Nghiên cứu kiểm soát chất lượng sản phẩm pha chế theo đơn dùng qua đường tĩnh mạch tại bệnh viện nhi đồng 2

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - HỒNG THÙY LINH NGHIÊN CỨU KIỂM SỐT CHẤT LƯỢNG SẢN PHẨM PHA CHẾ THEO ĐƠN DÙNG QUA ĐƯỜNG TĨNH MẠCH TẠI BỆNH VIỆN NHI ĐỒNG Ngành: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT Mã số: 62720410 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC TP Hồ Chí Minh, năm 2022 Cơng trình hồn thành tại: Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Người hướng dẫn khoa học: GS.TS NGUYỄN ĐỨC TUẤN GS.TS LÊ QUAN NGHIỆM Phản biện 1: PGS.TS Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ Phản biện 2: PGS.TS Hoàng Minh Châu Phản biện 3: PGS.TS Trần Hữu Dũng Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp trường họp Khoa Dược - Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh vào hồi 14 00 ngày 12 tháng 01 Có thể tìm hiểu Luận án thư viện: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Thư viện Khoa học Tổng hợp TP HCM - Thư viện Đại học Y Dược TP HCM năm 2022 DANH MỤC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Hoàng Thùy Linh, Trịnh Hữu Tùng, Đoàn Vần Tuyền, Nguyễn Hoàng Thanh Tuyền, Nguyễn Thiện Hải, Lê Quan Nghiệm, Nguyễn Đức Tuấn (2019), “Thực trạng sử dụng đặc điểm hỗn hợp pha chế dịch truyền dinh dưỡng theo đơn bệnh viện nhi đồng năm 2017”, , 23 (2), tr 143 – 149 Hoang Thuy Linh, Trinh Xuan Tung, Trinh Huu Tung, Vo Quoc Bao, Le Thi Minh Hong, Pham Ngoc Thach, Nguyen Minh Ngoc, Luu Thanh Binh, Phan Trong Lan, Hoang Quoc Cuong, Nguyen Duc Hai, Nguyen Duy Long, Nguyen Thi Thu Phuong, Van Thi Thuy Linh, Pham Thi Mai Anh, Nguyen Thien Hai, Le Quan Nghiem, Nguyen Duc Tuan (2020), “Parenteral Nutrition Preparation Procedure: A Hazard Analysis and Critical Control Points Approach at a Pediatric Hospital in Vietnam”, Systematic reviews in pharmacy, 11(1), pp.159-164 Hoang Thuy Linh, Trinh Xuan Tung, Trinh Huu Tung, Vo Quoc Bao, Le Thi Minh Hong, Pham Ngoc Thach, Nguyen Minh Ngoc, Luu Thanh Binh, Phan Trong Lan, Hoang Quoc Cuong, Nguyen Duc Hai, Nguyen Duy Long, Nguyen Thi Thu Phuong, Van Thi Thuy Linh, Pham Thi Mai Anh, Nguyen Thien Hai, Le Quan Nghiem, Nguyen Duc Tuan (2020), “Risk of Microbiological Contamination when Preparing Total Parenteral Nutrition for Pediatric Patients: A Pilot Study at a Regional Hospital in Southern Vietnam”, Systematic reviews in pharmacy, 11(2), pp 1-5 Hoàng Thùy Linh, Lê Quan Nghiệm, Nguyễn Đức Tuấn (2021), “Khảo sát độ ổn định dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch”, Dược , T5/2021 (20), tr 8489 Hoàng Thùy Linh, Lê Quan Nghiệm, Nguyễn Đức Tuấn (2021), “Định lượng acid amin dung dịch nuôi ăn tĩnh mạch kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao” , Dược , T8/2021 (26), tr 56-64 1 GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Lý tính cần thiết nghiên cứu Pha chế thuốc theo đơn (PCTTĐ) phối hợp, trộn làm thay đổi thành phần thuốc theo định bác sĩ hàm lượng khối lượng để tạo phối hợp phù hợp cá thể bệnh nhân Những chế phẩm PCTTĐ đường tĩnh mạch, đặc biệt dịch truyền nuôi dưỡng nhân tạo ngồi đường tiêu hóa đóng vai trị quan trọng, có yêu cầu nghiêm ngặt chất lượng ảnh hưởng trực tiếp đến an tồn hiệu điều trị bệnh nhân Hiệu điều trị an toàn người bệnh phụ thuộc nhiều vào chất lượng dịch truyền, đặc biệt tính vơ khuẩn sản phẩm Cho đến nay, Cục quản lý thuốc thực phẩm Hoa Kỳ (FDA) Bộ Y tế Việt Nam chưa quy định thuốc pha chế theo đơn bệnh viện phải xét duyệt cấp phép lưu hành Những chế phẩm thực tế không đánh giá mặt vi sinh, tương tác thuốc, độ ổn định, sinh khả dụng, kiểm nghiệm, hạn dùng, bảo quản Vì vậy, chất lượng thuốc sau pha có ảnh hưởng đến q trình điều trị sức khỏe bệnh nhân hay không, câu hỏi lớn Hiện nay, số nước giới ban hành áp dụng tiêu chuẩn để kiểm soát chặt chẽ trình PCTTĐ bệnh viện Mỹ, liên minh Châu Âu, Canada, Úc ….Tại Việt Nam, chưa có văn pháp luật quy định cụ thể tiêu chí cho phịng PCTTĐ mà có quy định văn pháp quy luật Dược số 105/2016/QH13; Thông tư 22/2011/TT-BYT; Thông tư 35/2018/TT-BYT Thực hành tốt sản xuất thuốc, nguyên liệu làm thuốc, …, Nhìn định khơng thích hợp áp dụng cho sản phẩm PCTTĐ Bên cạnh đó, dự thảo Thơng tư quy định điều kiện sở khám bệnh, chữa bệnh phép phối hợp thuốc hóa dược để phục vụ nhu cầu điều trị sở yêu cầu khu vực pha chế cần phải có Thực hành tốt sản xuất (GMP) Tính đến thời điểm tại, khu vực hoạt động PCTTĐ sở y tế nói chung, bệnh viện Nhi đồng nói riêng chưa áp dụng cơng cụ phân tích rủi ro (hay mối nguy) để cải tiến hệ thống điểm kiểm soát tới hạn (HACCP)… Do đó, nguy tiềm ẩn chưa đánh giá kiểm soát phù hợp Các sản phẩm sau pha chế chưa có tiêu chuẩn để kiểm soát chất lượng, phương pháp kiểm nghiệm phù hợp, đảm bảo an toàn hiệu điều trị Hạn sử dụng sản phẩm sau pha chế chưa nghiên cứu đánh giá đầy đủ để đảm bảo hiệu chi phí điều trị Xuất phát từ khoảng trống quy định cho khu vực PCTTĐ, đề tài thực với mục đích nâng cao hiệu quả, chất lượng, ứng dụng công cụ HACCP cho khu vực PCTTĐ giúp tìm kiếm rủi ro ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm PCTTĐ xây dựng tảng khoa học để cải thiện quy trình phối hợp thuốc theo đơn bệnh viện, hạn chế rủi ro tương tác, tác dụng phụ kiểm soát chất lượng thuốc trình PCTTĐ Mục tiêu nghiên cứu Khảo sát nhu cầu sử dụng, thực trạng nguy PCTTĐ dùng qua đường tĩnh mạch bệnh viện Nhi đồng 2; Phân tích tài liệu khảo sát, đề xuất Bộ tiêu chí qui định PCTTĐ Việt Nam đánh giá tính khả thi Bộ tiêu chí bệnh viện Nhi đồng 2; Xây dựng tiêu chuẩn sở, thực pha chế, kiểm tra chất lượng, đánh giá độ ổn định dung dịch pha chế theo đơn dùng qua đường tĩnh mạch đại diện sở PCTTĐ bệnh viện Nhi đồng Đối tƣợng phƣơng pháp nghiên cứu  Nghiên cứu hồi cứu tiến cứu - Nhu cầu PCTTĐ năm 2017: định PCTTĐ, sản phẩm PCTTĐ định nhiều nhiều thành phần - Các nguy PCTTĐ: mơ tả quy trình, điều kiện thực PCTTĐ, áp dụng HACCP (Phân tích mối nguy điểm kiểm sốt tới hạn) để phân tích nguy PCTTĐ - Đánh giá thực trạng nhiễm vi sinh nơi PCTTĐ, kiểm chứng nguy có xảy khu vục PCTTĐ bệnh viện Nhi đồng 2, phân tích tính cần thiết có quy định cho cơng tác PCTTĐ bệnh viện để đảm bảo chất lượng sản phẩm pha chế  Phân tích tài liệu, khảo sát ý kiến - Phân tích quy định, tiêu chuẩn, tiêu chí, văn liên quan lĩnh vực PCTTĐ số quốc gia để chọn tiêu chí PCTTĐ phù hợp với Việt Nam - Khảo sát ý kiến chuyên gia quản lý Sở Y tế TP.HCM, sở y tế có triển khai cơng tác PCTTĐ TP/HCM - Đề xuất Bộ tiêu chí PCTTĐ Việt Nam - Áp dụng đánh giá tính khả thi Bộ tiêu chí bệnh viện Nhi đồng  Phân tích xây dựng phƣơng pháp - Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng thành phần sản phẩm PCTTĐ dùng qua đường tĩnh mạch đại diện bệnh viện Nhi đồng - Xây dựng tiêu chuẩn sở, kiểm tra chất lượng khảo sát độ ổn định chế phẩm PCTTĐ dùng qua đường tĩnh mạch Những đóng góp nghiên cứu mặt lý luận thực tiễn Các kết luận án có đóng góp sau cho lĩnh vực Khoa học Dược nói chung cho chuyên ngành Kiểm nghiệm thuốc Độc chất nói riêng: Bộ tiêu chí chất lượng áp dụng cho khu vực hoạt động pha chế thuốc theo đơn sở y tế Bộ tiêu chí bao gồm nội dung bản: nhân sự; quy định - quy trình; sở vật chất, trang thiết bị môi trường; công tác PCTTĐ bảo quản Bộ tiêu chí hướng dẫn xây dựng đánh giá khu vực PCTTĐ dễ sử dụng áp dụng cho đơn vị để nâng cao hiệu điều trị Bộ tiêu chí quy định PCTTĐ liệu khoa học giúp nhà quản lý chuyên gia tham khảo để đưa vào dược điển Việt Nam lần ban hành quy định dành cho khu vực PCTTĐ kiểm tra chất lượng chế phẩm PCTTĐ ngồi đường tiêu hóa sở y tế Tiêu chuẩn sở kết khảo sát độ ổn định hỗn hợp PCTTĐ đại diện bệnh viện Nhi đồng Hỗn hợp PCTTĐ có thành phần phức tạp định nhiều năm 2017 Bảng tiêu chuẩn sở Viện Kiểm nghiệm thuốc TP.HCM thẩm định Bố cục luận án Luận án gồm 148 trang: phần mở đầu trang, tổng quan tài liệu 35 trang, đối tượng phương pháp nghiên cứu 21 trang, kết nghiên cứu 66 trang, bàn luận 21 trang, kết luận kiến nghị trang Luận án có 60 bảng, 37 sơ đồ hình, có 96 tài liệu tham khảo, 14 tài liệu tiếng Việt 82 tài liệu tiếng Anh TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Pha chế thuốc theo đơn FDA, WHO, USP 43… định nghĩa phối hợp thuốc thực hành mà dược sĩ bác sĩ cấp phép pha trộn thay đổi thành phần thuốc để tạo loại thuốc phù hợp với nhu cầu bệnh nhân Nguy pha chế thuốc theo đơn Các thuốc miễn trừ tiêu chuẩn thực hành tốt đánh giá chất lượng tùy sở y tế FDA Bộ Y tế Việt Nam quy định thuốc phối hợp theo đơn bệnh viện qua xét duyệt lưu hành Do vậy, tính an tồn, hiệu độ ổn định chế phẩm không kiểm tra gây rủi ro cho bệnh nhân Một số tiêu chuẩn quy định hƣớng dẫn pha chế thuốc theo đơn Tiêu chuẩn pha chế thuốc theo đơn Mỹ: USP 43 Tiêu chuẩn pha chế thuốc theo đơn Châu Âu: Khung pháp lý Liên minh Châu Âu (EU) sản phẩm y tế (theo Hướng dẫn 2001/83/EC Quy định số 726/2004) Theo dược điển Quốc tế: hướng dẫn thực hành tốt dược điển (GPhP - Good Pharmacopoeial Practice) Canada, Úc Singapore…: tiêu chuẩn riêng dựa vào USP 43 Châu Âu Việt Nam: dự thảo thông tư năm 2018 tiếp tục xin ý kiến 2.2 Phân tích nguy điểm kiểm sốt tới hạn Tồn q trình từ kê đơn, phối hợp thuốc quản lý sử dụng thuốc phức tạp đặc biệt số thao tác tiềm ẩn nguy sai sót WHO đưa cơng cụ HACCP vào sử dụng ngành công nghiệp dược phẩm vào năm 2003 2.3 Các thông số kiểm nghiệm chế phẩm phối hợp thuốc theo đơn Theo USP 43, tiêu chuẩn chế phẩm bắt buộc phải đảm bảo trì suốt thời gian sử dụng hoạt lực, chất phân hủy… Theo ASEAN quy trình thử độ ổn định với thử nghiệm thích hợp cần tiến hành vào thời điểm 0, đến 24 phù hợp với khoảng thời gian sử dụng dự kiến nhiệt độ bảo quản/sử dụng nêu Các phép thử cần thực hình thức, màu sắc, độ trong, định lượng, sản phẩm phân hủy, pH, kích thước tiểu phân, tương tác với bao bì/nắp đậy/dụng cụ độ vơ khuẩn ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Đối tƣợng nghiên cứu Những định PCTTĐ từ khoa lâm sàng bệnh viện Nhi đồng từ 01/01/2017 đến 31/12/2017; Quy trình điều kiện thực PCTTĐ; Các quy định, tiêu chuẩn, tiêu chí, văn liên quan lĩnh vực PCTTĐ (Mỹ, Úc, Canada, Malaysia, Singapore, Anh, Việt Nam); PCTTĐ có thành phần hỗn hợp bao gồm: dextrose 10 %, glucoce 30 %, NaCl 10 %, KCl 10 %, CaCl 10%, MgSO4 15 %, Vaminolact 6,5 % 3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 3.2.1 Khảo sát nhu cầu sử dụng, thực trạng nguy có PCTTĐ bệnh viện Nhi đồng - Thiết kế nghiên cứu: hồi cứu tiến cứu Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-138 Sử dụng trắc nghiệm F t để kiểm tra tính tƣơng thích phƣơng trình hồi quy ý nghĩa hệ số phƣơng trình Yêu cầu: 0,990 ≤ R2 ≤ Kết khảo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ chất phân tích đƣợc tóm tắt bảng sau đây: Bảng 6.3 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-acid aspartic (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0140 758591 914954 0,8291 TT80 0,0187 1931071 1669513 1,1567 TT90 0,0210 1952567 1556062 1,2548 TT100 0,0234 2609029 1916706 1,3612 TT120 0,0280 3392690 2054487 1,6514 Giá trị F 414,17 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 20,35 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 0,80 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 57,1767x R2 0,9928 Bảng 6.4 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-acid glutamic (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0240 1275968 914954 1,3946 TT80 0,0319 3088310 1669513 1,8498 TT90 0,0359 3167895 1556062 2,0358 TT100 0,0399 4187675 1916706 2,1848 TT120 0,0479 5662420 2054487 2,7561 Giá trị F 302,91 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 17,40 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 0,45 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 55,4573x R2 0,9902 Bảng 6.5 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-serin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0127 853521 914954 0,9329 TT80 0,0169 2101809 1669513 1,2589 TT90 0,0190 2094189 1556062 1,3458 TT100 0,0211 2864507 1916706 1,4945 TT120 0,0254 3816016 2054487 1,8574 Giá trị F 375,92 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 19,39 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 0,34 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 71,1683x R2 0,9921 Bảng 6.6 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-histidin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0074 212490 914954 TT80 0,0098 491470 1669513 TT90 0,0111 542099 1556062 TT100 0,0123 718531 1916706 TT120 0,0148 942623 2054487 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Tỷ số AS/IS 0,2322 0,2944 0,3484 0,3749 0,4588 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-139 Dung dịch Nồng độ acid amin (mg/mL) Diện tích pic (µV x giây) Tỷ số AS/IS Giá trị F 620,27 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 24,91 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 0,03 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 30,7999x R2 0,9952 Bảng 6.7 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-threonin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0121 832322 914954 0,9097 TT80 0,0162 1962247 1669513 1,1753 TT90 0,0182 2061110 1556062 1,3246 TT100 0,0202 2723166 1916706 1,4208 TT120 0,0243 3627877 2054487 1,7658 Giá trị F 546,30 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 23,37 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 1,04 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 69,3194x R2 0,9945 Bảng 6.8 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-arginin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0143 735461 914954 0,8038 TT80 0,0191 1779049 1669513 1,0656 TT90 0,0214 1825883 1556062 1,1734 TT100 0,0238 2450007 1916706 1,2782 TT120 0,0286 3287113 2054487 1,6000 Giá trị F 670,02 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 25,88 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -1,35 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 54,0647x R2 0,9955 Bảng 6.9 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-alanin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0213 1791729 914954 1,9583 TT80 0,0284 4251158 1669513 2,5463 TT90 0,0319 4351750 1556062 2,7966 TT100 0,0354 6074130 1916706 3,1690 TT120 0,0425 8022199 2054487 3,9047 Giá trị F 470,89 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 21,70 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -0,33 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 91,5328x R2 0,9937 Bảng 6.10 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-tyrosin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0017 84192 914954 TT80 0,0023 208771 1669513 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Tỷ số AS/IS 0,0920 0,1250 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-140 Dung dịch TT90 TT100 TT120 Nồng độ acid amin (mg/mL) 0,0026 0,0029 0,0035 Diện tích pic (µV x giây) Tỷ số AS/IS 206319 1556062 0,1326 291301 1916706 0,1520 381773 2054487 0,1858 Giá trị F 368,84 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 19,21 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 0,54 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 51,3916x R2 0,9919 Bảng 6.11 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-glycin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0070 994928 914954 1,0874 TT80 0,0094 2450387 1669513 1,4677 TT90 0,0105 2522600 1556062 1,6211 TT100 0,0117 3481323 1916706 1,8163 TT120 0,0140 4384263 2054487 2,1340 Giá trị F 3152,09 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 56,14 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 1,74 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 149,7565x R2 0,9990 Bảng 6.12 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-valin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0113 1010461 914954 1,1044 TT80 0,0151 2490454 1669513 1,4917 TT90 0,0169 2574608 1556062 1,6546 TT100 0,0188 3425399 1916706 1,7871 TT120 0,0226 4313469 2054487 2,0995 Giá trị F 539,59 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 23,23 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 2,29 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 87,2481x R2 0,9945 Bảng 6.13 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-methionin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0044 197233 914954 0,2156 TT80 0,0059 495054 1669513 0,2965 TT90 0,0067 549558 1556062 0,3532 TT100 0,0074 732117 1916706 0,3820 TT120 0,0089 939279 2054487 0,4572 Giá trị F 670,02 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 25,88 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -1,35 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 54,0647x R2 0,9955 Bảng 6.14 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ taurin (n=2) Dung dịch Nồng độ acid amin Diện tích pic (µV x giây) Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Tỷ số AS/IS Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-141 TT60 TT80 TT90 TT100 TT120 (mg/mL) 0,0011 0,0015 0,0017 0,0019 0,0022 Acid amin 60772 133949 145389 196905 251745 Giá trị F Giá trị t a Giá trị t b Phƣơng trình hồi quy R2 Nội chuẩn 914954 1669513 1556062 1916706 2054487 161,61 12,71 1,02 0,0664 0,0802 0,0934 0,1027 0,1225 FLT(0,05) = 10,13 tLT(0,05) = 3,18 ŷ = 51,1939x 0,9818 Bảng 6.15 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-tryptophan (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0048 180083 914954 0,1968 TT80 0,0064 456418 1669513 0,2734 TT90 0,0072 486709 1556062 0,3128 TT100 0,0080 631047 1916706 0,3292 TT120 0,0096 838460 2054487 0,4081 Giá trị F 371,79 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 19,28 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -0,38 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 43,1075x R2 0,9920 Bảng 6.16 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-phenylalanin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0091 513561 914954 0,5613 TT80 0,0121 1271186 1669513 0,7614 TT90 0,0136 1322456 1556062 0,8499 TT100 0,0151 1772408 1916706 0,9247 TT120 0,0182 2317186 2054487 1,1279 Giá trị F 1752,92 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 41,87 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 0,37 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 61,4882x R2 0,9983 Bảng 6.17 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-isoleucin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0106 826051 914954 0,9028 TT80 0,0141 2025889 1669513 1,2135 TT90 0,0159 2099075 1556062 1,3490 TT100 0,0177 2846878 1916706 1,4853 TT120 0,0212 3808814 2054487 1,8539 Giá trị F 668,01 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 25,85 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -0,76 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 88,2534x Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-142 R2 0,9955 Bảng 6.18 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-leucin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0241 1749545 914954 1,9122 TT80 0,0321 4327297 1669513 2,5920 TT90 0,0361 4504512 1556062 2,8948 TT100 0,0401 6033155 1916706 3,1477 TT120 0,0482 7955070 2054487 3,8720 Giá trị F 1353,95 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 36,80 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -0,14 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 80,1477x R2 0,9978 Bảng 6.19 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-lysin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0203 941954 914954 1,0295 TT80 0,0271 2436487 1669513 1,4594 TT90 0,0305 2636668 1556062 1,6944 TT100 0,0339 3641909 1916706 1,9001 TT120 0,0407 5191384 2054487 2,5269 Giá trị F 299,68 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 17,31 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -3,75 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 72,5399x R2 0,9901 Bảng 6.20 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ s AS/IS nồng độ L-prolin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0187 305447 914954 0,3338 TT80 0,0250 793850 1669513 0,4755 TT90 0,0281 847023 1556062 0,5443 TT100 0,0312 1190045 1916706 0,6209 TT120 0,0375 1489085 2054487 0,7248 Giá trị F 518,01 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 22,76 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -1,94 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 21,0559x R2 0,9942 Nhận xét: Phƣơng trình tuyến tính nồng độ tỷ số AS/IS chất phân tích có ý nghĩa khoảng nồng độ khảo sát 6.2.4 Độ xác Độ xác phƣơng pháp thể độ lặp lại độ xác trung gian Độ lặp lại: Chuẩn bị dung dịch thử Tiến hành sắc ký lần mẫu theo điều kiện sắc ký chọn, ghi nhận giá trị diện tích pic, từ suy nồng độ chất phân tích dung dịch thử Độ xác trung gian: Tiến hành nhƣ độ lặp lại nhƣng ngày khác Yêu cầu: Giá trị RSD nồng độ chất phân tích dung dịch thử ngày ngày phải không 2,0 % Kết khảo sát độ xác quy trình đƣợc thể bảng sau đây: Bảng 6.21 Kết khảo sát độ xác Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-143 Nồng độ dung dịch thử (mg/mL), ngày RSD (%) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu L-Acid aspartic 0,0238 0,0238 0,0238 0,0237 0,0240 0,38 L-Acid glutamic 0,0397 0,0397 0,0398 0,0398 0,0401 0,33 L-Serin 0,0212 0,0210 0,0208 0,0211 0,0215 1,16 L-Histidin 0,0116 0,0116 0,0118 0,0118 0,0118 0,74 L-Threonin 0,0203 0,0198 0,0200 0,0202 0,0208 1,67 L-Arginin 0,0227 0,0226 0,0225 0,0224 0,0228 0,67 L-Alanin 0,0351 0,0348 0,0345 0,0350 0,0351 0,99 L-Tyrosin 0,0029 0,0029 0,0029 0,0029 0,0029 0,60 Glycin 0,0123 0,0123 0,0119 0,0120 0,0122 1,40 L-Valin 0,0211 0,0212 0,0213 0,0214 0,0214 0,55 L-Methionin 0,0074 0,0073 0,0074 0,0073 0,0074 0,86 Taurin 0,0018 0,0018 0,0018 0,0019 0,0018 1,06 L-Tryptophan 0,0084 0,0084 0,0084 0,0084 0,0084 0,31 L-Phenylalanin 0,0156 0,0155 0,0156 0,0157 0,0157 0,42 L-Isoleucin 0,0172 0,0172 0,0173 0,0173 0,0173 0,51 L-Leucin 0,0402 0,0402 0,0404 0,0404 0,0405 0,35 L-Lysin 0,0332 0,0329 0,0331 0,0326 0,0325 0,98 L-Prolin 0,0325 0,0318 0,0327 0,0314 0,0321 1,44 Nồng độ dung dịch thử (mg/mL), ngày RSD (%) RSD (n=12) (%) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu 10 Mẫu 11 Mẫu 12 L-Acid aspartic 0,0237 0,0242 0,0240 0,0240 0,0239 0,0237 0,81 0,82 L-Acid glutamic 0,0405 0,0408 0,0406 0,0408 0,0406 0,0405 0,34 0,42 L-Serin 0,0209 0,0209 0,0208 0,0208 0,0209 0,0209 0,25 0,89 L-Histidin 0,0118 0,0117 0,0117 0,0116 0,0117 0,0118 0,64 0,69 L-Threonin 0,0204 0,0203 0,0206 0,0203 0,0209 0,0207 1,18 1,37 L-Arginin 0,0222 0,0223 0,0221 0,0224 0,0222 0,0224 0,54 0,91 L-Alanin 0,0332 0,0335 0,0336 0,0337 0,0341 0,0343 1,20 1,48 L-Tyrosin 0,0029 0,0028 0,0028 0,0028 0,0029 0,0029 1,92 1,26 Glycin 0,0121 0,0121 0,0121 0,0120 0,0122 0,0120 0,62 1,01 L-Valin 0,0216 0,0211 0,0212 0,0212 0,0214 0,0215 0,92 0,74 L-Methionin 0,0074 0,0072 0,0073 0,0074 0,0074 0,0073 1,11 1,03 Taurin 0,0020 0,0020 0,0020 0,0020 0,0020 0,0020 0,00 1,11 L-Tryptophan 0,0084 0,0084 0,0082 0,0082 0,0083 0,0083 1,08 0,98 L-Phenylalanin 0,0157 0,0154 0,0154 0,0155 0,0156 0,0157 0,89 1,29 L-Isoleucin 0,0175 0,0170 0,0172 0,0171 0,0174 0,0174 1.14 1,11 L-Leucin 0,0410 0,0404 0,0405 0,0404 0,0408 0,0409 0,65 0,55 L-Lysin 0,0325 0,0329 0,0326 0,0328 0,0330 0,0331 0,71 1,77 L-Prolin 0,0387 0,0371 0,0374 0,0372 0,0380 0,0385 1,60 1,81 Nhận xét: Kết khảo sát độ lặp lại độ xác cho thấy giá trị RSD nồng độ chất phân tích dung dịch thử nhỏ 2,0 % nên quy trình định lƣợng đạt yêu cầu độ xác 6.2.5 Độ Độ đƣợc thực cách thêm chuẩn vào dung dịch placebo ba mức nồng độ 80 %, 100 % 120 % so với nồng độ đo chất phân tích Mỗi mức nồng độ chuẩn bị mẫu tiến hành sắc ký mẫu lần Bảng 6.22 Chuẩn bị dung dịch thẩm định độ Mẫu Dung dịch Dung dịch chuẩn gốc Dung dịch nội Nƣớc vừa đủ placebo (mL) acid (mL) chuẩn (mL) (mL) DD80 M1 DD80 M2 1,6 DD80 M3 2 200 DD100 M1 DD100 M2 2,0 DD100 M3 Acid amin Mẫu 0,0238 0,0398 0,0211 0,0117 0,0201 0,0228 0,0356 0,0029 0,0121 0,0212 0,0074 0,0018 0,0084 0,0155 0,0171 0,0402 0,0333 0,0322 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-144 DD120 M1 DD120 M2 2,4 DD120 M3 Tính tỷ lệ thu hồi dựa lƣợng chuẩn thêm vào lƣợng tìm đƣợc với tiêu chuẩn chấp nhận từ 98 102 % RSD ≤ % Kết khảo sát độ quy trình đƣợc thể bảng sau đây: Bảng 6.23 Kết khảo sát độ mức nồng độ 80 % Nồng độ thêm vào Nồng độ thực tế (mg/mL) Tỷ lệ thu hồi (%) (mg/mL) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Acid amin L-Acid aspartic 0,0187 0,0187 0,0187 0,0188 0,0190 0,0189 L-Acid glutamic 0,0319 0,0319 0,0319 0,0324 0,0323 0,0324 L-Serin 0,0169 0,0169 0,0169 0,0171 0,0170 0,0172 L-Histidin 0,0098 0,0098 0,0098 0,0097 0,0098 0,0100 L-Threonin 0,0162 0,0162 0,0162 0,0160 0,0159 0,0165 L-Arginin 0,0191 0,0191 0,0191 0,0187 0,0188 0,0193 L-Alanin 0,0284 0,0284 0,0284 0,0280 0,0280 0,0288 L-Tyrosin 0,0023 0,0023 0,0023 0,0024 0,0024 0,0024 Nội chuẩn … … … … … … Glycin 0,0094 0,0094 0,0094 0,0092 0,0092 0,0092 L-Valin 0,0151 0,0151 0,0151 0,0154 0,0153 0,0153 L-Methionin 0,0059 0,0059 0,0059 0,0059 0,0059 0,0059 Taurin 0,0015 0,0015 0,0015 0,0015 0,0015 0,0015 L-tryptophan 0,0064 0,0064 0,0064 0,0064 0,0064 0,0063 L-Phenylalanin 0,0121 0,0121 0,0121 0,0123 0,0123 0,0123 L-Isoleucin 0,0141 0,0141 0,0141 0,0143 0,0142 0,0140 L-Leucin 0,0321 0,0321 0,0321 0,0324 0,0324 0,0323 L-Lysin 0,0271 0,0271 0,0271 0,0266 0,0266 0,0269 L-Prolin 0,0250 0,0250 0,0250 0,0252 0,0252 0,0248 Bảng 6.24 Kết khảo sát độ mức nồng độ 100 % Nồng độ thêm vào Nồng độ thực tế (mg/mL) (mg/mL) Mẫu Mẫu Mẫu 100,51 101,43 101,15 98,58 98,91 98,28 98,93 101,07 … 98,41 101,91 98,91 98,29 101,20 101,46 101,17 101,00 98,11 100,91 101,51 101,20 100,47 99,49 98,26 98,77 98,80 101,74 … 98,27 101,90 98,47 98,39 100,82 101,41 100,25 100,96 98,13 100,73 100,96 101,59 101,60 101,34 101,60 101,27 101,52 101,39 … 98,32 101,25 98,88 98,83 99,09 101,85 98,99 100,69 99,19 99,26 Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Acid amin L-Acid aspartic 0,0234 0,0234 0,0234 0,0233 0,0237 L-Acid glutamic 0,0399 0,0399 0,0399 0,0400 0,0406 L-Serin 0,0211 0,0211 0,0211 0,0212 0,0215 L-Histidin 0,0123 0,0123 0,0123 0,0122 0,0124 L-Threonin 0,0202 0,0202 0,0202 0,0200 0,0206 L-Arginin 0,0238 0,0238 0,0238 0,0234 0,0235 L-Alanin 0,0354 0,0354 0,0354 0,0349 0,0361 L-Tyrosin 0,0029 0,0029 0,0029 0,0030 0,0029 Nội chuẩn … … … … … Glycin 0,0117 0,0117 0,0117 0,0115 0,0115 L-Valin 0,0188 0,0188 0,0188 0,0190 0,0191 L-Methionin 0,0074 0,0074 0,0074 0,0073 0,0073 Taurin 0,0019 0,0019 0,0019 0,0018 0,0019 L-tryptophan 0,0080 0,0080 0,0080 0,0081 0,0081 L-Phenylalanin 0,0151 0,0151 0,0151 0,0153 0,0153 L-Isoleucin 0,0177 0,0177 0,0177 0,0179 0,0175 L-Leucin 0,0401 0,0401 0,0401 0,0407 0,0403 L-Lysin 0,0339 0,0339 0,0339 0,0334 0,0340 L-Prolin 0,0312 0,0312 0,0312 0,0318 0,0307 Bảng 6.25 Kết khảo sát độ mức nồng độ 120 % Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu 0,0235 0,0395 0,0214 0,0125 0,0205 0,0234 0,0359 0,0029 … 0,0115 0,0191 0,0073 0,0018 0,0079 0,0150 0,0174 0,0399 0,0335 0,0307 99,81 100,31 100,13 98,92 98,76 98,12 98,61 101,56 … 98,57 101,13 99,02 98,50 101,35 101,33 101,40 101,38 98,58 101,86 101,26 101,72 101,92 100,59 101,70 98,66 101,85 98,17 … 98,18 101,38 98,35 101,28 101,50 101,03 99,03 100,41 100,33 98,42 100,74 98,87 101,41 101,64 101,41 98,29 101,31 98,58 … 98,75 101,63 98,79 98,91 98,80 99,27 98,73 99,45 98,77 98,95 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn RSD (%) 0,49 0,19 0,57 1,41 1,78 1,61 1,54 0,33 … 0,07 0,37 0,25 0,29 1,12 0,24 1,09 1,06 0,63 0,90 Tỷ lệ thu hồi (%) RSD (%) 0,73 1,42 0,91 1,37 1,61 0,28 1,73 1,86 … 0,29 0,25 0,35 1,51 1,51 1,11 1,47 0,96 0,96 1,85 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-145 Nồng độ thêm vào (mg/mL) Acid amin L-Acid aspartic L-Acid glutamic L-Serin L-Histidin L-Threonin L-Arginin L-Alanin L-Tyrosin Nội chuẩn Glycin L-Valin L-Methionin Taurin L-tryptophan L-Phenylalanin L-Isoleucin L-Leucin L-Lysin L-Prolin Nồng độ thực tế (mg/mL) Tỷ lệ thu hồi (%) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu 0,0280 0,0479 0,0254 0,0148 0,0243 0,0286 0,0425 0,0035 … 0,0140 0,0226 0,0089 0,0022 0,0096 0,0182 0,0212 0,0482 0,0407 0,0375 0,0280 0,0479 0,0254 0,0148 0,0243 0,0286 0,0425 0,0035 … 0,0140 0,0226 0,0089 0,0022 0,0096 0,0182 0,0212 0,0482 0,0407 0,0375 0,0280 0,0479 0,0254 0,0148 0,0243 0,0286 0,0425 0,0035 … 0,0140 0,0226 0,0089 0,0022 0,0096 0,0182 0,0212 0,0482 0,0407 0,0375 0,0280 0,0478 0,0249 0,0145 0,0240 0,0281 0,0420 0,0035 … 0,0139 0,0230 0,0089 0,0022 0,0097 0,0182 0,0215 0,0483 0,0411 0,0367 0,0280 0,0480 0,0250 0,0145 0,0240 0,0281 0,0423 0,0035 … 0,0139 0,0229 0,0087 0,0022 0,0097 0,0185 0,0216 0,0490 0,0406 0,0368 0,0284 0,0484 0,0258 0,0150 0,0246 0,0282 0,04231 0,0034 … 0,0143 0,0229 0,0087 0,0022 0,0095 0,0185 0,0209 0,0482 0,0413 0,0372 99,71 99,80 98,21 98,42 98,80 98,17 98,69 100,37 … 98,93 101,75 99,78 98,52 101,07 99,92 101,55 100,18 101,11 98,06 99,83 100,29 98,51 98,21 98,84 98,21 99,39 101,23 … 98,86 101,25 98,42 98,86 101,79 101,91 101,77 101,68 99,82 98,12 101,17 100,94 101,54 101,89 101,37 98,80 101,41 98,51 … 101,91 101,46 98,28 98,12 99,01 101,77 98,66 100,15 101,54 99,25 Nhận xét: Tỷ lệ thu hồi mức thêm chuẩn 80 %, 100 %, 120 % chất phân tích nằm khoảng 98 - 102 % Giá trị RSD Tỷ lệ thu hồi mức thêm chuẩn chất phân tích khơng q % Nhƣ vậy, quy trình định lƣợng đạt yêu cầu độ 6.2.6 Khoảng xác định Dựa kết khảo sát tính tuyến tính, độ độ xác, quy trình định lƣợng đồng thời acid phƣơng pháp HPLC-FLD có khoảng xác định nhƣ sau: Bảng 6.26 Khoảng xác định acid Khoảng xác định Khoảng xác định Acid amin Acid amin (mg/mL) (mg/mL) L-Alanin 0,0284 – 0,0425 Taurin 0,0015 – 0,0022 L-Histidin 0,0098 – 0,0148 L-Tyrosin 0,0023 – 0,0035 L-Arginin 0,0191 – 0,0286 L-Valin 0,0151 – 0,0226 L-Isoleucin 0,0141 – 0,0212 L-Lysin 0,0271 – 0,0407 L- Acid aspartic 0,0187 – 0,0280 L-Methionin 0,0059 – 0,0089 L-Leucin 0,0321 – 0,0482 L-Phenylalanin 0,0121 – 0,0182 L-Threonin 0,0162 – 0,0243 L-Acid glutamic 0,0240 – 0,0479 L-Serin 0,0169 – 0,0254 Glycin 0,0094 – 0,0140 L-Tryptophan 0,0064 – 0,0096 L-Prolin 0,0250 – 0,0375 Kết luận chung: Kết thẩm định cho thấy quy trình định lƣợng đồng thời acid amin chế phẩm pha chế thuốc theo đơn dùng qua đƣờng tĩnh mạch phƣơng pháp HPLC-FLD đạt yêu cầu tính phù hợp hệ thống, có tính chọn lọc, khoảng xác định rộng, đạt độ xác độ Nhƣ quy trình đƣợc áp dụng để định lƣợng đồng thời acid chế phẩm pha chế thuốc theo đơn THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG GLUCOSE TRONG CHẾ PHẨM PHA CHẾ THUỐC THEO ĐƠN DÙNG QUA ĐƢỜNG TĨNH MẠCH BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC-RID Quy trình định lƣợng glucose chế phẩm pha chế thuốc theo đơn dùng qua đƣờng tĩnh mạch phƣơng pháp HPLC-RID đƣợc thẩm định theo hƣớng dẫn ICH (International Conference on Harmonization) ban hành vào tháng 11 năm 2005 bao gồm khảo sát tính phù hợp hệ thống, tính chọn lọc, tính tuyến tính khoảng xác định, độ xác độ 7.1 Chuẩn bị mẫu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn RSD (%) 0,81 0,57 1,85 2,00 1,48 0,36 1,42 1,39 … 1,74 0,25 0,84 0,38 1,43 1,10 1,72 0,87 0,89 0,68 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-146 Dung dịch chuẩn g c glucose: cân xác khoảng 9,300 g glucose chuẩn, cho vào bình định mức 25 mL, thêm khoảng 15 mL, siêu âm phút, lắc đều, thêm nƣớc vừa đủ đến vạch, lắc - Dung dịch chuẩn glucose: cân xác khoảng 5,000 g glucose chuẩn, cho vào bình định mức 50 mL, thêm khoảng 30 mL nƣớc, siêu âm phút, lắc đều, thêm nƣớc vừa đủ đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc millipore 0,45 μm - Dung dịch thử: dung dịch chế phẩm, lọc qua màng lọc milipore 0,45 μm - Mẫu trắng: nƣớc - Dung dịch placebo: chuẩn bị nhƣ mẫu thử nhƣng khơng có glucose 7.2 Kết thẩm định quy trình 7.2.1 Khảo sát tính phù hợp hệ thống Tiến hành sắc ký mẫu chuẩn lần Yêu cầu tính phù hợp hệ th ng: Phép thử có giá trị giá trị RSD thời gian lƣu, diện tích pic glucose số đĩa lý thuyết biểu kiến không %; hệ số bất đối pic glucose nằm khoảng 0,8 – 1,5 Bảng 7.1 Kết khảo sát tính phù hợp hệ th ng (n=6) Thời gian lƣu Diện tích pic Hệ số bất Số đĩa lý thuyết biểu n (phút) (µV x giây) đối kiến 5,976 8762833 0,97 1763 5,972 8781794 0,97 1770 5,961 8808987 0,98 1779 5,954 8742055 0,97 1785 5,948 8748451 0,97 1785 5,952 8776995 0,97 1802 Trung bình 5,961 8770186 0,97 1781 RSD (%) 0,19 0,28 0,42 0,70 Nhận xét: Kết khảo sát cho thấy giá trị RSD thời gian lƣu, diện tích pic số đĩa lý thuyết biểu kiến không %; hệ số bất đối pic glucose nằm khoảng 0,8 – 1,5 Nhƣ vậy, quy trình đạt tính phù hợp hệ thống 7.2.2 Tính chọn lọc Tiến hành sắc ký lần dung dịch chuẩn, dung dịch thử, dung dịch placabo mẫu trắng, ghi nhận sắc ký đồ Quy trình đạt tính chọn lọc sắc ký đồ dung dịch placebo mẫu trắng khơng có pic có thời gian lƣu tƣơng đƣơng với thời gian lƣu glucose sắc ký đồ dung dịch chuẩn, sắc ký đồ dung dịch thử phải có pic có thời gian lƣu tƣơng đƣơng với thời gian lƣu glucose sắc ký đồ dung dịch chuẩn, sắc ký đồ dung dịch thử thêm chuẩn phải có tăng lên chiều cao diện tích pic có thời gian lƣu tƣơng đƣơng với thời gian lƣu glucose dung dịch chuẩn Hình 7.1 đến 7.4 minh họa sắc ký đồ mẫu phân tích khảo sát tính chọn lọc Kết khảo sát tính chọn lọc cho thấy điều kiện phân tích: sắc ký đồ dung dịch placebo mẫu trắng không xuất pic khoảng thời gian lƣu tƣơng ứng với thời gian lƣu glucose sắc ký đồ dung dịch chuẩn, sắc ký đồ dung dịch thử xuất pic có thời gian lƣu tƣơng đƣơng với glucose sắc ký đồ dung dịch chuẩn, thêm dung dịch chuẩn glucose vào dung dịch thử có tăng lên chiều cao diện tích pic có thời gian lƣu tƣơng ứng với thời gian lƣu glucose dung dịch chuẩn Nhƣ quy trình có tính chọn lọc - Hình 7.1 Sắc ký đồ dung dịch placebo Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-147 Hình 7.2 Sắc ký đồ mẫu trắng Hình 7.3 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn Hình 7.4 Sắc ký đồ dung dịch thử 7.2.3 Tính tuyến tính Bảng 7.2 Chuẩn bị dung dịch khảo sát tính tuyến tính Nồng độ (g/mL) Dung dịch chuẩn gốc glucose (mL) Nƣớc vừa đủ (mL) 0,0093 0,25 0,0186 0,5 0,0465 1,25 0,0744 10 0,0930 2,5 0,1116 0,1395 3,75 0,1860 Tiến hành sắc ký lần dung dịch khảo sát tính tuyến tính, ghi nhận sắc ký đồ Thiết lập mối tƣơng quan diện tích pic nồng độ chất phân tích Dùng phần mềm Microsoft Excel® xử lý thống kê số liệu thu đƣợc, xác định hệ số a (độ dốc), b (tung độ gốc), R2 (hệ số tƣơng quan bình phƣơng) phƣơng trình hồi quy (ŷ = ax + b) Sử dụng trắc nghiệm F t để kiểm tra tính tƣơng thích phƣơng trình hồi quy ý nghĩa hệ số phƣơng trình Yêu cầu: 0,990 ≤ R2 ≤ Kết khảo sát tính tuyến tính diện tích pic nồng độ chất phân tích đƣợc tóm tắt bảng sau đây: Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-148 Bảng 7.3 Kết kháo sát tính tuyến tính diện tích pic nồng độ glucose (n=2) Dung dịch Nồng độ glucose (g/mL) Diện tích pic (µV x giây) 0,0093 888833 0,0186 1775301 0,0465 4408329 0,0744 7066147 0,0930 8830843 0,1116 10630554 0,1395 13216864 0,1860 17730309 Giá trị F 286477,02 FLT(0,05) = 5,99 Giá trị t a 535,24 tLT(0,05) = 2,45 Giá trị t b -0,43 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 95167477x R2 Nhận xét: Phƣơng trình tuyến tính nồng độ diện tích pic glucose có ý nghĩa khoảng nồng độ khảo sát 7.2.4 Độ xác Độ xác phƣơng pháp thể độ lặp lại độ xác trung gian Độ lặp lại: Chuẩn bị dung dịch thử Tiến hành sắc ký lần mẫu theo điều kiện sắc ký chọn, ghi nhận giá trị diện tích pic, từ suy nồng glucose dung dịch thử hàm lƣợng phần trăm glucose chế phẩm so với hàm lƣợng ghi nhãn Độ xác trung gian: Tiến hành nhƣ độ lặp lại nhƣng ngày khác Yêu cầu: Giá trị RSD hàm lƣợng phần trăm glucose chế phẩm so với hàm lƣợng ghi nhãn ngày ngày phải không 2,0 % Kết khảo sát độ xác quy trình đƣợc thể bảng sau đây: Bảng 7.4 Kết khảo sát độ xác Dung dịch thử (ngày 1) RSD Glucose (%) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Diện tích pic 9625365 9632649 9671841 9651294 9658420 9633359 (µV x giây) Hàm lƣợng % glucose 98,60 98,68 99,08 98,87 98,94 98,69 0,18 so với hàm lƣợng nhãn Dung dịch thử (ngày 2) RSD (%) RSD (n=12) (%) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu 10 Mẫu 11 Mẫu 12 Diện tích pic 9649670 9631926 9618433 9633891 9620097 9614613 (µV x giây) Hàm lƣợng % glucose 98,85 98,67 98,53 98,69 98,55 98,49 0,14 0,14 so với hàm lƣợng nhãn Nhận xét: Kết khảo sát độ lặp lại độ xác cho thấy giá trị RSD hàm lƣợng phần trăm glucose chế phẩm so với hàm lƣợng ghi nhãn nhỏ 2,0 % nên quy trình định lƣợng đạt yêu cầu độ xác 7.2.5 Độ Độ đƣợc thực cách thêm chuẩn glucose vào dung dịch placebo ba mức nồng độ 80 %, 100 % 120 % so với nồng độ đo glucose Mỗi mức nồng độ chuẩn bị mẫu tiến hành sắc ký mẫu lần Tính tỷ lệ thu hồi dựa lƣợng chuẩn thêm vào lƣợng tìm đƣợc với tiêu chuẩn chấp nhận từ 98 -102 % RSD ≤ % Kết khảo sát độ quy trình đƣợc thể bảng sau đây: Bảng 7.5 Kết khảo sát độ Mức nồng Dung Diện tích Lƣợng Lƣợng chuẩn Tỷ lệ thu độ thêm Mẫu dịch pic chuẩn tìm thêm vào (g) hồi (%) vào placebo (µV x giây) lại (g) DD80 M1 1,5890 7669388 1,6154 101,66 vừa đủ 80 % 20 mL DD80 M2 1,5903 7657589 1,6129 101,42 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-149 DD80 M3 DD100 M1 DD100 M2 DD100 M3 DD120 M1 DD120 M2 DD120 M3 1,6002 2,0043 2,0039 2,0123 2,3902 2,4065 2,4102 1,6142 100,88 2,0208 100,83 100 % 2,0186 100,73 2,0166 100,22 2,4036 100,56 120 % 2,4127 100,26 2,4121 100,08 100,74 Trung bình 0,53 RSD (%) Nhận xét: Tỷ lệ thu hồi mức thêm chuẩn 80 %, 100 %, 120 % glucose nằm khoảng 98 – 102 % Giá trị RSD Tỷ lệ thu hồi mức thêm chuẩn glucose không % Nhƣ vậy, quy trình định lƣợng đạt yêu cầu độ 7.2.6 Khoảng xác định Dựa kết khảo sát tính tuyến tính, độ độ xác, quy trình định lƣợng glucose có khoảng xác định từ 0,0744 – 0,1116 (g/mL) Kết luận chung: Kết thẩm định cho thấy quy trình định lƣợng glucose chế phẩm pha chế thuốc theo đơn dùng qua đƣờng tĩnh mạch phƣơng pháp HPLC-RID đạt yêu cầu tính phù hợp hệ thống, có tính chọn lọc, khoảng xác định rộng, đạt độ xác độ Nhƣ quy trình đƣợc áp dụng để định lƣợng glucose chế phẩm pha chế thuốc theo đơn Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 7664111 9594377 9583685 9574330 11411740 11455080 11451980 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-150 PHỤC LỤC 13 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ĐỘ ỔN ĐỊNH DUNG DỊCH DINH DƢỠNG NUÔI ĂN TĨNH MẠCH ảng Nguyên liệu để pha chế thuốc theo đơn Dung dịch tiêm truyền glucose 10 % Dung dịch tiêm truyền glucose 30 % Dung dịch tiêm truyền natri clorid 10 % Dung dịch tiêm kali clorid Kabi 10 % Thể tích đóng gói (ml) 500 250 250 10 Dung dịch tiêm calci clorid 500 mg/5 ml Dung dịch tiêm magnesi sulfat Kabi 15 % 10 Stt Tên, dạng bào chế Nhà sản xuất Công ty cổ phần (CTCP) Fresenius Kabi Việt Nam CTCP Dƣợc phẩm Vĩnh Phúc CTCP Dƣợc – Trang thiết bị y tế Bình Định CTCP Fresenius Kabi Việt Nam Dung dịch tiêm truyền Vaminolact 6,5%, thành phần hàm lƣợng 100 ml: L-Alanin (0,63 g), L-Histidin (0,21 g), L-Arginin (0,41 g), LIsoleucin (0,31 g), L-Aspartic acid (0,41 g), LLeucin (0,70 g), L-Cystein / cystin (0,10 g), LFresenius KABI Austria 100 Threonin (0,36 g), L-Serin (0,38 g), L-Tryptophan GmbH (0,14 g), Taurin (0,03 g), L-Tyrosin (0,05 g), LValin (0,36 g), L-Lysin (0,56 g), L-Methionin (0,13 g), L-Phenylalanin (0,27 g), L-Glutamic acid (0,71 g), Glycin (0,21 g), L-Prolin (0,56 g) Kết khảo sát độ ổn định a Độ màu sắc Kết khảo sát độ màu sắc dung dịch dinh dƣỡng nuôi ăn tĩnh mạch đƣợc trình bày bảng ảng Kết khảo sát độ màu sắc dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch (n=6) Lô giờ 24 48 + + + + + + + + + + + + “+” đạt Các mẫu dung dịch khảo sát đạt tiêu chí màu sắc độ sau 48 quan sát Tại thời điểm 48 giờ, mẫu khảo sát có màu nhƣng khơng thẫm dung dịch đối chiếu V7 b pH Kết khảo sát pH dung dịch dinh dƣỡng ni ăn tĩnh mạch đƣợc trình bày bảng ảng Kết khảo sát pH dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch (n=6) Lô giờ 24 48 4,95 4,89 4,87 4,87 4,81 4,81 4,89 4,93 4,87 4,89 4,85 4,95 TB 4,88 4,86 4,87 4,92 RSD 1,44 % 0,95 % 0,41 % 0,85 % pH trung bình dung dịch dinh dƣỡng nằm khoảng cho phép (pH 4,5-6,5) theo dƣợc điển Mỹ 43 c Độ thẩm thấu Kết khảo sát độ thẩm thấu dung dịch dinh dƣỡng nuôi ăn tĩnh mạch theo thời gian đƣợc trình bày bảng Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-151 ảng Kết khảo sát độ thẩm thấu dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch (n=6) Độ thẩm thấu (mOsmol/kg) Lô giờ giờ 9 9 29,7 22,0 13,6 11,4 9 9 21,2 23,8 14,9 14,3 9 9 40,7 41,6 40,5 40,5 Trung 9 9 bình 30,5 29,1 23,0 22,1 1 1 RSD ,05 % ,17 % ,64 % ,74 % Độ thẩm thấu dung dịch giảm không đáng kể từ lúc pha (0 giờ) đến thời điểm 48 giờ, chứng tỏ dung dịch ổn định suốt thời gian bảo quản d Nội độc t vi khuẩn thử vô khuẩn Kết kiểm tra nội độc tố vi khuẩn thử vô khuẩn dung dịch dinh dƣỡng ni ăn tĩnh mạch, trình bày bảng ảng Kết kiểm tra nội độc t vi khuẩn thử vô khuẩn dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch (n=6) Lô giờ 24 48 0,0337 0,0385 0,0465 0,0385 ± 0,015 ± 0,003 ± 0,006 ± 0,003 Nội độc tố 0,0317 0,0387 0,0483 0,0387 vi khuẩn ± 0,002 ± 0,001 ± 0,011 ± 0,001 (EU/mL) 0,0375 0,0456 0,0421 0,0456 ± 0,006 ± 0,009 ± 0,002 ± 0,009 + + + + Thử vô + + + + khuẩn + + + + “+” đạt Qua phân tích cho thấy, nồng độ nội độc tố dung dịch dinh dƣỡng qua lần đánh giá có giá trị dƣới ngƣỡng cho phép 0,25 EU/mL sau 48 khảo sát Đồng thời, dung dịch đạt tiêu chí độ vơ khuẩn Từ phản ánh dung dịch sau pha chế đạt tiêu chuẩn vi sinh theo quy định trì đƣợc ổn định vi sinh sau 48 bảo quản điều kiện – oC e Giới hạn pthalat Kết kiểm nghiệm giới hạn phthalat dung dịch dinh dƣỡng nuôi ăn tĩnh mạch đƣợc trình bày bảng ảng Kết kiểm nghiệm giới hạn phthalat (n=18) Stt Phthalat 6 24 48 Dimethyl phthalat (DMP) Diethyl phthalat (DEP) Dipropyl phthalat (DPP) Dibutyl phthalat (DBP) Di-n-pentyl phthalat (DpenP) Dioctyl phthalat (DOP) “-” không phát Sau 48 khảo sát, dung dịch dinh dƣỡng nuôi ăn tĩnh mạch không tạo phthalat suốt trình bảo quản f Kết định lượng Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-152 ảng Tóm tắt kết định lượng thành phần dung dịch dinh dưỡng ăn nuôi tĩnh mạch (n=18) Hàm lƣợng phần trăm so với nhãn thời điểm sau pha chế (%) STT Thành phần giờ 24 48 Glucose 99,08 98,94 98,81 98,63 K+ 103,11 101,61 101,07 100,37 Ca2+ 100,68 100,17 99,79 99,34 Na+ 100,92 100,77 100,60 100,48 Mg2+ 99,81 99,75 99,41 98,96 L-Acid aspartic 103,81 103,81 103,59 104,03 L-Acid glutamic 100,76 101,01 100,01 102,06 L-Serin 99,10 98,08 99,10 97,93 L-Histidin 99,64 99,36 99,50 99,50 10 L-Threonin 100,81 100,56 100,06 101,72 11 L-Arginin 98,01 97,29 98,45 96,85 12 L-Alanin 97,89 97,05 99,12 95,49 13 L-Tyrosin 102,84 102,24 103,43 101,65 14 Glycin 103,04 102,61 103,04 102,61 15 L-Valin 105,51 105,43 105,35 105,68 16 L-Methionin 100,83 100,83 101,06 100,60 17 Taurin 107,99 107,99 107,99 107,00 18 L-Tryptophan 107,00 105,94 107,00 105,73 19 L-Phenylalanin 103,04 102,71 103,04 102,71 20 L-Isoleucin 99,14 99,23 99,14 99,33 21 L-Leucin 103,05 103,05 102,71 103,60 22 L-Lysin 104,56 104,56 104,88 104,51 23 L-Prolin 101,80 102,28 102,28 101,80 24 Cystein 104,77 104,78 104,53 104,91 Kết định lƣợng thành phần dung dịch dinh dƣỡng nuôi ăn tĩnh mạch đạt theo yêu cầu ngƣỡng 90 % - 110 % so với hàm lƣợng nhãn Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn