Tuyển chọn và phát triển một số dòng moina triển vọng phục vụ ương nuôi cá tra bột

SỞ NƠNG NGHIỆP VÀ PTNT CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Độc lập – Tự – Hạnh phúc TRUNG TÂM CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TÊN NHIỆM VỤ: TUYỂN CHỌN VÀ PHÁT TRIỂN MỘT SỐ DÒNG Moina TRIỂN VỌNG PHỤC VỤ ƯƠNG NUÔI CÁ TRA BỘT (Mã số: TS01/18-19) Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: TRUNG TÂM CƠNG NGHỆ SINH HỌC TP.HCM Chủ nhiệm nhiệm vụ: ThS Lê Văn Hậu Thành phố Hồ Chí Minh – 2020 SỞ NƠNG NGHIỆP VÀ PTNT CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Độc lập – Tự – Hạnh phúc TRUNG TÂM CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TUYỂN CHỌN VÀ PHÁT TRIỂN MỘT SỐ DÒNG Moina TRIỂN VỌNG PHỤC VỤ ƯƠNG NUÔI CÁ TRA BỘT (Mã số: TS01/18-19) (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày 17/06/2020) Chủ nhiệm nhiệm vụ ThS Lê Văn Hậu Cơ quan chủ trì nhiệm vụ PGS.TS Dương Hoa Xơ SỞ NƠNG NGHIỆP VÀ PTNT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM CƠNG NGHỆ SINH HỌC CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Thành phố Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2020 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KH&CN I THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Tuyển chọn phát triển số dòng Moina triển vọng phục vụ ương nuôi cá tra bột (Mã số: TS01/18-19) Thuộc: Chương trình/lĩnh vực (tên chương trình/lĩnh vực): Khơng Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: LÊ VĂN HẬU Ngày, tháng, năm sinh: 23/08/1988 Nam/ Nữ: Nam Học hàm, học vị: Thạc sĩ Chức danh khoa học: Nghiên cứu viên Chức vụ: Nhân viên Điện thoại: Tổ chức: (028) 37 153 792 Mobile: 0973.103.365 Fax: (028) 38 916 997 E-mail: levanhauts@gmail.com Tên tổ chức cơng tác: Phịng CNSH Thuỷ sản Địa tổ chức: 2374 Quốc lộ 1, khu phố 2, phường Trung Mỹ Tây, Q.12, Tp.HCM Địa nhà riêng: 40/7A Trần Văn Quang, P.10, Q Tân Bình, Tp.HCM Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: TRUNG TÂM CƠNG NGHỆ SINH HỌC TP.HCM Điện thoại: (028) 37 153 792 Fax: (028) 38 916 997 E-mail: ttcnsh.snn@tphcm.gov.vn Website: https://www.hcmbiotech.com.vn Địa chỉ: 2374 Quốc lộ 1, khu phố 2, phường Trung Mỹ Tây, Q.12, TP.HCM Họ tên thủ trưởng tổ chức: DƯƠNG HOA XÔ Số tài khoản: 3713.0.1007645 Kho bạc: Nhà nước TP.HCM Tên quan chủ quản đề tài: SỞ NƠNG NGHIỆP VÀ PTNT TP.HCM II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng 01 năm 2018 đến tháng 12 năm 2019 - Thực tế thực hiện: từ tháng 01 năm 2018 đến tháng 06 năm 2020 - Được gia hạn (nếu có): tháng - Lần từ tháng 01 năm 2020 đến tháng 06 năm 2020 Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 500.000.000 đồng, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học: 500.000.000 đồng + Kinh phí từ nguồn khác: đồng b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT Theo kế hoạch Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (đồng) 01/2018 – 250.000.000 12/2018 01/2019 – 250.000.000 12/2019 Thực tế đạt Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (đồng) 01/2018 – 12/2018 01/2019 – 12/2019 Ghi (Số đề nghị toán) 249.755.600 227.619.600 c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Tuyển chọn phát triển số dòng moina triển vọng phục vụ ương nuôi cá tra bột Đơn vị tính: đồng Số TT Nội dung khoản chi Trả công lao động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác Tổng cộng Theo kế hoạch Tổng NSKH 134.031.100 Thực tế đạt Nguồn khác Tổng NSKH 134.031.100 134.031.100 134.031.100 286.208.900 286.208.900 270.837.300 270.837.300 0 0 0 0 79.760.000 79.760.000 72.506.800 72.506.800 500.000.000 500.000.000 477.375.200 477.375.200 - Lý thay đổi (nếu có): Chậm cấp kinh phí Nguồn khác Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: Số TT Số, thời gian ban hành văn Số 01/QĐ-CNSH, ngày 09 tháng 01 năm 2018 Tên văn Ghi Quyết định V/v thành lập Hội đồng khoa học xét duyệt đề cương chi tiết Đề tài sở cấp Trung tâm năm 2018 Quyết định V/v thành lập Hội đồng khoa học đánh giá tiến độ, nghiệm thu Nhiệm vụ Khoa học công nghệ năm 2018 Quyết định V/v gia hạn thời gian thực nhiệm vụ khoa học công nghệ cấp sở Trung tâm Công nghệ Sinh học Số 86/QĐ-CNSH, ngày 25 tháng 06 năm 2019 Số 476/QĐ-SNN, ngày 27 tháng 12 năm 2019 Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Số TT Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Tên tổ chức tham gia thực Dịch vụ P.CNSH Thực phẩm Dịch vụ Trung tâm Công nghệ thức ăn sau thu hoạch thuỷ sản (Viện Nghiên cứu NTTS II) Nội dung tham gia chủ yếu Phân tích thành phần dinh dưỡng Moina Sản phẩm chủ yếu đạt Phân tích thành phần dinh dưỡng Moina Giá trị protein, lipid Tên cá nhân tham gia thực Nội dung tham gia Sản phẩm chủ yếu đạt Hồn thành tất nội dung đăng ký theo đề cương Định danh xác thành phần Ghi chú* Giá trị protein, lipid - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: Số TT Tên cá nhân đăng ký theo Thuyết minh Lê Văn Hậu Lê Văn Hậu Tham gia tất nội dung Lê Lưu Phương Hạnh Lê Lưu Phương Hạnh Định danh SHPT Ghi chú* Ngô Huỳnh Phương Thảo Ngô Huỳnh Phương Thảo Cố vấn khoa học loài Định hướng hướng nghiên cứu Trần Thị Thanh Hương P.CNSH Thực phẩm Phân tích thành phần dinh dưỡng Moina Giá trị protein, lipid - Lý thay đổi (nếu có): Thay đổi thành viên tham gia cần chun mơn người thực Tình hình hợp tác quốc tế: Theo kế hoạch (Nội dung, thời gian, kinh phí, Số địa điểm, tên tổ chức hợp tác, TT số đoàn, số lượng người tham gia ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Theo kế hoạch Thực tế đạt Số (Nội dung, thời gian, kinh phí, (Nội dung, thời gian, TT địa điểm ) kinh phí, địa điểm ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, công việc chủ yếu: STT 1.1 Các nội dung , công việc đăng ký Nội dung 1: Thu nhận tăng sinh khối bảo quản mẫu Moina spp ao ương cá khu vực ĐBSCL Công việc 1: Thu thập mẫu nước chứa Moina spp Thời gian (bắt đầu – kết thúc) Theo kế hoạch Thực tế đạt 1/2018 12/2018 1/2018 12/2018 1/2018 12/2018 1/2018 12/2018 - Người, quan thực ThS Lê Văn Hậu ThS Lê Lưu Phương Hạnh ThS Lê Văn Hậu ThS Lê Lưu 1.2 1.3 2.1 2.2 ao ương cá khu vực ĐBSCL Công việc 2: Tăng sinh khối mẫu Moina spp phục vụ cho việc định danh phân dịng Cơng việc 3: Phương pháp sản xuất, bảo quản, ấp nở trứng nghỉ Moina Nội dung 2: Định danh phân dòng mẫu Moina spp thu nhận Cơng việc 1: Định danh sơ hình thái Cơng việc 2: Định danh phân dịng kỹ thuật sinh học phân tử Nội dung 3: Đánh giá khả sinh trưởng phát triển tính chịu mặn dòng Moina spp Nội dung 4: Xác định giá trị dinh dưỡng số dòng Moina spp sàng lọc Nội dung 5: Đánh giá hiệu số dịng Moina spp chọn lọc lên q trình ương cá Tra bột thông qua tỷ lệ sống sinh trưởng (chiều dài trọng lượng cá) Phương Hạnh ThS Lê Văn Hậu ThS Lê Văn Hậu ThS Lê Văn Hậu ThS Lê Lưu Phương Hạnh ThS Lê Văn Hậu ThS Lê Lưu Phương Hạnh ThS Lê Văn Hậu ThS Lê Lưu Phương Hạnh 01/2018 12/2018 01/2018 12/2018 01/2018 12/2018 01/2018 12/2018 01/2019 – 06/2019 01/2019 – 04/2020 ThS Lê Văn Hậu Cộng tác viên 05/2019 – 07/2019 03/2020 – 06/2020 ThS Lê Văn Hậu Dịch vụ phân tích 01/2019 – 12/20219 10/2019 – 06/2020 ThS Lê Văn Hậu Cộng tác viên - Lý thay đổi (nếu có): Kế hoạch phê duyệt chậm trễ khơng có kinh phí thực III SẢN PHẨM KH&CN CỦA NHIỆM VỤ Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Số TT Tên sản phẩm tiêu chất lượng chủ yếu Moina dòng thuần, sạch, rõ nguồn gốc Số lượng Đơn vị đo Theo kế hoạch Thực tế đạt Dòng 1-2 - Lý thay đổi (nếu có): b) Sản phẩm Dạng III Số TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học cần đạt Theo kế Thực tế hoạch đạt Bài báo khoa học 01 đăng tạp chí nước 02 báo đăng tạp chí nước Hội thảo, hội nghị Không đăng ký 02 báo cáo (01 oral, 01 báo cáo poster) Số lượng, nơi công bố (Tạp chí, nhà xuất bản) Tạp chí khoa học Đại học Cần Thơ Tập 54, số chuyên đề: Thuỷ sản (2018)(2):36-44 Tạp chí khoa học – Cơng nghệ Thuỷ sản Số 3/2019 (47-54), Đại học Nha Trang Hội nghị khoa học trẻ toàn quốc ngành thủy sản lần (2018), 10 (2019) - Lý thay đổi (nếu có): c) Kết đào tạo: Số TT Cấp đào tạo, Chuyên ngành đào tạo Thực tập Cử nhân, Kỹ sư Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt 01 1-2 - Lý thay đổi (nếu có): Ghi (Thời gian kết thúc) 07/2019 01 Đã báo cáo 04/2020; 01 thực d) Thống kê danh mục sản phẩm KHCN ứng dụng vào thực tế Số TT Tên kết ứng dụng Địa điểm (Ghi rõ tên, địa nơi ứng dụng) Thời gian Kết sơ 2 Đánh giá hiệu nhiệm vụ mang lại: a) Hiệu khoa học công nghệ: Bước đầu sản xuất, bảo quản, ấp nở trứng nghỉ Moina micrura với tỉ lệ nở 30% sau tháng bảo quản 4oC b) Hiệu kinh tế xã hội: Trứng nghỉ Moina sản phẩm hồn tồn thị trường Việt Nam, áp dụng thực hiệu mang lại giảm chi phí điều trị bệnh cho cá, đỡ chi phí cơng lao động, … Tình hình thực chế độ báo cáo, kiểm tra nhiệm vụ: Số TT I Nội dung Thời gian thực Ghi (Tóm tắt kết quả, kết luận chính, người chủ trì…) 7/2019 Hồn thành tiến độ nội dung đăng ký giai đoạn Đề tài tiếp tiếp tục thực Báo cáo tiến độ Lần Chủ nhiệm đề tài (Họ tên, chữ ký) Thủ trưởng tổ chức chủ trì (Họ tên, chữ ký đóng dấu) ThS Lê Văn Hậu PGS.TS Dương Hoa Xô MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iii DANH SÁCH BẢNG iv DANH SÁCH HÌNH v TÍNH CẤP THIẾT CỦA VIỆC THỰC HIỆN NHIỆM VỤ viii MỤC TIÊU NHIỆM VỤ viii TÓM TẮT ix CHƯƠNG I MỞ ĐẦU CHƯƠNG II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung 2.2 Đánh giá tổng quan tình hình nghiên cứu thuộc lĩnh vực đề tài CHƯƠNG III VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 3.1 Vật liệu 15 3.2 Phương pháp 16 3.2.1 Sơ đồ bước thực 16 3.2.2 Phương pháp thu mẫu Moina spp 16 3.2.3 Phương pháp phân lập, nhân dòng mẫu Moina spp 17 3.3 Phương pháp định danh Moina spp 18 3.3.1 Định danh hình thái 18 3.3.2 Kỹ thuật sinh học phân tử giải trình tự DNA 18 3.4 Phương pháp sinh sản ephippia phương thức bảo quản ephippia Moina 20 3.4.1 Ảnh hưởng thức ăn lên khả sinh trứng nghỉ M micrura N2 20 3.4.2 Ảnh hưởng NH3 lên khả sinh trứng nghỉ M micrura N2 21 3.4.3 Điều kiện bảo quản ephippia Moina sp 22 3.4.4 Phương pháp đánh giá yếu tố tác động đến tỉ lệ nở trứng nghỉ M micrura.22 3.4.4.1 Phương pháp đánh giá ảnh hưởng pH, NaClO lên tỉ lệ nở trứng nghỉ Moina 23 3.4.4.2 Phương pháp đánh giá ảnh hưởng nhiệt độ lên tỉ lệ nở trứng nghỉ 23 3.5 Đánh giá khả sinh trưởng phát triển, tính chịu mặn dịng Moina spp 23 3.5.1 Đánh giá khả sinh trưởng phát triển dòng Moina spp 23 3.5.2 Đánh giá tính chịu mặn dịng Moina spp 24 3.6 Xác định giá trị dinh dưỡng (protein, lipid) dòng Moina spp 25 3.7 Đánh giá hiệu số dòng Moina spp chọn lọc lên trình ương cá Tra bột 25 3.8 Phương pháp phân tích xử lý số liệu 26 i Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 54, Số chuyên đề: Thủy sản (2018)(2): 36-44 1.6 µM mồi tương ứng dùng để giải trình tự Mỗi sản phẩm PCR giải trình tự hai chiều máy Genetic Analyzer 3500 (Hitachi) với BigDyeTM Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, Mỹ) 2.4 Phân tích kết giải trình tự lồi (Hebert et al., 2003) Sau đó, trình tự gen mtCOI hiệu chỉnh kích thước 561 bp để xây dựng phát sinh loài phần mềm MEGA 6.0 (Tamura et al., 2013) KẾT QUẢ 3.1 Thu mẫu phân dòng Moina spp Trình tự nucleotide đồng trình tự xi ngược mẫu xác định công cụ Align Sequence phần mềm SnapGene® 2.3.2 (GSL Biotech; snapgene.com) Các trình tự so sánh với liệu ngân hàng gen NCBI công cụ giải thuật so sánh chuỗi sinh học (Blast) để định danh loài Moina sp Các lồi có tương đồng trình tự nucleotide ≥ 97% xác định Bảng 1: Địa điểm thu thập mẫu Moina spp STT Vùng địa lý Xã Tân Thạch, huyện Châu Thành, tỉnh Bến Tre Phường 6, Tp Cao Lãnh, tỉnh Đồng Tháp Xã Phú Thuận, huyện Hồng Ngự, tỉnh Đồng Tháp Mẫu nước có chứa Moina spp thu tám vùng địa lý thuộc năm tỉnh, thành thuộc khu vực ĐBSCL với tổng số 22 mẫu nước thu (tương ứng 22 ao) Sau bố trí theo phương pháp nêu 2.1, kết thu gồm 66 mẫu Moina sp hóa phát triển đủ số lượng để tiến hành định danh (Bảng 1) Số mẫu nước Ký hiệu mẫu nước (1,2,3: ao 1, 2, 3) Các mẫu Moina sp dùng để định danh hình thái marker phân tử BT1; BT2; BT3 BT1.4; BT1.5; BT1.6; BT2.1; BT2.9; BT3.2; BT3.8; BT3.9 CL1; CL2; CL3 HN1; HN3 HN2; CL1.1; CL1.2; CL1.3; CL1.5; CL1.9; CL1.10; CL3.1; CL3.2 HN1.1; HN1.3; HN1.5; HN1.6; HN1.8; HN1.9; HN1.10; HN2.2; HN2.4; HN2.5; HN2.6; HN2.7; HN3.1; HN3.3; HN3.4; HN3.9; CL1.6; HN1.7; HN2.3; HN2.9; Xã Vĩnh Trạch, huyện TS1.1; TS1.3; TS1.6; TS2.5; TS2.7; Thoại Sơn, tỉnh An TS1; TS2; TS3 TS3.1; TS3.3; TS3.9; TS3.10 Giang Thị trấn Cái Dầu, huyện CP1.2; CP1.4; CP1.5; CP2.4; CP2.8; Châu Phú, tỉnh An CP1; CP2; CP3 CP3.3; CP3.5; CP3.8 Giang Phường Thới An, Q Ô OM1; OM2 OM1.2; OM1.3; OM1.6; OM2.5; OM2.6 Môn, Tp Cần Thơ Phường Tân Lộc, Q TN1.2; TN1.5; TN1.8; TN2.2; TN2.4; TN1; TN2; TN3 Thốt Nốt, Tp Cần Thơ TN3.7 Xã Tân Thành, huyện LA1; LA2 LA1; LA2 Mộc Hóa, tỉnh Long An 3.2 Định danh Moina spp phương thái tương tự M micrura phần đầu lõm không pháp hình thái có lơng tơ, chóp đầu nhơ cao, mắt to cách xa chóp đầu (Kurz, 1874) (Hình 2) 5/66 mẫu lại Kết định danh hình thái cho thấy có hai lồi khơng xác định lồi đặc điểm hình thái có Moina sp diện phổ biến, bao gồm Moina tương đồng loài M macrocopa loài M macrocopa Moina micrura Trong đó, 5/66 mẫu micrura, cụ thể phần đầu trịn khơng có lơng tơ, có hình thái tương tự M macrocopa phần đầu mắt nhỏ sát chóp đầu phần đầu lõm có trịn, có nhiều lông tơ mảnh đầu, mắt sát với lông tơ, mắt chóp đầu sát (Hình 3) chóp đầu (Straus, 1980) (Hình 1); 56/66 mẫu có hình 38 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ a 100 µm 50 µm Tập 54, Số chuyên đề: Thủy sản (2018)(2): 36-44 d 50 µm g 50 µm c b 50 µm e f 50 µm h 50 µm i Hình 1: Đặc điểm hình thái Moina macrocopa (Straus, 1980) a Tồn thể nhìn từ mặt lưng; b Tồn thể nhìn từ phần bên; c Phần đầu mắt ; d Lông tơ phần đầu; e Gai bụng; f Phần chẻ đôi râu; g Đôi râu lông tơ râu; h Gai chân nhảy; i Phần 100 µm 50 µm 50 µm a 100 µm d 50 µm e 50 µm h g b c 100 µm 50 µm 50 µm f i Hình 2: Đặc điểm hình thái Moina micrura (Kurz, 1874) a Tồn thể nhìn từ mặt lưng; b,c Cá thể Moina micrura nhìn từ mặt bên; d Đầu khơng có lơng tơ, đồng thời có mắt to; e Phần chẻ đôi râu; f Bào tử; g Gai bụng; h Gai chân nhảy; i Phần đuôi 39 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ a 100 µm 50 µm d Tập 54, Số chuyên đề: Thủy sản (2018)(2): 36-44 50 µm b 100 µm 50 µm e 100 µm c f Hình 3: Đặc điểm hình thái nhóm Moina spp khơng xác định lồi a,b,c Hình thái tương tự M macrocopa, phần đầu trịn, mắt chóp đầu sát lại khơng có lơng tơ phần đầu; d,e Phần đầu giống M micrura lại khơng lõm sâu, mắt với chóp đầu sát nhau, có lơng tơ phần đầu; f M macrocopa (trên) M micrura (dưới) OM2.6 TN1.5 OM2.5 OM1.6 OM1.3 OM1.2 HN3.9 HN3.4 HN3.3 HN2.9 HN2.6 HN2.4 HN1.10 HN1.9 HN1.8 HN1.7 HN1.6 HN1.3 HN1.1 CL3.2 CL3.1 CL1.10 CL1.6 CL1.2 BT2.9 BT2.1 BT 3.8 TN1.8 CP 3.3 CP3.5 I CL1.9 Belgium (M micrura KC479042.1) CL1.5 CP 1.2 CP 1.5 CP2.4 BT1.4 BT1.6 CL1.1 HN2.2 HN2.5 TS 2.7 TS3.3 TS3.9 II III HN2.7 Russia (Moina cf micrura KX168555.1) IV LA1 TS 2.5 TS1.3 TS1.6 Thailand (M macrocopa HM236481.1) V 0.02 Hình 4: Mối quan hệ phát sinh lồi mẫu Moina sp thu thập nghiên cứu mô tả NJ (Neighbour - joining) dựa trình tự 561 bp gen mtCOI Moina sp 40 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 54, Số chuyên đề: Thủy sản (2018)(2): 36-44 3.3 Định danh Moina spp marker phân tử Thơ) 13 mẫu Hồng Ngự (Đồng Tháp), sáu mẫu Cao Lãnh (Đồng Tháp), ba mẫu Châu Thành (Bến Tre) hai mẫu Châu Phú (An Giang) Các mẫu có mối quan hệ di truyền gần với lồi M micrura (KC479042.1) phân lập Bỉ năm 2013 Blast ngân hàng gen NCBI cho thấy chúng tương đồng đến 99% Hầu hết mẫu Moina sp nhóm I có trình tự gen tương đồng với nhau, riêng ba mẫu CP3.3, CP3.5 CL1.9 có khác biệt nucleotide vị trí 33, 225, 462, 543 (Hình 5) Tuy nhiên, sai khác không đáng kể nên chúng xếp nhóm Trong tổng số 66 mẫu Moina sp sau ly trích DNA có 48 mẫu Moina sp khuếch đại thành công gen mtCOI cặp mồi LCO1490/HCO2198 để giải trình tự Kết phân tích mối quan hệ phát sinh lồi đưa năm nhóm trình tự mtCOI tương đương với năm nhóm Moina sp (Hình 4) Sự khác nhóm Moina sp phân lập thể thông qua khác vị trí nucleotide vùng trình tự 561 bp gen mtCOI (Bảng 2) Các mẫu Moina sp thuộc nhóm I bao gồm: hai mẫu Thốt Nốt (Cần Thơ), năm mẫu Ơ Mơn (Cần Hình 5: So sánh tương đồng trình tự gen mtCOI mẫu CL1.9, CP3.3, CP3.5 với mẫu M micrura khác thuộc nhóm I (An Giang) có trình tự gen mtCOI khơng tương đồng với bốn lồi Moina sp (M micrura, M macrocopa, M brachiata M affinis) công bố NCBI Trong nhóm này, vị trí nucleotide 27, 36, 49, 53 gen mtCOI mẫu Moina sp phân lập Châu Phú (An Giang), có khác biệt so với mẫu Moina sp CL1.5 phân lập Cao Lãnh (Đồng Tháp) (Hình 6) Các mẫu Moina sp nhóm II bao gồm: mẫu huyện Hồng Ngự (Đồng Tháp); mẫu huyện Cao Lãnh (Đồng Tháp); mẫu huyện Châu Thành (Bến Tre) mẫu huyện Thoại Sơn (An Giang) Trình tự gen nhóm II tương đồng 85% với lồi M micrura phân lập Bỉ năm 2013 (KC479042.1) Bốn mẫu Moina sp thuộc nhóm III gồm: mẫu Cao Lãnh (Đồng Tháp), ba mẫu Châu Phú Hình 6: So sánh tương đồng trình tự gen mtCOI mẫu CL1.5 với mẫu CP1.2, CP1.5, CP2.4 Moina cf micrura phân lập Nga (2011) (KX168555.1) Nhóm IV có mẫu Moina sp HN2.7 phân lập Hồng Ngự (Đồng Tháp) Kết Blast cho thấy trình tự gen mtCOI mẫu Moina HN2.7 khơng tương đồng với trình tự mtCOI bốn lồi Moina sp (M micrura, M macrocopa, M brachiata M affinis) công bố NCBI lại tương đồng đến 99% với trình tự lồi Bốn mẫu Moina sp thuộc nhóm V gồm: mẫu Mộc Hóa (Long An) ba mẫu Thoại Sơn (An Giang) có trình tự gen mtCOI tương đồng tương đồng 99% với dòng M macrocopa (HM236481.1) phân lập Thái Lan (2016) 41 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 54, Số chuyên đề: Thủy sản (2018)(2): 36-44 Bảng 2: Các vị trí sai khác nucleotide vùng trình tự mtCOI (561 bp) 48 mẫu Moina sp sử dụng nghiên cứu Haplotype Trình tự tương đồng BT2.1 BT2.9 BT3.8 CL1.2 CL1.6 CL1.9 CL1.10 CL3.1 CL3.2 CP3.3 CP3.5 HN1.1 HN1.3 HN1.6 HN1.7 I HN1.8 HN1.9 HN1.10 HN2.4 HN2.6 HN2.9 HN3.3 HN3.4 HN3.9 OM1.2 OM1.3 OM1.6 OM2.5 OM2.6 TN1.5 TN1.8 BT1.4 BT1.6 CL1.1 HN2.2 II HN2.5 TS2.7 TS3.3 TS3.9 CL1.5 CP1.2 III CP1.5 CP2.4 IV HN2.7 LA1 TS1.3 V TS1.6 TS2.5 5 T G G G G G G G T A A A A A A A A A A 1 A G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G T C C C C T A A A A T C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A T T T T A T T T T A G T A A A A A A A A A Vị trí nucleotide 3 G T C A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A T T A T T A T T A T T A A T G A T A T A T A T G A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A C T T T T T C T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T T 8 A G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G G C T C 3 A A G G G G T C C C C C Các vị trí nucleotide giống mô tả dấu chấm 3.4 So sánh kết định danh Moina sp phương pháp hình thái marker phân tử danh hai phương pháp: thơng qua hình thái marker phân tử Kết định danh hai phương pháp trình bày Bảng Trong nghiên cứu này, 48 mẫu Moina sp định 42 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 54, Số chuyên đề: Thủy sản (2018)(2): 36-44 Bảng 3: So sánh kết định danh phương pháp hình thái marker phân tử micrura Bỉ (KC479042.1) nên xem nhóm lồi Moina sp mới, chưa công bố ngân hàng NCBI Hình thái 39/48 M micrura Marker phân tử 31/48 M micrura (nhóm I) 8/48 Moina sp (nhóm II) 5/48 Khơng xác 4/48 Moina sp (nhóm III) định 1/48 Moina sp (nhóm IV) 4/48 M macrocopa 4/48 M macrocopa (nhóm V) Sự phân bố địa lý nhóm Moina sp ghi nhận nghiên cứu Các nhóm Moina sp khơng phân bố tỉnh, thành thu mẫu Kết cụ thể sau, M micrura nhóm I có mặt hầu hết vùng địa lý thu mẫu khu vực ĐBSCL Trong mẫu nước thu Mộc Hóa (Long An) khơng thấy xuất M micrura Trong đó, mật độ xuất loài M macrocopa thấp, diện 2/8 vùng địa lý khảo sát Thoại Sơn (An Giang) Mộc Hóa (Long An) Các nhóm Moina sp chưa xác định xác lồi (nhóm II, III IV) tìm thấy 3/5 tỉnh thành: An Giang, Đồng Tháp, Bến Tre Một số mẫu Moina sp thuộc ba nhóm phát ao nuôi với M micrura (mẫu HN 2.2, HN 2.5, CL 1.1, CL 1.5) M macrocopa (mẫu TS 2.7) Điều cho thấy tùy theo điều kiện môi trường ao ni vùng địa lý, lồi Moina sp phù hợp thường chiếm ưu Kết nghiên cứu làm sở cho nghiên cứu đa dạng lồi Moina sp địa phương, góp phần chọn dòng Moina sp tăng trưởng tốt giàu dinh dưỡng phục vụ cho quy trình ương nuôi giống thủy sản THẢO LUẬN Căn vào trình tự gen mtCOI, 48 mẫu Moina sp thu thập nghiên cứu phân thành năm nhóm, 31 mẫu nhóm I (64,6%) thuộc lồi M micrura, bốn mẫu nhóm V (8,3%) có quan hệ di truyền gần với loài M macrocopa, mẫu thuộc nhóm II, bốn mẫu thuộc nhóm III mẫu thuộc nhóm IV (27,1%) chưa xác định xác lồi Theo giả thuyết, mẫu Moina sp có khác biệt trình tự gen mtCOI lớn 3% xem khác loài (Hebert et al., 2003) Do đó, mẫu Moina sp thuộc nhóm II, III loài Moina khác với bốn loài Moina sp (M micrura, M macrocopa, M brachiata M affinis) công bố NCBI Riêng mẫu Moina HN2.7 nghiên cứu mẫu Moina cf micrura phân lập Nga năm 2011 (KX168555.1) có tương đồng cao (99%) trình tự mtCOI nên chúng xác định lồi Tuy nhiên, nhóm tác giả Nga so sánh trình tự Moina sp KX168555.1 với lồi M micrura chưa xác định xác tên loài Moina sp Mặc dù nghiên cứu này, tồn đồng thời hai loài M micrura M macrocopa ao nuôi chưa ghi nhận, số mẫu nước ao có diện lúc ba nhóm Moina sp khác nhau, M micrura nhóm I (CL1.2, CL1.6, CL1.10) Moina sp nhóm III (CL1.5) Moina sp nhóm II (CL1.1) mẫu nước ao CL1 thu Cao Lãnh (Đồng Tháp) Moina sp nhóm II (HN2.2, HN 2.5), M micrura nhóm I (HN 2.4, HN2.6 HN 2.9) Moina sp nhóm IV (HN2.7) mẫu nước ao HN2 thu Hồng Ngự (Đồng Tháp) Kết cho thấy nhận định xác lồi Moina mang tính đặc hữu vùng địa lý chưa thể rõ nghiên cứu Tương tự, sau phân tích 160 mẫu Moina sp., Bekker et al., (2016) nhận thấy ranh giới địa lý xác lồi/nhóm Moina sp chưa rõ ràng, đặc biệt lồi M branchiate phân bố rộng rãi từ miền Nam đến miền Bắc Trung Quốc Có thể với lượng mẫu lớn hơn, dịng/ lồi Moina sp đặc hữu cho số vùng địa lý ghi nhận (Bekker et al., 2016) Trong nghiên cứu này, có 18/66 mẫu Moina sp khơng giải trình tự, lý chưa khuếch đại đoạn gen mtCOI với cặp mồi LCO1490/HCO2198 khơng tìm nhiệt độ bắt cặp phù hợp cho mẫu Moina sp Vấn đề tác giả Bekker et al (2016) đề cập nghiên cứu Việc định danh Moina sp thơng qua hình thái cịn nhiều hạn chế, hình thái tiềm ẩn bị bỏ sót, số hình thái khơng thể rõ biểu giai đoạn sinh trưởng Moina Trong việc sử dụng marker phân tử cho kết rõ ràng dễ phân tích so với việc quan sát hình thái, vốn phương pháp địi hỏi tỉ mỉ giàu kinh nghiệm người thực Điều ghi nhận nghiên cứu tại, kết định danh loài Moina sp hai phương pháp (quan sát hình thái sử dụng marker phân tử) tương đối giống khác số mẫu ghi nhận Cụ thể mẫu Moina sp nhóm II xác định thuộc lồi M micrura vào hình thái, nhiên, định danh marker phân tử trình tự gen mtCOI mẫu tương đồng 85% với M KẾT LUẬN Trong nghiên cứu này, phương pháp định danh Moina sp marker phân tử DNA barcode ứng dụng 48 mẫu Moina sp thu thập năm tỉnh, thành thuộc khu vực ĐBSCL xác định diện năm nhóm Moina sp 43 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Tập 54, Số chuyên đề: Thủy sản (2018)(2): 36-44 Trong đó, nhóm I thuộc lồi M micrura có tần suất cao (64,58%), nhóm V thuộc lồi M macrocopa (chiếm 8,33%); nhóm II (16,67%), III (8,33%) IV (0,02%) lồi Moina sp chưa cơng bố trình tự mtCOI NCBI Để đánh giá đầy đủ tính đại diện loài Moina sp khu vực tìm nhóm/dịng Moina sp có ưu sức tăng trưởng hàm lượng dinh dưỡng để chọn lọc hóa phục vụ cho cơng tác ương nuôi động vật thủy sản cần triển khai việc thu thập thêm mẫu Moina spp vùng địa lý khác mốc thời gian khác Ngoài ra, nhóm Moina sp chưa công bố ngân hàng gen NCBI, thông tin thêm hình thái lẫn di truyền cần bổ sung để định danh lồi cách xác Hiện nay, cặp mồi PCR đặc hiệu dùng để định danh lồi Moina sp chưa cơng bố Do đó, dựa khác biệt trình tự gen mtCOI nhóm/lồi Moina sp., cặp mồi đặc hiệu cho nhóm/lồi cần thiết kế để định danh nhanh xác TÀI LIỆU THAM KHẢO Bekker, E I., Karabanov, D P., Galimov Y R and Kotov A A., 2016 DNA barcoding reveals high cryptic diversity in the North Eurasian Moina species (Crustacea: Cladocera) PLos One, 11(8): e0161737.doi:10.1371/journal.pone.0161737 Cox, A J and Hebert, P D N., 2001 Colonization, extinction and phylogeographic patterning in a freshwater crustacean Molecular Ecology, 10(2): 371-386 Folmer, O., Black, M., Hoeh, W., Lutz, R and Vrijenhoek, R , 1994 DNA primers for amplification of mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I from diverse metazoan invertebrates Molecular Marine Biology and Biotechnology, 3(5): 294-299 Hebert, P D N., Cywinska, A., Ball, S L and deWaard, J R., 2003 Biological identifications through DNA 44 barcodes Proceedings of the royal society B: Biological sciences 270(1512): 313-321 Islam, M R., Hassan, M R., Begum, M., Punom, N J., Begum, M K., Sultana, N and Rahman, M S., 2017 Effects of feeding zooplankton, Moina macrocopa (Straus, 1820 ) on the growth of Nile tilapia Oreochromis niloticus L Bangladesh Journal of Scientific and Industrial Research, 52(2): 81-88 Knowlton, N and Weigt, L A., 1998 New dates and new rates for divergence across the isthmus of Panama Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences, 265(1412): 2257-2263 Kotani,T., Imari, H., Miyashima, A and Fushimi, H., 2016 Effects of feeding with frozen freshwater cladoceran Moina macrocopa on the performance of red sea bream Pagrus major larviculture Aquaculture International, 24(1): 183-197 Olojo, E A A., Olurin, K B and Osikoya, O, J., 2003 Food and feeding habits of Synodontis nigrita from the Osun river, South West Nigeria, Naga Worldfish Center Quarterly, 26(4): 21-24 Rottmann, R W., Graves, J S., Watson, C and Yanong, R P E., 2003 Culture techniques of Moina: The ideal Daphnia for feeding to freshwater fish fry CIR 1054/FAO24, pp 2-9 Tamura, K., Stecher, G., Peterson, D., Filipski, A and Kumar, S., 2013 MEGA6: Molecular evolutionary genetics analysis version 6.0 Molecular Biology and Evolution, 30(12): 2725-2729 Vũ Ngọc Út, 2011 Vai trò thức ăn tự nhiên nuôi trồng thủy sản, truy cập ngày 18 tháng 07 năm 2017 Địa chỉ: http://uvvietnam.com.vn/NewsDetail.aspx?newsId=775 Vũ Ngọc Út Dương Thị Hồng Oanh., 2013 Giáo trình động thực vật thủy sinh Nhà xuất Đại học Cần Thơ Thành phố Cần Thơ, 342 trang Wares, J P and Clifford W C., 2001 Phylogeography and historical ecology of the north atlantic intertidal Evolution, 55(12): 2455-2469 Witty L M., 2004 Practical guide to identifying freshwater crustacean zooplankton, second edition Canada, 60 pages Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 3/2019 THÔNG BÁO KHOA HỌC NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA THỨC ĂN TỚI KHẢ NĂNG SẢN XUẤT KÉN VÀ CÁC YẾU TỐ BẢO QUẢN TỚI TỶ LỆ NỞ CỦA TRỨNG NGHỈ Moina micrura KURZ, 1874 STUDY ON THE EFFECTS OF FEED TO THE COMBINED PRODUCTION EPHIPPIA AND STORAGE FACTORS TO THE RATE OF RESTING EGGS Moina micrura KURZ, 1874 Lê Văn Hậu¹, Nguyễn Thành An², Lê Lưu Phương Hạnh¹ Ngơ Huỳnh Phương Thảo¹ Ngày nhận bài: 30/6/2019; Ngày phản biện thông qua: 10/9/2019; Ngày duyệt đăng: 28/9/2019 TĨM TẮT Moina micrura lồi giáp xác sinh sản đơn tính tìm thấy phổ biến Đồng sông Cửu Long, Việt Nam (Lê Văn Hậu cộng sự, 2018) Trong điều kiện bất lợi, Moina sinh kén (túi chứa trứng nghỉ) (Dodson et al, 2010) Trong trứng nghỉ nhiều loại động vật phù du như: Artermia, Daphnia, Rotifer sử phổ biến giới nhiều thập kỷ qua, nhiên trứng nghỉ M micrura chưa nghiên cứu nhiều lý khó sản xuất thương mại tỉ lệ nở thấp Trong nghiên cứu này, loại thức ăn điều kiện môi trường (pH, nhiệt độ) nhằm sản xuất bảo quản kén Moina nghiên cứu M mirura nuôi loại thức ăn khác nhau: Cám gạo, men bánh mì tảo Scenedesmus sp Mật độ M micrura bố trí ban đầu cho nghiệm thức 200 ct/L; Kết cho thấy số lượng kén cao nghiệm thức nuôi cám gạo (180 ± 12 kén/L; P