Bộ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÈU KHÁNH DUY NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CẢI THIỆN VẬN ĐỘNG CỦA CAO KHÔ MẠN KINH TỬ (Vitex trifolia L f) THÔNG QUA HỆ DOPAMINERGIC TRÊN MÔ HÌNH RUÒI GIẤM DROSOPHILA KHÓA LUẬ[.]
Bộ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - LÈU KHÁNH DUY NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CẢI THIỆN VẬN ĐỘNG CỦA CAO KHÔ MẠN KINH TỬ (Vitex trifolia L.f) THÔNG QUA HỆ DOPAMINERGIC TRÊN MƠ HÌNH RI GIẤM DROSOPHILA KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ HÀ NỘI - 2023 Bộ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI - LÈU KHÁNH DUY Mã sinh viên: 1801142 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CẢI THIỆN VẬN ĐỘNG CỦA CAO KHÔ MẠN KINH TỬ (Vitex trifolia L.f) THÔNG QUA HỆ DOPAMINERGIC TRÊN MƠ HÌNH RUỒI GIẤM DROSOPHILA KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ Người hưởng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thị Lập PGS.TS Phạm Thị Nguyệt Hằng Nơi thực hiện: Viện Dược liệu Bộ mơn Hóa sinh HÀ NỘI - 2023 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin phép bày tở lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Phạm Thị Nguyệt Hằng - Trưởng khoa Dược lý- Sinh hóa, Viện Dược liệu PGS.TS Nguyễn Thị Lập - Giảng viên khoa Công nghệ sinh học người thầy đà trực tiếp hướng dẫn, tận tình bảo ln quan tâm, giúp đỡ tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến ThS Đinh Thị Minh, CN Nguyễn Văn Hiệp, DS Bùi Thị Hà Vy anh chị khoa Dược lý - Sinh hóa, Viện Dược Liệu giúp đỡ, hướng dẫn kỹ thuật tạo điều kiện tốt cho em suốt thời gian em tham gia nghiên cứu thực nghiệm khoa Nhân dịp này, em xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám hiệu tồn thể thầy giáo trường Đại học Dược Hà Nội giảng dạy tạo điều kiện thuận lợi cho em thời gian học tập trường Cuối cùng, xin bày tỏ yêu thương biết ơn sâu sắc tới Bố Mẹ, người thân gia đình bạn bè bên cạnh động viên, quan tâm hỗ trợ mặt sống Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 3/6/2023 Sinh viên Lều Khánh Duy MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐÈ CHƯƠNG 1: TÔNG QUAN 1.1 Hội chứng mãn kinh 1.1.1 Sinh lý bệnh 1.1.1.1 Sơ lược vê hội chứng mãn kỉnh 1.1.1.2 Nguyên nhân dân đền mãn kinh 1.1.2 Một sô triệu chứng hội chứng mãn kinh 1.1.2.1 Đau nửa đâu phụ nữ mãn kinh 1.1.2.2 Đau xương - khớp phụ nữ mãn kỉnh 1.1.2.3 Đau vủ thời kỳ mãn kinh 1.1.3 Các liệu pháp nhăm thiện vận động liên quan đên đau mãn kinh 1.1.3.1 1.1.3.2 1.1.3.3 1.2 Đôi với đau nửa đâu Đối với đau xương khớp Đôi với đau vủ Tác dụng thông qua hệ dopaminergic 1.2.1 Dopamin hệ dopaminergic 1.2.2 Khải niệm vê dopamin Q trình sinh tổng họp chuyển hóa dopamin Vhí trị dopamin thần kinh trung ương (CNS) tủy sống 1.2.3 Các nhóm receptor dopamin 1.2.4 Cơ chê cải thiện vận động liên quan đên đauthông qua hệ dopaminergic 10 1.2.1.1 1.2.1.2 1.3 Tổngquan Mạn kinh tử (Vitex trifolia L.f) 11 1.3.1 Thực vật học 11 1.3.1.1 Vị trí phân loại 11 1.3 ỉ.2 Đặc điểm thực vật 12 1.3.1.3 Đặc điểm dược liệu Mạn kinh tử 12 1.3.1.4 Phân bố 13 1.3.2 Thành phẩn hóa học 13 1.3.3 Tác dụng công dụng 15 1.3.3.1 Công dụng dãn gian 15 1.3.3.2 Các nghiên cứu vê hoạt tính sinh học 16 1.3.3.3 Các nghiên cứu hệ dopaminergic 17 1.4 Căn khoa học xây dựng mơ hình ruồi giấm Drosophila nghiên cứu tác dụng cải thiện vận động hệ dopaminergic cao khô Mạn kinh tử (Vitex trifolia L.f) 18 1.4.1 Cẫn khoa học xây dựng mơ hình 18 1.4.2 Giả thuyêt mơ hình đặt 19 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỦXl 21 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 21 2.1.1 Đôi tượng nghiên cứu 21 2.1.1.1 Dược liệu nghiên cứu 21 2.1.1.2 Dịng rỉ giâm phục vụ nghiên cứu 21 2.1.2 Dụng cụ, hóa chất thí nghiệm 22 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Quy trình chuẩn bị ruồi phục vụ nghiên cứu 23 Quy trình nhân dịng ri hoang dại Canton - s thu ruôiphục vụ nghiên cứu 23 2.2.1.2 Thức ăn cho ruôi giâm 24 2.2.1.3 Quy trình cho ruồi ăn thuốc 24 2.2.2 Khảo sát lựa chọn nông độ cao khô Mạn kinh tử (Vitex trifolia L.f) 24 2.2.1.1 2.2.2.1 Chia lô thỉ nghiệm 24 2.2.2.2 Tiến hành thỉ nghiệm 24 2.2.3 Đánh giá tác dụng cải thiện vận động cao khô Mạn kinh tử (Vitex trifolia L.f.) mơ hình ri giâm Drosophila băng thử nghiệm hành vi .27 Thử nghiệm đảnh giá khả leo trèo ruồi trưởng thành (Climbing assay) 27 2.2.3.2 Thử nghiệm đánh giá khả di chuyển (bò) ruồi trưởng thành (Locomotor tracking system) 29 2.2.4 Đảnh giả tác động lên hệ dopaminergic thông qua sô lượng tê bào sản sinh dopamin não ri băng phương pháp hóa mơ miền dịch huỳnh quang 32 2.2.3 ỉ 2.2.5 Phân tích thống kê 33 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN cứu 34 3.1 Kết khảo sát lựa chọn nồng độ cao khô Mạn kinh tử 34 3.2 Kết đánh giá tác dụng cải thiện vận động cùa cao khô Mạn kinh tử thông qua thử nghiệm hành vi 35 3.1.1 Đánh giả tác dụng cải thiện vận động cao khô Mạn kinh tử thông qua khả leo trèo ruôi giâm trưởng thành (Climbing assay) 35 3.1.2 Đánh giá tác dụng cải thiện vận động cao khô Mạn kinh tử thơng qua khả di chuyến (bị) ruồi trưởng thành (Locomotor tracking system assay) 37 3.3 Ket đánh giá tác động lên hệ dopaminergic thông qua số lượng tế bào sản sinh dopamin não ruồi phương pháp hóa mơ miễn dịch huỳnh quang 39 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 42 4.1 đối tượng nghiên cứu 42 4.2 Vê nghiên cứu tác dụng cải thiện vận động Mạn kinh tử hội chứng mãn kinh 42 4.3 mơ hình ruồi giấm 43 4.4 xây dựng mơ hình nghiên cứu 44 4.5 khảo sát nồng độ cao khôMạn kinh tử đế phục vụ nghiên cứu 45 4.6 kết nghiên cứu 45 4.6.1 Đánh giả tác dụng cải thiện vận động cao khô Mạn kinh tử thông qua khả leo trèo ruồi giấm trưởng thành (Climbing assay) 45 4.6.2 Đảnh giá tác dụng cải thiện vận động cao khô Mạn kinh tử thông qua khả di chuyển (bò) ruồi giấm trưởng thành (Locomotor tracking system assay) 46 4.6.3 Đảnh giả tác động lên hệ dopaminergic thông qua sô lượng tê bào sản sinh dopamin não ruôi giâm băng phương pháp hóa mơ miên dịch huỳnh quang 47 4.7 Một số hạn chế nghiên cứu 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 Kết luận 49 Đề xuất 49 TÃI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Thuốc giảm đau bậc 1, bậc theo khuyến cáo Tố chức Y tế Thế giới (WHO) [1] Bảng 1.2: cấu trúc hóa học số hoạt chất có Mạn kinh tử [27] 14 Bảng 2.1 : Hóa chất sử dụng nghiên cứu 22 Bảng 2.2: Dụng cụ thiêt bị nghiên cứu 22 DANH MỤC HÌNH ẢNH, sơ ĐỊ, ĐỊ THỊ Tổng hợp chuyển hóa Dopamin (DA) Synap dopaminergic: Các nhóm receptor Dopamin [99], [103] 10 Một số hình ảnh Mạn kinh tử [9] 12 Một số hình ảnh dược liệu Mạn kinh tử [10] 13 Hình Hình Hình Hình Hình 1.1: 1.2: 1.3: 1.4: 1.5: Hình Hình Hình Hình Hình Hình 2.1: Quy trình điều chế cao khô Mạn kinh tử 21 2.2: Sơ đồ thiết kế thí nghiệm 23 2.3: Thiết kế thí nghiệm khảo sát nồng độ cao khô Mạn kinh tử 25 2.4 Thiêt kê thí nghiệm đánh giá khả leo trèo ruồi giâm trưởng thành 28 2.5: Thiết kế nghiên cứu đánh giá khả di chuyển cùa ruồi trướng thành 30 2.6: Phễu buồng quan sát 31 Hình 3.1: Hình 3.2: Hình 3.3: Hình 3.4: Kêt khảo sát nông độ cao khô Mạn kinh tử sau ngày sau ngày 34 Ket đánh giá khả leo trèo ruồi trưởng thành sau ngày 36 Ket đánh giá khả nãng di chuyển (bò) ruồi trưởng thành sau ngày 38 Ket định lượng dopamin hệ thần kinh não ấu trùng ruồi giấm 40 DANH MỤC KÝ Tự, CHŨ VIẾT TẤT Tên viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt 3IY 3-iodo-L-tyrosine 3-iodo-L-tyrosin AADC L-aromatic amino acid decarboxylase L-aromatic amino acid decarboxylase ALDH Aldehyd dehydrogenase Aldehyd dehydrogenase CNS Central nervous - system Hệ than kinh trung ương COMT Catechol-O-methyl transferase Catechol-O-methyl transferase DA Dopamine Dopamin DAT Dopamin transporter Chất vận chuyển Dopamin DOPAC 3,4-dihydroxyphenylacetic acid 3,4-dihydroxyphenylacetic acid ER Esstrogen receptor Receptor Estrogen HAV Homovanillic acid Acid homovanillic HRT Hormone replacement therapy Liệu pháp thay hormon LD L-Dopa L-Dopa MAO Monoamine oxidase Monoamine oxidase NSAIDs Non-steroid anti - imflammatory drugs Thuốc chống viêm không steroid PBS Phosphate Buffered Saline Dung dịch đệm phosphat PFA Paraformaldehyd Paraformaldehyd TH Tyrosin hydrolase Tyrosin hydrolase VMAT2 Vesicular Monoamine Transporter Bọc dự trữ vận chuyển monoamin VT Vitex trifolia Vitex trifolia Ventral tegmental area Vùng não thất VTA ĐẶT VÁN ĐÈ Phụ nữ mãn kinh thường gặp phải triệu chứng đau hội chứng mãn kinh bao gồm: đau nửa đầu, đau khớp, đau vú, [46], [56], [72], [106] Dịch tễ cho thấy triệu chứng đau phố biến hội chứng mạn kinh bao gồm đau nửa đầu (38%), đau xương khớp (31%) [100], đau vú từ nhẹ đến nặng (11%)[18], [65] Các triệu chứng đau có ảnh hưởng đến khả vận động phụ nữ đau lại tự [110], không thực hoạt động bình thường[108] Việc sử dụng loại thuốc nhằm cải thiện vận động liên quan đến đau có tác dụng phụ nghiêm trọng NSAIDs (ibuprofen, diclofenac, ) gây rối loạn tiêu hóa nghiêm trọng [62], thuốc chủ vận dopamin bromociptin gây nhức đầu, buồn nơn [94] Lồi Mạn kinh (Vừex trifolia L.f) sử dụng phổ biến y học cổ truyền, cùa dùng để chữa cảm mạo, sốt, đau đầu, nhức thái dương, nhức mắt, tối tăm mặt mũi, vô kinh Theo “The Natural Pharmacy”, loài thuộc chi Vitex giới thiệu dùng đế điều trị hội chứng tiền mãn kinh Quả Mạn kinh có chứa thành phần: casticin, luteolin (flavonoid), rotundifuran (diterpenoid), vitexilacton (lacton) tương tự Vitex agnus-castus [97] Tác dụng thành phần có tác dụng giảm triệu chứng đau hội chứng mãn kinh[60], diterpenoid có tác dụng thơng qua hệ dopaminergic [38] Từ nhũng đánh giá thấy nhu cầu thuốc nhằm cải thiện vận động liên quan đến đau hội chứng mãn kinh giới nói chung Việt Nam nói riêng ngày lớn Hơn nữa, với kết thu chứng kinh nghiệm sử dụng dân gian, Mạn kinh tử tiềm để phát triển thành sản phẩm có tác dụng hỗ trợ/điều trị cải thiện vận động liên quan đến đau hội chứng mãn kinh phụ nữ vấn đề đặt cần có nghiên cứu sâu tác dụng dược lý chế liên quan, độ an toàn loài thực vật Mặc dù Mạn kinh tử dùng làm thuốc đà nghiên cứu nhiều giới - đặc biệt loài Vitex agnus-castus, có nghiên cứu Việt Nam liên quan đến cải thiện vận động liên quan đến đau hội chứng mãn kinh Đặc biệt, chưa có nghiên cứu tác dụng chế thông qua hệ dopaminergic từ Mạn kinh tử (Vitex trifolia L.f.) Việt Nam giới Chính thế, chúng tơi thực đề tài: “NGHIÊN cứu TÁC DỤNG CẢI THIỆN