1044 nghiên cứu thành phần hóa học dược liệu cỏ lào (eupatorium odoratum l)

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ DƯƠNG THỊ CẨM TIÊN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC DƯỢC LIỆU CỎ LÀO (Eupatorium odoratum L.) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC ThS Nguyễn Thị Trang Đài Cần Thơ – 2014 LỜI CẢM ƠN Con cảm ơn ba mẹ gia đình ln quan tâm, ủng hộ con; động viên động lực cho cố gắng suốt thời gian qua Em chân thành bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến cô ThS Nguyễn Thị Trang Đài Trong suốt thời gian làm đề tài, cô ln tận tình hướng dẫn, giúp đỡ động viên em; cảm ơn cô lo lắng cho em tạo điều kiện tốt để em hoàn thành luận văn tốt nghiệp Em cảm ơn đến: Cô ThS Nguyễn Ngọc Quỳnh, thầy ThS Lê Thanh Vĩnh Tuyên, cô ThS Thạch Trần Minh Uyên, chị Ngô Thị Kim Hương, chị Nguyễn Vũ Phương Lan quan tâm, động viên giúp đỡ em suốt thời gian qua Liên mơn Hóa phân tích- Kiểm nghiệm – Độc chất mơn Hóa dược tạo điều kiện, giúp đỡ em nhiều Mình gởi lời cảm ơn sâu sắc đến bạn làm đề tài phòng nghiên cứu 1, 2, cảm ơn bạn giúp đỡ, động viên chia sẻ kinh nghiệm quý báu suốt thời gian làm đề tài Cảm ơn bạn Kim Dung, Bảo An, Thúy An, Duy Toàn, Việt Phát, Kim Ngân, Minh Tri, em Quảng Thị An Dung, Nguyễn Thị Ánh Ngoan DK36 giúp đỡ, chia động viên thực đề tài LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết luận văn hồn tồn riêng tơi chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu trước Cần Thơ, ngày tháng Sinh viên kí tên năm 2014 i MỤC LỤC TRANG PHỤ BÌA LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC i DANH MỤC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ SƠ ĐỒ iv DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ v ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1.TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN THỰC VẬT HỌC 1.1.1 Vị trí, phân loại: 1.1.2 Đặc điểm thực vật học họ Asteraceae 1.1.3 Đặc điểm thực vật học chi Eupatorium 1.1.4 Đặc điểm thực vật học loài Eupatorium odoratum L 1.2 TỔNG QUAN VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.2.1 Tổng quan thành phần hóa học loài Eupatorium odoratum L 1.2.2 Định lượng hợp chất loài Eupatorium odoratum L 12 1.3 TỔNG QUAN TÁC DỤNG DƯỢC LÝ VÀ CÔNG DỤNG 12 1.3.1 Theo y học cổ truyền 12 1.3.2 Theo y học đại 13 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 16 2.1.1 Nguyên liệu 16 2.1.2 Dung mơi hóa chất 16 2.1.3 Trang thiết bị nghiên cứu 16 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.2.1 Nghiên cứu thực vật học 17 2.2.2 Thử tinh khiết 18 2.2.3 Nghiên cứu hóa học 19 ii Chương KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 24 3.1 NGHIÊN CỨU THỰC VẬT HỌC 24 3.1.1 Đặc điểm hình thái dược liệu Cỏ lào nghiên cứu 24 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu 26 3.1.3 Đặc điểm bột dược liệu 30 3.2 THỬ TINH KHIẾT 33 3.2.1 Xác định độ ẩm 33 3.2.2 Xác định hàm lượng chất chiết dược liệu Cỏ lào 33 3.3 NGHIÊN CỨU HÓA HỌC 33 3.3.3 Chiết xuất tách phân đoạn 36 3.3.4 Phân lập tinh chế 39 3.3.5 Kiểm tra độ tinh khiết xác định cấu trúc chất phân lập 44 Chương BÀN LUẬN 55 4.1 KHẢO SÁT THỰC VẬT HỌC 55 4.2 THỬ TINH KHIẾT 55 4.3 KHẢO SÁT HÓA HỌC 55 4.3.1 Phân tích sơ thành phần hóa thực vật 55 4.3.2 Chiết xuất 56 4.3.3 Phân lập 56 4.3.5 Tinh chế 58 4.3.6 Xác định cấu trúc chất phân lập 58 KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC PHỤ LỤC PHỤ LỤC iii DANH MỤC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ viết nguyên Ý nghĩa Bz Benzen CC Classical Chromatography Sắc ký cột cổ điển COSY Correlated Spectroscopy (Phổ) tương quan 1H-1H Cf Chloroform s singlet Đỉnh đơn d doublet Đỉnh đôi DĐVN Dược điển Việt nam DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer DMSO Dimethyl sulfoxide EtOAc Ethyl acetate FID Flame Ionization Detector Đầu dị ion hóa lửa HPLC High Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation MeOH Methanol MS Mass Spectroscopy Khối phổ NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân PE Petrolium ether SKLM Sắc ký lớp mỏng UV Ultraviolet iv DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ SƠ ĐỒ Bảng 3.1 Độ ẩm Cỏ lào 33 Bảng 3.2 Hàm lượng chất chiết toàn mặt đất Cỏ lào 33 Bảng 3.3 Kết định tính sơ thành phần hóa học tồn mặt đất dược liệu Cỏ lào 33 Bảng 3.4 Hàm lượng chất chiết nồng độ cồn khác 35 Bảng 3.5 Thăm dò pha động cho CC 39 Bảng 3.6 Kết sắc ký cao A 41 Bảng 3.7 Thăm dò pha động cho CC cao B 41 Bảng 3.8 Kết sắc ký cao B 43 Bảng 3.9 So sánh liệu phổ 1H–NMR 13–CNMR A acid vanillic 57 Bảng 3.10 So sánh phổ 1H–NMR 13–CNMR B4 protocatechuic acid 59 Sơ đồ 3.11 Quy trình chiết xuất, tách phân đoạn 38 v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cây Cỏ lào (Eupatorium odoratum L.) Hình 3.1 Cây Cỏ lào (Eupatorium odoratum L.) tỉnh Sóc Trăng 24 Hình 3.2 Đặc điểm Cỏ lào thu hái tỉnh Sóc Trăng 25 Hình 3.3 Vi phẫu Cỏ lào 26 Hình 3.4 Bóc tách biểu bì Cỏ lào 27 Hình 3.5 Vi phẫu thân Cỏ lào 28 Hình 3.6 Vi phẫu rễ Cỏ lào 29 Hình 3.7 Soi bột Cỏ lào 30 Hình 3.8 Soi bột thân Cỏ lào 31 Hình 3.9 Soi bột rễ Cỏ lào 32 Hình 3.10 So sánh dịch chiết dược liệu Cỏ lào độ cồn khác 36 Hình 3.11 Thăm dị pH chiết xuất với dung mơi chloroform 37 Hình 3.12 Thăm dị pH chiết xuất với dung mơi ethyl acetat 37 Hình 3.13 Kết phân đoạn 38 Hình 3.14 Sắc ký đồ phân đoạn cao A 40 Hình 3.15 Sắc ký đồ phân đoạn cao B 43 Hình 3.16 Kiểm tra độ tinh khiết A SKLM 45 Hình 3.17 Kiểm tra độ tinh khiết B1 SKLM 47 Hình 3.18 Kiểm tra độ tinh khiết B2 SKLM 48 Hình 3.19 Kiểm tra độ tinh khiết B3 SKLM 49 Hình 3.20 Kiểm tra độ tinh khiết B4 SKLM 51 Hình 3.21 Sắc ký đồ hợp chất phân lập 52 Hình 3.22 Các hợp chất phân lập 52 ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam nằm vùng nhiệt đới gió mùa, ánh sáng nhiều, lượng mưa lớn, độ ẩm cao nên thực vật phát triển mạnh Thảm thực vật nước ta đa dạng, phong phú nguồn dược liệu quý giá cần nghiên cứu phát triển Hơn nữa, dược liệu có vai trị ngày quan trọng đời sống người, xu hướng sử dụng thuốc có nguồn gốc từ thảo dược để phịng trị bệnh trở nên phổ biến Do đó, nhiều loài dược liệu khác nghiên cứu tìm hợp chất có hoạt tính nhằm phục vụ cho nhu cầu khám chữa bệnh Cây Cỏ lào (Eupatorium odoratum L.) thuộc họ Cúc (Asteraceae), gọi Cộng sản, Yên bạch, Bớp bớp, Bù xích, Chùm hơi, Nhả nhật, Muồng mung phia, loài mọc hoang lan rộng, chiếm địa bàn phân bố nhanh nhiều vùng giới Ở Việt Nam, Cỏ lào thường gặp nhiều nơi từ tỉnh đồng đến miền trung du vùng đồi núi thấp Về công dụng y học, từ lâu dân gian biết dùng Cỏ lào để cầm máu, chữa lành vết thương, vết bỏng trị số bệnh nhiễm khuẩn đường ruột, ung nhọt, ghẻ lở, cảm cúm…[1], [8] Thành phần hóa học Cỏ lào tác giả nước nghiên cứu Các phận có chứa tinh dầu, flavonid, tanin, alkaloid, coumarin [11] Tuy nhiên thành phần hóa thực vật Cỏ lào chưa nghiên cứu đầy đủ chưa có tiêu chuẩn thực vật học cho dược liệu Trong Cỏ lào nguồn nguyên liệu dễ tìm có nhiều thiên nhiên Đây dược liệu có nhiều tiềm Do đó, đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học dược liệu Cỏ lào (Eupatorium odoratum L.)” thực với mục tiêu cụ thể sau:  Khảo sát thực vật học thành phần hóa học mẫu dược liệu Cỏ lào thu thập tỉnh Sóc Trăng  Thăm dị điều kiện chiết xuất hợp chất  Phân lập, tinh chế xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập Ý nghĩa đề tài: ❖ Góp phần xây dựng tiêu chuẩn thực vật học dược liệu Cỏ lào ❖ Có kết phân tích sơ thành phần hóa học tồn mặt đất Cỏ lào ❖ Phân lập xác định cấu trúc hoạt chất chính, góp phần bổ sung vào thành phần hóa thực vật dược liệu Cỏ lào Việt Nam 3500 3000 D:\DATA\IR TPHCM\IR Toan\meas\Sample description.0 2500 2000 Wavenumber cm-1 Phổ B4Sample Compartment Sample IR description Page 1/1 1500 1000 557.15 639.49 942.52 878.70 817.94 765.81 1130.23 1097.13 1601.72 1540.66 1522.03 1472.86 1418.78 1361.75 1292.09 1683.13 2632.24 2806.89 3903.96 3854.16 3839.63 3821.45 3801.95 3751.17 3735.73 3711.84 3690.27 3676.27 3649.64 3629.50 3567.64 3257.62 85 Transmittance [%] 90 95 100 PL-03 500 09/06/2014 PL-04 Phụ lục 1.2 Phổ khối (MS) chất A Phổ khối (MS) chất A PL-05 Phụ luc 1.3 Phổ 13C-NMR, 1H-NMR, DEPT, HSQC, HMBC chất A Phổ 1H-NMR chất A Phổ 1Hex -NMR chất A PL-06 Phổ 13C-NMR chất A Phổ 13Cex-NMR chất A PL-07 Phổ DEPT chất A Phổ DEPTex chất A PL-08 Phổ HMBC chất A PL-09 Phổ HMBCex chất A PL-10 Phổ HMBCex chất A PL-11 Phổ HSQC chất A PL-12 Phổ HSQC chất A PL-13 Phụ lục 1.4 Phổ 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT chất B1 Phổ 1H-NMR chất B1 Phổ 1Hex-NMR chất B1 PL-14 Phổ 13C-NMR chất B1 Phổ 13Cex-NMR chất B1 PL-15 Phổ DEPT chất B1 PL-16 Phụ lục 1.5 Phổ 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT chất B4 Phổ 1H-NMR chất B4 Phổ 1Hex-NMR chất B4 PL-17 Phổ 13C-NMR chất B4 Phổ 13Cex-NMR chất B4