Nghiên cứu tác dụng giảm đau và bảo vệ gan của các cao chiết từ lá cây trứng cá (muntingia calabura l )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ NGUYỄN VIỆT QUANG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢM ĐAU VÀ BẢO VỆ GAN CỦA CÁC CAO CHIẾT TỪ LÁ CÂY TRỨNG CÁ (MUNTINGIA CALABURA L.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CẦN THƠ, 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ NGUYỄN VIỆT QUANG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢM ĐAU VÀ BẢO VỆ GAN CỦA CÁC CAO CHIẾT TỪ LÁ CÂY TRỨNG CÁ (MUNTINGIA CALABURA L.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Chuyên ngành: Dược Lý – Dược Lâm sàng Mã số: 8720205 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS NGUYỄN THỊ THU HƯƠNG CẦN THƠ, 2021 i LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập nghiên cứu Trung tâm Sâm Dược liệu Thành phố Hồ Chí Minh tơi nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ, hỗ trợ từ gia đình, q Thầy Cơ, anh chị bạn bè Tôi vô biết ơn người dành tất tình u thương tình cảm góp phần tạo động lực để tơi vượt qua quãng đường dài học tập đầy khó khăn thử thách Trước tiên tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới cô PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương tận tình bảo, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới Ban Giám hiệu, Khoa Dược, Khoa Sau đại học, thầy cô trường Đại học Tây Đô giảng dạy trang bị cho kiến thức bản, tận tình giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tập thể anh chị em phịng thí nghiệm Trung tâm Sâm Dược Liệu nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành đề tài Lời cuối cùng, tơi xin kính chúc quý thầy cô trường Đại học Tây Đô thật dồi sức khỏe, niềm tin để tiếp tục thực sứ mệnh cao đẹp truyền đạt kiến thức cho hệ mai sau, Cô, Chú, Anh, Chị Trung tâm Sâm Dược Liệu vui vẻ, mạnh khỏe thành công công việc sống Tôi xin chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày tháng năm 2021 Người cam đoan Nguyễn Việt Quang ii TÓM TẮT Cây Trứng cá (cây mật sâm, tên khoa học Muntingia calabura L., Muntingiaceae) loài quen thuộc với người dân vùng đồng sông Cửu Long Lá Trứng cá sử dụng y học dân gian giúp hỗ trợ điều trị viêm, giảm đau, ngăn ngừa nhồi máu tim Nghiên cứu nhằm đánh giá tác dụng tác dụng giảm đau bảo vệ gan cao chiết nước cao chiết cồn 45% từ Trứng cá thực nghiệm gây đau (gây đau xoắn bụng acid acetic, gây đau bàn chân chuột formalin) thực nghiệm gây tổn thương gan mạn paracetamol chuột nhắt trắng đực chủng (Swiss albino) Kết định tính, định lượng cho thấy cao chiết từ Trứng cá có hàm lượng flavonoid tồn phần 21,87 mg quercetin/g cao chiết cồn 18,48 mg quercetin/g cao chiết nước Các cao chiết uống liều lượng tương đương 2,5 g g nguyên liệu khô/kg trọng lượng thể chuột theo phác đồ ngày trước tiến hành thực nghiệm gây đau ngày sau tiến hành thực nghiệm tổn thương gan mạn paracetamol Kết cho thấy cao chiết nước cao chiết cồn từ Trứng cá thể tác dụng giảm đau phụ thuộc vào liều thực nghiệm gây đau, liều uống tương đương g nguyên liệu/kg trọng lượng chuột cho tác dụng giảm đau tương tự thuốc đối chiếu diclofenac natri (liều uống 15 mg/kg) Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan cho thấy cho chuột uống paracetamol với liều 250 mg/kg 15 ngày làm tăng aspartate aminotransferas (AST) alanine aminotransferas (ALT) huyết tương tăng hàm lượng malondialdehyd (MDA), đồng thời làm giảm hàm lượng glutathion (GSH) gan chuột Việc điều trị cao chiết nước cao chiết cồn từ Trứng cá, tương tự thuốc đối chiếu silymarin cho tác dụng làm giảm hoạt độ ALT AST huyết tương, cải thiện tình trạng stress oxy hóa qua việc làm giảm hàm lượng MDA làm tăng hàm lượng GSH gan đạt ý nghĩa thống kê so với đối chứng không điều trị Nghiên cứu cho thấy Trứng cá ứng viên tiềm cho tác dụng hỗ trợ điều trị đau bảo vệ gan Từ khóa: Muntingia calabura L., tác dụng giảm đau, flavonoid, mơ hình chuột bị tổn thương gan paracetamol, tác dụng bảo vệ gan iii ABTRACT Muntingia calabura L (Muntingiaceae) is acquainted familiar to the people in the Mekong delta The leaves of M calabura are known to have ethnopharmacological properties such as anti-inflammatory, analgesic, antigout activities, and prevention of acute coronary syndrome The present study aims to investigate the analgesic and hepatoprotective effects of M calabura leaf extracts by using the mouse pain models (acetic acid-induced writhing responses and formalin-induced hind paw pain) and a subchronic paracetamol-induced hepatotoxicity model in Swiss albino mice The flavonoid contents were found as 21.87 mg quercetin equivalent/dry weight in 45% ethanol extract and 18.48 mg quercetin equivalent/dry weight in aqueous extract Oral administration of M calabura leaf extracts was performed at the doses equivalent to 2.5 g and g raw materials/kg mouse body weight for days before the pain models and for days after paracetamol intoxication The results revealed that aqueous extract and ethanol extract from M calabura leaves showed analgesic effects which were dose-dependent in both pain models At the oral dose equivalent to g of raw materials/kg, the M calabura leaf extracts demonstrated analgesic effect similar to the reference drug diclofenac sodium (15 mg/kg) On the other hand, the results revealed that paracetamol orally administered at dose of 250 mg/kg for 15 days induced an increase in hepatic MDA content, plasma levels of AST and ALT, and significantly decreased hepatic GSH content in mice Oral administration of either ethanol extract or aqueous extract of M calabura, as well as silymarin (a reference drug, 0.1 g/kg) decreased plasma AST and ALT concentrations in paracetamol-intoxicated mice Moreover, M calabura leaves extracts also improved the oxidative stress status in mouse liver through effective reduction of hepatic MDA levels and increasing of hepatic GSH levels Taking together, M calabura leaves may be an alternative candidate for pain treatment and liver protection Keywords: Muntingia calabura L., analgesic effect, flavonoids, paracetamol-induced hepatotoxicity mouse model, hepatoprotective effect iv LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam kết luận văn dựa kết nghiên cứu hướng dẫn Cô PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương Các số liệu kết có luận văn hồn tồn trung thực chưa cơng bố luận văn trước đây, tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm đề tài Cần Thơ, ngày tháng năm 2021 Người cam đoan Nguyễn Việt Quang v MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN TÓM TẮT ii ABTRACT iii LỜI CAM ĐOAN iv MỤC LỤC v DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH ix DANH MỤC SƠ ĐỒ VÀ BIỂU ĐỒ .x DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT .xi ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY TRỨNG CÁ 1.1.1 Thực vật học 1.1.2 Thành phần hóa học Trứng cá 1.1.3 Công dụng 1.1.4 Một số nghiên cứu tác dụng dược lý Trứng cá 1.2 TỔNG QUAN VỀ ĐAU .5 1.2.1 Phân loại đau 1.2.2 Cơ chế gây đau 1.2.3 Điều trị đau .8 1.3 THỰC NGHIỆM GÂY ĐAU TRÊN CHUỘT 1.3.1 Phân loại theo tác nhân đau .8 1.3.2 Phân loại theo vị trí tác động 1.4 TỔNG QUAN VỀ SINH LÝ VÀ BỆNH LÝ GAN 11 1.4.1 Cấu tạo gan chuột gan người 11 1.4.2 Chức gan 12 1.4.3 Các bệnh lý gan, chẩn đoán điều trị 14 1.5 THỰC NGHIỆM GÂY TỔN THƯƠNG GAN 18 1.5.1 Các tác nhân gây mơ hình tổn thương gan phổ biến 20 1.5.2 Thực nghiệm tổn thương gan paracetamol 21 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 vi 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 24 2.1.1 Nguyên liệu 24 2.1.2 Động vật thử nghiệm 24 2.1.3 Thiết bị - dụng cụ 24 2.1.4 Hóa chất 25 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.2.1 Phương pháp chiết cao từ Trứng cá .27 2.2.2 Xác định khối lượng làm khô nguyên liệu cao chiết 28 2.2.3 Định tính định lượng flavonoid 29 2.2.4 Khảo sát tính an tồn cao chiết từ Trứng cá 31 2.2.5 Khảo sát tác dụng giảm đau cao chiết từ Trứng cá chuột nhắt trắng 32 2.2.6 Khảo sát tác dụng bảo vệ gan cao chiết từ Trứng cá chuột nhắt đực trắng gây tổn thương gan mạn paracetamol 33 2.2.7 Đánh giá kết 37 2.3 ĐẠO ĐỨC TRONG NGHIÊN CỨU Y HỌC 37 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ 38 3.1 CHIẾT XUẤT CÁC CAO CHIẾT TỪ LÁ TRỨNG CÁ VÀ ĐỊNH TÍNHĐỊNH LƯỢNG FLAVONOID 38 3.1.1 Chiết xuất cao chiết từ Trứng cá 38 3.1.2 Định tính- định lượng flavonoid 38 3.2 ĐÁNH GIÁ TÍNH AN TỒN CỦA CÁC CAO CHIẾT TỪ LÁ TRỨNG CÁ 41 3.3 KHẢO SÁT TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA CÁC CAO CHIẾT TỪ LÁ TRỨNG CÁ TRÊN CÁC THỰC NGHIỆM GÂY ĐAU 42 3.3.1 Kết tác dụng giảm đau Trứng cá thực nghiệm gây đau acid acetic 1% 42 3.3.2 Kết tác dụng Trứng cá thực nghiệm gây đau formalin 2,5% 44 3.4 KHẢO SÁT TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CÁC CAO CHIẾT TỪ LÁ TRỨNG CÁ TRÊN THỰC NGHIỆM GÂY TỔN THƯƠNG MẠN BẰNG PARACETAMOL 46 vii CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 55 4.1 ĐỊNH TÍNH- ĐỊNH LƯỢNG 55 4.2 ĐÁNH GIÁ TÍNH AN TỒN CỦA CÁC CAO CHIẾT TỪ LÁ TRỨNG CÁ 56 4.3 TÁC DỤNG GIẢM ĐAU CỦA CÁC CAO CHIẾT TỪ LÁ TRỨNG CÁ TRÊN CÁC MÔ HÌNH GÂY ĐAU BẰNG ACID ACETIC VÀ FORMALIN 56 4.4 TÁC DỤNG BẢO VỆ GAN CỦA CÁC CAO CHIẾT TỪ LÁ TRỨNG CÁ TRÊN MƠ HÌNH GÂY TỔN THƯƠNG GAN MẠN BẰNG PARACETAMOL 59 4.4.1 Tổn thương gan mạn paracetamol .59 4.4.2 Tác dụng bảo vệ gan cao chiết từ Trứng cá 61 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 64 5.1 KẾT LUẬN .64 5.2 KIẾN NGHỊ 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 PHỤ LỤC xiii viii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các hợp chất có Trứng cá Bảng 1.2 Tổng hợp nghiên cứu tác dụng dược lý Trứng cá .5 Bảng 1.3 Một số mơ hình gây đau thực nghiệm 10 Bảng 1.4 So sánh gan chuột gan người 12 Bảng 1.5 Chỉ số De Ritis (AST/ALT) chẩn đoán bệnh gan 17 Bảng 1.6 So sánh mơ hình đánh giá tác động bảo vệ gan 20 Bảng 1.7 Một số tác nhân gây tổn thương gan phổ biến 21 Bảng 1.8 Một số nghiên cứu thực nghiệm gây tổn thương gan paracetamol 23 Bảng 2.1 Định tính hợp chất flavonoid Trứng cá phản ứng hóa học .29 Bảng 2.2 Thiết kế thử nghiệm gây đau chuột acid acetic 1% formalin 2,5% 32 Bảng 2.3 Thiết kế thử nghiệm gây tổn thương gan chuột paracetamol .33 Bảng 3.1 Kết hiệu suất cao chiết 38 Bảng 3.2 Kết độ ẩm bột Trứng cá cao chiết 38 Bảng 3.3 Kết định tính flavonoid phản ứng hóa học 39 Bảng 3.4 Hàm lượng flavonoid tồn phần tính theo quercetin cao chiết từ Trứng cá 41 Bảng 3.5 Kết khảo sát liều an toàn cao chiết Trứng cá 41 Bảng 3.6 Tổng số lần xoắn bụng thực nghiệm gây đau acid acetic 1% 42 Bảng 3.7 Diễn biến số xoắn bụng chuột lô thử nghiệm ghi nhận 10 phút thực nghiệm gây đau acid acetic 1% 43 Bảng 3.8 Tổng số lần liếm chân thực nghiệm gây đau formalin 2,5% pha sớm (0 -5 phút), pha muộn (20 – 30 phút) 44 Bảng 3.9 Hoạt độ AST (Ul/mL) huyết tương chuột 46 Bảng 3.10 Hoạt độ ALT (Ul/mL) huyết tương chuột 48 Bảng 3.11 Hàm lượng MDA (nM/g protein) gan chuột .50 Bảng 3.12 Hàm lượng GSH (nM/g protein) trong gan chuột 52 74 86 Sistanizad M., Peterson G.M (2013), "Drug-induced liver injury in the Australian setting", Journal of clinical pharmacy and therapeutics, 38(2), 115120 87 Suk KT, Kim DJ (2012), Drug-induced liver injury: present and future, Clinical and Molecular Hepatology, 18, 249-257 88 Vadivelu N, Whitney C J, Sinatra R S, McQuay H (2009), Pain pathways and acute pain processing Acute Pain Management, 3-20 89 Vargas-Mendoza N (2014),"Hepatoprotective effect of silymarin", World journal of hepatology, 6(3), 144 90 Velázquez K, Mohammad H, Sweitzer S, (2007), Protein kinase c in pain: Involvement of multiple isoforms, Pharmacological Research, 55(6), 578–589 91 Viện Dược liệu, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam (2004), Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, 492 – 493 92 Võ Thị Kiều Ngân, Nguyễn Thị Ngọc Mai, Nguyễn Thanh Hoàng, Trần Hồng Đức Nguyễn Đức Độ (2017), Khảo sát hàm lượng phenolic tổng, flavonoid tổng, hoạt tính chống oxy hóa hoạt tính kháng khuẩn cao chiết ethanol methanol thân rễ cỏ tranh (Imperata cylindrica), Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 52b: 16- 22 93 Vilash V, Suja SR, Latha PG, Aneeshkumar AL, Ragesh R Nair, Rajasekharan S (2016), “Antihepatotoxic effect of ethanolic extract of Pellionia heyneana Wedd., leaf on paracetamol induced liver damage in Wistar rats” Journal of Traditional and Folk Practices, 4(2), 17-26 94 Xie W, Wang M, Chen C, Zhang X, Melzig M.F (2016), Hepatoprotective effect of isoquercitrin against acetaminophen-induced liver injury, Life Sciences, 152, 180-189 95 Yoon E, Babar A, Choudhary M, Kutner M, Pyrsopoulos N (2016), Acetaminophen-induced hepatotoxicity: A comprehensive update, Journal of Clinical and Translational Hepatology, 4(2), 131-142 96 Zakaria Z, Mahmood N, Mamat S, Nasir N, Omar M (2018), Endogenous antioxidant and lox-mediated systems contribute to the hepatoprotective activity of aqueous partition of methanol extract of M calabura L Leaves against paracetamol intoxication, Frontiers in Pharmacology, 8, 982 75 97 Zakaria ZA, Mahmood N, Omar M, Taher M, Basir R (2019), Methanol extract of M calabura leaves attenuates CCl4-induced liver injury: Possible synergistic action of flavonoids and volatile bioactive compounds on endogenous defence system, Pharm Biol, 57(1), 335-344 98 Zakaria ZA, Balan T, Azemi AK, Omar MH, Mohtarrudin N, Ahmad Z, Abdullah MN, Desa MN, Teh LK, Salleh MZ (2016), Mechanism(s) of action underlying the gastroprotective effect of ethyl acetate fraction obtained from the crude methanolic leaves extract of Muntingia calabura, BMC Complementary and Alternative Medicine, 16:78 99 Zakaria ZA, Sani MH, Cheema MS, Kader AA, Kek TL, Salleh MZ, (2014), Antinociceptive activity of methanolic extract of Muntingia calabura leaves: Further elucidation of the possible mechanisms, BMC Complementary and Alternative Medicine, 14(1):63 100 Zakaria, Z A., Mahmood, N D., & Omar, M H et al (2019), Methanol extract of Muntingia calabura leaves attenuates CCl4-induced liver injury: Possible synergistic action of flavonoids and volatile bioactive compounds on endogenous defence system, Pharmaceutical Biology, 57(1):335-344 xiii PHỤ LỤC Phụ lục Kết khảo sát mơ hình gây tổn thương gan mạn paracetamol chuột nhắt trắng Hoạt độ AST (Ul/mL) (+) Stt Chứng bệnh lý (-) Cao Cao Cao Cao nước nước cồn cồn 0,56 1,12 0,69 1,37 mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg Silymarin đối chiếu 0,1 g/kg Cao Cao Chứng cồn nước Silymarin sinh lý 1,37 1,12 0,1 g/kg mg/kg mg/kg 133 64 47 47 54 74 56 49 49 65 96 70 88 65 91 72 49 60 51 44 156 91 74 79 98 70 43 42 44 47 165 52 60 70 89 53 51 53 44 65 165 85 82 47 58 68 33 46 56 43 77 60 58 65 60 51 53 46 40 28 65 58 49 70 75 46 50 49 43 46 93 63 55 67 60 40 56 42 40 43 TB 118,75 67,88 64,13 63,75 73,13 59,25 48,88 48,38 45,88 47,63 SEM 14,44 4,79 5,42 3,98 6,17 4,68 2,71 2,11 1,99 4,33 xiv Hoạt độ ALT (Ul/mL) (+) Stt Chứng bệnh lý (-) Cao Cao Cao Cao nước nước cồn cồn 0,56 1,12 0,69 1,37 mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg Silymarin đối chiếu 0,1 g/kg Cao Cao Chứng cồn nước Silymarin sinh lý 1,37 1,12 0,1 g/kg mg/kg mg/kg 98 70 69 77 61 69 69 53 45 51 106 75 82 73 77 80 45 77 53 53 163 73 102 68 64 72 43 49 53 57 118 53 60 85 96 51 41 47 61 65 168 76 98 61 74 76 41 41 58 34 91 54 64 80 70 56 57 53 41 41 106 51 51 72 79 48 51 48 40 56 116 58 53 77 68 45 41 53 53 55 TB 120,75 63,75 72,38 74,13 73,63 62,13 48,50 52,63 50,50 51,50 SEM 10,25 3,80 6,94 2,62 3,87 4,84 3,56 3,77 2,73 3,44 xv Hàm lượng MDA (nM/g protein) (+) Stt Chứng bệnh lý (-) Cao Cao Cao Cao nước nước cồn cồn 0,56 1,12 0,69 1,37 mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg Silymarin đối chiếu 0,1 g/kg Cao Cao Chứng cồn nước Silymarin sinh lý 1,37 1,12 0,1 g/kg mg/kg mg/kg 47,08 33,38 50,84 62,14 52,56 23,45 34,41 27,56 40,23 25,85 53,58 35,78 44,34 52,21 53,24 24,82 26,53 31,67 20,37 31,67 110,08 54,61 32,70 27,22 26,88 25,51 21,74 29,96 41,94 32,36 62,49 48,79 38,52 30,30 29,62 20,37 28,59 30,99 26,88 33,04 99,12 49,47 45,02 64,20 47,76 32,70 21,06 31,67 41,26 24,82 52,56 44,34 41,94 42,63 48,79 25,85 31,33 26,88 28,93 37,15 45,71 50,84 46,39 39,89 42,97 24,82 26,19 24,14 28,59 32,36 44,34 45,02 42,97 40,57 28,93 23,11 36,81 27,56 18,66 33,38 TB 64,37 45,28 42,84 44,90 41,34 25,08 28,33 28,80 30,86 31,33 SEM 9,07 2,61 1,92 4,81 3,94 1,25 1,99 0,96 3,28 1,44 xvi Hàm lượng GSH (nM/g protein) (+) Stt (-) Cao Cao Cao Cao Chứng nước nước cồn cồn bệnh lý 0,56 1,12 0,69 1,37 mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg Silymarin đối chiếu 0,1 g/kg Cao Cao Chứng cồn nước Silymarin sinh lý 1,37 1,12 0,1 g/kg mg/kg mg/kg 4446,22 8782,60 7646,12 7131,85 7519,14 7690,56 6820,75 7150,90 9176,23 6420,76 5385,87 8319,12 7030,27 8211,18 6973,13 8084,20 8750,85 7169,94 7741,36 6141,40 3258,95 6058,87 7328,67 6281,08 8350,86 7296,93 7906,43 8211,18 8122,30 6465,20 6020,77 4985,88 6827,10 6573,14 6915,98 8147,69 7703,26 7131,85 8096,90 6865,19 4604,94 5208,10 7531,84 6516,00 6503,30 7138,20 9404,80 7462,00 8547,68 7385,81 5246,19 5176,35 7836,59 6516,00 6630,28 8211,18 7842,94 7398,51 7715,96 6998,52 5474,76 7208,04 6446,16 8661,96 6566,79 8223,88 6960,43 8122,30 8058,81 6293,78 5595,39 5506,50 7398,51 7150,90 8255,63 7677,87 8154,04 7969,92 7881,03 7646,12 TB 5004,1 6405,7 7255,7 7130,3 7214,4 7808,8 7942,9 7577,1 8167,5 6777,1 SEM 308,37 531,92 162,66 307,67 263,29 150,46 302,60 160,60 171,57 191,07 xvii Phụ lục Kết khảo sát mơ hình gây đau acid acetic 1% chuột nhắt trắng Số đau xoắn bụng chuột ghi nhận 0-10 phút (+) (-) Cao nước Cao nước Cao cồn Cao cồn Chứng Trứng cá Trứng cá Trứng cá Trứng cá nước cất (0,56 g/kg) (1,12 g/kg) (0,69 g/kg) (1,37 g/kg) 25 20 15 11 2 22 18 16 21 15 15 20 14 20 22 14 16 16 7 5 3 15 19 2 TB 15,6 15,6 3,88 14,13 6,50 1,38 SEM 3,0 1,8 0,69 1,23 1,02 0,32 Stt Diclofenac 15 mg/kg xviii Số đau xoắn bụng chuột ghi nhận 10 - 20 phút (+) (-) Cao nước Cao nước Cao cồn Cao cồn Chứng Trứng cá Trứng cá Trứng cá Trứng cá nước cất (0,56 g/kg) (1,12 g/kg) (0,69 g/kg) (1,37 g/kg) 17 10 2 13 2 15 0 10 11 15 11 20 10 4 18 13 8 16 15 11 TB 15,5 10,00 2,1 5,1 1,6 0,4 SEM 1,1 1,4 0,5 1,2 0,5 0,3 Stt Diclofenac 15 mg/kg xix Số đau xoắn bụng chuột ghi nhận 20 - 30 phút (+) (-) Cao nước Cao nước Cao cồn Cao cồn Chứng Trứng cá Trứng cá Trứng cá Trứng cá nước cất (0,56 g/kg) (1,12 g/kg) (0,69 g/kg) (1,37 g/kg) 15 3 0 2 0 6 7 13 5 1 17 2 TB 9,5 3,2 0,2 2,1 1,7 0,9 SEM 1,7 0,8 0,1 0,6 0,7 0,3 Stt Diclofenac 15 mg/kg xx Phụ lục Kết khảo sát mơ hình gây đau formalin 2,5% chuột nhắt trắng, Thời gian số lần liếm chân chuột ghi nhận - phút (+) (-) Cao nước Cao nước Cao cồn Cao cồn Chứng Trứng cá Trứng cá Trứng cá Trứng cá nước cất (0,56 g/kg) (1,12 g/kg) (0,69 g/kg) (1,37 g/kg) 52 52 37 25 36 47 43 29 45 25 49 55 48 34 37 66 47 57 57 39 12 42 20 60 50 43 37 20 18 62 58 53 40 32 12 49 37 48 36 28 22 59 54 50 40 19 21 TB 55,1 49,9 41,6 34,0 30,1 28,1 SEM 1,9 2,5 3,0 3,7 6,2 4,9 Stt Diclofenac 15 mg/kg xxi Thời gian số lần liếm chân chuột ghi nhận 20 - 30 phút (+) (-) Cao nước Cao nước Cao cồn Cao cồn Chứng Trứng cá Trứng cá Trứng cá Trứng cá nước cất (0,56 g/kg) (1,12 g/kg) (0,69 g/kg) (1,37 g/kg) 59 43 43 43 49 48 105 57 10 26 40 50 78 34 38 17 29 80 71 48 30 32 26 45 16 46 33 58 23 58 72 50 64 35 17 63 79 45 52 45 16 65 58 51 42 18 44 TB 65,6 59,3 40,9 41,0 31,8 30,4 SEM 6,7 7,5 4,8 4,4 6,8 4,3 Stt Diclofenac 15 mg/kg xxii Phụ lục Một số hình ảnh thực nghiệm xxiii Thuốc Voltaren (diclofenac natri) 75 mg (Novartis Co Ldt, Thụy Sĩ) Bản mỏng: TLC Silica gel 60 GF254 để dung môi khai triển Toluen: ethyl acetat : acid formic (5 : : 0,2 ) xxiv Máy ly tâm lạnh HERMEL Z32 HK (Đức) Máy ly tâm PRP EBA-200 (Đức) Máy sinh hóa bán tự động Screen Master 300 (Arezzo, Italy) xxv Gan chuột bị tổn thương uống paracetamol Gan chuột bình thường