAB 2X mơ tả Rogers Bendich (1988) bao gồm: Cetyltrimethylammonium bromide (Himedia), Tris base (Promega), Boric acid (Scharlau), Hydrochloric acid (Merck), Sodium Chloride (Sigma), Ethylene diamine tetraacetic acid (Biobasic), Chloroform (Labscan), Isopropanol (Scharlau), Ethanol (Scharlau) số hoá chất khác bổ sung theo quy trình ly trích DNA thực vật Phương pháp thử 4.1 Xác định mức độ đồng số tiêu liên quan đến đặc tính nơng học đồng ruộng, theo QCVN 01-153: 2014/BNNPTNT, quy chuẩn khảo nghiệm quốc gia tính khác biệt, tính đồng tính ổn định (DUS) giống mướp đắng Tổng số kiểm tra tối thiểu lần đánh giá đồng đồng ruộng 20 cây/dòng Quan sát số tiêu nơng học đặc trưng, đánh giá tính đồng kiểu hình dịng khổ qua nhằm đánh giá chất lượng dòng triển vọng đồng ruộng Trong 20 cây/dịng trồng đánh giá đồng ruộng khơng có khác dạng Tổng số 15 đặc tính nơng học suất theo dõi nhằm đánh giá mức độ đồng dòng khổ qua Phiến lá: Số thuỳ (5 thuỳ, thuỳ, thuỳ) 167 Xác định ngày hoa đầu tiên: Ngày hoa xuất xác định khoảng thời gian hoa khoảng thời gian bắt đầu trồng khoảng 3-4 thật đến xuất hoa Xác định ngày hoa đực đầu tiên: Ngày hoa đực xuất xác định khoảng thời gian hoa khoảng thời gian bắt đầu trồng khoảng 3-4 thật đến xuất hoa đực Tổng số quả/ cây: Đếm số lượng trái lần thu hoạch tính tổng số trái thu hoạch/ 60 90 NST Chiều dài (cm): Chiều dài đo từ đầu đến cuối đuôi trưởng thành xác định chiều dài trung bình trưởng thành chọn ngẫu nhiên Chu vi vòng (cm): Chu vi vòng đo phần bụng trưởng thành xác định chu vi vịng trung bình trưởng thành chọn ngẫu nhiên Hình dạng mặt cắt dọc quả: hình tam giác, hình trứng, hình trục hình thn Màu vỏ quả: trắng, xanh nhạt, xanh xanh đậm Số lượng U vấu: (1), nhiều (2) 10 U vấu: Kích cỡ nhỏ, trung bình to 11 U vấu: Hình dạng đỉnh, nhọn (1), tù (2), trịn (3) 12 Chiều dài vết gợn (quả): ngắn (3), trung bình (5), dài (7) 13 Trọng lượng trung bình quả/ (gram): Ghi nhận trọng lượng tươi lần thu hoạch ước tính trung bình trọng lượng 14 Độ bóng vỏ quả: bóng (1), khơng bóng (2) 15 Năng suất lý thuyết tươi/cây (kg): thu hoạch xác định suất 60 NST 90 NST 4.2 Xác định độ dòng khổ qua thị phân tử 168 4.2.1 Phương pháp ly trích DNA tổng số mẫu non khổ qua Ly trích DNA tổng số mẫu non khổ qua thực theo phương pháp CTAB mô tả Rogers Bendich (1988) Bước 1: Mẫu nghiền nát tube 1,5 ml, tiếp đến hút 700 µl dung dịch CTAB 2X vào tube 1,5 ml chứa mẫu nghiền, vortex 2500 vòng/phút phút cho đều, ủ nhiệt độ 75 oC 30 phút Thành phần nồng độ chất có dung dịch CTAB 2X trình bày bảng 1: Bảng Thành phần nồng độ chất có dung dịch CTAB 2X Nồng độ ban Nồng độ cuối Lượng cần Thành phần đầu lít Cetrimonium Brom (CTAB) 100 % 2% 20 g Sodium Chloride (NaCl) 5M 1,4 M 280 ml Tris base, pH = 8,0 1M 100 mM 100 ml Ethylene diamine tetraacetic 0,5 mM 20 mM 40 ml acid (ETDA), pH = 8,0 - Bước 2: Thêm 350 µl dung dịch Chloroform: Isoamylacohol (24:1) vào tube 1,5 ml, trộn cách đảo ngược ống từ đến 10 lần, ly tâm 13000 vòng/phút 10 phút - Bước 3: Sau ly tâm, thu nhận 600 µl dịch phía chuyển sang ống eppendorf 1,5 ml mới, thêm 600 µl isopropanol vào ống eppendorf chứa dịch trên, trộn cách đảo ngược ống nhiều lần, trữ lạnh oC, 30 phút, nhằm tạo mơi trường thích hợp cho việc tủa DNA - Bước 4: Sau trữ lạnh, ly tâm 13000 vòng/phút 10 phút Đổ bỏ dịch nổi, thu tủa DNA - Bước 5: Rửa tủa DNA 900 µl ethanol 70 %, ly tâm 13000 vòng/phút, phút 169 - Bước 6: Thu tủa DNA sấy khô nhiệt độ 65 oC 10 phút - Bước 7: Bảo quản DNA 100 µl dung dịch TE1X tủ đông oC - Bước 8: Kiểm tra chất lượng DNA sau ly trích điện di gel agarose % 4.2.2 Phương pháp thực phản ứng PCR - Bước 1: Chuẩn bị thành phần phản ứng PCR Tổng thể tích phản ứng 20 µl gồm có DNA genomic mẫu khổ qua 20 ng, 0.3 mM dNTPs, 0.4 mM of each primer, 1X Taq buffer, 2.5 mM Mg2+, and U Taq polymerase (TaKaRa Biotechnology Co.) Chu trình nhiệt phản ứng PCR thể bảng Thơng tin trình tự 10 cặp mồi sử dụng để chạy PCR trình bày phần phụ lục Bảng Chu trình nhiệt phản ứng PCR Phản ứng Nhiệt độ (oC) Thời gian Tiền biến tính 94 phút Biến tính 94 phút Bắt cặp theo primer 45 giây Kéo dài 72 phút Hoàn tất 72 phút Giữ mẫu Chu kỳ 35 - Bước 2: Điện di quan sát mẫu băng PCR đánh giá kết Phương pháp điện di mẫu PCR sử dụng gel-agarose Nồng độ agarose sử dụng 3,5 % Hiệu điện tiến hành điện di 110 V 60 phút Kết thúc điện di, khuôn gel đặt lên bàn UV, quan sát băng DNA - Độ dịng tính theo cơng thức sau: 170 Số thị phân tử cho 01 band nhất/mẫu Độ (%) = Tổng số thị nhân thành cơng x 100% - Xác định cá thể có kiểu gene đồng hợp dựa kết đánh giá di truyền DNA thị SSR - Kết điện di mẫu PCR sử dụng gel-agarose tư liệu minh chứng phương pháp xác định vị trí đồng hợp tử dòng khổ qua cần đánh giá độ trình bày sau: L Ho Ho He Ho (Ho) (He) Hình Kết điện di sản phẩm nhân DNA marker SSR locus đồng hợp, dị hợp Ghi chú: L: DNA Ladder (base pair), thước kích thước DNA; Ho: Homozygous, đồng hợp tử; He: Heterozygote, dị hợp tử - Mẫu đánh giá vị trí phân tử DNA có 01 vệt băng gọi mẫu đồng hợp tử (Ho); mẫu đánh giá vị trí phân tử DNA nhiều 01 vệt băng mẫu dị hợp tử (He) mẫu tiếp tục làm cách tự thụ nhân tạo 171 Phụ lục Thông tin 10 cặp primers sử dụng quy trình nhân PCR Stt Locus Primer sequence (5'-3') Ta Size (bp) (oC) McSSR07 AGAGAGGGAGAACGAGACGG TTTATATGATGGGTCACTTGGC 55 150-200 McSSR14 TTCTTGCTCGGAGACAAATG GGCCAATTCTTTCCCTTTTC 52 150-200 McSSR20 GGAATTCAGGTGAACCTGACG CCAGGAGGAAGAGGAACTGC 55 200-250 McSSR44 TGGCTAGGTAAGCGTCCTGT ACTACGGCGACGAAGAATCA 52 150-200 McSSR68 CTTCTCTTTGCCCCTTACGA CAGTGCCCCACAACTATGAA 55 150-200 McSSR71 AAATAAATTAGCCGATCTTTG CAT TCATTTCTGATCTGGAAAACCA 55 150-200 McSSR72 TGCAGCATCCATAGCCATAC GGCAGTGTGATGTGATTCTGA 55 250-300 McSSR73 AATGGGGATATTCCCGAAAC AATGGGAGCAAGAATTTCCA 55 250-300 McSSR107 GAAGCACAATCACTCGTTGC GAACGGGTGTTACCTGAGGA 55 250-300 10 McSSR108 GCAAATTTCTCATTTCCTCTTG A ACCCACCCAGATGAATGAAT 55 150-200 172 Dạng III: Chấp nhận đăng 01 báo khoa học thuộc tạp chí nước 173 Dạng IV: Hướng dẫn 01 thạc sỹ chuyên ngành Công nghệ Sinh học, tốt nghiệp T2/2022 174 Dạng V: 01 Đăng ký bảo hộ 01 giống khổ qua lai F1 NLU - Mẫu đơn chấp nhận đăng ký bảo hộ 01 giống khổ qua lai F1 NLU đến Cục Trồng trọt Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn, ngày 26 tháng năm 2022 - Đã gửi mẫu hạt giống F1 NLU 0122 đến Trung tâm khảo kiểm nghiệm giống, sản phẩm trồng Nam Bộ ngày 28 tháng 04 năm 2022 tiến hành khảo nghiệm DUS theo hợp đồng thực số 19-31/HĐTK-CNSH 2022 ngày 28/04/2022 175