Ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng thực vật đến sinh trưởng và trao đổi chất của tảo chlorella vulgaris beijerinck 1890

BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TPHCM TRUNG TÂM NGHIÊN CƢ́U VÀ PHÁ T TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG THỰC VẬT ĐẾN SINH TRƯỞNG VÀ TRAO ĐỔI CHẤT CỦA TẢO Chlorella vulgaris (Beijerinck 1890) CHỦ NHIỆM NDNC (Ký tên) Ks Trương Thị Thuý Hằng Ks Võ Hoàng Nhu CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) (Ký tên/đóng dấu xác nhận) i TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Mục đích nghiên cứu nhằm đánh giá ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng thực vật lên sinh trưởng trao đổi chất tảo Chlorella vulgaris(C.vulgaris) Nghiên cứu thực chất kích thích sinh trưởng gồm NAA, IAA, IBA với nồng độ từ 0,05 µM đến µM Tảo C.vulgarisđược ni môi trường F/2, độ mặn 25‰ Kết cho thấy hai loại auxin NAA IAA nồng độ 0,5 µM có tác dụng thúc đẩy tăng trưởng tảo cao nhất, IBA có ảnh hưởng cao nồng độ 0,1 µM Nồng độ NAA 0,5 µM kích thích C.vulgaris sinh trưởng cao vào ngày ni thứ đạt mật độ cực đại 16,14 ± 1,65 (106tb/ml), sinh khối khô 6,19 ± 1,39 (mg/ml), hàm lượng protein 51,05 %, lipid chiếm 9,05 % sinh khối khô tảo Tảo C.vulgaris nuôi hệ thống tấm, sử dụng môi trường F/2, pH từ – 8,5; nồng độ muối 25 ppt, cường độ chiếu sáng 60 µmol/m2s, nhiệt độ 280C cho kết đạt sinh khối cao vào ngày thứ với mật độ tế bào đạt 10,09 ± 2,57 (106tb/ml), sinh khối khô 1,29 ± 0,05 (mg/ml) ii MỤC LỤC Trang phụ bìa i Tóm tắt ii Mục lục iii Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình vẽ viii THƠNG TIN ĐỀ TÀI MỞ ĐẦU CHƢƠNG - TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm sinh học tảo C.vulgaris 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3 Đặc điểm sinh trưởng 1.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến tốc độ sinh trưởng C.vulgaris 1.3 Các phương pháp nuôi sinh khối tảo 1.3.1 Nuôi mẻ 1.3.2 Nuôi liên tục 1.3.3 Nuôi bán liên tục 1.3.4 Nuôi hệ thống 1.4 Các chất kích thích sinh trưởng 1.4.1 Auxin 1.4.2 Cytokinin 13 1.4.3 Gibberellin 16 1.5 Một số cơng trình nghiên cứu tác động chất kích thích 18 sinh trưởng thực vật lên tảo C.vulgaris CHƢƠNG 2- NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 21 2.2 Nội dung nghiên cứu 21 2.3 Vâ ̣t liê ̣u nghiên cứu 21 iii 2.3.1 Đối tượng thí nghiệm 21 2.3.2 Dụng cụ nguyên vật liê ̣u thí nghiê ̣m 21 2.4 Phương pháp nghiên cứu và bố trí thí nghiê ̣m 21 2.4.1 Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng chất kích thích 21 sinh trưởng thực vật đến tảo C.vulgaris 2.4.1.1.Đánh giá ảnh hưởng NAA đến sinh trưởng phát 22 triển tảo C.vulgaris 2.4.1.2.Đánh giá ảnh hưởng IAA đến sinh trưởng phát 22 triển tảo C.vulgaris 2.4.1.3.Đánh giá ảnh hưởng IBA đến sinh trưởng phát 23 triển tảo C.vulgaris 2.4.2 Nuôi sinh khối tảo C.vulgaris hệ thống 23 2.5 Các tiêu theo dõi thí nghiệm 24 2.5.1.Phương pháp xác định mật độ tế bào tảo 24 2.5.2.Phương pháp xác định trọng lượng khô tảo 24 2.5.3.Phương pháp xác định hàm lượng protein tổng số (phương 24 pháp Bradford) 2.5.4.Phương pháp xác định hàm lượng lipid tổng số 26 2.5.5 Phương pháp theo dõi yếu tố môi trường 26 2.6 Phương pháp xử lý số liệu 26 CHƢƠNG - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Đánh giá ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng 27 đến C.vulgaris 3.1.1 Các yếu tố chất lượng nước bể nuôi tảo 27 C.vulgaris 3.1.2 Đánh giá ảnh hưởng NAA đến sinh trưởng phát 27 triển tảo C.vulgaris 3.1.3 Đánh giá ảnh hưởng IAA đến sinh trưởng phát 29 triển tảo C.vulgaris 3.1.4 Đánh giá ảnh hưởng IBA đến sinh trưởng phát triển tảo C.vulgaris iv 32 3.2 Nuôi sinh khối tảo C.vulgaris hệ thống 35 CHƢƠNG - KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 39 4.1 Kết luận 39 4.2 Đề nghị 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 PHỤ LỤC 44 v DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT VIẾT TẮT THUẬT NGƢ̃ TIẾNG VIỆT CTV Cộng tác viên CKTST Chất kích thích sinh trưởng ĐC Đối chứng IAA Indole-3-acetic acid IBA Indole-3-butyric acid IM Indomethacin NAA 1-Naphthaleneacetic acid NT Nghiệm thức PAA Phenylacetic acid SKK Sinh khối khô vi DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 2.1 Lập đồ thị chuẩn dung dịch Albumin 25 3.1 Các yếu tố môi trường bể nuôi tảo C.vulgaris 27 3.2 Hàm lượng protein & lipid C.vulgaris chất kích thích sinh trưởng NAA 29 3.3 Hàm lượng protein & lipid C.vulgaris chất kích thích sinh trưởng IAA 31 3.4 Hàm lượng protein & lipid C.vulgaris chất kích thích sinh trưởng IBA 33 vii DANH SÁCH CÁC HÌNH TÊN HÌNH ẢNH Hình TRANG 1.1 Hình thái Vi tảo C.vulgaris Beijerinck 1890 1.2 Năm pha tăng trưởng nuôi vi tảo 2.1 Tảo C.vulgaris bình nhựa lít nồng độ chất kích 21 thích sinh trưởng 2.2 Hình thái tảo C.vulgaris q trình thí nghiệm 23 2.3 Tảo C.vulgaris nuôi hệ thống 23 3.1 Ảnh hưởng nồng độ chất kích thích sinh trưởng NAA đến 28 mật độ tế bào C.vulgaris 3.2 Ảnh hưởng nồng độ chất kích thích sinh trưởng NAA đến 28 sinh khối khô tảo C.vulgaris 3.3 Ảnh hưởng nồng độ chất kích thích sinh trưởng IAA đến 30 mật độ tế bào C.vulgaris 3.4 Ảnh hưởng nồng độ chất kích thích sinh trưởng IAA đến 30 sinh khối khô tảo C.vulgaris 3.5 Ảnh hưởng nồng độ chất kích thích sinh trưởng IBA đến 32 mật độ tế bào C.vulgaris 3.6 Ảnh hưởng nồng độ chất kích thích sinh trưởng IBA đến 32 sinh khối khô tảo C.vulgaris 3.7 Hàm lượng protein tảo C.vulgaris chất kích thích sinh 34 trưởng NAA, IAA, IBA 3.8 Hàm lượng lipid tảo C.vulgaris chất kích thích sinh 34 trưởng NAA, IAA, IBA 3.9 Mật độ tảo C.vulgaris nuôi hệ thống 35 3.10 Sinh khối tảo C.vulgaris nuôi hệ thống 35 viii THÔNG TIN ĐỀ TÀI Tên đề tài/dự án: “Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng thực vật đến sinh trưởng trao đổi chất tảo Chlorella vulgaris Beijerinck 1890” Chủ nhiệm đề tài/dự án: Ks Trương Thị Thúy Hằng & Ks Võ Hồng Nhu Cơ quan chủ trì: Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công Nghệ Cao, thành phố Hồ Chí Minh Thời gian thực hiện: từ tháng 1/2015 đến tháng 12/2015 Kinh phí duyệt: 144,406,000 đồng Mục tiêu: Xác định chất kích thích sinh trưởng nồng độ thích hợp thuộc nhóm auxin cho tăng trưởng vi tảo C.vulgaristrên môi trường dinh dưỡng F/2 nuôi sinh khối tảo C.vulgaris sinh trưởng tốt, đạt mật độ cao Sản phẩm đề tài /dự án: Quy trình ni tảo Chlorella vulgaris báo cáo khoa học MỞ ĐẦU Hiện nay, ngồi thức ăn nhân tạo nguồn thức ăn sống vi tảo biển đóng vai trị vơ quan trọng phát triển hầu hết đối tượng nuôi thủy sản Vi tảo biển giàu dinh dưỡng, rẻ tiền, dễ tiêu hóa nguồn cung cấp axít béo khơng bão hịa đa nối đơi (PUFAs-Polyunsaturated fatty acids) axít docosahexaenoic (DHA, C22:6n-3), axít eicosapentaenoic (EPA, C20:5n-3) axít arachidonic (AA, C20:4n-6) cần thiết cho phát triển vật nuôi giai đoạn ấu trùng Một số loài vi tảo biển sử dụng rộng rãi phổ biến làm thức ăn sống nuôi trồng thủy sản Isochrysis galbana, Chaetoceros gracilis, Chlorella vulgaris, Nannochloropsis oculata, Tetraselmis chuii.Trong đóC.vulgaris thường tìm thấy nước nước biển có chu kỳ tăng trưởng ngắn Lồi tảo phù hợp cho nghiên cứu sinh hóa, sử dụng để trực tiếp quan sát tác động hormone thực vật cấp độ tế bào (PiotrowskaNiczyporuk ctv, 2012).Nhóm chất auxin nghiên cứu có tác dụng kích thích q trình sinh trưởng, trao đổi chất tảo C.vulgaris nuôi môi trường Knope’s Tảo C.vulgaris nghiên cứu ghi nhận chúng sinh trưởng tốt nhiều mơi trường khác Trong điều kiện Việt Nam, nghiên cứu cửa Đặng Diễm Hồng (2011) xác định môi trường dinh dưỡng F/2 tốt cho phát triển tảo C.vulgaris Ngoài kết nghiên cứu ảnh hưởng auxin đến sinh trưởng trao đổi chất tảo thực với quy mơ phịng thí nghiệmchưa đưa vào sản xuất sinh khối.Xuất phát từ vấn đề nêu trên, tiến hành nghiên cứu “Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng thực vật đến sinh trưởng trao đổi chất tảo Chlorella vulgaris Beijerinck 1890” Dựa vào Hình 3.6 chúng tơi ghi nhận nồng độ 0,1 µM IBA tảo C.vulgaris đạt sinh khối cao vào khoảng 5,97 ± 1,02 (mg/ml) cao so với nồng độ lại µM; 0,05 µM; 0,5µM; 1µM; µM với sinh khối khô 4,32 ± 0,53; 4,65 ± 1,46; 3,95 ± 0,51; 4,21 ± 0,37; 4,39 ± 0,64 (mg/ml) Mặc dù khác biệt khơng có ý nghĩa mặt thống kê (p>0,05) nghiệm thức 0,1 tương đương với IBA nồng độ 0,1µM cho thấy tảo đạt sinh khối cao vào ngày thứ Bảng 3.4 Hàm lượng protein & lipid C.vulgaris chất kích thích sinh trưởng IBA Nồng độ (µM) (ĐC) 0,05 0,1 0,5 SKK (mg/ml) 4,32 4,65 5,97 3,95 4,21 4,39 protein (mg/ml) 0,78 1,12 2,03 1,07 1,39 0,92 lipid (mg/ml) 0,16 0,23 0,36 0,28 0,25 0,22 % % Protein/SKK lipid/SKK 18,06 3,70 24,09 4,95 6,03 34,00 27,09 7,09 33,02 5,94 20,96 5,01 Bảng 3.4 cho thấy hàm lượng protein loài tảo C.vulgaris ảnh hưởng nồng độ kích thích sinh trưởng IBA khoảng 18,06đến 34,00% sinh khối khô, lipid từ 3,70 đến 7,09% sinh khối khô Hàm lượng protein cao (34,00%) nồng độ 0,1µM, lipid cao (7,09 %) nồng độ 0,5µM Ở thí nghiệm này, chúng tơi nhận thấy kết có tương đồng với nghiên cứu Alicja Piotrowska năm 2014, C.vulgaris nuôi môi trường Knope’s Nồng độ auxin gồm IAA, IBA, PBA NAA Hai loại auxin IAA IBA nồng độ 0,1 µM có tác dụng thúc đẩy tăng trưởng tảo cao nhất, NAA PAA có ảnh hưởng mạnh µM Hàm lượng IAA IBA 0,1 µM NAA PAA µM làm tăng nồng độ sắc tố quang hợp, monosacarit protein hòa tan C.vulgaris (33% - 81%) ngày thứ ,thời gian mật độ đạt cực đại – ngày ngắn so với kết thí nghiệm chúng tơi nuôi môi trường F/2 (7 – ngày) 33 Hàm lượng protein (%/SKK) NAA IAA IBA 50 45 40 35 30 25 20 15 10 0 (ĐC) 0,05 0,1 0,5 (µM) Hình 3.7 Hàm lượng protein tảo C.vulgarisở chất kích thích sinh trưởng Hàm lượng lipid (%/SKK) NAA, IAA, IBA 10 NAA IAA IBA (ĐC) 0,05 0,1 0,5 (µM) Hình 3.8 Hàm lượng lipid tảo C.vulgarisở chất kích thích sinh trưởng NAA, IAA, IBA Dựa vào Hình 3.7 Hình 3.8 nhận thấy tiến hành nuôi tảo C.vulgarisở chất kích thích sinh trưởng khác (NAA, IAA, IBA) thí nghiệm sử dụng NAA cho kết cao hàm lượng protein, lipid so với thí nghiệm cịn lại Kết auxin (NAA, IAA, IBA) đóng vai trò quan trọng cho tăng trưởng trao đổi chất tảo C.vulgaristrong suốt q trình ni cấy Từ kết đạt thí nghiệm trên, chúng tơi chọn NAA với nồng độ 0,5µM cho tăng trưởng cao mật độ tế bào (16,14 ± 1,65x106tb/ml), sinh khối khô (6,19 ± 1,39mg/ml), hàm lượng protein lipid 34 (51,05 % & 9,05 %) làm sở thí nghiệm cho việc ni sinh khối tảo C.vulgaristrong hệ thống 3.2 Nuôi sinh khối tảo C.vulgaris hệ thống Mật độ tế bào (106 tb/ml) 12 10 9,58 10,09 8,21 7,88 4,93 3,81 3,58 0,74 Hình 3.9 Mật độ tảo C.vulgaris nuôi hệ thống Sinh khối tảo khô (mg/ml) 1,4 1,30 1,29 1,2 1,14 1,02 0,98 0,90 0,8 0,63 0,6 0,4 0,28 0,2 Hình 3.10 Sinh khối tảo C.vulgaris nuôi hệ thống Khi tiến hành nuôi sinh khối tảo C.vulgaris hệ thống tác động NAA nồng độ 0,5µM, mật độ ban đầu 105 (tb/ml) thu kết sau: Tảo C.vulgaris đạt cực đại vào ngày thứ 6, mật độ tế bào đạt 10,09 ± 2,57 (106tb/ml), sinh khối khô 1,29 ± 0,05 (mg/ml) Chúng nhận thấy rẳng, tiến hành ni sinh khối thể tích lớn thời gian tảo đạt mật độ cực đại ngắn mật độ tảo giảm so với lúc ni thể tích nhỏ Điều hồn tồn phù hợp với kết nghiên cứu nuôi sinh khối tảo Đồng thời để trì 35 nguồn tảo liên tục, tiến hành thu sinh khối tảo tảo đạt đỉnh sinh trưởng (pha logarit), tùy theo nhu cầu sử dụng thức ăn ấu trùng thủy sản mà lượng tảo C.vulgarisđược sản xuất cho phù hợp Kết thí nghiệm hồn tồn phù hợp với nghiên cứu Đặng Diễm Hồng ctv (2011), tảo C.vulgaristhích hợp phát triển mơi trường F/2, pH mơi trường thích hợp 7, nồng độ muối từ 25-30 ppt, cường độ chiếu sáng mức 100 µmol/m2s, nhiệt độ môi trường 28 - 300C 36 QUY TRÌNH NI TẢO Chlorella vulgaris Sơ đồ quy trình ni cấy Chlorella vulgaris: Nuôi trồng Chlorella vulgaris đĩa thạch (1) Ni trồng Chlorella vulgaris bình tam giác 100 ml (2) Ni trồng Chlorella vulgaris bình tam giác 250 ml (3) Nuôi trồng Chlorella vulgaris bình tam giác 500 ml (4) Ni trồng Chlorella vulgaris bình nhựa1lít (5) Ni trồng Chlorella vulgaris bình nhựa lít (6) Ni trồng Chlorella vulgaris hệ thống 40 – 50 lít (1) Cấy chuyển mẫu tảo Chlorella vulgaris bình tam giác 100 ml Sinh khối VTB Chlorella vulgaris giữ giống đĩa thạch cấy chuyển nuôi MT F/2 lỏng, độ mặn 25‰, cường độ chiếu sáng 60 µmol/m2s, pH MT = cấp độ bình tam giác 100ml, với MĐTB ban đầu đạt khoảng triệu TB/ml MĐTB cao đạt 10,2 triệu TB/ml sau 12 ngày nuôi cấy bình tam giác 100 ml (2) Cấy chuyển tảo Chlorella vulgaris từ bình tam giác 100 ml sang bình tamgiác 250 ml Sau 5-7 ngày ni cấy cấp độ bình tam giác 100 ml, sinh khối VTB Chlorellavulgaris cấy chuyển cách pha loãng mẫu theo tỉ lệ 70: 30, nuôi MT F/2 lỏng, độ mặn 25‰, cường độ chiếu sáng 60 µmol/m2s, pH MT=7 chuyển từ bình tam giác 100 ml sang bình tam giác 250 ml với MĐTB ban đầu đạt khoảng triệu TB/ml MĐTB cao đạt 12,3 triệu TB/ml sau 15 ngày nuôi cấy bình tam giác 250 ml 37 (3) Cấy chuyển tảo Chlorella vulgaris từ bình tam giác 250 ml sang bình tamgiác 500 ml Sau 4-5 ngày ni cấy cấp độ bình tam giác 250 ml, sinh khối vi tảo biển Chlerella vulgaris cấy chuyển cách pha loãng mẫu theo tỉ lệ 50: 50 MT F/2 lỏng, độ mặn 25‰, cường độ chiếu sáng 60 µmol/m2s, pH MT = từ bình tam giác 250 ml chuyển sang bình giác 500 ml cho MĐTB ban đầu đạt khoảng triệu TB/ml MĐTB cao đạt 14,9 triệu TB/ml sau 12 ngày nuôi cấy bình tam giác 500 ml (4) Cấy chuyển tảo Chlorella vulgaris từ bình tam giác 500 ml sang bình tamgiác lít Sau 5-7 ngày ni cấy cấp độ bình tam giác 500 ml, sinh khối VTB Chlorella vulgaris cấy chuyển cách pha loãng mẫu theo tỉ lệ 50: 50 nuôi MT F/2 lỏng, độ mặn 25‰, cường độ chiếu sáng 60 µmol/m2s, pH MT=7 chuyển từ bình tam giác 500 ml sang bình tam giác lít cho MĐTB ban đầu đạt khoảng triệu TB/ml MĐTB cao đạt 16,2 triệu TB/ml sau ngày ni cấy bình tam giác lít (5) Cấy chuyển tảo Chlorella vulgaris từ bình tam giác lít sang bình nhựa 5lít Sau 4-5 ngày ni cấy cấp độ bình tam giác lít, sinh khối VTB Chlorella vulgaris cấy chuyển cách pha lỗng mẫu theo tỉ lệ 30: 70 ni MT F/2 lỏng, độ mặn 25‰, cường độ chiếu sáng 60 µmol/m2s, pH MT=7 bình tam giác lít chuyển sang bình nhựa lít cho MĐTB ban đầu đạt khoảng triệu TB/ml MĐTB cao đạt 12,5 triệu TB/ml sau 5ngày ni cấy bình nhựa lít (6) Cấy chuyển tảo Chlorella vulgaris từ bình nhựa lít sang tấmkính Sau 3-4 ngày ni cấy cấp độ bình nhựa lít, sinh khối VTB Chlorella vulgaris cấy chuyển cách pha loãng mẫu theo tỉ lệ 30: 70 nuôi MT F/2 lỏng, độ mặn 25‰, cường độ chiếu sáng 60 µmol/m2s, pH MT=7 chuyển từ bình nhựa lít sang túi kính (40-50 lít) cho MĐTB ban đầu đạt khoảng triệu TB/ml MĐTB cao đạt 10,09 triệu TB/ml sau 5-6 ngày ni cấy túi kính suốt với thể tích 40 – 50 lít 38 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Kết auxin (NAA, IAA, IBA) đóng vai trị quan trọng cho tăng trưởng trao đổi chất tảo C.vulgaristrong suốt q trình ni cấy Tảo C.vulgaris ni mơi trường F/2, ảnh hưởng auxin gồm NAA, IAA, IBA từ 0đến µM Hai loại auxin NAA IAA nồng độ 0,5 µM có tác dụng thúc đẩy tăng trưởng tảo cao nhất, IBA có ảnh hưởng nồng độ 0,1 µM Nồng độ NAA 0,5 µM kích thích C.vulgaris sinh trưởng cao vào ngày thứ sau nuôi tảo đạt mật độ cực đại 16,14 ± 1,65 (106tb/ml), sinh khối khô 6,19 ± 1,39 (mg/ml), hàm lượng protein 51,05 %, lipid chiếm 9,05 % sinh khối khô tảo Tảo C.vulgaris đạt sinh khối vào ngày thứ với mật độ tế bào đạt 10,09 ± 2,57 (106tb/ml), sinh khối khô 1,29 ± 0,05 (mg/ml) nuôi môi trường F/2, pH từ – 8,5; nồng độ muối 25 ppt, cường độ chiếu sáng 60 µmol/m2s, nhiệt độ 280C 4.2 Đề nghị Kết nghiên cứu áp dụng vào thực tế chưa mang lại hiệu nên đề tài không tiếp tục thực đơn vị 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt [1] Dương Thị Hồng Oanh, Nguyễn Thị Kim Liên,Nghiên cứu kỹ thuật ni sinh khối tảo Spirulina platensis, Trường Đại học Cần Thơ, Kỷ yếu Hội nghị Khoa học thủy sản lần 4: 314-325 [2] Đặng Diễm Hồng(2011),Nghiên cứu xây dựng tập đoàn giống vi tảo biển quang tự dưỡng, dị dưỡng Việt Nam ni sinh khối số lồi tảo dị dưỡng làm thức ăn nuôi trồng thủy sản, Chương trình CNSH cấp nhà nước Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam [3] Nguyễn Minh Tuấn(2012),Nghiên cứu nuôi trồng vi tảo Chlorella vulgaris làm nguyên liệu sản xuất Biodiesel,Tạp chí Khoa học Công nghệ, số 10, 6/2012 [4] Trương Văn Lung(2004),Công nghệ sinh học số loài tảo kinh tế, NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội [5] Trương Vĩnh(2011),Nghiên cứu qui trình cơng nghệ sản xuất biodiesel từ vi tảo Việt Nam, Đề tài cấp B2008-12-06 [6] Võ Thị Kiều Thanh(2012),Ứng dụng tảo Chlorella sp Daphnia sp lọc chất thải hữu nước thải từ trình chăn ni lợn sau xử lý USAB,Tạp chí sinh học, 2012, 34(3SE): 145-153 Tài liệu tiếng anh [7] Alicja Piotrowska ctv(2008),The effect of indomethacin on the growth and metabolism of green alga Chlorella vulgaris Beijerinck Plant Growth Regul, 55:125–136 [8] Alicja Piotrowska ctv(2013),The effect of natural and synthetic auxins on the growth, metabolite content and antioxidant response of green alga Chlorella vulgaris (Trebouxiophyceae) Plant Growth Regul (2014), 73:57–66 [9] Anna Pietryczuk Romuald Czerpak(2011), Effect of traumatic acid on antioxidant activity in Chlorella vulgaris (Chlorophyceae) Plant Growth Regul (2011),65:279–286 40 [10]Anna Pietryczuk ctv (2013), Influence of traumatic acid on growth and metabolism of Chlorella vulgaris under conditions of salt stress Plant Growth Regul (2014) 73:103–110 [11]Attilio Converti ctv(2009), Effect of temperature and nitrogen concentration on the growth and lipid content of Nannochloropsis oculata and Chlorella vulgaris for biodiesel production Chemical Engineering and Processing 48, 1146–1151 [12]Basu S, Sun H, Brian L, Quatrano RL, Muday GK(2002),Early embryo development in Fucus distichus is auxin sensitive Plant Physiol 130:292–302 [13] Bing Xu ctv(2013),The effect of varying LED light sources and influent carbon/nitrogen ratios on treatment of synthetic sanitary sewage using Chlorella vulgaris World J Microbiol Biotechnol 29:1289-1300 [14] Bradford MM(1976),A rapid and sensitive method for the quantization of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding Anal Biochem 72:248–254 [15]Coutteau P.(1996), “Micro-algae” Manual on the production and use of live food for aquaculture, Patrick Sorgeloos (Eds) Published by Food and Agriculture Organization of the United Nation [16]Czerpak R, Bajguz A, Białecka B, Wierzchołowska LE, Wolan´ska MM(1994),Effect of auxin precursors and chemical analogues on the growth and chemical composition inChlorella pyrenoidosaChick Acta Soc Bot Pol 63:279– 286 doi:10.5586%2Fasbp.1994.038 [17] B Tamburic, F.W Zemichael, G.C Maitland, K Hellgardt(2008), Design of a novel flat-plate shotobioreactor system for green glgal hydrogen production.Proceedings of the WHEC, May 16.-21 2010 [18]E Sierra, F G Acien, J M Acien Fernández, J L Garcia, C Gonzalez, E Molina Grima, Characterization of a flat plate photobioreactor for the production of microalgae Chemical Engineering Journal, 2008 138(1-3), 136-147 [19]F Hadj-Romdhane ctv(2013),The culture of Chlorella vulgaris in a recycled supernatant: Effects on biomass production and medium quality Bioresource Technology 132 (2013) 285–292 41 [20]Hunt RW, Chinnasamy S, Das KC(2011),The effect of naphthalene acetic acid on biomass productivity and chlorophyll content of green algae, coccolithophore, diatom, and cyanobacterium cultures Appl Biochem Biotechnol 164:1350–1365 [21]Jin Q, Scherpa P, Heimannb K, Hasenstein KH(2008), Auxin and cytoskeletal organization in algae Cell Biol Int 32:542–545 [22]Lien T, Pettersen R, Knutsen G(1971),Effects of indole-3-acetic acid and gibberelin on synchronous cultures of Chlorella fusca Physiol Plant 24:185–190 doi:10.1111/j.1399-3054.1971.tb03476 [23]Melinda J Griffiths ctv(2013),The effect of nitrogen limitation on lipid productivity and cell composition in Chlorella vulgaris Appl Microbiol Biotechnol (2014) 98:2345–2356 [24]Melinda J Griffiths ctv (2014),The effect of degree and timing of nitrogen limitation on lipid productivity in Chlorella vulgaris.Appl Microbiol Biotechnol (2014) 98:6147–6159 [25]Mohammed Battah ctv(2015), Effect of Mn,Co and H2O2 on biomass and lipids of the green microalga Chlorella vulgaris as a potential candidate for biodiesel production Ann Microbiol (2015) 65:155–162 [26] Piotrowska-Niczyporuk A, Bajguz A, Zambrzycka E, Godlewska- Zyłkiewicz B (2012), Phytohormones as regulators of heavy metal biosorption and toxicity in green alga Chlorella vulgaris (Chlorophyceae) Plant Physiol Biochem 52:52–65 [27]Polevoi VV, Tarakhovskaya ER, Maslov YI, Polevoi AV(2003), Role of auxin in induction of polarity in Fucus vesiculosus zygotes.Russ J Dev Biol 34:360–364 [28]Sakakibara K, Nishiyama T, Sumikawa N, Kofuji R, Murata T,Hasebe M(2003), Involvement of auxin and a homeodomainleucine zipper I gene in rhizoid development of the moss Physcomitrella patens Development 130:4835–4846 [29]Senthil Chinnasamy ctv (2009), Biomass Production Potential of a Wastewater Alga Chlorella vulgaris ARC under Elevated Levels of CO2 and Temperature International Journal of Molecular Sciences2009, 10, 518-532 [30]Subhasha Nigam ctv(2011), Effect of Nitrogen on Growth and Lipid Content of Chlorella pyrenoidosa American Journal of Biochemistry and Biotechnology (3): 124-129 42 [31] Vance BD(1987), Phytohormone effects on cell division in Chlorella pyrenoidosa Chick (TX-7-11-05) (Chlorellaceae) J Plant Growth Regul 5:169–173 doi:10.1007/BF02087185 [32]Zahra Amini Khoeyi(2011), Effect of light intensity and photoperiod on biomass and fatty acid composition of the microalgae, Chlorella vulgaris Aquacult Int (2012) 20:41–49 [33] Yokoya NS, Handro W(1996), Effects of auxins and cytokinins on tissue culture of Grateloupia dichotoma (Gigartinales, Rhodophyta).Hydrobiologia 326(327):393–400 43 PHỤ LỤC PHỤ LỤC - Mật độ tảo C.vulgaris ảnh hưởng CKTST NAA nồng độ nuôi NAA 11 13 15 1,62 ± 0,02 7,96 ± 0,79 8,82 ± 0,10 9,78b ± 0,68 8,30 ± 0,69 5,23 ± 0,24 4,32 ± 0,52 3,25 ± 0,53 0,05 1,83 ± 0,22 6,61 ± 0,20 10,36 ± 1,53 10,88b ± 0,92 10,42 ± 0,85 8,62 ± 0,33 6,27 ± 0,51 4,59 ± 1,20 0,1 1,49 ± 0,03 8,02 ± 0,55 9,62 ± 1,28 10,47b ± 1,89 9,13 ± 0,75 7,32 ± 0,29 5,32 ± 1,07 4,01 ± 0,92 0,5 1,53 ± 0,20 10,68 ± 1,82 13,57 ± 2,05 16,14a ± 1,65 13,35 ± 0,52 11,89 ± 1,40 8,58 ± 0,22 4,73 ± 0,95 1,65 ± 0,12 5,725 ± 0,12 10,2 ± 0,12 12,96a ± 0,68 9,89 ± 0,01 7,35 ± 0,35 6,23 ± 0,22 4,73 ± 0,08 1,53 ± 0,07 7,58 ± 1,15 10,11 ± 0,29 12,05b ± 0,56 9,38 ± 0,06 8,73 ± 0,03 6,98 ± 0,17 4,63 ± 0,43 PHỤ LỤC - Mật độ tảo C.vulgaris ảnh hưởng CKTST IAA nồng độ nuôi IAA 11 13 15 1,59 ± 0,15 7,00 ± 1,08 8,42 ± 0,53 9,78a ± 0,40 8,33 ± 0,73 5,69 ± 0,58 4,36 ± 0,29 3,18 ± 0,58 0,05 1,73 ± 0,13 7,04 ± 0,58 9,34 ± 2,41 9,95a ± 1,73 9,12 ± 1,98 7,18 ± 1,57 6,15 ± 0,61 5,06 ± 0,79 0,1 1,58 ± 0,05 6,29 ± 0,47 9,11 ± 2,71 10,7a ± 1,23 9,88 ± 1,50 6,96 ± 1,97 5,99 ± 0,99 4,43 ± 1,41 0,5 1,7 ± 0,04 7,63 ± 1,65 10,87 ± 0,58 12,41a ± 0,89 12,68 ± 0,12 10,03 ± 0,42 8,68 ± 0,25 5,36 ± 0,81 1,65 ± 0,17 5,725 ± 0,17 10,2 ± 0,66 10,53a ± 1,43 9,59 ± 0,25 8,33 ± 0,51 6,36 ± 0,10 5,11 ± 0,41 1,58 ± 0,12 5,87 ± 0,33 8,66 ± 0,97 9,73a ± 1,44 8,73 ± 0,62 7,52 ± 1,02 6,41 ± 0,66 4,98 ± 0,13 PHỤ LỤC - Mật độ tảo C.vulgaris ảnh hưởng CKTST IBA nồng độ nuôi IBA 11 13 15 1,58 ± 0,09 6,82 ± 0,76 8,76 ± 0,10 9,49b ± 0,10 7,9 ± 0,69 5,73 ± 1,23 4,58 ± 0,10 3,06 ± 0,36 0,05 1,74 ± 0,09 6,8 ± 0,53 8,05 ± 0,24 9,72b ± 1,37 8,36 ± 0,66 6,58 ± 0,52 5,92 ± 0,20 4,75 ± 0,27 0,1 1,61 ± 0,07 6,7 ± 1,69 10,5 ± 052 12,8a ± 0,52 11,7 ± 1,47 8,92 1,10 7,78 ± 1,07 4,64 ± 0,38 44 0,5 1,59 ± 0,12 6,71 ± 1,62 8,32 ± 2,50 10,31b ± 1,40 9,85 ± 2,51 6,81 ± 3,00 6,21 ± 2,27 4,09 ± 1,50 1,68 ± 0,17 5,725 ± 0,17 10,2 ± 0,66 10,53b ± 1,43 9,59 ± 0,25 8,33 ± 0,51 6,36 ± 0,10 5,11 ± 0,41 1,58 ± 0,12 5,87 ± 0,33 8,66 ± 0,97 9,73b ± 1,44 8,73 ± 0,62 7,52 ± 1,02 6,41 ± 0,66 4,98 ± 0,13 PHỤ LỤC - Sinh khối tảo C.vulgaris ảnh hưởng CKTST NAA nồng độ ni Nồng độ (µM) NAA Ngày 0,05 0,1 0,5 0,8 ± 0,24 0,97 ± 0,26 0,84 ± 0,31 0,77 ± 0,31 0,85 ± 0,27 0,98 ± 0,05 3,02 ± 0,63 2,85 ± 0,71 3,14 ± 0,99 3,41 ± 1,34 3,46 ± 1,21 2,56 ± 0,89 4,07 ± 0,60 3,95 ± 0,89 4,17 ± 0,98 5,31 ± 1,47 4,76 ± 1,24 3,10 ± 0,59 4,99a ± 1,10 4,23a ± 1,58 4,84a ± 1,27 6,19a ± 1,39 4,86a ± 1,76 4,50a ± 0,64 4,51 ± 1,07 4,13 ± 1,85 4,56 ± 0,74 5,93 ± 1,45 3,98 ± 1,72 4,45 ± 0,75 11 3,80 ± 0,61 2,72 ± 0,89 3,61 ± 0,35 4,95 ± 1,21 3,26 ± 1,64 3,68 ± 0,81 13 3,71 ± 0,61 2,44 ± 1,00 2,77 ± 0,84 4,03 ± 1,20 2,54 ± 1,22 3,09 ± 0,65 15 2,99 ± 0,33 1,75 ± 0,55 2,36 ± 0,90 3,4 ± 1,01 2,43 ± 1,33 2,53 ± 0,41 PHỤ LỤC - Sinh khối tảo C.vulgaris ảnh hưởng CKTST IAA nồng độ ni Nồng độ (µM) IAA Ngày 0,05 0,1 0,5 0,66 ± 0,24 0,76 ± 0,12 0,78 ± 0,16 0,63 ± 0,17 0,67 ± 0,05 0,65 ± 0,24 2,51 ± 0,79 2,37 ± 1,39 2,9 ± 1,00 2,73 ± 1,29 3,29 ± 1,03 2,65 ± 1,02 3,21 ± 0,52 3,52 ± 0,88 4,11 ± 1,13 4,21 ± 0,98 3,97 ± 0,74 3,35 ± 0,71 3,57a ± 1,14 3,49a ± 1,73 4,56a ± 1,58 4,71a ± 1,26 4,32a ± 1,22 3,89a ± 1,63 3,28 ± 1,05 3,64 ± 1,90 4,47 ± 1,82 4,41 ± 0,86 4,22 ± 1,05 3,32 ± 1,11 11 3,07 ± 0,97 3,13 ± 1,91 4,21 ± 1,92 3,76 ± 0,28 3,11 ± 0,14 3,15 ± 1,10 13 2,82 ± 0,97 1,80 ± 2,29 3,26 ± 1,48 2,89 ± 0,74 2,43 ± 0,33 2,89 ± 1,06 15 2,38 ± 0,94 1,42 ± 1,90 2,49 ± 1,09 2,34 ± 0,91 1,97 ± 0,31 2,31 ± 0,86 45 PHỤ LỤC - Sinh khối tảo C.vulgaris ảnh hưởng CKTST IBA nồng độ ni Nồng độ (µM) IBA Ngày 0,05 0,1 0,5 0,8 ± 0,14 0,83 ± 0,12 0,81 ± 0,20 0,56 ± 0,05 0,89 ± 0,10 0,74 ± 0,20 3,02 ± 0,63 3,34 ± 1,11 3,46 ± 1,27 2,66 ± 0,72 2,91 ± 0,39 3,21 ± 0,94 3,40 ± 0,02 4,03 ± 0,63 4,57 ± 0,54 4,14 ± 1,12 3,92 ± 0,20 4,06 ± 0,50 4,32a ± 0,53 4,65a ± 1,46 5,97a ± 1,02 3,95a ± 0,51 4,21a ± 0,37 4,39a ± 0,64 3,98 ± 0,61 4,59 ± 1,70 5,71 ± 0,84 3,53 ± 0,22 4,04 ± 0,10 3,99 ± 0,27 11 3,72 ± 0,54 3,14 ± 1,37 4,43 ± 0,93 2,36 ± 0,05 3,51 ± 0,31 3,34 ± 1,00 13 3,36 ± 0,22 2,65 ± 1,63 3,83 ± 1,06 1,48 ± 0,08 3,23 ± 0,17 1,81 ± 0,52 15 2,86 ± 0,22 1,82 ± 1,24 3,04 ± 0,79 0,87 ± 0,29 2,91 ± 0,17 0,34 ± 0,14 PHỤ LỤC – Mật độ tảo C.vulgaris nuôi sinh khối nồng độ 0,5µM NAA NGÀY TB 0,74 3,58 4,93 8,21 9,58 10,09 7,88 3,81 SD 0,03 0,52 0,25 1,04 0,74 2,57 0,49 0,7 TB ± SD 0,74 ± 0,03 3,58 ± 0,52 4,93 ± 0,25 8,21 ± 1,04 9,58 ± 0,74 10,09 ± 2,57 7,88 ± 0,49 3,81 ± 0,7 PHỤ LỤC – Sinh khối tảo C.vulgaris nuôi sinh khối nồng độ 0,5µM NAA ngày TB 0,28 0,63 1,02 1,14 1,21 1,29 0,98 0,9 SD 0,003 0,043 0,019 0,01 0,046 0,277 0,38 TB ± SD 0.28 ± 0.00 0,63 ± 0,03 1,02 ± 0,04 1,14 ± 0,02 1,21 ± 0,01 1,29 ± 0,05 0,98 ± 0,28 0,90 ± 0,38 46 PHỤ LỤC - THÀNH PHẦN MÔI TRƢỜNG F/2 Dung dịch stock (g/L dH2O) Lƣợng sử dụng (mL) NaH2PO4.H2O Na2SiO3.9H2O 30 Dung dịch vi lượng * Dung dịch vitamin ** 0,5 Dung dịch stock (g/L dH2O) Lƣợng sử dụng FeCl3.6H2O - 3,15 Na2EDTA - 4,36 MnCl2.4H2O 180 1mL ZnSO4.7H2O 22 1mL CoCl2.6H2O 10 1mL CuSO4.5H2O 9,8 1mL Dung dịch stock (g/L dH2O) Lƣợng sử dụng Thiamin HCl (vitamin B1) - 200 mg Biotin (vitamin H) 1mL Cyanocobalamin (Vitamin B12) 1mL Thành phần Dung dịch vi lượng Thành phần **Dung dịch vitamin Thành phần 47