Nghiên cứu nhóm chất steroid phân cực từ loài sao biển archaster typicus, một loài sao biển rất phổ biển ở vùng biển việt nam,

1 MỞ ĐẦU Biển Đại dương chiếm 70% bề mặt trái đất, chứa đựng nguồn tài nguyên sinh vật biển đa dạng với gần 300.000 loài thực vật, động vật vi sinh vật khác Sự đa dạng biến biển đại dương trở thành nguồn tài nguyên thiên nhiên vô quý báu, cung cấp nguyên liệu cho nhiều ngành công nghiệp thiết yếu thực phẩm, mỹ phẩm, hóa dược…Tuy nhiên, trước đây, giá trị cung cấp dược liệu chất có hoạt tính sinh học cao cho ngành hóa dược nguồn tài nguyên chưa quan tâm mức Ngày này, nhờ hỗ trợ kỹ thuật tiên tiến, nhiều hợp chất từ sinh vật biển phân lập, xác định cấu trúc thử hoạt tính sinh học Trong số đó, nhiều hợp chất thể hoạt tính sinh học phong phú, tạo cung cấp mẫu hình cho hệ thuốc mới, sản phẩm khác phục vụ cho sống [1-3] Việt Nam thiên nhiên ưu đãi với triệu km2 vùng biển, có khí hậu nhiệt đới gió mùa, mật độ cửa sông dày đặc điều kiện lý tưởng cho hệ sinh vật biển đa dạng chủng loại giàu trữ lượng Ngay từ năm 1970 có vài cơng trình nghiên cứu hợp chất thiên nhiên từ sinh vật biển Tuy nhiên, so với nguồn tiềm sinh vật biển nước ta đến cơng trình nghiên cứu nước tản mát, đặc biệt nghiên cứu ngành Da Gai Các sinh vật thuộc ngành Da Gai (Echinoderm) bao gồm năm lớp: Sao Biển (Asteroidea), Sao Biển Rắn (Ophiuroidea), Cầu Gai (Echinoidea), Hải Sâm (Holothuria) Huệ Biển (Crinoidea), nguồn cung cấp dồi steroid phân cực Các hợp chất steroid phân cực có cấu trúc đa dạng thể nhiều hoạt tính sinh học thú vị khác như: kháng vi khuẩn, kháng nấm, kháng viêm, giảm đau, giảm huyết áp, chống khối u, chống vi rút, tan máu, tác động đến vận chuyển tín hiệu thần kinh [8, 11, 22, 26, 27, 69, 77, 107] Lớp chất steroid phân cực từ biển thu hút quan tâm nhà khoa học Nga, Hàn Quốc, Trung Quốc, Nhật Bản, Italia Tuy nhiên, Việt Nam chưa có cơng trình nghiên cứu riêng lớp chất Với mục đích tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học từ sinh vật biển thuộc ngành Da gai nhằm tạo sở cho nghiên cứu lĩnh vực phát phát triển dược phẩm mới, luận án tập trung nghiên cứu nhóm chất steroid phân cực từ loài biển Archaster typicus, loài biển phổ biển vùng biển Việt Nam, thuộc lớp biển Asterodea, ngành Da gai Echinodermata Nội dung luận án bao gồm: • Phân lập hơp chất steroid phân cực từ loài biển Archaster typicus Việt Nam • Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập • Thử nghiệm số hoạt tính sinh học chất phân lập CHƯƠNG I – TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung biển (Asteroidea) Sao biển lồi động vật khơng xương sống, thuộc ngành Da gai (Echinodermata, lớp Asteroidea) sống đáy biển Cơ thể dẹp theo chiều lưng bụng, có hình có đối xứng bậc hay nhiều cánh xếp xung quanh Cánh biển dài 1- 1,5 cm, có tới 80 cm Lỗ miệng có màu sặc sỡ, bị giá miệng hướng phía Bên quanh miệng vịng ống nước, từ phát năm ống nước nhánh hình nan quạt tỏa năm cánh, ống nước nhánh có hai dãy chân ống Sao biển nhờ hoạt động chân ống cách nhịp nhàng, tốc độ di chuyển chậm từ đến 10 cm phút [2] Lớp Asteroidea chia thành (order): Brisingida, Forcipulatida, Notomyotida, Paxillosida, Spinulosida, Valvatida Velatida Đến thống kê có có khoảng 1800 loài biển phân bố tất đại dương giới Những nơi có nhiều biển phải kể đến vùng biển Ơxtrâylia, Đơng Thái Bình Dương Bắc Mỹ, đặc biệt vùng biển nhiệt đới Ấn Độ-Thái Bình Dương nơi tập trung đại đa số loài biển [2, 6] Ở Việt Nam có khoảng 60 lồi biển khác nhau, phân bố dọc bờ biển từ Bắc đến Nam Theo tác giả Lamarck (1816) loài biển Archaster typicus thuộc họ Archasteridea Valvatida Bộ Valvatida bao gồm 14 họ: Acanthasteridea, Archasteridae, Asterinidae, Asterodiscididae, Chaetasteridae, Ganeriidae, Leilasteridae, Goniasteridae, Mithrodidae, Odontasteridae, Ophidiasteridae, Oreasteridae, Poraniidae, Pseudarchasteridae, với hàng trăm loài khác Trong số đó, Archasteridea họ nhỏ với chi ArchasterTM gồm loài: Archaster angulatus, Archaster laevis Archaster typicus Cho đến nay, giới có khoảng 80 lồi biển khác nghiên cứu thành phần hóa học [14, 33, 40, 51, 77, 80] Một số loài quan tâm nghiên cứu Asterina pectinifera [26, 104, 115], Linckia laevigata [14, 24, 25, 36, 37, 43, 46, 48, 86, 87, 114] Trong số 200 hợp chất thu có đến 50% chất thuộc lớp chất steroid, 20% ceramide Ngồi ra, biển cịn chứa số hợp chất khác như: ancaloit, axit béo…Qua cho thấy, steroid ceramide lớp chất có thành phần hóa học Sao biển Các hợp chất ceramide có đường (cerebroside) từ biển thường mang hoạt tính gây độc tế bào, kháng khuẩn, kháng nấm Cho đến nay, vai trò sinh học cereboside chưa hiểu đầy đủ Người ta cho rằng, hợp chất tham gia vào q trình truyền tín hiệu màng tế bào, sinh trưởng biệt hóa tế bào, trì hình thái chức tế bào Về mặt sinh thái học, cerebroside từ biển thể khả chống hà tốt, lồi thường gây nhiều khó khăn cho tàu thuyền phương tiện đánh cá [99] Lớp chất steroid từ biển, đặc biệt nhóm steroid phân cực, thu hút nhiều quan tâm nghiên cứu nhà khoa học giới hoạt tính thú vị chúng, như: hoạt tính gây độc tế bào, chống ung thư, chống virut, tan máu, tăng sinh tế bào thần kinh, kháng viêm, giảm đau, hạ huyết áp Một vài hợp chất khác lại thể có hoạt tính kháng vi khuẩn gram dương tốt Trong vài năm trở lại đây, số lượng lớn hợp chất thuộc lớp chất phân lập từ loài biển Các steroid phân cực thường chia làm loại: polyhydroxy steroid, steroid sulfate, glycoside polyhydroxy steroid asterosaponine Trong đó, glycoside polyhydroxy steroid asterosaponine thường thấy loài thuộc chi Echinaster polyhydroxy steroid thấy có mặt hầu hết lồi biển nghiên cứu [28] Nghiên cứu mối tương quan cấu trúc hoạt tính rằng, hoạt tính steroid có đường phụ thuộc chủ yếu vào số lượng tiểu phân đường cấu tạo mạch nhánh Tuy nhiên, ảnh hưởng cấu trúc loại đường phần anglycon đến hoạt tính chưa làm sáng tỏ Gần nhà khoa học Nga tiến hành nghiên cứu mối liên hệ cấu trúc polyhydroxy steroid với hoạt tính độc tế bào tan máu Tám hợp chất từ bốn loài biển khác thử nghiệm hoạt động làm tan hồng cầu chuột gây độc giao tử (trứng tinh trùng) loài cầu gai Strongylocentrotus intermedius Các tác giả phát rằng, hoạt tính gây độc tế bào số hợp chất tăng tỷ lệ nghịch với số lượng nhóm OH phần aglycon Mặt khác, có mối liên hệ độc tính tế bào hoạt động làm tan máu steroid thử nghiệm Nồng độ muối, nhiệt độ giá trị pH yếu tố quan trọng định hoạt động làm tan máu steroid gắn đường Những nghiên cứu khoa học steroid đóng vai trị thành phần màng tế bào loài biển, có đóng góp cho việc bền hóa màng kép tế bào [28, 95, 104] Gần đây, mười hợp chất polyhydroxy steroid, kí hiệu certonardoside A-J, phân lập từ loài biển Certonadoa semiregularis đảo Komun, Hàn Quốc Các hợp chất thể phổ kháng virut rộng HIV, HSV, CoxB, EMCV VSV, số đó, hai hợp chất certonardoside I J thể hoạt tính mạnh Hợp chất ganglioside, LMG-4, phân lập từ lồi Luidia maculata có hoạt tính gây độc tế bào PC12 có mặt yếu tố tăng trưởng thần kinh NGF [6] Ngồi cịn có số hợp chất polyhydroxy steroid gắn đường thể hoạt tính kháng số dịng vi khuẩn hoạt tính gây độc tế bào tương đối tốt Bảng 1.1: Tổng hợp hoạt tính sinh học hợp chất steroid phân cực STT Hoạt tính sinh học Hoạt tính gây độc tế bào Nhóm chất Polyhydroxy steroid steroid sulfate Glycoside polyhydroxy steroid Asterosaponine Hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm Polyhydroxy steroid steroid sulfate Sao biển chứa hợp chất có hoạt tính Certonardoa semiregularis; Hippasteria phrygiana; Luidia quinaria; Anthenea chinensis TLTK [16], [21], [62], [79], [102], [108111], [12], [13], Certonardoa [110], [111] semiregularis; Anasterias minuta; Glycoside polyhydroxy steroid Asterosaponine Hoạt tính tán Polyhydroxy steroid Henricia [33], [40], huyết Glycoside polyhydroxy steroid Asterosaponine leviuscula; Culcita [67], [101] novaeguineae Hoạt tính neuritogenic Glycoside polyhydroxy steroid Linckia laevigata; [23], [24], [46], [81], [85-87] Những thông tin cho thấy khả ứng dụng tiềm tàng biển nói chung đặc biệt lớp chất steroid phân cực từ biển nói riêng cơng nghiệp dược phẩm Các hợp chất có cấu trúc vô đa dạng mang đặc điểm riêng biệt Nước ta có nguồn tài nguyên sinh vật biển phong phú, đến chưa có cơng trình khoa học nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học lớp chất steroid phân cực từ biển Do đó, nhằm tạo sở cho nghiên cứu lĩnh vực phát phát triển dược phẩm mới, luận án đặt mục tiêu nghiên cứu thành phần hóa học khảo sát hoạt tính sinh học lớp chất steroid phân cực từ loài biển Archaster typicus sinh sống vùng biển Việt Nam 1.2 Những nghiên cứu trước lớp chất steroid phân cực có lồi biển 1.2.1 Các nghiên cứu thành phần hóa học Từ kết nghiên cứu thành phần hóa học lồi biển cho thấy, lớp chất có biển steroid Dựa vào cấu trúc hóa học steroid phân lập người ta chia chúng thành nhóm sau: polyhydroxy steroid, steroid sulfate, glycoside polyhydroxy steroid asterosaponine [96, 105] 1.2.1.1 Các hợp chất Polyhydroxy steroid Trước năm 2000 có số cơng bố nhóm chất từ biển [90] Trong vài năm gần đây, khoảng 50 hợp chất polyhydroxy steroid phân lập từ nguồn tài nguyên Năm 2003, từ loài biển Certonardoa semiregularis thu thập gần đảo Komun, Hàn Quốc, Wang cs phân lập 13 hợp chất polyhydroxy steroid certonardosterol A-M (1-13) [111] Mạch nhánh hợp chất 9, 10 lần tìm thấy hợp chất sterol thiên nhiên [108, 111] Cũng từ lồi này, vào năm 2004 nhóm nghiên cứu tách thêm 23 hợp chất polyhydroxy steroid 14-36 Trong số đó, có năm hợp chất 14,15,19-21 thuộc nhóm tetrol, nhóm chất [107, 108] Các hợp chất steroid 25-31 có chứa nhóm xeton vị trí C-8 khung steroid cấu trúc gặp biển Các hợp chất 28-31 vị trí C-8/C-14 có chứa liên kết đôi [108] Cấu trúc đặc biệt tìm thấy số lồi hải miên Các hợp chất 9, 10, 34 có chứa mạch nhánh đặc biệt khơng ankyl hóa hay đề ankyl hóa mà cịn vị trí bất thường nhóm –OH Năm 2004, từ lồi biển Astropecten triseriatus thu thập từ vùng biển FiJi, nhóm nghiên cứu Levina EV cộng phân lập polyhydroxy steroid liên hết với triseramide 37 [63] Hợp chất tìm thấy số loài thực vật bậc thấp Các hợp chất steroid tương tự nhóm nghiên cứu Finamore E cộng tìm thấy lồi biển Myxoderma platyacantum [19] Từ năm 2002-2005, nhóm nghiên cứu Stonik cộng phân lập dãy hợp chất polyhydroxy steroid từ mẫu biển vùng Viễn Đơng, LB Nga [60, 66] Từ hai lồi biển Henricia sanguinolenta H.leviuscula phân lập hợp chất steroid phân cực mới, kí hiệu 38-39 [60, 67] Trong đó, hợp chất tetrol 38 có cấu trúc phần nhân 3β,6β,15β-trihydroxy steroid thấy hợp chất 39 có chứa nhóm xeton vị trí C-15 giống hợp chất 25-31 Từ loài biển Henricia tumida, nhóm nghiên cứu phân lập hợp chất polyhydroxy steroid mới, kí hiệu 40-41 [66] Từ loài biển Hippasteria phrigyana phân lập phrygiasterol 42 [62] Đây hợp chất polyhydroxy steroid chứa vòng xyclopropan lần phân lập từ loài da gai Nhóm hợp chất có mối quan hệ với sterol tự tìm thấy Hải miên, San hô cứng san hô mềm Từ dịch chiết MeOH loài biển Henricia leviuscula phân lập polyhydroxy steroid 43-44 có chứa nhóm –OH vị trí C23, C24 C24, C25 phần mạch nhánh [20, 33, 72, 94] C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Cũng từ loài biển này, gần đây, nhóm nghiên cứu Kicha A.A cs phân lập thêm hợp chất 45 Một hợp chất polyhydroxy steroid khác 46 có chứa 15,16-isopropylidenedioxy phân lập từ lồi biển Asterina pectinifera vùng DaMaDao, Qungdao, Trung Quốc [115] Tuy nhiên, hợp chất 46 sản phẩm phản ứng với aceton trình chiết tách Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 10 Sự diện loạt dẫn xuất polyhydroxy steroid loài biển khác cho thấy đa dạng cấu trúc nhóm chất lớp Sao biển Asteroidea tầm quan trọng chúng tồn biển 1.2.1.2 Các hợp chất steroid sulfate Năm 2001 từ loài biển Leptasterias alaskensis asiatica L fisheri thu thập vùng Viễn Đơng, nhóm nghiên cứu người Nga phân lập ba dẫn xuất cholesterol sulfate [41] Hợp chất cholesterol sulfate (47) tìm thấy sterol sulfate chủ yếu dịch chiết từ loài biển Leptasterias alaskensis asiatica L fisheri với hàm lượng tương ứng 53,4% 37,8%, nhiên 5αcholestan-3β-ol sulfate (48) (24,3 28,2%) 5α-cholestan-7-ene-3β-ol sulfate (49) (11,2 and 20,0%) xem thành phần trội loài biển Từ dịch chiết loài biển Lethasterias nanimensis chelifera phân lập cặp ion độc đáo có tên alkaloid steroid bao gồm cation alkaloid anion steroid phân lập phương pháp sắc ký lỏng pha đảo [50] Cấu trúc chúng xác định 1-methyl-6,7-dihydroxy-1,2,3,4tetrahydroisoquino-linium salts of asterone sulfate (50), isoasterone sulfate (51) tornasterol A sulfate (52) Tiếp tục nghiên cứu loài biển này, nhóm tác giả phân lập nhiều hợp chất sulfate steroid khác (53-58) có hợp chất 54, 56, 57 [44] Các steroid 53-55 xác định muối sulfate tương ứng hợp chất asterone sulfate, isoasterone sulfate tornasterol A sulfate Các hợp chất 56-58 chứng minh muối tyrammonium sulfate steroid tương ứng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 120 Bảng 4.18: Dữ liệu phổ 1H 13C-NMR phần aglycon hợp chất A16 a C δCab 36,8 29,6 79,7 31,0 50,1 81,2 41,8 10 36,4 146,4 39,2 11 12 117,8 43,4 13 42,5 δHac ( J Hz) 1,42 (1H, m, H-1) 1,72 (1H, m, H’-1) 2,25 (1H, m, H-2) 1,62(1H, m, H’-2) 4,17 (1H, m, H-3) 2,59 (1H, d, J=11,9,H-4) 1,32 (1H, m, H’-4) 1,25 (1H, m, H-5) 3,57 (1H, m, H-6) 2,38 (1H, m, H-7) 0,96 (1H, m, H’-7) 2,07 (1H, m, H-2) 5,33 (1H, m, H-11) 2,24 (1H, m, H-12) 2,04 (1H, m, H’-12) - C 14 15 δCab 55,1 25,9 16 23,7 17 18 19 20 21 22 60,4 13,6 19,7 75,0 26,6 55,3 23 24 213,8 54,8 25 26 27 25,4 22,9 22,8 δHac ( J Hz) 1,27 (1H, m, H-14) 1,77 (1H, m, H-15) 1,22 (1H, m, H’-15) 1,88 (1H, m, H-16) 1,69 (1H, m, H’-16) 1,64 (1H, m, H-17) 0,77 (3H, s, H-18) 0,98 (3H, s, H-19) 1,33 (3H, s, H-21) 2,61 (1H, d, J=15,2,H-22) 2,51(1H,d, J=15,2,H’-22) 2,37 (2H, dd, J=3,6; J=7,1; H-24) 2,08 (1H, m, H-25) 0,90 (3H, s, H-26) 0,90 (3H, s, H-27) MeOD-d4, b 125,8 MHz, c 700 MHz Bảng 4.19: Số liệu phổ 1H- NMR, 13C-NMR, HMBC ROESY đường hợp chất A16 ab ac δC δH ( J Hz) C   Qui 104,6 4,40 (d, J = 7,6) 74,4 3,33 (m) 91,1 3,33 (m) 75,2 3,03 (t, J = 8,8) 72,6 3,35 (m) 18,2 1,26 (d, J = 6,2) Qui2 104,1 4,53 (d, J = 7,7) 85,1 3,48 (t, J = 8,4) 75,4 3,70 (t, J = 9,2) 85,6 3,24 (t, J = 9,3) 72,4 3,56 (m) 18,3 1,43 (d, J = 6,1)) HMBC ROESY aglycon; 3, Qui1 Qui 4, Qui1 Qui1 1, Qui2; Qui3 Qui2 3, Qui2 4, Qui2 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Qui1 Qui1 Qui1 Qui1 3, Qui2 Qui3 1, Qui2 Qui2, Fuc1 1, Qui2 Qui2 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 121 Fuc1 103,0 4,45 (d, J = 7,6) 82,3 3,67 (m) 75,1 3,67 (m) 72,5 3,62 (br,s) 72,1 3,72 (m) 16,5 1,26 (d, J = 6,2) Fuc2 107,0 4,41 (d, J = 8,0) 73,8 3,53 (dd, J = 7,7, J = 10,1) 75,0 3,47 (dd, J = 9,4, J = 3,5) 73,0 3,56 (d, J = 2,9) 72,6 3,62 (m) 16,8 1,24 (d, J = 6,4) Qui3 107,0 4,52 (d, J = 7,7) 76,7 3,28 (d,d, J = 7,3, J = 9,5) 77,0 3,32 (t, J = 9,1) 76,2 3,10 (t, J = 9,2) 74,7 3,34 (m) 18,0 1,36 (d, J = 6,3) a b c Fuc , Fuc Fuc1 4, Fuc1 Fuc1 1, Fuc2 3, Fuc1; Qui2 Fuc1 Fuc1 Fuc1 Fuc1 3, Fuc2 Fuc2 1, Fuc2 4, Fuc2 Fuc2 Fuc2 Fuc2 Fuc2 Qui2 Qui3; Qui2 Qui3 Qui3 Qui3 Qui3 4, Qui3 MeOD-d4, 125.8 MHz, 700 MHz Dựa việc phân tích phổ 1D-TOCSY (phụ lục 17) đơn vị đường xác định độ dịch chuyển hóa học số tương tác proton vị trí C1C5 đơn vị đường quinovose proton vị trí C1-C4 đơn vị đường fucose Thơng số phổ proton vị trí C5 đơn vị đường fucose xác định cách chiếu bước sóng điện tử vào ngun tử H khơng liên kết với nguyên tử oxy (H-6) Dựa vào tín hiệu phổ hai chiều 1H-1H COSY-45, HSQC, HMBC, ROESY cho phép xác định giá trị cacbon proton mạch oligosaccharide hợp chất A16, ngoại trừ vị trí C2 (δC 82,3, δH 3,67) C3 (δC 75,1, δH 3,67) phân tử đường Fuc1 Vị trí nhóm phân tử Fuc1 xác định dựa vào phổ HMBC có khả thiết lập mối tương quan proton nguyên tử cacbon liền kề Trên phổ HMBC có tín hiệu thể tương tác proton anomeric H-1(δH 4,45) với nguyên tử C δC 82,3 Do đó, vị trí C2 Fuc1 xác định Các liệu phổ phân tử đường đơn phù hợp với liệu phổ β-fucopyranose, β-quinovopyranose cuối mạch 3-O-β- Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 122 quinovopyranose, 2,4–di-O-β-quinovopyranose 2-O-β-fucopyranose hợp chất asterosaponine biết Thủy phân A16 với 2M TFA sau xử lý với (R)-(-)-octan-2-ol tiến hành acetyl hóa thu fucoside octyl acetylat quinovose octyl acetylat Cấu hình Dcủa Fuc Qui xác định cách so sánh thời gian lưu dẫn xuất với mẫu chuẩn D-, L- đường đơn sử dụng phương pháp sắc kí khí (GC) Vị trí liên kết glycoside phân tử đường mạch oligosaccharide với phần aglycon hợp chất A16 chứng minh phổ ROESY, HMBC (bảng 4.18, bảng 4.19): C-1 Qui1 tương tác với H-6 aglycol, H-1 Qui2 với C-3 Qui1, H-1 Qui3 với H-1, C-1 Qui2, H-1 Fuc1 với H-4 Qui2, H-1 Fuc2 với C-2 Fuc1 Hình 4.78: Cấu trúc hóa học hợp chất A16 Từ thơng tin trên, cấu trúc hóa học hợp chất A16 xác định (20S)-6α-O-{β-D-fucopyranosyl-(1→2)-β-D-fucopyranosyl-(1→4)-[β-D-quinovopy ranosyl-(1→2)]-β-D-quinovopyranosyl-(1→3)-β-D-quinovopyranosyl}-20-hydroxy5α-cholest-9(11)-en-23-one-3β-yl sulfate Đây asterosaponine có cấu trúc mạch đường gồm tồn đơn vị đường bị deoxy hóa, β-D-fucose, β-Dquinovose, gặp tự nhiên Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 123 Bảng 4.20: Bảng tổng hợp chất phân lập từ biển Archaster typicus AT4 {(24R)-27-nor-5α-cholestane-3β, 6α,8,14,15α,24-hexaol} A1 {(24R)-27-nor-5α-cholestane3β,4β,6α,8,14,15α,24-heptaol)} (Hợp chất mới) OH OH OH OH OH HO OH OH A2 ((24R)-24-O-α-D-glucopyranosyl-27nor-5α-cholestan-3β,4β,5,6α,7β,8,14, 15α,24-nonaol) (Hợp chất mới) A4 (Muối natri (24S)- & (24R)-5α-cholest25(27)-ene-3β,6α,8,14,15α, 24,26heptaol 15-O-sulfate) OH A3 ((24R)-5α-cholestane-3β,4β,5,6α,8,14,15α, 24,26-nonaol) (Hợp chất mới) A5 (Muối natri (23E)-27-nor-25-oxo-5αcholest-23-ene-3β,6α,8,14,15α-pentaol 15-Osulfate) (Hợp chất mới) (Hợp chất mới) A6 (3-O-sulfoasterone) A7 (Δ24-3-O-sulfothornasterol A) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 124 OH O OSO3Na OH 24 A8 (Δ -3-O-sulfothornasterol) A10 (Muối natri (24E)-5α-cholest-24-ene3β,6α,8,14,15α,26-hexaol 15-O-sulfate) A12 ((24R)-27-norcholestan-3β,4β,5α,6α, 8,14,15α,24-octanol) A9 (Muối natri (24E)-5α-cholest-24-ene3β,4β,5,6α, 7β,8,14,15α,26-nonaol 6-Osulfate) A11 (Muối natri (24E)-5α-cholest-24-ene3β,4β,6α,8,14,15α,26-heptaol 15-O-sulfate) A13 ((24R)-27-norcholestan-3β,4β,5α,6α,7β,8β, 14α,15α,24-nonanol) A14-Archasteroside A (Hợp chất mới) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 125 A15 - Archasteroside B (Hợp chất mới) A16 - Archasteroside C (Hợp chất mới) 4.2 Kết thử hoạt tính sinh học 4.2.1 Hoạt tính chống ung thư in vitro Với mục đích tìm kiếm hợp chất có hoạt tính chống ung thư, số hợp chất phân lập từ biển Archaster typicus tiến hành thử hoạt tính sinh học dựa mơ hình sàng lọc in vitro Viện nghiên cứu ung thư quốc gia Hoa Kỳ Các hợp chất đánh giá hoạt tính gây độc tế bào dịng tế bào ung thư ảnh hưởng chúng đến hoạt động số yếu tố phiên mã liên quan đến ung thư NF-κB p53 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 126 Các yếu tố phiên mã NF-κB p53 nhóm protein tham gia vào hoạt động đọc dịch mã di truyền gen Khi bị kích thích nhiều tác nhân khác nhau, chúng liên kết với phân tử ADN vị trí đặc hiệu khởi động chương trình làm tăng giảm q trình biểu gen đích thơng qua việc kích hoạt hay kìm hãm có mặt ARN polymease Các nhóm protein đóng nhiều vai trị sinh lý quan trọng bao gồm điều khiển trình phiên mã tế bào, đáp ứng tín hiệu từ môi trường nội bào ngoại bào, điều khiển hoạt động chu trình tế bào NF-κB điều chỉnh 200 gen, bao gồm gen tham gia vào trình miễn dịch viêm, ức chế trình chết theo chương trình, tăng sinh tế bào phản hồi tiêu cực NF-κB NF-κB điều hịa tích cực gen mã hóa cytokine (TNFα, IL1β, IL1β, IL6, IL2, IL12, IFNγ), phân tử tế bào bám dính mạch máu (VCAM)-1, phân tử bám dính gian bào (ICAM)-1, chemokine (IL-8, protein viêm đại thực bào (MIP)-1α, methul (MCP)-1 emzyme cảm ứng (COX-2, iNOS) NF-κB đóng vai trị quan trọng việc ngăn chặn trình chết theo chương trình (programmed cell dead hay apoptosis) tế bào thông qua chế thúc đẩy sinh sản gen antiapoptosis (Bcl-2, Bcl-XL, cIAP-1 -2, TRAF-1 2-) ức chế gen proapoptosis (Bax, Fas, p53, caspase-1) Các yếu tố liên quan đến di tế bào ung thư protein MMP (bao gồm MMP-2, -3, -9 -13), ICAM, VCAM chịu tác động yếu tố nhân NF-κB Ngồi ra, NF-κB ngăn chặn di cư tế bào nội môi thông qua việc tăng xuất chất ức chế tế bào MMP-1 mơ tả tế bào hình [54] Như kích hoạt NF-κB có liên quan mật thiết đến phát sinh phát triển ung thư P53 (còn gọi protein 53 protein khối u 53), loại protein ức chế khối u người mã hóa gen TP53 [29, 42, 73, 88] P53 có vai trị sinh học quan trọng tham gia điều chỉnh chu kỳ tế bào, trị ổn định cách ngăn chặn đột biến gen [4, 7, 15, 17, 39, 68, 75, 76, 83, 97, 106] protein thuộc nhóm p53 (có nấm men) cố định chặt chẽ đặc hiệu Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 127 protein khác gọi cyclin Protien tổng hợp nhanh qua điểm kiểm soát thời gian ngắn Protein p53 cố định có hình dạng hoạt động protein kinase trở nên có khả cố định gốc phosphat protein xác định Sự cố định diễn serin threonin Protein p53 (khối lượng 53 kDa) cảm ứng ADN bị thương tổn xạ ion hóa hay chất gây đột biến phosphoprotein Phospho yếu tố kiểm soát biểu lộ nhiều gen, đặc biệt biểu lộ gen WAF mà protein tương ứng ngăn cản replicase A cố định ADN (ức chế tái bản) p53 yếu tố ức chế phiên mã (vậy ức chế dịch mã gen mã hóa cho cyclin E Sự ức chế replicase A cyclin E, hai phong bế chu kì tế bào G1 dẫn đến ngừng nhân bản, cho phép tế bào liên quan sửa chữa thương tổn xảy ADN Ngoài ra, p53 biết đến loại gen bị đột biến thường xuyên ung thư thiếu hụt dẫn tới nguy gia tăng mạnh bệnh nguy hiểm [70, 71] Việc đánh giá tìm kiếm hợp chất có hoạt tính ức chế kích hoạt yếu tố phiên mã NF-κB hay kích hoạt p53 cung cấp thêm đích cho việc ngăn ngừa dự phịng ung thư 4.2.1.1 Hoạt tính gây độc tế bào Các hợp chất phân lập từ loài biển Archaster typicus tiến hành thử hoạt tính gây độc tế bào dịng tế bào ung thư cổ tử cung người (Hela) dòng tế bào ung thư biểu mô chuột (JB6 Cl 41) theo phương pháp mô tả mục 2.2.3.1 Kết thử nghiệm cho thấy, có hợp chất có kí hiệu A14 A15 thể có khả gây độc tế bào Kết thí nghiệm nêu bảng 4.21 Bảng 4.21: Kết hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ lồi biển Archaster typicus IC50 (µM) Dòng tế bào Chất A14 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn A15 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 128 Hela 24 14 JB6 P+ Cl14 37 18 Hợp chất A15 thể hoạt tính mạnh với giá trị IC50 là: 14 µM; 18 µM 4.2.1.2 Tác động đến hoạt hóa yếu tố nhân NF-κB; p53A15 có hoạt tính gây độc tế bào mạnh dòng tế bào ung thư nên lựa chọn để đánh giá tác động lên yếu tố nhân NF-κB; p53- theo phương pháp mô tả mục 2.2.3.2 Kết cho thấy: Ở nồng độ 12,5 µM, hợp chất A15 thể hoạt tính kích hoạt phiên mã p53 mạnh gấp 1,3 lần so với mẫu tế bào khơng xử lí với chất thử A15 Song, khơng kích hoạt NF-κB Theo tìm hiểu chúng tơi hợp chất asterosaponine thử nghiệm hoạt tính phiên mã yếu tố nhân p53 cho kết khả quan Từ kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào tác động lên yếu tố phiên mã NF-κB p53 thấy hoạt tính kích hoạt p53 khơng kích hoạt NF-κB chế ức chế phát triển tế bào ung thư A15 Kết giúp định hướng nghiên cứu tiếp để sử dụng biển việc phân lập hoạt chất bào chế dược phẩm có tác dụng điều trị ung thư tạo chế phẩm dạng thực phẩm chức phục vụ sống 4.2.2 Hoạt tính ức chế thụ tinh phát triển phơi thai lồi cầu gai Strongylocentrotus intermedius Các hợp chất thuộc nhóm polyhydroxy steroid phân lập từ loài biển Archaster typicus đánh giá hoạt tính ức chế thụ tinh thử nghiệm gây độc giao tử (trứng, tinh trùng) loài cầu gai Strongylocentrotus intermedius theo phương pháp mô tả mục 2.2.3.3 Kết thí nghiệm trình bày bảng 4.22 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 129 Đối với thử nghiệm ức chế thụ tinh trứng loài Cầu gai Strongylocentrotus intermedius (bảng 4.22), bốn hợp chất A1, A9, A10, A11 thể hoạt tính Trong đó, có ba hợp chất A9, A10, A11 thể hoạt tính mạnh với giá trị EC100 là: 25 μg/ml, 25 μg/ml, 25 μg/ml; EC50 là: 12 μg/ml, 20 μg/ml, 17 μg/ml Hợp chất A1 thể hoạt tính yếu với giá trị EC50 75 μg/ml Bảng 4.22: Kết hoạt tính gây độc giao tử Nồng độ ức chế (μg/ml)a Hợp chất Tinh trùng cầu gai Phôi bào EC100 EC50 EC100 EC50 A1 100 75 >100 - A2 >100 - >100 - A3 >100 - >100 - A4 100 - >100 - A5 100 85 >100 - A9 25 12 50 23 A10 25 20 100 90 A11 25 17 100 60 (-) không thử Đối với thử nghiệm ức chế phát triển phơi bào lồi Cầu gai Strongylocentrotus intermedius, ba hợp chất A9, A10, A11 thể hoạt tính, hợp chất A9 thể có độ độc mạnh với giá trị EC100 50 μg/ml, EC50 23 μg/ml Hai hợp chất lại A10, A11 có độc tính yếu với giá trị EC100 là: 100 μg/ml, 100 μg/ml; EC50 là: 90 μg/ml, 60 μg/ml Thử nghiệm gây độc giao tử (trứng, tinh trùng) loài cầu gai phép thử tiêu chuẩn để đánh giá độc tính mức tế bào phơi thai, sử dụng hai loại kính hiển vi quang học điện tử Phương pháp thích hợp khơng đánh giá độ độc sinh thái biển (mức độ ô nhiễm nước biển) mà để đánh giá độ độc với người, phương pháp thử nhanh độ độc thuốc để nghiên cứu dị dạng bào thai [53] Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 130 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Đây cơng trình nghiên cứu sâu lớp chất steroid phân cực từ loài biển Archaster typicus thu thập vùng biển Việt Nam Về nghiên cứu hóa học: Đã phân lập 17 hợp chất Cấu trúc hóa học hợp chất xác định phương pháp phổ khối lượng, phổ cộng hưởng từ hạt nhân phương pháp hóa lý khác Các hợp chất phân lập xác định cấu trúc bao gồm: • (24R)-27-nor-5α-cholestane-3β,6α,8,14,15α,24-hexaol (AT4) • (24R)-27-nor-5α-cholestane-3β,4β,6α,8,14,15α,24-heptaol (A1) • (24R)-24-O-α-D-glucopyranosyl-27-nor-5α-cholestan-3β,4β,5,6α,7β,8,14, 15α,24-nonaol (A2) • (24R)-5α-cholestane-3β,4β,5,6α,8,14,15α,24,26-nonaol (A3) • Muối natri (24S)- & (24R)-5α-cholest-25(27)-ene-3β,6α,8,14,15α,24,26heptaol 15-O-sulfate (A4) • Muối natri (23E)-27-nor-25-oxo-5α-cholest-23-ene-3β,6α,8,14,15α-pentaol 15-O-sulfate (A5) • 3-O-sulfoasterone (A6) • 3-O-sulfothornasterol A (A7) • Δ24-3-O-sulfothornasterol A (A8) • Muối natri (24E)-5α-cholest-24-ene-3β,4β,5,6α,7β,8,14,15α,26-nonaol 6-Osulfate (A9) • Muối natri (24E)-5α-cholest-24-ene-3β,6α,8,14,15α,26-hexaol 15-O-sulfate (A10) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 131 • Muối natri (24E)-5α-cholest-24-ene-3β,4β,6α,8,14,15α,26-heptaol 15-Osulfate (A11) • (24R)-27-norcholestan-3β,4β,5α,6α,8,14,15α,24-octanol (A12) • (24R)-27-norcholestan-3β,4β,5α,6α,7β,8β,14α,15α,24-nonanol (A13) • Archasteroside A (A14) • Archasteroside B (A15) • Archasteroside C (A16) Trong số có hợp chất AT4, A1, A2, A3, A4, A5, A14, A15 A16 Ngoài ra, hợp chất A6, A7, A8, A9, A10, A11 lần tìm thấy lồi Archaster typicus Việt Nam Về nghiên cứu hoạt tính sinh học: 2.1 Đã khảo sát hoạt tính chống ung thư in vitro hợp chất qua đánh giá hoạt tính gây độc tế bào dịng tế bào ung thư ảnh hưởng đến hoạt động yếu tố phiên mã NF-κB p53 Kết cho thấy: - Các hợp chất A14 A15 có hoạt tính gây độc tế bào dịng tế bào ung thư cổ tử cung người (Hela) (IC50 24 µM 14 µM) dịng tế bào ung thư biểu mô chuột (JB6 Cl 41) với giá trị IC50 là: 37 µM 18 µM - Ở nồng độ 12,5 µM hợp chất A15 kích hoạt phiên mã p53 mạnh gấp 1,3 lần so với mẫu đối chứng song khơng kích hoạt NF-κB Đây hợp chất asterosaponine đánh giá tác dụng đến hoạt động phiên mã yếu tố nhân p53 cho kết khả quan Kết cho thấy hoạt tính kích hoạt p53 khơng kích hoạt NF-κB chế ức chế phát triển tế bào ung thư A15 2.2 Đã khảo sát hoạt tính ức chế thụ tinh phát triển phôi thai hợp chất polyhydroxy steroid thử nghiệm gây độc giao tử (trứng, tinh Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 132 trùng) loài cầu gai Strongylocentrotus intermedius Kết thử nghiệm cho thấy: Có 4/8 hợp chất thử nghiệm có hoạt tính gây độc tế bào với tinh trùng phôi bào dạng lồi Cầu gai Trong số hợp chất A9 có hoạt tính mạnh với giá trị EC50 = 12 μg/ml phép thử gây độc tinh trùng EC50 = 23 μg/ml phép thử gây độc phôi bào Kiến nghị: Đây cơng trình bước đầu nghiên cứu hoạt tính sinh học số hợp chất steroid phân cực phân lập từ loài biển Các thử nghiệm sinh học dừng mức độ thăm dò, cần tiếp tục khảo sát toàn diện Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 133 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA LUẬN ÁN Alla A Kicha, Natalia V Ivanchina, Trinh T T Huong, Anatoly I Kalinovsky, Pavel S Dmitrenok, Sergey N Fedorov, Sergey A Dyshlovoy, Pham Q Long, Valentin A Stonik (2010), “Two new asterosaponines, archasterosides A and B, from the Vietnamese starfish Archaster typicus and their anticancer properties”, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 20, pp 3826-3830 Natalia V Ivanchina, Alla A Kicha, Trinh T.T Huong, Anatoly I Kalinovsky, Pavel S Dmitrenok, Irina G Agafonova, Pham Q Long, Valentin A Stonik (2010), “Highly hydroxylated steroids of the starfish Archaster typicus from the vietnamese waters”, steroids, 75, pp 897–904 Alla A Kicha, Trinh T T Huong, Natalia V Ivanchina, Anatoly I Kalinovsky, Pavel S Dmitrenok, Sergey N Fedorov, Sergey A Dyshlovoy, Pham Q Long, Valentin A Stonik (2010), “Asterosaponin archasteroside C from the starfish Archaster typicus, Russ Chem Bull, 50, pp 724-527 Trịnh Thị Thu Hương, Phạm Quốc Long, Alla A Kicha, Natalia V Ivanchina, Anatoly I Kalinovsky, Pavel S Dmitrenok, and Valentin A Stonik (2009), “A new polyhidroxy steroid from the starfish Archaster typicus”, Tạp chí Hố học, T 47 (4A), Tr 374-379, Trịnh Thị Thu Hương, Chu Quang Truyền, Nguyễn Tiến Đạt, Châu Văn Minh, Phạm Quốc Long, Alla A Kicha, Natalia V Ivanchina, Anatoly I Kalinovsky, Pavel S Dmitrenok, Valentin A Stonik (2010), “Các hợp chất Asterosaponine phân lập từ loài biển Archaster typicus Việt Nam”, Tạp chí khoa học cơng nghệ, T 48 (4A), Tr.1-8 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn