Nghiên cứu kiểm soát chất lượng sản phẩm pha chế theo đơn dùng qua đường tĩnh mạch tại bệnh viện nhi đồng 2

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH HỒNG THÙY LINH NGHIÊN CỨU KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG SẢN PHẨM PHA CHẾ THEO ĐƠN DÙNG QUA ĐƯỜNG TĨNH MẠCH TẠI BỆNH VIỆN NHI ĐỒNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC TP.HỒ CHÍ MINH, Năm 2022 Năm 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH HỒNG THÙY LINH NGHIÊN CỨU KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG SẢN PHẨM PHA CHẾ THEO ĐƠN DÙNG QUA ĐƯỜNG TĨNH MẠCH TẠI BỆNH VIỆN NHI ĐỒNG NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 62720410 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS NGUYỄN ĐỨC TUẤN GS.TS LÊ QUAN NGHIỆM TP.HỒ CHÍ MINH, Năm 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận án Hoàng Thùy Linh i MỤC LỤC Trang i v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Từ nguyên ASPEN Nghĩa tiếng Việt American Society for Parenteral Hiệp hội Dinh dưỡng đường and Enteral Nutrition Tĩnh mạch Tiêu hóa Hoa Kỳ Association of Southeast Asian Hiệp hội quốc gia Đông Nations Nam Á BET Bacterial Endotoxin Test Thử nghiệm nội độc tố vi khuẩn BYT Bộ Y tế cGMPs Current Good Manufacturing Thực hành tốt sản xuất Practices hành Centrally Infused Parenteral Nuôi ăn qua tĩnh mạch trung Nutrition tâm CSE Control Standard Endotoxin Chất chuẩn nội độc tố CCP Critical Control Points Điểm kiểm soát tới hạn C-PEC Containment Primary Engineering Hệ thống lọc cấp chống tạp ASEAN CIPN Control nhiễm DNA Deoxyribonucleic acid DEP Diethyl phthalat DOP Dioctyl phthalat DPP Dipentyl phthalat DBP Dibutyl phthalat DPenP Di-n-pentyl phthalat DMP Dimethyl phthalat EC European Commission EDTA Ethylen diamine tetraacetic acid EU European Union Liên minh Châu Âu FD Fluorescence detector Đầu dò huỳnh quang FDA Food and Drug Administration Cục quản lý Thuốc Thực Ủy ban Châu Âu phẩm Hoa Kỳ Chữ viết tắt Từ nguyên FDCA Nghĩa tiếng Việt Federal Food, Drug, and Cosmetic Đạo luật Liên bang Thực Act FMOC phẩm, Dược phẩm Mỹ phẩm Fluorenyl methyl oxycarbonyl clorid GLP Good Laboratory Practice Thực hành tốt phịng thí nghiệm GMP Good Manufacturing Practice Thực hành tốt sản xuất GPhP Good Pharmacopoeial Practice Thực hành tốt dược điển HACCP Hazard Analysis and Critical Phân tích mối nguy điểm Control Points kiểm sốt tới hạn HPLC High Performance Liquid Chromatography ICP-AES Sắc ký lỏng hiệu cao Inductively Coupled Plasma - Quang phổ phát xạ nguyên tử Atomic Emission Spectroscopy plasma kết hợp tự cảm Inductively Coupled Plasma - Khối phổ phát xạ plasma liên Mass Spectrometry kết cảm ứng IV Intravenous Đường tĩnh mạch ISO International Organization for ICP-MS Standardization Tổ chức tiêu chuẩn hóa quốc tế LAL Limulus Amoebocyte Lysate LOD Limit of Detection Giới hạn phát NECC New England Compounding Trung Center England tâm pha chế New NL Năng lượng OPA Ortho-phthalaldehyd PCTTĐ Pha chế thuốc theo đơn PCR Polymerase Chain Reaction Phản ứng chuỗi polymerase PDA Photodiode Array Dãy diod quang i Chữ viết tắt Từ nguyên PIPN Peripherally Infused Parenteral Nutrition PN Parenteral Nutrition Nghĩa tiếng Việt Nuôi ăn qua tĩnh mạch ngoại vi Dinh dưỡng tiêm truyền (nuôi ăn tĩnh mạch) PEC The Primary Engineering Control QH Quốc Hội rDNA Recombinant Deoxyribonucleic Hệ thống lọc cấp DNA tái tổ hợp Acid RID Refractive Index Detector Đầu dò số khúc xạ SOP Standard Operating Procedure Quy trình thao tác chuẩn TPN Total Parenteral Nutrition Dinh dưỡng tiêm truyền tồn phần (ni ăn tĩnh mạch toàn phần) TEA Triethylamine TSB Trypto-casein Soy Broth TSA Trypto-casein Soy Agar TT Thông tư USP United States Pharmacopoeia Dược điển Hoa kỳ UV - Vis Ultraviolet – Visible Tử ngoại – Khả kiến WHO World Health Organization Tổ chức Y tế giới Viện KNT Viện Kiểm nghiệm thuốc TP Hồ TPHCM Chí Minh Viện KNT TW Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương ii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Thành phần dịch truyền dinh dưỡng 20 Bảng 1.2 Các thông số kiểm nghiệm theo dạng chế phẩm 27 Bảng 1.3 Tiêu chuẩn trì suốt thời hạn sử dụng sản phẩm thuốc 28 Bảng 1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định [26] 29 Bảng 1.5 Giới hạn tiểu phân theo USP 43 31 Bảng 1.6 Tóm tắt phương pháp phân tích thành phần hỗn hợp pha chế thuốc theo đơn 36 Bảng 2.1 Chất chuẩn đối chiếu vật liệu đối chiếu dùng nghiên cứu 38 Bảng 2.2 Chất chuẩn đối chiếu acid amin dùng nghiên cứu 39 Bảng 2.3 Dung mơi, hóa chất, thuốc thử, mơi trường dùng nghiên cứu 39 Bảng 2.4 Các số kê đơn khoa lâm sàng bệnh viện Nhi đồng 42 Bảng 2.5 Các tiêu chuẩn xác định nguy 44 Bảng 2.6 Thành phần thể tích cho phản ứng khuếch đại 47 Bảng 2.7 Chương trình PCR 48 Bảng 2.8 Các chương trình rửa giải gradient khảo sát với pha động acetonitril/ methanol nước 51 Bảng 2.9 Các chương trình rửa giải gradient khảo sát với pha động dung dịch đệm pH 3,0/dung dịch acid sulfuric 0,1 % acetonitril 52 Bảng 2.10 Các chương trình rửa giải gradient khảo sát 54 Bảng 2.11 Nồng độ acid amin dung dịch chuẩn gốc 54 Bảng 2.12 Nồng độ hỗn hợp acid amin chuẩn 55 Bảng 2.13 Tiêu chuẩn sở dự kiến hỗn hợp PCTTĐ 57 Bảng 3.1 Sự phân bố pha chế thuốc theo đơn khoa lâm sàng (n=24.583) 59 Bảng 3.2 Phân tích thành phần, tỷ lệ thể tích thành phần pha chế thuốc theo đơn (n= 24.583) 60 Bảng 3.3 Hỗn hợp pha chế thuốc theo đơn bệnh viện Nhi đồng (n=24.583) 62 ii Bảng 3.4 Giá trị thống kê số mili đương lượng ion hỗn hợp pha chế thuốc theo đơn (n= 24.583) 63 Bảng 3.5 Giá trị thống kê lượng hỗn hợp pha chế thuốc theo đơn (n=24.583) 63 Bảng 3.6 Các quy trình áp dụng khu vực pha chế thuốc theo đơn 66 Bảng 3.7 Kết phân tích nguy quy trình pha chế dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch 70 Bảng 3.8 Xác định điểm kiểm soát tới hạn 71 Bảng 3.9 Hệ thống giám sát đề nghị cho điểm kiểm sốt tới hạn quy trình pha chế dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch 72 Bảng 3.10 Biện pháp khắc phục cố đề xuất quy trình pha chế dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch bệnh viện Nhi đồng 73 Bảng 3.11 Các hoạt động cần tài liệu tham khảo lưu hồ sơ 74 Bảng 3.12 Kết đánh giá mơi trường phịng PCTTĐ 75 Bảng 3.13 Kết nhuộm Gram định danh 76 Bảng 3.14 Các tiêu chí nhân số nước 78 Bảng 3.15 Các quy định quy trình PCTTĐ số nước 82 Bảng 3.16 Các tiêu chí sở vật chất, trang thiết bị môi trường số nước 82 Bảng 3.17 Tiêu chuẩn khơng khí khu vực PCTTĐ số nước 84 Bảng 3.18 Quy định vệ sinh khu vực PCTTĐ số nước 84 Bảng 3.19 Các tiêu chí cơng tác PCTTĐ bảo quản số nước 85 Bảng 3.20 Thông tin cần có quy trình PCTTĐ số nước 85 Bảng 3.21 Quy định điều kiện bảo quản chế phẩm PCTTĐ số nước 86 Bảng 3.22 Đặc điểm chuyên gia quản lý tham gia nghiên cứu (n=6) 87 Bảng 3.23 Tóm tắt kết khảo sát tiêu chí nhân (Phụ lục 8) 87 Bảng 3.24 Tóm tắt kết khảo sát sở vật chất, trang thiết bị mội trường khu vực PCTTĐ (Phụ lục 8) 88 Bảng 3.25 Tóm tắt kết khảo sát công tác pha chế bảo quản (Phụ lục 8) 89 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-131 Sử dụng trắc nghiệm F t để kiểm tra tính tương thích phương trình hồi quy ý nghĩa hệ số phương trình Yêu cầu: 0,990 ≤ R2 ≤ Kết khảo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ chất phân tích tóm tắt bảng sau đây: Bảng 6.3 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-acid aspartic (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0140 758591 914954 0,8291 TT80 0,0187 1931071 1669513 1,1567 TT90 0,0210 1952567 1556062 1,2548 TT100 0,0234 2609029 1916706 1,3612 TT120 0,0280 3392690 2054487 1,6514 Giá trị F 414,17 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 20,35 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 0,80 Phương trình hồi quy ŷ = 57,1767x R2 0,9928 Bảng 6.4 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-acid glutamic (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0240 1275968 914954 1,3946 TT80 0,0319 3088310 1669513 1,8498 TT90 0,0359 3167895 1556062 2,0358 TT100 0,0399 4187675 1916706 2,1848 TT120 0,0479 5662420 2054487 2,7561 Giá trị F 302,91 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 17,40 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 0,45 Phương trình hồi quy ŷ = 55,4573x R2 0,9902 Bảng 6.5 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-serin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0127 853521 914954 0,9329 TT80 0,0169 2101809 1669513 1,2589 TT90 0,0190 2094189 1556062 1,3458 TT100 0,0211 2864507 1916706 1,4945 TT120 0,0254 3816016 2054487 1,8574 Giá trị F 375,92 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 19,39 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 0,34 Phương trình hồi quy ŷ = 71,1683x R2 0,9921 Bảng 6.6 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-histidin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0074 212490 914954 TT80 0,0098 491470 1669513 TT90 0,0111 542099 1556062 TT100 0,0123 718531 1916706 TT120 0,0148 942623 2054487 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Tỷ số AS/IS 0,2322 0,2944 0,3484 0,3749 0,4588 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-132 Dung dịch Nồng độ acid amin (mg/mL) Diện tích pic (µV x giây) Tỷ số AS/IS Acid amin Nội chuẩn Giá trị F 620,27 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 24,91 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 0,03 Phương trình hồi quy ŷ = 30,7999x R2 0,9952 Bảng 6.7 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-threonin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0121 832322 914954 0,9097 TT80 0,0162 1962247 1669513 1,1753 TT90 0,0182 2061110 1556062 1,3246 TT100 0,0202 2723166 1916706 1,4208 TT120 0,0243 3627877 2054487 1,7658 Giá trị F 546,30 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 23,37 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 1,04 Phương trình hồi quy ŷ = 69,3194x R2 0,9945 Bảng 6.8 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-arginin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0143 735461 914954 0,8038 TT80 0,0191 1779049 1669513 1,0656 TT90 0,0214 1825883 1556062 1,1734 TT100 0,0238 2450007 1916706 1,2782 TT120 0,0286 3287113 2054487 1,6000 Giá trị F 670,02 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 25,88 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -1,35 Phương trình hồi quy ŷ = 54,0647x R2 0,9955 Bảng 6.9 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-alanin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0213 1791729 914954 1,9583 TT80 0,0284 4251158 1669513 2,5463 TT90 0,0319 4351750 1556062 2,7966 TT100 0,0354 6074130 1916706 3,1690 TT120 0,0425 8022199 2054487 3,9047 Giá trị F 470,89 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 21,70 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -0,33 Phương trình hồi quy ŷ = 91,5328x R2 0,9937 Bảng 6.10 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-tyrosin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0017 84192 914954 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Tỷ số AS/IS 0,0920 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-133 Dung dịch TT80 TT90 TT100 TT120 Nồng độ acid amin (mg/mL) 0,0023 0,0026 0,0029 0,0035 Diện tích pic (µV x giây) Tỷ số AS/IS Acid amin Nội chuẩn 208771 1669513 0,1250 206319 1556062 0,1326 291301 1916706 0,1520 381773 2054487 0,1858 Giá trị F 368,84 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 19,21 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 0,54 Phương trình hồi quy ŷ = 51,3916x R2 0,9919 Bảng 6.11 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-glycin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0070 994928 914954 1,0874 TT80 0,0094 2450387 1669513 1,4677 TT90 0,0105 2522600 1556062 1,6211 TT100 0,0117 3481323 1916706 1,8163 TT120 0,0140 4384263 2054487 2,1340 Giá trị F 3152,09 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 56,14 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 1,74 Phương trình hồi quy ŷ = 149,7565x R2 0,9990 Bảng 6.12 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-valin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0113 1010461 914954 1,1044 TT80 0,0151 2490454 1669513 1,4917 TT90 0,0169 2574608 1556062 1,6546 TT100 0,0188 3425399 1916706 1,7871 TT120 0,0226 4313469 2054487 2,0995 Giá trị F 539,59 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 23,23 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 2,29 Phương trình hồi quy ŷ = 87,2481x R2 0,9945 Bảng 6.13 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-methionin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0044 197233 914954 0,2156 TT80 0,0059 495054 1669513 0,2965 TT90 0,0067 549558 1556062 0,3532 TT100 0,0074 732117 1916706 0,3820 TT120 0,0089 939279 2054487 0,4572 Giá trị F 670,02 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 25,88 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -1,35 Phương trình hồi quy ŷ = 54,0647x R2 0,9955 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-134 Bảng 6.14 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ taurin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0011 60772 914954 TT80 0,0015 133949 1669513 TT90 0,0017 145389 1556062 TT100 0,0019 196905 1916706 TT120 0,0022 251745 2054487 Giá trị F 161,61 Giá trị t a 12,71 Giá trị t b 1,02 Phương trình hồi quy R2 Tỷ số AS/IS 0,0664 0,0802 0,0934 0,1027 0,1225 FLT(0,05) = 10,13 tLT(0,05) = 3,18 ŷ = 51,1939x 0,9818 Bảng 6.15 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-tryptophan (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0048 180083 914954 0,1968 TT80 0,0064 456418 1669513 0,2734 TT90 0,0072 486709 1556062 0,3128 TT100 0,0080 631047 1916706 0,3292 TT120 0,0096 838460 2054487 0,4081 Giá trị F 371,79 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 19,28 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -0,38 Phương trình hồi quy ŷ = 43,1075x R2 0,9920 Bảng 6.16 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-phenylalanin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0091 513561 914954 0,5613 TT80 0,0121 1271186 1669513 0,7614 TT90 0,0136 1322456 1556062 0,8499 TT100 0,0151 1772408 1916706 0,9247 TT120 0,0182 2317186 2054487 1,1279 Giá trị F 1752,92 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 41,87 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b 0,37 Phương trình hồi quy ŷ = 61,4882x R2 0,9983 Bảng 6.17 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-isoleucin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0106 826051 914954 0,9028 TT80 0,0141 2025889 1669513 1,2135 TT90 0,0159 2099075 1556062 1,3490 TT100 0,0177 2846878 1916706 1,4853 TT120 0,0212 3808814 2054487 1,8539 Giá trị F 668,01 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 25,85 tLT(0,05) = 3,18 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-135 Giá trị t b Phương trình hồi quy R2 -0,76 ŷ = 88,2534x 0,9955 Bảng 6.18 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-leucin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0241 1749545 914954 1,9122 TT80 0,0321 4327297 1669513 2,5920 TT90 0,0361 4504512 1556062 2,8948 TT100 0,0401 6033155 1916706 3,1477 TT120 0,0482 7955070 2054487 3,8720 Giá trị F 1353,95 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 36,80 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -0,14 Phương trình hồi quy ŷ = 80,1477x R2 0,9978 Bảng 6.19 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-lysin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0203 941954 914954 1,0295 TT80 0,0271 2436487 1669513 1,4594 TT90 0,0305 2636668 1556062 1,6944 TT100 0,0339 3641909 1916706 1,9001 TT120 0,0407 5191384 2054487 2,5269 Giá trị F 299,68 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 17,31 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -3,75 Phương trình hồi quy ŷ = 72,5399x R2 0,9901 Bảng 6.20 Kết kháo sát tính tuyến tính tỷ số AS/IS nồng độ L-prolin (n=2) Diện tích pic (µV x giây) Nồng độ acid amin Dung dịch Tỷ số AS/IS (mg/mL) Acid amin Nội chuẩn TT60 0,0187 305447 914954 0,3338 TT80 0,0250 793850 1669513 0,4755 TT90 0,0281 847023 1556062 0,5443 TT100 0,0312 1190045 1916706 0,6209 TT120 0,0375 1489085 2054487 0,7248 Giá trị F 518,01 FLT(0,05) = 10,13 Giá trị t a 22,76 tLT(0,05) = 3,18 Giá trị t b -1,94 Phương trình hồi quy ŷ = 21,0559x R2 0,9942 Nhận xét: Phương trình tuyến tính nồng độ tỷ số AS/IS chất phân tích có ý nghĩa khoảng nồng độ khảo sát 6.2.4 Độ xác Độ xác phương pháp thể độ lặp lại độ xác trung gian Độ lặp lại: Chuẩn bị dung dịch thử Tiến hành sắc ký lần mẫu theo điều kiện sắc ký chọn, ghi nhận giá trị diện tích pic, từ suy nồng độ chất phân tích dung dịch thử Độ xác trung gian: Tiến hành độ lặp lại ngày khác Yêu cầu: Giá trị RSD nồng độ chất phân tích dung dịch thử ngày ngày phải không 2,0 % Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-136 Kết khảo sát độ xác quy trình thể bảng sau đây: Bảng 6.21 Kết khảo sát độ xác Nồng độ dung dịch thử (mg/mL), ngày RSD Acid amin (%) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu L-Acid aspartic 0,0238 0,0238 0,0238 0,0238 0,0237 0,0240 0,38 L-Acid glutamic 0,0398 0,0397 0,0397 0,0398 0,0398 0,0401 0,33 L-Serin 0,0211 0,0212 0,0210 0,0208 0,0211 0,0215 1,16 L-Histidin 0,0117 0,0116 0,0116 0,0118 0,0118 0,0118 0,74 L-Threonin 0,0201 0,0203 0,0198 0,0200 0,0202 0,0208 1,67 L-Arginin 0,0228 0,0227 0,0226 0,0225 0,0224 0,0228 0,67 L-Alanin 0,0356 0,0351 0,0348 0,0345 0,0350 0,0351 0,99 L-Tyrosin 0,0029 0,0029 0,0029 0,0029 0,0029 0,0029 0,60 Glycin 0,0121 0,0123 0,0123 0,0119 0,0120 0,0122 1,40 L-Valin 0,0212 0,0211 0,0212 0,0213 0,0214 0,0214 0,55 L-Methionin 0,0074 0,0074 0,0073 0,0074 0,0073 0,0074 0,86 Taurin 0,0018 0,0018 0,0018 0,0018 0,0019 0,0018 1,06 L-Tryptophan 0,0084 0,0084 0,0084 0,0084 0,0084 0,0084 0,31 L-Phenylalanin 0,0155 0,0156 0,0155 0,0156 0,0157 0,0157 0,42 L-Isoleucin 0,0171 0,0172 0,0172 0,0173 0,0173 0,0173 0,51 L-Leucin 0,0402 0,0402 0,0402 0,0404 0,0404 0,0405 0,35 L-Lysin 0,0333 0,0332 0,0329 0,0331 0,0326 0,0325 0,98 L-Prolin 0,0322 0,0325 0,0318 0,0327 0,0314 0,0321 1,44 Nồng độ dung dịch thử (mg/mL), ngày RSD (%) RSD (n=12) (%) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu 10 Mẫu 11 Mẫu 12 L-Acid aspartic 0,0237 0,0242 0,0240 0,0240 0,0239 0,0237 0,81 0,82 L-Acid glutamic 0,0405 0,0408 0,0406 0,0408 0,0406 0,0405 0,34 0,42 L-Serin 0,0209 0,0209 0,0208 0,0208 0,0209 0,0209 0,25 0,89 L-Histidin 0,0118 0,0117 0,0117 0,0116 0,0117 0,0118 0,64 0,69 L-Threonin 0,0204 0,0203 0,0206 0,0203 0,0209 0,0207 1,18 1,37 L-Arginin 0,0222 0,0223 0,0221 0,0224 0,0222 0,0224 0,54 0,91 L-Alanin 0,0332 0,0335 0,0336 0,0337 0,0341 0,0343 1,20 1,48 L-Tyrosin 0,0029 0,0028 0,0028 0,0028 0,0029 0,0029 1,92 1,26 Glycin 0,0121 0,0121 0,0121 0,0120 0,0122 0,0120 0,62 1,01 L-Valin 0,0216 0,0211 0,0212 0,0212 0,0214 0,0215 0,92 0,74 L-Methionin 0,0074 0,0072 0,0073 0,0074 0,0074 0,0073 1,11 1,03 Taurin 0,0020 0,0020 0,0020 0,0020 0,0020 0,0020 0,00 1,11 L-Tryptophan 0,0084 0,0084 0,0082 0,0082 0,0083 0,0083 1,08 0,98 L-Phenylalanin 0,0157 0,0154 0,0154 0,0155 0,0156 0,0157 0,89 1,29 L-Isoleucin 0,0175 0,0170 0,0172 0,0171 0,0174 0,0174 1.14 1,11 L-Leucin 0,0410 0,0404 0,0405 0,0404 0,0408 0,0409 0,65 0,55 L-Lysin 0,0325 0,0329 0,0326 0,0328 0,0330 0,0331 0,71 1,77 L-Prolin 0,0387 0,0371 0,0374 0,0372 0,0380 0,0385 1,60 1,81 Nhận xét: Kết khảo sát độ lặp lại độ xác cho thấy giá trị RSD nồng độ chất phân tích dung dịch thử nhỏ 2,0 % nên quy trình định lượng đạt yêu cầu độ xác 6.2.5 Độ Độ thực cách thêm chuẩn vào dung dịch placebo ba mức nồng độ 80 %, 100 % 120 % so với nồng độ đo chất phân tích Mỗi mức nồng độ chuẩn bị mẫu tiến hành sắc ký mẫu lần Bảng 6.22 Chuẩn bị dung dịch thẩm định độ Mẫu Dung dịch Dung dịch chuẩn gốc Dung dịch nội Nước vừa đủ placebo (mL) acid (mL) chuẩn (mL) (mL) DD80 M1 DD80 M2 1,6 2 200 DD80 M3 DD100 M1 2,0 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-137 DD100 M2 DD100 M3 DD120 M1 DD120 M2 2,4 DD120 M3 Tính tỷ lệ thu hồi dựa lượng chuẩn thêm vào lượng tìm với tiêu chuẩn chấp nhận từ 98 102 % RSD ≤ % Kết khảo sát độ quy trình thể bảng sau đây: Bảng 6.23 Kết khảo sát độ mức nồng độ 80 % Nồng độ thêm vào Nồng độ thực tế (mg/mL) Tỷ lệ thu hồi (%) (mg/mL) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Acid amin L-Acid aspartic 0,0187 0,0187 0,0187 0,0188 0,0190 0,0189 L-Acid glutamic 0,0319 0,0319 0,0319 0,0324 0,0323 0,0324 L-Serin 0,0169 0,0169 0,0169 0,0171 0,0170 0,0172 L-Histidin 0,0098 0,0098 0,0098 0,0097 0,0098 0,0100 L-Threonin 0,0162 0,0162 0,0162 0,0160 0,0159 0,0165 L-Arginin 0,0191 0,0191 0,0191 0,0187 0,0188 0,0193 L-Alanin 0,0284 0,0284 0,0284 0,0280 0,0280 0,0288 L-Tyrosin 0,0023 0,0023 0,0023 0,0024 0,0024 0,0024 Nội chuẩn … … … … … … Glycin 0,0094 0,0094 0,0094 0,0092 0,0092 0,0092 L-Valin 0,0151 0,0151 0,0151 0,0154 0,0153 0,0153 L-Methionin 0,0059 0,0059 0,0059 0,0059 0,0059 0,0059 Taurin 0,0015 0,0015 0,0015 0,0015 0,0015 0,0015 L-tryptophan 0,0064 0,0064 0,0064 0,0064 0,0064 0,0063 L-Phenylalanin 0,0121 0,0121 0,0121 0,0123 0,0123 0,0123 L-Isoleucin 0,0141 0,0141 0,0141 0,0143 0,0142 0,0140 L-Leucin 0,0321 0,0321 0,0321 0,0324 0,0324 0,0323 L-Lysin 0,0271 0,0271 0,0271 0,0266 0,0266 0,0269 L-Prolin 0,0250 0,0250 0,0250 0,0252 0,0252 0,0248 Bảng 6.24 Kết khảo sát độ mức nồng độ 100 % Nồng độ thêm vào Nồng độ thực tế (mg/mL) (mg/mL) Acid amin L-Acid aspartic L-Acid glutamic L-Serin L-Histidin L-Threonin L-Arginin L-Alanin L-Tyrosin Nội chuẩn Glycin L-Valin L-Methionin Taurin L-tryptophan L-Phenylalanin L-Isoleucin L-Leucin L-Lysin Mẫu Mẫu Mẫu 100,51 101,43 101,15 98,58 98,91 98,28 98,93 101,07 … 98,41 101,91 98,91 98,29 101,20 101,46 101,17 101,00 98,11 100,91 101,51 101,20 100,47 99,49 98,26 98,77 98,80 101,74 … 98,27 101,90 98,47 98,39 100,82 101,41 100,25 100,96 98,13 100,73 100,96 101,59 101,60 101,34 101,60 101,27 101,52 101,39 … 98,32 101,25 98,88 98,83 99,09 101,85 98,99 100,69 99,19 99,26 Tỷ lệ thu hồi (%) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu 0,0234 0,0399 0,0211 0,0123 0,0202 0,0238 0,0354 0,0029 … 0,0117 0,0188 0,0074 0,0019 0,0080 0,0151 0,0177 0,0401 0,0339 0,0234 0,0399 0,0211 0,0123 0,0202 0,0238 0,0354 0,0029 … 0,0117 0,0188 0,0074 0,0019 0,0080 0,0151 0,0177 0,0401 0,0339 0,0234 0,0399 0,0211 0,0123 0,0202 0,0238 0,0354 0,0029 … 0,0117 0,0188 0,0074 0,0019 0,0080 0,0151 0,0177 0,0401 0,0339 0,0233 0,0400 0,0212 0,0122 0,0200 0,0234 0,0349 0,0030 … 0,0115 0,0190 0,0073 0,0018 0,0081 0,0153 0,0179 0,0407 0,0334 0,0237 0,0406 0,0215 0,0124 0,0206 0,0235 0,0361 0,0029 … 0,0115 0,0191 0,0073 0,0019 0,0081 0,0153 0,0175 0,0403 0,0340 0,0235 0,0395 0,0214 0,0125 0,0205 0,0234 0,0359 0,0029 … 0,0115 0,0191 0,0073 0,0018 0,0079 0,0150 0,0174 0,0399 0,0335 99,81 100,31 100,13 98,92 98,76 98,12 98,61 101,56 … 98,57 101,13 99,02 98,50 101,35 101,33 101,40 101,38 98,58 101,26 101,72 101,92 100,59 101,70 98,66 101,85 98,17 … 98,18 101,38 98,35 101,28 101,50 101,03 99,03 100,41 100,33 100,74 98,87 101,41 101,64 101,41 98,29 101,31 98,58 … 98,75 101,63 98,79 98,91 98,80 99,27 98,73 99,45 98,77 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn RSD (%) 0,49 0,19 0,57 1,41 1,78 1,61 1,54 0,33 … 0,07 0,37 0,25 0,29 1,12 0,24 1,09 1,06 0,63 0,90 RSD (%) 0,73 1,42 0,91 1,37 1,61 0,28 1,73 1,86 … 0,29 0,25 0,35 1,51 1,51 1,11 1,47 0,96 0,96 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-138 L-Prolin 0,0312 0,0312 0,0312 0,0318 0,0307 0,0307 Bảng 6.25 Kết khảo sát độ mức nồng độ 120 % Nồng độ thêm vào Nồng độ thực tế (mg/mL) (mg/mL) Acid amin L-Acid aspartic L-Acid glutamic L-Serin L-Histidin L-Threonin L-Arginin L-Alanin L-Tyrosin Nội chuẩn Glycin L-Valin L-Methionin Taurin L-tryptophan L-Phenylalanin L-Isoleucin L-Leucin L-Lysin L-Prolin 101,86 98,42 98,95 Tỷ lệ thu hồi (%) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu 0,0280 0,0479 0,0254 0,0148 0,0243 0,0286 0,0425 0,0035 … 0,0140 0,0226 0,0089 0,0022 0,0096 0,0182 0,0212 0,0482 0,0407 0,0375 0,0280 0,0479 0,0254 0,0148 0,0243 0,0286 0,0425 0,0035 … 0,0140 0,0226 0,0089 0,0022 0,0096 0,0182 0,0212 0,0482 0,0407 0,0375 0,0280 0,0479 0,0254 0,0148 0,0243 0,0286 0,0425 0,0035 … 0,0140 0,0226 0,0089 0,0022 0,0096 0,0182 0,0212 0,0482 0,0407 0,0375 0,0280 0,0478 0,0249 0,0145 0,0240 0,0281 0,0420 0,0035 … 0,0139 0,0230 0,0089 0,0022 0,0097 0,0182 0,0215 0,0483 0,0411 0,0367 0,0280 0,0480 0,0250 0,0145 0,0240 0,0281 0,0423 0,0035 … 0,0139 0,0229 0,0087 0,0022 0,0097 0,0185 0,0216 0,0490 0,0406 0,0368 0,0284 0,0484 0,0258 0,0150 0,0246 0,0282 0,04231 0,0034 … 0,0143 0,0229 0,0087 0,0022 0,0095 0,0185 0,0209 0,0482 0,0413 0,0372 99,71 99,80 98,21 98,42 98,80 98,17 98,69 100,37 … 98,93 101,75 99,78 98,52 101,07 99,92 101,55 100,18 101,11 98,06 99,83 100,29 98,51 98,21 98,84 98,21 99,39 101,23 … 98,86 101,25 98,42 98,86 101,79 101,91 101,77 101,68 99,82 98,12 101,17 100,94 101,54 101,89 101,37 98,80 101,41 98,51 … 101,91 101,46 98,28 98,12 99,01 101,77 98,66 100,15 101,54 99,25 Nhận xét: Tỷ lệ thu hồi mức thêm chuẩn 80 %, 100 %, 120 % chất phân tích nằm khoảng 98 - 102 % Giá trị RSD Tỷ lệ thu hồi mức thêm chuẩn chất phân tích khơng % Như vậy, quy trình định lượng đạt yêu cầu độ 6.2.6 Khoảng xác định Dựa kết khảo sát tính tuyến tính, độ độ xác, quy trình định lượng đồng thời acid phương pháp HPLC-FLD có khoảng xác định sau: Bảng 6.26 Khoảng xác định acid Khoảng xác định Khoảng xác định Acid amin Acid amin (mg/mL) (mg/mL) L-Alanin 0,0284 – 0,0425 Taurin 0,0015 – 0,0022 L-Histidin 0,0098 – 0,0148 L-Tyrosin 0,0023 – 0,0035 L-Arginin 0,0191 – 0,0286 L-Valin 0,0151 – 0,0226 L-Isoleucin 0,0141 – 0,0212 L-Lysin 0,0271 – 0,0407 L- Acid aspartic 0,0187 – 0,0280 L-Methionin 0,0059 – 0,0089 L-Leucin 0,0321 – 0,0482 L-Phenylalanin 0,0121 – 0,0182 L-Threonin 0,0162 – 0,0243 L-Acid glutamic 0,0240 – 0,0479 L-Serin 0,0169 – 0,0254 Glycin 0,0094 – 0,0140 L-Tryptophan 0,0064 – 0,0096 L-Prolin 0,0250 – 0,0375 Kết luận chung: Kết thẩm định cho thấy quy trình định lượng đồng thời acid amin chế phẩm pha chế thuốc theo đơn dùng qua đường tĩnh mạch phương pháp HPLC-FLD đạt yêu cầu tính phù hợp hệ thống, có tính chọn lọc, khoảng xác định rộng, đạt độ xác độ Như quy trình áp dụng để định lượng đồng thời acid chế phẩm pha chế thuốc theo đơn THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG GLUCOSE TRONG CHẾ PHẨM PHA CHẾ THUỐC THEO ĐƠN DÙNG QUA ĐƯỜNG TĨNH MẠCH BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC-RID Quy trình định lượng glucose chế phẩm pha chế thuốc theo đơn dùng qua đường tĩnh mạch phương pháp HPLC-RID thẩm định theo hướng dẫn ICH (International Conference on Harmonization) ban hành vào tháng 11 năm 2005 bao gồm khảo sát tính phù hợp hệ thống, tính chọn lọc, tính tuyến tính khoảng xác định, độ xác độ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 1,85 RSD (%) 0,81 0,57 1,85 2,00 1,48 0,36 1,42 1,39 … 1,74 0,25 0,84 0,38 1,43 1,10 1,72 0,87 0,89 0,68 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-139 7.1 Chuẩn bị mẫu - Dung dịch chuẩn gốc glucose: cân xác khoảng 9,300 g glucose chuẩn, cho vào bình định mức 25 mL, thêm khoảng 15 mL, siêu âm phút, lắc đều, thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc - Dung dịch chuẩn glucose: cân xác khoảng 5,000 g glucose chuẩn, cho vào bình định mức 50 mL, thêm khoảng 30 mL nước, siêu âm phút, lắc đều, thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc millipore 0,45 μm - Dung dịch thử: dung dịch chế phẩm, lọc qua màng lọc milipore 0,45 μm - Mẫu trắng: nước - Dung dịch placebo: chuẩn bị mẫu thử khơng có glucose 7.2 Kết thẩm định quy trình 7.2.1 Khảo sát tính phù hợp hệ thống Tiến hành sắc ký mẫu chuẩn lần Yêu cầu tính phù hợp hệ thống: Phép thử có giá trị giá trị RSD thời gian lưu, diện tích pic glucose số đĩa lý thuyết biểu kiến không %; hệ số bất đối pic glucose nằm khoảng 0,8 – 1,5 Bảng 7.1 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống (n=6) Thời gian lưu Diện tích pic Hệ số bất Số đĩa lý thuyết biểu n (phút) (µV x giây) đối kiến 5,976 8762833 0,97 1763 5,972 8781794 0,97 1770 5,961 8808987 0,98 1779 5,954 8742055 0,97 1785 5,948 8748451 0,97 1785 5,952 8776995 0,97 1802 Trung bình 5,961 8770186 0,97 1781 RSD (%) 0,19 0,28 0,42 0,70 Nhận xét: Kết khảo sát cho thấy giá trị RSD thời gian lưu, diện tích pic số đĩa lý thuyết biểu kiến không %; hệ số bất đối pic glucose nằm khoảng 0,8 – 1,5 Như vậy, quy trình đạt tính phù hợp hệ thống 7.2.2 Tính chọn lọc Tiến hành sắc ký lần dung dịch chuẩn, dung dịch thử, dung dịch placabo mẫu trắng, ghi nhận sắc ký đồ Quy trình đạt tính chọn lọc sắc ký đồ dung dịch placebo mẫu trắng khơng có pic có thời gian lưu tương đương với thời gian lưu glucose sắc ký đồ dung dịch chuẩn, sắc ký đồ dung dịch thử phải có pic có thời gian lưu tương đương với thời gian lưu glucose sắc ký đồ dung dịch chuẩn, sắc ký đồ dung dịch thử thêm chuẩn phải có tăng lên chiều cao diện tích pic có thời gian lưu tương đương với thời gian lưu glucose dung dịch chuẩn Hình 7.1 đến 7.4 minh họa sắc ký đồ mẫu phân tích khảo sát tính chọn lọc Kết khảo sát tính chọn lọc cho thấy điều kiện phân tích: sắc ký đồ dung dịch placebo mẫu trắng không xuất pic khoảng thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu glucose sắc ký đồ dung dịch chuẩn, sắc ký đồ dung dịch thử xuất pic có thời gian lưu tương đương với glucose sắc ký đồ dung dịch chuẩn, thêm dung dịch chuẩn glucose vào dung dịch thử có tăng lên chiều cao diện tích pic có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu glucose dung dịch chuẩn Như quy trình có tính chọn lọc Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-140 Hình 7.1 Sắc ký đồ dung dịch placebo Hình 7.2 Sắc ký đồ mẫu trắng Hình 7.3 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn Hình 7.4 Sắc ký đồ dung dịch thử 7.2.3 Tính tuyến tính Bảng 7.2 Chuẩn bị dung dịch khảo sát tính tuyến tính Nồng độ (g/mL) Dung dịch chuẩn gốc glucose (mL) Nước vừa đủ (mL) 0,0093 0,25 0,0186 0,5 0,0465 1,25 0,0744 10 0,0930 2,5 0,1116 0,1395 3,75 0,1860 Tiến hành sắc ký lần dung dịch khảo sát tính tuyến tính, ghi nhận sắc ký đồ Thiết lập mối tương quan diện tích pic nồng độ chất phân tích Dùng phần mềm Microsoft Excel® xử lý thống kê số liệu thu được, xác định hệ số a (độ dốc), b (tung độ gốc), R2 (hệ số tương quan bình phương) phương trình hồi quy (ŷ = ax + b) Sử dụng trắc nghiệm F t để kiểm tra tính tương thích phương trình hồi quy ý nghĩa hệ số phương trình Yêu cầu: 0,990 ≤ R2 ≤ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-141 Kết khảo sát tính tuyến tính diện tích pic nồng độ chất phân tích tóm tắt bảng sau đây: Bảng 7.3 Kết kháo sát tính tuyến tính diện tích pic nồng độ glucose (n=2) Dung dịch Nồng độ glucose (g/mL) Diện tích pic (µV x giây) 0,0093 888833 0,0186 1775301 0,0465 4408329 0,0744 7066147 0,0930 8830843 0,1116 10630554 0,1395 13216864 0,1860 17730309 Giá trị F 286477,02 FLT(0,05) = 5,99 Giá trị t a 535,24 tLT(0,05) = 2,45 Giá trị t b -0,43 Phương trình hồi quy ŷ = 95167477x R2 Nhận xét: Phương trình tuyến tính nồng độ diện tích pic glucose có ý nghĩa khoảng nồng độ khảo sát 7.2.4 Độ xác Độ xác phương pháp thể độ lặp lại độ xác trung gian Độ lặp lại: Chuẩn bị dung dịch thử Tiến hành sắc ký lần mẫu theo điều kiện sắc ký chọn, ghi nhận giá trị diện tích pic, từ suy nồng glucose dung dịch thử hàm lượng phần trăm glucose chế phẩm so với hàm lượng ghi nhãn Độ xác trung gian: Tiến hành độ lặp lại ngày khác Yêu cầu: Giá trị RSD hàm lượng phần trăm glucose chế phẩm so với hàm lượng ghi nhãn ngày ngày phải không 2,0 % Kết khảo sát độ xác quy trình thể bảng sau đây: Bảng 7.4 Kết khảo sát độ xác Dung dịch thử (ngày 1) RSD Glucose (%) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Diện tích pic 9625365 9632649 9671841 9651294 9658420 9633359 (µV x giây) Hàm lượng % glucose 98,60 98,68 99,08 98,87 98,94 98,69 0,18 so với hàm lượng nhãn Dung dịch thử (ngày 2) RSD RSD (%) (n=12) (%) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu 10 Mẫu 11 Mẫu 12 Diện tích pic 9649670 9631926 9618433 9633891 9620097 9614613 (µV x giây) Hàm lượng % glucose 98,85 98,67 98,53 98,69 98,55 98,49 0,14 0,14 so với hàm lượng nhãn Nhận xét: Kết khảo sát độ lặp lại độ xác cho thấy giá trị RSD hàm lượng phần trăm glucose chế phẩm so với hàm lượng ghi nhãn nhỏ 2,0 % nên quy trình định lượng đạt yêu cầu độ xác 7.2.5 Độ Độ thực cách thêm chuẩn glucose vào dung dịch placebo ba mức nồng độ 80 %, 100 % 120 % so với nồng độ đo glucose Mỗi mức nồng độ chuẩn bị mẫu tiến hành sắc ký mẫu lần Tính tỷ lệ thu hồi dựa lượng chuẩn thêm vào lượng tìm với tiêu chuẩn chấp nhận từ 98 -102 % RSD ≤ % Kết khảo sát độ quy trình thể bảng sau đây: Bảng 7.5 Kết khảo sát độ Mức nồng Dung Diện tích Lượng Lượng chuẩn Tỷ lệ thu độ thêm Mẫu dịch pic chuẩn tìm thêm vào (g) hồi (%) vào placebo (µV x giây) lại (g) 80 % DD80 M1 1,5890 7669388 1,6154 101,66 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-142 DD80 M2 DD80 M3 DD100 M1 DD100 M2 DD100 M3 DD120 M1 DD120 M2 DD120 M3 1,5903 1,6002 2,0043 2,0039 2,0123 2,3902 2,4065 2,4102 1,6129 101,42 1,6142 100,88 2,0208 100,83 100 % 2,0186 100,73 vừa đủ 20 mL 2,0166 100,22 2,4036 100,56 120 % 2,4127 100,26 2,4121 100,08 Trung bình 100,74 RSD (%) 0,53 Nhận xét: Tỷ lệ thu hồi mức thêm chuẩn 80 %, 100 %, 120 % glucose nằm khoảng 98 – 102 % Giá trị RSD Tỷ lệ thu hồi mức thêm chuẩn glucose khơng q % Như vậy, quy trình định lượng đạt yêu cầu độ 7.2.6 Khoảng xác định Dựa kết khảo sát tính tuyến tính, độ độ xác, quy trình định lượng glucose có khoảng xác định từ 0,0744 – 0,1116 (g/mL) Kết luận chung: Kết thẩm định cho thấy quy trình định lượng glucose chế phẩm pha chế thuốc theo đơn dùng qua đường tĩnh mạch phương pháp HPLC-RID đạt yêu cầu tính phù hợp hệ thống, có tính chọn lọc, khoảng xác định rộng, đạt độ xác độ Như quy trình áp dụng để định lượng glucose chế phẩm pha chế thuốc theo đơn Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 7657589 7664111 9594377 9583685 9574330 11411740 11455080 11451980 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-143 PHỤC LỤC 13 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ĐỘ ỔN ĐỊNH DUNG DỊCH DINH DƯỠNG NUÔI ĂN TĨNH MẠCH Bảng Nguyên liệu để pha chế thuốc theo đơn Dung dịch tiêm truyền glucose 10 % Dung dịch tiêm truyền glucose 30 % Dung dịch tiêm truyền natri clorid 10 % Dung dịch tiêm kali clorid Kabi 10 % Thể tích đóng gói (ml) 500 250 250 10 Dung dịch tiêm calci clorid 500 mg/5 ml Dung dịch tiêm magnesi sulfat Kabi 15 % 10 Stt Tên, dạng bào chế Nhà sản xuất Công ty cổ phần (CTCP) Fresenius Kabi Việt Nam CTCP Dược phẩm Vĩnh Phúc CTCP Dược – Trang thiết bị y tế Bình Định CTCP Fresenius Kabi Việt Nam Dung dịch tiêm truyền Vaminolact 6,5%, thành phần hàm lượng 100 ml: L-Alanin (0,63 g), L-Histidin (0,21 g), L-Arginin (0,41 g), LIsoleucin (0,31 g), L-Aspartic acid (0,41 g), LLeucin (0,70 g), L-Cystein / cystin (0,10 g), LFresenius KABI Austria 100 Threonin (0,36 g), L-Serin (0,38 g), L-Tryptophan GmbH (0,14 g), Taurin (0,03 g), L-Tyrosin (0,05 g), LValin (0,36 g), L-Lysin (0,56 g), L-Methionin (0,13 g), L-Phenylalanin (0,27 g), L-Glutamic acid (0,71 g), Glycin (0,21 g), L-Prolin (0,56 g) Kết khảo sát độ ổn định a Độ màu sắc Kết khảo sát độ màu sắc dung dịch dinh dưỡng ni ăn tĩnh mạch trình bày bảng Bảng Kết khảo sát độ màu sắc dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch (n=6) Lô giờ 24 48 + + + + + + + + + + + + “+” đạt Các mẫu dung dịch khảo sát đạt tiêu chí màu sắc độ sau 48 quan sát Tại thời điểm 48 giờ, mẫu khảo sát có màu không thẫm dung dịch đối chiếu V7 b pH Kết khảo sát pH dung dịch dinh dưỡng ni ăn tĩnh mạch trình bày bảng Bảng Kết khảo sát pH dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch (n=6) Lô giờ 24 48 4,95 4,89 4,87 4,87 4,81 4,81 4,89 4,93 4,87 4,89 4,85 4,95 TB 4,88 4,86 4,87 4,92 RSD 1,44 % 0,95 % 0,41 % 0,85 % pH trung bình dung dịch dinh dưỡng nằm khoảng cho phép (pH 4,5-6,5) theo dược điển Mỹ 43 c Độ thẩm thấu Kết khảo sát độ thẩm thấu dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch theo thời gian trình bày bảng Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-144 Bảng Kết khảo sát độ thẩm thấu dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch (n=6) Độ thẩm thấu (mOsmol/kg) Lô giờ 24 48 929,7 922,0 913,6 911,4 921,2 923,8 914,9 914,3 940,7 941,6 940,5 940,5 Trung bình 930,5 929,1 923,0 922,1 RSD 1,05 % 1,17 % 1,64 % 1,74 % Độ thẩm thấu dung dịch giảm không đáng kể từ lúc pha (0 giờ) đến thời điểm 48 giờ, chứng tỏ dung dịch ổn định suốt thời gian bảo quản d Nội độc tố vi khuẩn thử vô khuẩn Kết kiểm tra nội độc tố vi khuẩn thử vô khuẩn dung dịch dinh dưỡng ni ăn tĩnh mạch, trình bày bảng Bảng Kết kiểm tra nội độc tố vi khuẩn thử vô khuẩn dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch (n=6) Lô giờ 24 48 0,0337 0,0385 0,0465 0,0385 ± 0,015 ± 0,003 ± 0,006 ± 0,003 Nội độc tố 0,0317 0,0387 0,0483 0,0387 vi khuẩn ± 0,002 ± 0,001 ± 0,011 ± 0,001 (EU/mL) 0,0375 0,0456 0,0421 0,0456 ± 0,006 ± 0,009 ± 0,002 ± 0,009 + + + + Thử vô + + + + khuẩn + + + + “+” đạt Qua phân tích cho thấy, nồng độ nội độc tố dung dịch dinh dưỡng qua lần đánh giá có giá trị ngưỡng cho phép 0,25 EU/mL sau 48 khảo sát Đồng thời, dung dịch đạt tiêu chí độ vơ khuẩn Từ phản ánh dung dịch sau pha chế đạt tiêu chuẩn vi sinh theo quy định trì ổn định vi sinh sau 48 bảo quản điều kiện – oC e Giới hạn pthalat Kết kiểm nghiệm giới hạn phthalat dung dịch dinh dưỡng ni ăn tĩnh mạch trình bày bảng Bảng Kết kiểm nghiệm giới hạn phthalat (n=18) Stt Phthalat giờ 24 48 Dimethyl phthalat (DMP) Diethyl phthalat (DEP) Dipropyl phthalat (DPP) Dibutyl phthalat (DBP) Di-n-pentyl phthalat (DpenP) Dioctyl phthalat (DOP) “-” không phát Sau 48 khảo sát, dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch khơng tạo phthalat suốt q trình bảo quản f Kết định lượng Bảng Tóm tắt kết định lượng thành phần dung dịch dinh dưỡng ăn nuôi tĩnh mạch (n=18) Hàm lượng phần trăm so với nhãn thời điểm sau pha chế (%) STT Thành phần giờ 24 48 Glucose 99,08 98,94 98,81 98,63 K+ 103,11 101,61 101,07 100,37 Ca2+ 100,68 100,17 99,79 99,34 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-145 STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Thành phần Na+ Mg2+ L-Acid aspartic L-Acid glutamic L-Serin L-Histidin L-Threonin L-Arginin L-Alanin L-Tyrosin Glycin L-Valin L-Methionin Taurin L-Tryptophan L-Phenylalanin L-Isoleucin L-Leucin L-Lysin L-Prolin Cystein Hàm lượng phần trăm so với nhãn thời điểm sau pha chế (%) giờ 24 48 100,92 100,77 100,60 100,48 99,81 99,75 99,41 98,96 103,81 103,81 103,59 104,03 100,76 101,01 100,01 102,06 99,10 98,08 99,10 97,93 99,64 99,36 99,50 99,50 100,81 100,56 100,06 101,72 98,01 97,29 98,45 96,85 97,89 97,05 99,12 95,49 102,84 102,24 103,43 101,65 103,04 102,61 103,04 102,61 105,51 105,43 105,35 105,68 100,83 100,83 101,06 100,60 107,99 107,99 107,99 107,00 107,00 105,94 107,00 105,73 103,04 102,71 103,04 102,71 99,14 99,23 99,14 99,33 103,05 103,05 102,71 103,60 104,56 104,56 104,88 104,51 101,80 102,28 102,28 101,80 104,77 104,78 104,53 104,91 Kết định lượng thành phần dung dịch dinh dưỡng nuôi ăn tĩnh mạch đạt theo yêu cầu ngưỡng 90 % - 110 % so với hàm lượng nhãn Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn