Thiết lập và đánh giá chất lượng ngân hàng tế bào vero dùng trong kiểm định vaccine viêm não nhật bản

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI - LUẬN VĂN THẠC SĨ THIẾT LẬP VÀ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƢỢNG NGÂN HÀNG TẾ BÀO VERO DÙNG TRONG KIỂM ĐỊNH VACCINE VIÊM NÃO NHẬT BẢN CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGUYỄN THỊ THU HẢO HÀ NỘI - 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI - LUẬN VĂN THẠC SĨ THIẾT LẬP VÀ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƢỢNG NGÂN HÀNG TẾ BÀO VERO DÙNG TRONG KIỂM ĐỊNH VACCINE VIÊM NÃO NHẬT BẢN NGUYỄN THỊ THU HẢO Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã ngành : 60420201 NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS ĐỖ TUẤN ĐẠT HÀ NỘI - 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Đây cơng trình nghiên cứu tơi số kết cộng tác với cộng khác; Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực, công nhận cho phép cộng công ty TNHH MTV Vaccine sinh phẩm số 1- nơi công tác ; Nếu có sai sót tơi xin chịu hoàn toàn trách nhiệm./ Hà Nội, ngày 05 tháng 10 năm 2020 Tác giả Nguyễn Thị Thu Hảo i LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn này, tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến: Công ty TNHH MTV Vaccine sinh phẩm số 1- nơi công tác, tạo điều kiện thuận lợi thời gian, sở vật chất giúp hoàn thành thủ tục c n thiết tr nh làm việc, học tập nghi n cứu TS Đỗ Tuấn Đạt- chủ tịch hội đồng quản trị, công ty TNHH MTV Vaccine sinh phẩm số 1- người định hướng, bảo kiến thức khoa học, tận tâm giúp đỡ động vi n vượt qua trở ngại khó khăn suốt thời gian thực luận văn Sự giúp đỡ, bảo tận t nh cô chú, anh chị, bạn đồng nghiệp làm việc phịng quản lý chất lượng, cơng ty TNHH MTV Vaccine sinh phẩm số Cuối cùng, xin cảm ơn gia đ nh, bạn bè - người ln b n cạnh, khuyến khích ủng hộ tơi suốt tr nh học tập thực luận văn Hà Nội, ngày 05 tháng 10 năm 2020 Tác giả NGUYỄN THỊ THU HẢO ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi DANH MỤC CÁC THUẬT NGỮ, CHỮ VIẾT TẮT viii PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu Mục đích 2 Y u c u PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung tế bào Vero 1 Nguồn gốc đặc điểm 2 Đặc tính nhạy cảm tế bào Vero với virus 2.2 Giới thiệu chung vaccine viêm não Nhật Bản 2.3 Ứng dụng tế bào Vero kiểm định vaccine VNNB Việt Nam 2.4 Quy trình thiết lập đánh giá chất lƣợng ngân hàng tế bào 11 Xây dựng hệ thống ngân hàng tế bào 11 Đánh giá chất lượng ngân hàng tế bào 16 PHẦN III VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 3.1 Đối tƣợng nghiên cứu: Tế bào Vero 28 3.2 Nội dung nghiên cứu 28 3.3 Vật liệu Phƣơng pháp nghiên cứu sử dụng 29 3 Sơ đồ công nghệ dự kiến thực 29 3 Vật liệu nghi n cứu 29 3 Phương pháp nghi n cứu thực nội dung thiết lập ngân hàng tế bào 31 3 Phương pháp nghi n cứu nội dung nghi n cứu đánh giá chất lượng ngân hàng tế bào sử dụng kiểm định vaccine 36 iii PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 49 4.1 Kết xây dựng ngân hàng tế bào Vero 49 1 Nuôi cấy tế bào lấy từ Nitơ lỏng 49 Cấy truyền 51 Cất giữ tế bào 52 4.2 Kết kiểm định ngân hàng tế bào 53 Thử nghiệm vô khuẩn 53 4.2 Thử nghiệm Mycoplasma 55 4.2 Thử nghiệm kiểm tra vi khuẩn lao 58 4 Độ sống tế bào 59 Kiểm tra virus ngoại lai tr n tế bào 60 Kiểm tra virus ngoại lai tr n động vật thí nghiệm 67 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 74 5.1 Kết luận 74 5.2 Kiến nghị 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Kết theo dõi phát triển tế bào sau khui 50 Bảng Theo dõi phát triển tế bào cấy truyền l n 53 Bảng Kết theo dõi phát triển tế bào cấy truyền l n 53 Bảng 4 Kết theo dõi phát triển tế bào cấy truyền l n 54 Bảng Kết theo dõi ống môi trường Thioglycolate Soybean sau cấy .54 Bảng Kết theo dõi ống môi trường lỏng I lỏng II sau cấy l n 56 Bảng Kết theo dõi ống môi trường lỏng I lỏng II sau cấy truyền 57 Bảng Kết theo dõi ống môi trường Lowenstein sau cấy .59 Bảng Kết theo dõi chai tế bào MRC5 sau gây nhi m 63 Bảng Theo dõi chai tế bào Vero sau gây nhi m 65 Bảng 11 Kết theo dõi chai tế bào BHK-21 sau gây nhi m 66 Bảng 12 Kết theo dõi chuột lang sau gây nhi m 68 Bảng 13 Kết theo dõi chuột ổ sau gây nhi m 71 Bảng 14 Kết theo dõi chuột nhắt sau gây nhi m 73 v DANH MỤC CÁC HÌNH H nh H nh ảnh tế bào Vero H nh 2 Khu vực sản xuất ngân hàng tế bào 14 H nh Trang phục làm việc phòng .15 H nh Cách cố định chuột nhắt tay 22 H nh Vị trí ti m phúc mạc chuột nhắt 22 H nh Sơ đồ vị trí ti m phúc mạc 22 Hình 2.7 Kỹ thuật ti m não chuột 23 H nh Cách cố định chuột lang 24 H nh Cách ti m chuột lang 24 H nh 1: Sơ đồ công nghệ dự kiến sản xuất kiểm định ngân hàng tế bào 29 H nh Chuẩn bị mẫu để đếm tế bào 35 H nh 3 Buồng đếm hồng c u 35 H nh Cách đếm tế bào 36 H nh Kết hấp phụ hồng c u 46 H nh Sơ đồ tóm tắt quy tr nh sản xuất ngân hàng tế bào 49 H nh Chai tế bào Vero sau ngày nuôi cấy .51 H nh B nh Nitơ bảo quản ống tế bào .52 H nh 4 Sơ đồ tóm tắt quy tr nh kiểm định ngân hàng tế bào .53 H nh Môi trường Thioglycolate Soybean sau thời gian theo dõi 55 H nh Các ống môi trường canh thang II cấy l n cấy chuyển sau theo dõi 57 H nh Các ống môi trường canh thang I cấy l n cấy chuyển sau theo dõi 58 H nh 8: Các ống môi trường sau theo dõi 59 H nh Tế bào sau thử nghiệm hấp phụ hồng c u 61 H nh Kết ngưng kết hồng c u 61 H nh 11 Kết theo dõi tế bào MRC5 vào ngày thứ 14 .64 H nh 12 Kết theo dõi tế bào Vero vào ngày thứ 14 .65 vi H nh 13 Kết theo dõi tế bào BHK-21 vào ngày thứ 14 67 H nh 14:Kết theo dõi mổ nội tạng chuột lang sau 42 ngày theo dõi 70 H nh 15 : Kết chuột ổ sau 14 ngày theo dõi 72 H nh 16: Kết nhắt ổ sau 21 ngày theo dõi .73 vii DANH MỤC CÁC THUẬT NGỮ, CHỮ VIẾT TẮT ATCC American type culture collection- trung tâm lưu giữ dòng tế bào gốc chuẩn Mỹ ARN Axit ribonucleic BHK-21 Baby hamster kidney-dòng tế bào thận chuột hamster sơ sinh CHO Chinese hamster ovary- dòng tế bào buồng trứng chuột hamster C6/36 Tế bào muỗi CPE Cytopathic effect- hủy hoại tế bào DMSO Dimethyl sulfoxide- chất bảo quản tế bào FBS Fetal bovine serum-huyết bào thai b GMP Good Manufacturing Practices- thực hành tốt sản xuất In vivo Thử nghiệm không ống nghiệm In vitro Thử nghiệm ống nghiệm MCB Master cell bank- ngân hàng tế bào gốc MEM Minimum Essential Medium- môi trường nuôi cấy tế bào MRC5 Dịng tế bào lưỡng bội phơi phổi người NRA National regulatory authorities- quan kiểm định quốc gia PRNT Plaque Reduction Neutralization Test- kỹ thuật trung hoà giảm đám hoại tử PreM Premembrane-vùng tiền màng Protein E Protein Envelope- protein vùng vỏ p Đời cấy chuyền t bào RCB Reference cell bank- ngân hàng tế bào gốc chuẩn T-E Trypsin-EDTA-enzyme tách tế bào TCYTTG Tổ chức y tế giới VNNB Vi m não Nhật Bản viii ,7 , 11, 14 theo hướng dẫn WHO [32] Kết cụ thể ngày ghi nhận thể bảng 11 hình 4.13 Sau thời gian theo dõi, chúng tơi nhận thấy tồn chai mẫu tế bào kín lớp, tế bào giữ nguy n h nh thái đặc trưng: hình thoi, không thấy xuất đám hủy hoại, tượng tế bào bị bong khỏi bề mặt ni cấy Tồn chai mẫu khơng có bất k khác biệt so với chai chứng Quan sát cảm quan cho thấy: môi trường màu vàng cam, trong, khơng có tượng vẩn đục ( h nh 13) Bảng 4.11 Kết theo dõi chai tế bào BHK-21 sau gây nhiễm Ngày thứ Ch.1 36,5 C chứng Ch.2 Ch.3 Ch.4 Ch.5 CC (-) - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 08.07.19 36,5 oC với mẫu thử 05.07.19 o Tế bào Thời gian 36,5 oC Các chai gây nhiễm 11.07.19 11 36,5 oC 15.07.19 14 18.07.19 36,5oC (-): CPE (+): có CPE 66 Hình 4.13 Kết theo dõi tế bào BHK-21 vào ngày thứ 14 4.2.6 Kiểm tra virus ngoại lai động vật thí nghiệm 4.2.6.1 Kiểm tra virus ngoại lai chuột lang Đối với chuột lang tiến hành tr n chuột lang sử dụng đường ti m ổ bụng theo khuyến cáo WHO tài liệu tr n giới [15][25][32] [36] Khác với đối tượng chuột nhắt hay chuột ổ, kích thước chuột lang to khoảng 35 -45 g, liều ti m lớn 5ml/ con, n n thao tác ti m c n thành thục xác Trong trường hợp ti m sai giữ không chặt, chuột giãy ảnh hưởng đến quan nội tạng dẫn đến tượng chết ảnh hưởng quan nội tạng mà nguy n nhân không xuất phát từ virus ngoại lai Chuột lang chúng tơi nhận từ sở chăn ni có cấp phép phải tiến hành theo dõi ngày đ u để đảm bảo lựa chọn chuột khỏe mạnh, dấu hiệu bệnh lý Chuột sau ti m chăm sóc ri ng biệt tiến hành theo dõi cảm quan vào ngày 1, 3, 7, , 14, 17, 21, 24, 28, 31, 35, 38, 42 theo khuyến cáo WHO để đánh giá t nh trạng sức khỏe chuột [32] Vào ngày cuối giai đoạn theo dõi, nhóm đề tài tiến hành mổ để theo dõi quan nội tạng nhằm phát dấu hiệu bất thường có virus ngoại lai gây n n Theo bảng 12, kết theo dõi cho thấy, sau ti m 5/ chuột mẫu khỏe mạnh b nh thường vịng 24 h đ u, điều chứng tỏ người 67 thực kĩ thuật Trong suốt tr nh theo dõi 42 ngày, 5/5 chuột mẫu khỏe mạnh b nh thường: nhanh nhẹn, lông mượt, đuôi hồng, khơng có dấu hiệu bệnh lý ( h nh 14) Chúng tiến hành mổ quan sát nội tạng chuột thử nghiệm: quan nội tạng tim, gan, ruột, phổi… b nh thường, khơng có tượng sưng, phù nề, tím tái, khơng phát khối u nhọt bất thường ( h nh 14) Từ chứng tr n, đưa kết luận, ngân hàng tế bào Vero khơng có virus ngoại lai thử nghiệm tr n chuột lang Bảng 4.12 Kết theo dõi chuột lang sau gây nhiễm Ngày theo dõi Theo dõi chuột 1- 2- 3- 4- 5- Chứng Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Ngày tiêm khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, 08.08.19 không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh -3.05.08.19 -2.06.08.19 -1.07.08.19 1.09.08.19 68 3.11.08.19 7.15.08.19 10.18.08.19 14.22.08.19 17.25.08.19 21.29.08.19 24.01.09.19 28.05.09.19 lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh 69 31.08.09.19 35.12.09.19 38.15.09.19 42.19.09.19 lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột Chuột khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, khỏe, không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh không bệnh lý lý lý lý lý lý Hình 4.14:Kết theo dõi mổ nội tạng chuột lang sau 42 ngày theo dõi 4.2.6.2 Kiểm tra virus ngoại lai chuột ổ Chuột ổ ngày tuổi đối tượng chọn lựa cho thử nghiệm Việc lựa chọn mẫu, đường ti m, liều ti m, ngày ti m tuân thủ hướng dẫn hướng dẫn WHO tài liệu tr n giới [15][25][32] [36] Chuột sơ sinh nhạy cảm, d bị ảnh hưởng yếu tố b n ngoài, v 70 thao tác ti m, phải cẩn thận để tránh ảnh hưởng tới não ổ bụng đối tượng thí nghiệm Sau gây nhi m, nhóm đề tài nhận thấy có điều đặc biệt lưu ý phải sát trùng vị trí ti m chuột vị trí đ u chuột mẹ thật kĩ, tránh mùi lạ v d dẫn tới tượng mẹ ăn động vật Kết sau 24h gây nhi m, khơng có tượng chuột chết kĩ thuật ti m Như vậy, người thực tiến hành thao tác y u c u Theo bảng 13, ngày theo dõi 1, 3, 5, 7, , 14 tất chuột khỏe mạnh, khơng có dấu hiệu bất thường sức khỏe Kết thúc tr nh, chuột lớn l n khỏe mạnh, khơng có dấu hiệu bệnh lý : nhanh nhẹn, lông mượt, đuôi hồng hào ( h nh 15) Từ chúng tơi đưa kết luận, mẫu ngân hàng tế bào Vero không phát virus ngoại lai tr n chuột ổ Bảng 4.13 Kết theo dõi chuột ổ sau gây nhiễm Dấu hiệu Ngày theo dõi 0.08.08.19 /4 chuột khỏe, không bệnh lý 1.09.08.19 /4 chuột khỏe, không bệnh lý 3.11.08.19 /4 chuột khỏe, không bệnh lý 5.13.08.19 /4 chuột khỏe, không bệnh lý 7.15.08.19 /4 chuột khỏe, không bệnh lý 10.18.08.19 /4 chuột khỏe, không bệnh lý 14.22.08.19 /4 chuột khỏe, không bệnh lý 71 Hình 4.15 : Kết chuột ổ sau 14 ngày theo dõi 4.2.6.3 Kiểm tra virus ngoại lai chuột nhắt trưởng thành Tương tự chuột ổ, tr n chuột nhắt trưởng thành tiến hành ti m theo đường ti m não ổ bụng [15][25][32] [36] So với chuột sơ sinh, đối tượng chuột nhắt d thao tác theo dõi Kết sau 24h gây nhi m, khơng có tượng chuột chết kĩ thuật ti m Như người thực tiến hành thao tác y u c u Theo bảng 14, ngày theo dõi 1, 3, 5, 7, 10, 14 tất chuột khỏe mạnh, khơng có dấu hiệu bất thường sức khỏe Kết thúc tr nh, chuột lớn l n khỏe mạnh, khơng có dấu hiệu bệnh lý : nhanh nhẹn, lông mượt, đuôi hồng hào (hình 4.16) Từ chúng tơi đưa kết luận, mẫu ngân hàng tế bào Vero không phát virus ngoại lai tr n chuột trưởng thành 72 Bảng 4.14 Kết theo dõi chuột nhắt sau gây nhiễm Dấu hiệu Ngày theo dõi 0.08.08.19 /2 chuột khỏe, không bệnh lý 1.09.08.19 /2 chuột khỏe, không bệnh lý 3.11.08.19 /2 chuột khỏe, không bệnh lý 5.13.08.19 /2 chuột khỏe, không bệnh lý 7.15.08.19 /2 chuột khỏe, không bệnh lý 10.18.08.19 /2 chuột khỏe, không bệnh lý 14.22.08.19 /2 chuột khỏe, không bệnh lý 17.25.08.19 /2 chuột khỏe, không bệnh lý 21.29.08.19 /2 chuột khỏe, khơng bệnh lý Hình 4.16: Kết nhắt ổ sau 21 ngày theo dõi 73 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghi n cứu tr nh bày ph n n u tr n, xin rút số kết luận sau: Đã xây dựng quy tr nh sản xuất ngân hàng tế bào Vero đạt ti u chuẩn quốc tế, kí hiệu WCB-2 19, với số lượng ống, nồng độ tế bào 3106 tế bào/ml/ống, từ ngân hàng tế bào gốc MCB-2 15 Ngân hàng tế bào sản xuất bảo quản công ty TNHH MTV Vaccine sinh phẩm số 1, theo quy định mà TCYTTG đề Trong tương lai, ngân hàng WCB-2019 sử dụng để phục vụ cho thử nghiệm kiểm định vaccine VNNB tr n tế bào Vero Đã xây dựng quy tr nh tiến hành kiểm tra chất lượng ngân hàng tế bào WCB-2 19 dùng cho kiểm định tất thử nghiệm TCYTTG khuyến cáo y u c u : Độ sống, độ thu n khiết (vô khuẩn, mycoplasma, vi khuẩn lao, virus ngoại lai tr n dòng t bào động vật) Qua thực nghiệm, ngân hàng tế bào WCB-2 19 đạt ti u chuẩn chất lượng tất thử nghiệm - Độ sống: Tổng số tế bào/ml: 2,9 x >1,5 x 106, tế bào kín lớp % vịng ngày ni cấy -Vơ khuẩn : khơng có phát triển nấm vi khuẩn sau ngày theo dõi -Vi khuẩn lao : khơng có phát triển vi khuẩn lao sau ngày theo dõi - Mycoplsam: khơng có phát triển mycoplasma sau ngày theo dõi - Virus ngoại lai tr n động vật: không phát virus ngoại lai tr n chuôt lang , chuột nhắt, chuột ổ - Virus ngoại lai tr n động vật: không phát virus ngoại lai tr n tế bào Vero khác loạt, MRC5 BHK-21 74 Do ngân hàng WCB-2 19 sử dụng cho hệ thống thử nghiệm kiểm định mà không sử dụng để sản xuất vaccine ti m cho người n n khơng địi hỏi y u c u nghiệm ngặt tính an tồn di truyền ngân hàng tế bào sản xuất, số thử nghiệm cân nhắc không đưa vào trước RCB MCB kiểm tra tồn diện có chứng nhận chất lượng quốc tế nước Thành công việc xây dựng kiểm tra chất lượng ngân hàng tế bào Vero theo ti u chuẩn quốc t tiền đề, sở để xây dựng ngân hàng khác 5.2 Kiến nghị - Mặc dù kiểm tra chất lượng, nhi n tr nh sử dụng c n theo dõi chặt chẽ nhiệt độ, thiết bị bảo quản để đảm bảo tr độ sống tính tồn vẹn ống tế bào Theo khuyến cáo TCYTTG, năm c n kiểm tra tính ổn định chất lượng ngân hàng tế bào, mặt độ sống tính vơ khuẩn - Hiện xu hướng chung giới khuyến cáo TCYTG giảm bớt việc sử dụng động vật thí nghiệm theo xu hướng 3Rs (Replacement – Reduction – Refinement) Phương pháp khuyến khích việc khơng sử dụng động vật thí nghiệm mà tr ti u chuẩn chất lượng WHO V vậy, tương lai, điều kiện cho phép thay việc kiểm tra chất lượng ngân hàng tế bào tr n động vật thử nghiệm sinh học phân tử, mi n dịch có giá trị tương đương 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Bộ y tế - Dược điển Việt nam (2 18), phụ lục 15 “ Kiểm tra vô trùng vắc xin/ sinh phẩm”, nhà xuất y học, trang 368-370 Bộ y tế - Dược điển Việt nam (2 18), phụ lục 15 47 “ Kiểm tra mycoplasma vaccine/ sinh phẩm”, nhà xuất y học , trang 411413 Bộ y tế - Dược điển Việt nam (2 18), phụ lục 15 36 “ Phát mycoplasma phương pháp nuối cấy”, nhà xuất y học, trang 394-395 Huỳnh Phương Li n , Tr n Hằng Nga, Vũ Hồng Nga, Nguy n Đăng Tiến , Đỗ Thủy Ngân , Nguy n Quế Anh cs (2 9), “ Nghi n cứu sản xuất thử nghiệm vaccine VNNB bất hoạt tr n tế bào Vero” , tạp chí Y học dự phòng , số 4(1 3), trang 86-91 Phan Thị Ngà, L hồng Phong, Vũ Sinh Nam, Huỳnh Phương Li n, Tr n Văn Tiến (1998), “Những nghi n cứu virus VNNB miền Bắc Việt Nam”, tạp chí Y học dự phịng , tập VIII, số 2(36) Nguy n Thu Yến (2 2), “ Hiệu phòng bệnh vi m não Nhật Bản huyện Gia Lương, tỉnh Bắc Ninh sau năm (1993-1999) gây mi n dịch vaccine viện VSDTTU sản xuất ”, tạp chí Y học, số 5(432), trang 76-78 Nguy n Thu Yến (2 1), “ Kết ti m vaccine VNNB viện VSDT sản xuất ti m chủng mở rộng, khu vực miền Bắc, 1997-2 chí Y học dự phòng, tập XI, số 3(49), trang 16-19 ”, tạp Tài liệu tiếng anh Barrett AD, Monath Tp, Barban V, Niedrig M, Teuwen DE (2 5), “ 17D yellow fever vaccin: new insughts Areport of a workshop held during the world congress on Medicine and Health in the tropics , Marseille, France”, ,Vaccin 7, 25(15): 2758-65 Bernard N Fields, David M Knipe, Peter M Howley, Robert M Chanock (1996),“ Flaviviridae In: Fields viriology” 3th ed Vol1 Lippincott Williams and Wilkins: 932-1015 10 Council of Europe – European Directorate for the Quality of Medicines (COE-EDQM) (2 ), “General texts on biological products”, European pharmcopoeia 7.0, vol1 11 Council of Europe – European Directorate for the Quality of Medicines (COE-EDQM) (2 ), “Biological test”, European pharmcopoeia , vol1 12 Council of Europe – European Directorate for the Quality of Medicines (COE-EDQM) (2005), “ Test for extraneous agents in viral vaccines for human use’, European pharmacopoeia , pp 169-170 13 Earley E, Peralta PH, Johnson KM (1967), “ A plaque neutralization method for arboviruses”, Proc Soc Exp Biol Med 125(3): 741–747 14 FDA (2 ), “ History and Characterization of the Vero Cell Line” 15 FDA (2 ), “ FDA’s approach to Adventitious – agent testing of cell substrates and viral vaccine: Traditional and Novel methods” 16 FDA (2 ), “Characterization and qualification of cell substrates and other biological materials used in the production of viral vaccines for infectious disease indication” 17 Ferguson M, Kurane I, Wimalaratne O, Shin J, WHO informal consultation group (2 7), “WHO informal consultation on scientific basic specifications for production and control of Japanese encepalitis vaccine ( inactivated) for human use, Geneva, Switzerland, 1-2 June 6”, vaccine 25(29);5233-5243 18 Govorkova EA, et al (1996), “ African green monkey kidney (Vero) cells provide an alternative host cell system for influenza A and B viruses”, J Virol 70: 5519-5524, 1996 PubMed: 8764064 19 Hiroyama T (1962), “ Epidemiology of Japannese encepalitis”, Sai Ching Iga Ku 17: 1272-1280 20 Huynh Phuong Lien et al (2 9), “ Japanese encephalitis vaccin production in Viet Nam: Current status, Finacing and future plans”, International meeting on introduction of evidence base policy on control and prevention of japanese encephalitis through immunization of children in Viet Nam 21 Kayser F H, Bienz K A, Eckert J, Zinkernagel R M (2 5), “ Medical Microbiology”, Thieme 21st edition, pp 279-287 22 Liebhaber H, et al (1967), “ Replication of rubella virus in a continuous line of African green monkey kidney cells (Vero)” Proc Soc Exp Biol Med 125: 636-643, PubMed: 4961494 23 Murphy FA (198 ), “ Togavirus morphology and morphogenensis In: Schlesinger RW,eds The Togavirus: Biology, Structure, Repplication”, New York: Academic press: 241-316 24 Monath TP, Tsai TF Flavivirus In ; Richman D, Whitley RJ, Hayden FG, eds (2 2), “ Clinical viriology “, ed Washington, DC ; D C; AMS press, 2002:1097-1151 25 NIH (2 11), “ Overview of Routine tets for Adventitious agents, National Institute of Allergy and Infectious Diseases” 26 Osada N., Kohara A., Yamaji T., Hirayama N., Kasai F., Sekizuka T., Kuroda M , Hanada K (2 14), “ The genome landscape of the African green monkey kidney-derived Vero cell line”, DNA Res 21:673-683 27 Rhim JS, Schell K (1967), “ Cytopathic effects of the parainfluenza virus SV5 in Vero cells” Nature 216: 271-272, PubMed: 4293683 28 Rhim JS, Schell K (1967), “ Cytopathic and plaque assay of rubella virus in a line of African green monkey kiency cells (Vero)”, Proc Soc Exp Biol Med 125: 602-606, PubMed: 4961492 29 Simizu B, et al (1967), “ Characterization of the Tacaribe group of arboviruses I Propagation and plaque assay of Tacaribe virus in a line of African green monkey kidney cells (Vero)” Proc Soc Exp Biol Med 125: 119-123, 1967 PubMed: 6027511 30 Sasaki K, et al (1964), “ Studies on measles virus II Propagation in two established simian renal cell lines and development of a plaque assay”, Kitasato Arch Exp Med 37: 27-42, PubMed: 5833688 31 Tsai TF, chang GW, Yu YX (1999), “ Japanese encephalitis vaccines In Plotkin SA and and Orenstein WA, eds ”, Vaccines-3rd edition, WB Sauders, Inc., Philadenphia, PA672-710 32 WHO TRS 987, annex (2 ), “ Recommendations for the evaluation of animal cell as substrates for the manufacture of biological medicinal products and for the characterization of cell banks” 33 WHO TRS 963, annex (2 7), “Recommendations for Japanese encepalitis vaccine ( inactivated) for human use ” 34 WHO TRS 999, annex (2 16), “ WHO good manufacturing practices for biological products” 35 WHO TRS 872, annex (1995), “ General requirements for the sterility of biological substances” 36 WHO TRS 927, annex (2 5), “Reqiurement for Use of Animal cells as in vitro Substrates for the Production of Biologicals,” 37 WHO TRS 993, annex (2 15), “Scientific principles for regulatory risk evaluaation on finding an adventitious agent in a marketed vaccine’’ 38 Yasumura Y, Kawakita M (1963), “The research for the SV4 by means of tissue culture technique”, Nippon Rinsho 21 (6): 1201–1219 39 Yasumura Y, Kawakita Y (1963), “ Studies on SV4 in tissue culture preliminary step for cancer research in vitro” Nihon Rinsho 21: 12 11215 40 www.atcc.org/media/PDFs/Culture Guides/Animcellculture-guide.ashx