Thông tin tài liệu
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o a lu LA THỊ BÍCH NGỌC n va n Tên đề tài: tn to PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN CÁC CHỦNG NẤM MỐC CÓ p ie gh KHẢ NĂNG SINH CELLULASE, ỨNG DỤNG TRONG XỬ LÝ RÁC THẢI NƠNG NGHIỆP oa nl w d KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC f an nv a lu oi lm ul : Chính quy : Cơng nghệ sinh học : CNSH & CNTP : 2011 - 2015 at nh Hệ đào tạo Chuyên ngành Khoa Khóa học z z om l.c gm @ an Lu Thái Nguyên, năm 2015 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o LA THỊ BÍCH NGỌC a lu n Tên đề tài: va n PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN CÁC CHỦNG NẤM MỐC CÓ tn to KHẢ NĂNG SINH CELLULASE, ỨNG DỤNG TRONG p ie gh XỬ LÝ RÁC THẢI NÔNG NGHIỆP oa nl w KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC d f an nv a lu ul oi lm Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ sinh học Lớp : K43 - CNSH Khoa : CNSH & CNTP Khóa học : 2011 - 2015 Giảng viên hƣớng dẫn 1: TS Trần Văn Chí Giảng viên hƣớng dẫn 2: Th.S Lƣơng Thị Thu Hƣờng at nh z z om l.c gm @ an Lu Thái Nguyên, năm 2015 n va ac th si i LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập nghiên cứu để hồn thành khóa luận tốt nghiệp em nhận hướng dẫn, giúp đỡ động viên thầy cơ, bạn bè gia đình Nhân dịp hồn thành khóa luận tốt nghiệp: Trước hết, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Trần Văn Chí giảng viên khoa Cơng nghệ sinh học - Cơng nghệ thực phẩm, trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên quan tâm giúp đỡ hướng dẫn em tận tình, a lu chu đáo suốt trình làm khóa luận tốt nghiệp n Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Th.S Lương Thị Thu n va Hường tạo điều kiện giúp đỡ hướng dẫn để em hoàn thành tốt luận tn to văn tốt nghiệp p ie gh Em xin gửi lời tri ân tới thầy cô giáo ngồi khoa Cơng nghệ sinh học - Công nghệ thực phẩm, trường Đại học Nông Lâm Thái oa nl w Nguyên dìu dắt truyền đạt cho em không kiến thức mà cao hết đạo đức làm người suốt bốn năm học qua d nv a lu Cuối em xin cảm ơn gia đình, người thân bạn bè ln oi lm ul khóa luận f an động viên, giúp đỡ em suốt trình học tập, nghiên cứu hoàn thành Thái Nguyên, tháng năm 2015 at nh Sinh viên z z gm @ La Thị Bích Ngọc om l.c an Lu n va ac th si ii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Muối vô chức sinh lý chúng phát triển vi sinh vật 11 Bảng 2.2: Một số VSV sản xuất cellulase 15 Bảng 3.1: Các hóa chất sử dụng đề tài nghiên cứu 32 Bảng 3.2 Các thiết bị sử dụng thí nghiệm 32 Bảng 3.3 Mơi trường thử hoạt tính Cellulose 33 a lu Bảng 3.4 Môi trường CMC 33 n Bảng 3.5 Thuốc thử lugol 34 n va Bảng 4.1: Thử xơ hoạt tính cellulase chủng nấm mốc 44 tn to Bảng 4.2: Số liệu đo mật đo mật độ tế bào vi sinh vật 49 p ie gh Bảng 4.3 Hoạt tính enzyme cellulase phương pháp đục lỗ thạch 50 Bảng 4.4 Kết định danh sơ chủng nấm mốc phân lập 51 oa nl w Bảng 4.5 Tối ưu điều kiện mơi trường có bổ sung đường glucose Thay hàm lượng CMC (carboxymethylcellulose) có mơi trường d nv a lu lượng glucose tương ứng 53 f an Bảng 4.6 Tối ưu điều kiện mơi trường có bổ sung đường saccarose Thay oi lm ul hàm lượng CMC (carboxymethylcellulose) có mơi trường lượng saccarose tương ứng 54 at nh Bảng 4.7 Giá trị OD ứng với công thức môi trường, nuôi cấy với thời z gian từ - 30h 55 z om l.c gm @ an Lu n va ac th si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 iii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 4.1: Hình ảnh cấy chuyển khuẩn lạc để giữ giống nấm mốc 47 Hình 4.2: Hình ảnh thử nghiệm sơ hoạt tính cellulose với rơm rạ 47 Hình 4.3: Hình ảnh thử nghiệm sơ hoạt tính cellulose với cỏ tươi 48 Hình 4.4: Hình ảnh cấy trang vi sinh vật môi trường đĩa thạch 48 Hình 4.5: Xác định hoạt tính enzyme phương pháp đục lỗ thạch 50 Hình 4.6: hình dạng sợi nấm chủng M17C 52 a lu n n va p ie gh tn to d oa nl w f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chú thích CMC : Carboxymethyl cellulose VSV : Vi sinh vật KL : Khuẩn lạc OD : Optical density a lu n n va p ie gh tn to d oa nl w f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 v MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT iv MỤC LỤC v Phần 1: MỞ ĐẦU a lu n n va 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Yêu cầu đề tài tn to 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài p ie gh 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn oa nl w Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan nấm mốc d nv a lu 2.1.1 Đặc điểm nấm mốc f an 2.1.2 VSV sinh tổng hợp cellulase 15 oi lm ul 2.1.3 Ứng dụng công nghệ enzyme ngày 16 2.1.4 Đặc điểm enzyme cellulase 16 at nh 2.2 Enzyme Amylase 21 z 2.2.1 Đặc điểm enzyme Amylase 21 z @ 2.2.2 Nguồn thu enzyme Amylase 21 gm 2.2.3 Ứng dụng Enzyme Amylase 23 om l.c 2.3 Rác thải nông nghiệp 26 2.3.1 Đặc điểm rác thải nông nghiệp 26 an Lu 2.3.2 Ứng dụng công nghệ vi sinh vật xử lý rác thải 27 n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 vi 2.4 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 30 2.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 30 2.4.2 Tình hình nghiên cứu nước 30 Phần 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 3.1 Đối tượng nghiên cứu 32 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 32 3.3 Hóa chất thiết bị sử dụng 32 a lu 3.3.1 Hóa chất 32 n 3.3.2 Dụng cụ thiết bị sử dụng 32 n va 3.3.3 Môi trường nuôi cấy 33 tn to 3.4 Nội dung nghiên cứu 34 p ie gh 3.5 Phương pháp nghiên cứu 34 3.5.1 Phương pháp phân lập tuyển chọn nấm mốc tổng số 34 oa nl w 3.5.2 Phương pháp xác định khả phân giải cellulose phương pháp đục lỗ thạch môi trường thử nghiệm (Gilbert H.J & Hazelwood G.P, d nv a lu 2009)[29] 41 f an 3.5.3 Định danh sơ chủng vi sinh vật 42 oi lm ul 3.5.4 Tối ưu hóa điều kiện ni cấy: lựa chọn mơi trường thích hợp để có điều kiện lên men thu sinh khối thu chế phẩm enzyme 42 at nh Phần 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 44 z 4.1 Phân lập tuyển chọn chủng nấm mốc có khả phân giải z cellulose…………………………………………………………………… 44 gm @ 4.1.1 Phân lập nấm mốc 44 om l.c 4.1.2 Tuyển chọn nấm mốc 49 4.2 Đánh giá hoạt tính enzyme phương pháp đục lỗ thạch an Lu 4.3 Định danh sơ chủng nấm mốc 50 51 n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 vii 4.4 Tối ưu hóa điều kiện môi trường nuôi cấy cách bổ sung thêm hàm lượng dinh dưỡng vào môi trường nuôi cấy ban đầu 52 Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 5.1 Kết luận 56 5.2 Kiến nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 a lu n n va p ie gh tn to d oa nl w f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Nước ta nước nông nghiệp phát triển, song song với điều ta nhìn có lượng lớn phế phụ phẩm lĩnh vực nông nghiệp thải Từ xa xưa, người dân biết tận dụng nguồn phế phụ phẩm để chế biến thức ăn chăn ni, tận dụng vào mục đích riêng mình, phục vụ đời sống sinh hoạt hàng ngày Nhưng a lu xã hội phát triển, nhu cầu người ngày tăng cao, dẫn tới n lượng phế phụ phẩm ngày nhiều hơn, người dân n va tận dụng phần vào sống, mục đích khơng thể tn to giải hết lượng phế phụ phẩm cịn lại p ie gh Chính vậy, với phát triển cơng nghệ sinh học, người tìm hiểu nghiên cứu loại enzyme chất xúc tác sinh học oa nl w có ý nghĩa cao cho trình sinh trưởng phát triển vi sinh vật, khơng cịn đóng vai trị quan trọng cơng nghệ chế biến d nv a lu thực phẩm, y học, kỹ thuật phân tích, cơng nghệ gen f an bảo vệ môi trường Từ đầu kỷ XX, hàng loạt enzyme oi lm ul tìm ứng dụng rộng rãi như: amylase, protease, pectinase, cellulase… Trong enzyme cellulase ứng dụng nhiều công nghiệp sản z Chấn, 2005) [22] at nh xuất cồn, công nghiệp chế biến vải, xử lý mơi trường…(Nguyễn Hữu z Ngày ta thu nhận enzyme từ nguồn khác @ gm từ thực vật, động vật VSV Do ưu điểm mặt sinh lý kỹ thuật om l.c sản xuất mà nguồn VSV ngày ứng dụng rộng rãi Một ưu điểm bật tốc độ sinh trưởng, sinh sản phát triển VSV diễn an Lu nhanh, nhanh nhiều so với thực vật động vật Mặt khác, n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 45 a lu M5 - M6 - - 19 M17A +++ M7 + 20 M17B +++ M8 ++ 21 M17C +++ M9 +++ KL tròn xốp trắng KL tròn, nhung mịn, màu xanh đậm KL mọc theo đám, xốp đen 22 M18 +++ 10 M10 - - 23 M19 + 11 M11 - - 24 M20A +++ +++ KL tròn, nhung mịn, mọc theo đám màu xanh đen KL tròn, mịn, màu xanh xám 25 M20B +++ 26 M20C +++ n màu đen - 18 M16 +++ n va p ie gh tn to 13 M12B f an nv M12A a lu 12 d oa nl w KL đốm đen, tròn, xốp KL tròn, trắng, xốp KL tròn, trắng, xốp KL tròn, nhung mịn, màu xanh xám KL màu xanh đen, mọc theo đám, xốp KL trắng, xốp KL tròn,nhung mịn, màu xanh đen KL đốm đen, xốp, mọc theo đám oi lm ul KL đốm trắng, xanh, mọc theo đám xốp at nh +++ z z om l.c an Lu +++: hoạt tính mạnh ++: hoạt tính trung bình gm +: hoạt tính yếu @ Ghi chú: -: khơng có hoạt tính n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 46 Theo kết xác định chủng khơng có hoạt tính, chủng có hoạt tính yếu, chủng hoạt tính trung bình, 13 chủng có hoạt tính cellulase mạnh Các chủng M9, M12A, M12B, M12C, M13, M16, M17A, M17B, M17C, M18, M20A, M20B, M20C chủng nấm mốc có hoạt tính cellulase mạnh chúng tơi lựa chọn để tiến hành thí nghiệm a lu n n va p ie gh tn to d oa nl w f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 47 a lu n n va p ie gh tn to d oa nl w Hình 4.1: Hình ảnh cấy chuyển khuẩn lạc để giữ giống nấm mốc f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ Hình 4.2: Hình ảnh thử nghiệm sơ hoạt tính cellulose với rơm rạ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 48 a lu n n va p ie gh tn to oa nl w Hình 4.3: Hình ảnh thử nghiệm sơ hoạt tính cellulose với cỏ tƣơi d f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ Hình 4.4: Hình ảnh cấy trang vi sinh vật môi trƣờng đĩa thạch an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 49 4.1.2 Tuyển chọn nấm mốc Xác định mật độ tế bào phương pháp đo OD Để đánh giá phát triển nấm mốc môi trường nuôi cấy, ta tiến hành đo OD khoảng thời gian ni cấy thích hợp Bảng 4.2: Số liệu đo mật đo mật độ tế bào vi sinh vật Tên chủng M12 M12 M17 M17 (A) (C) (B) (C) (B) 0,095 0,111 0,101 0,099 0,178 0,167 0,134 0,128 0,124 0,107 6h 0,175 0,139 0,155 0,131 9h 0,185 0,192 0,163 12h 0,139 0,212 0,196 0,138 0,184 0,209 0,212 0,197 0,237 27h M9 M17A M16 M13 0h 0,129 0,145 0,141 0,099 3h 0,114 0,155 0,157 0,145 0,121 0,178 0,147 0,156 0,132 0,193 0,162 0,196 15h 0,199 0,172 18h 0,201 21h M20 M20 M14 0,131 0,113 0,114 0,147 0,215 0,175 0,122 0,133 0,162 0,126 0,210 0,177 0,139 0,132 0,172 0,149 0,135 0,210 0,185 0,138 0,129 0,184 0,166 0,167 0,147 0,263 0,238 0,151 0,166 0,197 0,224 0,147 0,162 0,163 0,217 0,197 0,153 0,171 0,196 0,142 0,232 0,150 0,153 0,152 0,220 0,202 0,161 0,178 0,196 0,213 0,149 0,249 0,153 0,104 0,188 0,207 0,217 0,168 0,183 0,209 0,221 0,215 0,169 0,248 0,156 0,110 0,192 0,227 0,261 0,173 0,196 0,213 0,290 0,252 0,254 0,194 0,251 0,219 0,201 0,228 0,332 0,278 0,181 0,201 0,215 30h 0,304 0,278 0,271 0,206 0,255 0,212 0,206 0,239 0,319 0,282 0,187 0,187 0,254 33h 0,314 0,271 a lu M12 M18 0,212 0,223 0,177 0,217 0,234 0,339 0,266 0,210 0,216 0,239 36h 0,301 0,249 0,260 0,226 0,211 0,196 0,223 0,211 0,320 0,253 0,238 0,222 0,234 39h 0,298 0,242 0,254 0,219 0,208 0,192 0,234 0,221 0,317 0,245 0,220 0,216 0,211 42h 0,292 0,238 0,242 0,189 0,238 0,235 0,308 0,239 0,219 0,231 0,221 (C) Thời gian a lu n n va p ie gh tn to d oa nl w 24h 0,277 f an nv oi lm ul 0,211 0,202 nh at - Dựa vào bảng kết cho ta thấy, mật độ tế bào đạt cao hầu z hết chủng vi sinh vật phát triển đến giá trị cân động từ 30 - 36h z gm @ - Thời gian thấp cao 30 - 36h mật độ tế bào giảm Trong có chủng M12A, M17C, M18 chủng có mật độ tế bảo an Lu nghiên cứu om l.c tăng đều, ổn định sử dụng chủng để tiến hành n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 50 4.2 Đánh giá hoạt tính enzyme phƣơng pháp đục lỗ thạch a lu n n va p ie gh tn to d oa nl w f an nv a lu oi lm ul Hình 4.5: Xác định hoạt tính enzyme phƣơng pháp đục lỗ thạch Bảng 4.3 Hoạt tính enzyme cellulase phƣơng pháp đục lỗ thạch M12A M18 1,5 z M17C z Hoạt tính cellulase (D-d,cm) at Chủng vi sinh vật nh STT @ 0,8 om l.c gm 0,4 Dựa vào kết đo OD (bảng 4.2), ba chủng có giá trị OD cao an Lu (M12A, M17C, M18) lựa chọn để khảo sát hoạt tính sinh cellulose n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 51 phương pháp đục lỗ thạch môi trường thử nghiệm kết cho thấy chủng M17C chủng có hoạt tính mạnh với kích thước vịng phân giải cao (1,5cm) nằm khoảng enzyme có hoạt lực trung bình (D d > 15mm) Mặc dù phương pháp này, vi sinh vật thử nghiệm môi trường nghèo chất dinh dưỡng (mơi trường thử hoạt tính cellulose) thể rõ khả hoạt lực thể qua kích thước vịng phân giải 4.3 Định danh sơ chủng nấm mốc a lu Do điều kiện thời gian đề tài, định danh sơ đến cấp độ chi n n va chủng nấm mốc phân lập p ie gh tn to Bảng 4.4 Kết định danh sơ chủng nấm mốc phân lập Đặc điểm định loại Tên chủng Đặc điểm hình thái đến chi oa nl w Khuẩn lạc tròn, mặt trơn nhung mịn, màu xanh d M17C Aspergillus nhúm Không tiết sắc tố (theo Micheli ex (hình 4.5b) Fries,1832) f an nv a lu ngọc bích, có rãnh nhăn oi lm ul Hình thái vi thể: sợi nấm ngăn vách, thể bình Bào nh tử trần tụ họp thành hình at z cột, hình cầu (hình 4.5a) z gm @ - Dựa vào đặc điểm hình thái khuẩn lạc (từ kết bảng 4.6) so sánh Aspergillus om l.c với khóa phân loại Bergay’s, cho thấy chủng nấm mốc M17C thuộc chi an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 52 a lu a n n va Hình 4.6: hình dạng sợi nấm chủng M17C 4.4 Tối ƣu hóa điều kiện môi trƣờng nuôi cấy cách bổ sung thêm tn to hàm lƣợng dinh dƣỡng vào môi trƣờng nuôi cấy ban đầu p ie gh Hàm lượng dinh dưỡng sử dụng: đường glucose, đường saccarose, có bổ sung thêm hàm lượng nitơ vô (NH 4NO3) vào môi d oa nl w trường nuôi cấy f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 53 lu an n va p ie gh tn to Bảng 4.5 Tối ƣu điều kiện mơi trƣờng có bổ sung đƣờng glucose Thay hàm lƣợng CMC (carboxymethylcellulose) có môi trƣờng lƣợng glucose tƣơng ứng w Hàm lượng glucose/CMC môi trường nuôi cấy 2/8 3/7 4/6 5/5 6/4 7/3 8/2 9/1 0,101 0,111 0,156 0,378 0,760 0,816 0,777 0,785 0,805 0,835 0,848 0,935 0,982 0,118 0,162 0,574 0,655 0,823 0,859 0,814 0,812 0,847 0,842 0,834 0,872 0,943 0,127 0,134 0,160 0,434 0,661 1,114 1,147 1,184 1,236 1,240 1,241 1,280 1,326 0,141 0,176 0,247 0,633 0,860 1,172 1,346 1,535 1,464 1,466 1,443 1,435 1,472 0,146 0,248 0,592 0,976 1,428 1,563 1,561 1,537 1,575 1,544 1,535 1,506 1,529 0,094 0,104 0,122 0,642 0,889 1,163 1,211 1,239 1,270 1,267 1,265 1,232 1,254 0,119 0,164 0,511 0,779 1,008 1,081 1,016 0,997 1,005 0,998 0,962 1,037 1,135 0,136 0,267 0,525 0,928 1,162 1,159 1,056 1,073 1,068 1,073 1,075 1,075 1,144 0,109 0,131 0,162 0,750 0,821 0,827 0,747 0,745 0,752 0,746 0,734 0,735 0,773 0,136 0,175 0,246 0,630 0,987 1,110 1,110 1,132 1,156 1,184 1,233 1,423 1,563 d oa nl Thời gian 1/9 m ll u nf va an lu n oi tz z @ gm 0h 3h 6h 9h 12h 15h 18h 21h 24h 27h 30h 33h 36h om l.c Từ bảng số liệu trên, ta thấy thay hàm lượng CMC glucose số lượng tế bào tăng nhanh đạt giá trị lớn tỉ lệ CMC/glucose 5/5 (tức 1lit mơi trường, có hàm lượng CMC 10g ta bớt Lu an 5g thay vào ta bổ sung lượng glucose tương ứng 5g), thời gian đạt giá trị cân động rút ngắn n va đáng kể từ 30 - 36h môi trường CMC ban đầu xuống 12 - 18h (giảm 50% thời lượng) ac th si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 54 lu an n va p ie gh tn to Bảng 4.6 Tối ƣu điều kiện môi trƣờng có bổ sung đƣờng saccarose Thay hàm lƣợng CMC (carboxymethylcellulose) có mơi trƣờng lƣợng saccarose tƣơng ứng w Hàm lượng saccarose/ CMC môi trường nuôi cấy d oa nl Thời gian 2/8 3/7 4/6 5/5 6/4 7/3 8/2 9/1 0,007 0,017 0,047 0,339 0,362 0,402 0,427 0,642 0,689 0,721 0,792 0,010 0,020 0,137 0,553 0,559 0,535 0,552 0,712 0,734 0,763 0,792 0.012 0,023 0,089 0,204 0,269 0,277 0,307 0,392 0,401 0,442 0,506 0,011 0,026 0,065 0,136 0,182 0,214 0,245 0,353 0,373 0,439 0,407 0,014 0,023 0,090 0,167 0,300 0,340 0,361 0,470 0,509 0,380 0,559 0,015 0,028 0,135 0,514 0,618 0,644 0,678 0,710 0,726 0,525 0,789 0,011 0,032 0,072 0,185 0,399 0,417 0,498 0,604 0,630 0,744 0,636 0,020 0,020 0,038 0,070 0,149 0,242 0,265 0,379 0,404 0,610 0,447 0,021 0,021 0,037 0,095 0,132 0,401 0,443 0,506 0,533 0,401 0,604 0,010 0,017 0,052 0,077 0,108 0,211 0,238 0,338 0,401 0,437 0,506 m ll u nf va an lu n oi tz 0h 3h 6h 9h 12h 15h 18h 21h 24h 27h 30h 1/9 z Từ bảng số liệu trên, ta thấy thay hàm lượng CMC saccarose số lượng tế bào tăng đạt giá @ gm trị lớn tỉ lệ CMC/saccarose 6/4 (tức 1lit mơi trường, có hàm lượng CMC 10g ta bớt 4g l.c thay vào ta bổ sung lượng saccarose tương ứng 4g), thời gian đạt giá trị cân động rút ngắn om đáng kể từ 30 - 36h mơi trường CMC ban đầu xuống cịn 12 - 18h (giảm 50% thời lượng) Tuy nhiên môi trường an Lu có bổ sung saccarose lượng tế bào khơng tăng nhanh mơi trường có bổ sung hàm lượng glucose n va ac th si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 55 - Thay hàm lượng CMC (carboxymethylcellulose) glucose saccarose với hàm lượng tương ứng loại môi trường Nhận thấy môi trường CMC môi trường nghèo chất dinh dưỡng (môi trường toàn hợp chất muối) Để đánh giá khả tăng sinh nấm mốc môi trường tối ưu hơn, tiến hành bổ sung nguồn ni tơ (NH4NO3) thay phần CMC loại đường khác (glucose saccarose) Kết trình bày bảng n va p ie gh tn to 6h 9h 12h 15h 18h 21h 24h 27h 30h 0,25g 0,037 0,043 0,045 0,046 0,049 0,055 0,054 0,067 0,062 0,066 0,065 0,5g 0,025 0,030 0,031 0,042 0,047 0,056 0,064 0,082 0,081 0,081 0,084 0,75g 0,033 0,068 0,076 0,081 0,088 0,092 0,083 0,085 0,083 0,086 0,082 1g 0,145 0,154 0,157 0,161 0,165 0,156 0,167 0,168 0,173 0,181 0,186 0,25g 0,041 0,063 0,286 0,496 0,935 1,039 1,108 1,134 1,110 1,126 1,133 0,5g 0,028 0,040 0,411 0,508 0,810 1,036 1,057 1,067 1,081 1,092 1,104 0,75g 0,024 0,039 0,222 0,354 0,411 0,523 0,632 1,043 1,056 1,087 1,102 1g 0,016 0,036 0,126 0,292 0,302 0,768 0,771 0,811 0,835 0,903 1,001 CMC 0,026 0,033 0,041 0,045 0,052 0,057 0,064 0,070 0,077 0,083 CMC + glucose 0,058 0,091 0,624 0,904 1,113 1,189 1,206 1,234 1,301 nv 0,038 oi lm ul Mẫu đối chứng d oa nl w Lượng dinh dưỡng Hàm bổ lượng ni sung tơ theo môi tỉ lệ trường CMC có bổ sung glucose 3h f an n hàm lượng ni tơ mơi trường CMC chưa có glucose 0h a lu a lu Bảng 4.7 Giá trị OD ứng với công thức môi trƣờng, đƣợc nuôi cấy với thời gian từ - 30h 0,263 0,498 at nh Thí nghiệm bổ sung nguồn nitơ vào mơi trường nghiên cứu trình z bày bảng 4.5 ta thấy hàm lượng nitơ bổ sung có ảnh hưởng đến sinh z gm @ trưởng, phát triển nấm mốc thấy lượng nitơ bổ sung vào mơi trường có bổ sung glucose đạt tỉ lệ cao Trong thời gian nghiên cứu so so với CMC khơng có nitơ om l.c với mẫu đối chứng CMC có bổ sung nitơ hàm lượng tăng gấp 20 lần an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 56 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu, đề tài rút số kết luận sau: Phân lập 26 chủng nấm mốc, có 13 chủng nấm mốc có hoạt lực mạnh Tiến hành tiếp thử nghiệm phân giải cellulose 13 chủng M9, M12A, M12B, M12C, M13, M16, M17A, M17B, M17C, M18, M20A, M20B, M20C chọn số 13 chủng có hoạt lực mạnh a lu n Các chủng nấm mốc có khả phân giải cellulose cao Trong n va đó, chủng nấm mốc M17C có khả phân giải cellulose cao so với tn to chủng cịn lại Hoạt tính phân giải cellulose theo D-d (cm) 1,5cm p ie gh Định danh chủng nấm mốc M17C thuộc chi Aspergillus Chủng nấm mốc M17C phát triển thích hợp điều kiện môi oa nl w trường có bổ sung hàm lượng nitơ với tỉ lệ 1:1 (1g CMC: 1g Ni tơ), hàm lượng glucose tỉ lệ 5:5 (5g CMC : 5g glucose), hàm lượng saccarose tỉ lệ 6:4 d f an nv 5.2 Kiến nghị a lu (6g CMC: 4g saccarose) Trong trình nghiên cứu đề tài cho thấy enzyme cellulase tách từ ul oi lm chủng nấm mốc M17C có hoạt độ khả phân giải cellulose cao Do nh kết nghiên cứu phịng thí nghiệm, at phần hạn chế dụng cụ, thiết bị sử dụng thời gian tiến hành z z nghiên cứu, cần tiếp tục sâu định danh nấm mốc M17C, tìm hiểu @ gm độc tố sinh học, yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển om l.c nấm mốc Từ đó, mở hướng nghiên cứu tạo thành chế phẩm vi sinh để xử lý phế thải nơng nghiệp, góp phần bảo vệ mơi trường, phục vụ cho sản an Lu xuất nông nghiệp ngày phát triển bền vững n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Lân Dũng, Bùi Xn Đơng, Lê Đình Lương, 1982 Vi Nấm, NXB KH&KT, Hà Nội Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đăng Đức, Đặng Hồng Miên, Nguyễn Vĩnh Phước, Nguyễn ĐìnhQuyến, Nguyễn Phùng Tiến, Phạm Văn Ty, 1976 Một số phương pháp nghiên cứu Vi Sinh Vật (tập 2&3), NXB KH&KT, a lu Hà Nội n Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty Vi sinh vật học va n Nxb Giáo dục, 2003 tn to Trần Cẩm Vân (2005), giáo trình vi sinh vật học mơi trường, NXB ĐH p ie gh Quốc Gia Hà Nội Nguyễn Xuân Thành, Nguyễn Bá Hiên, Hoàng Hải, Vũ Thị Hoan Vi sinh oa nl w vật học công nghiệp Nxb Giáo dục, 2005 Đặng Minh Hằng (1999), “ Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến khả d a lu sinh tổng hợp cellulase số chủng vi sinh vật để xử lý rác”, f an nv Báo cáo khoa học, hội nghị Cơng nghệ Sinh học tồn quốc, NXB Khoa ul học kỹ thuật, Hà Nội, tr 333-339 oi lm Hồng Quốc Khánh, Ngơ Đức Huy, Nguyễn Duy Long (2003), “Khả nh sinh tổng hợp đặc điểm cellulase Aspergillus niger RNNL- at 363”, Báo cáo khoa học, Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc, NXB z z Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr.304-307 @ gm Tăng Thị Chính, Lý Kim Băng, Lê Gia Huy (1999), “Nghiên cứu sản xuất om l.c cellulase số chủng VSV ưu nhiệt phân lập từ bể ủ rác thải” Báo cáo khoa học, Hội nghị Cơng nghệ sinh học tồn quốc NXB Khoa học an Lu Kỹ thuật, Hà Nội, tr 790-797 n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Nguyễn Xuân Thành, Nguyễn Đường, Hoàng Hải, Vũ Thị Hoàn Sinh học đất Nxb Giáo dục, 2009 10 Nguyễn Xuân Thành cộng (2005), giáo trình vi sinh vật học công nghiệp, Nxb Giáo dục 11 Đặng Thị Thu, Lê Ngọc Tú, Tô Kim Anh, Phạm Thu Thủy, Nguyễn Xuân Sâm (2004) Công nghệ enzyme, Nxb khoa học kỹ thuật, Hà Nội 12 Lê Gia Hy (2010), giáo trình Cơng nghệ vi sinh vật xử lý chất thải, Nxb giáo dục Việt Nam a lu 13 Lê Minh Thành, giáo trình Quản lý xử lý chất thải rắn, Nxb Đại học n An Giang, khoa Kỹ thuật - công nghệ - môi trường n va 14 Luận án tiến sỹ sinh học Nghiên cứu vi sinh vật phân giải cellulose p ie gh tn to phân hủy rác thải hiếu khí ứng dụng, 2001 15 Đỗ Đức Thắng (2005), giới thiệu công nghệ Seraphin xử lý phế thải nông nghiệp sinh hoạt Tuyển tập báo cáo khoa học Hội nghị môi oa nl w trường 16 Lương Đức Phẩm (2009), Cơ sở khoa học công nghệ bảo vệ môi d nv a lu trường, Nxb giáo dục, Hà Nội f an 17 Tăng Thị Chính (2005), Cơng nghệ xử lý chất hữu phế thải nông oi lm ul nghiệp sinh hoạt vi sinh vật ưa nhiệt, Tuyển tập báo cáo khoa học Hội nghị môi trường toàn quốc at nh 18 Lý Kim Bảng, Lê Gia Hy, Tăng Thị Chính, Phan Tuyết Minh, Lê Thanh z Xuân, Trần Quang Huy, Đaò Ngọc Quang, Phạm Thị Cúc (1999) Sử z dụng vi sinh vật có hoạt tính phân giải cellulase cao để nâng cao chất @ om l.c học toàn quốc, Hà Nội gm lượng phân hủy rác thải sinh hoạt nông nghiệp Hội công nghệ sinh 19 Nguyễn Đức Lương (1996), Nghiên cứu tính chất số vi sinh vật có an Lu khả tổng hợp cellulaza cao ứng dụng chúng công nghệ xử n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99
Ngày đăng: 25/09/2023, 19:12
Xem thêm:
