1046 nghiên cứu thành phần hóa học của lá đu đủ carica papaya l caricaceae

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ ĐẶNG NGUYỄN VÂN ANH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ ĐU ĐỦ (Carica papaya L – Caricaceae) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC ThS LÊ THANH VĨNH TUYÊN Cần Thơ – 2015 LỜI CẢM ƠN Con xin cảm ơn cha mẹ bên cạnh động viên để đƣợc nhƣ ngày hôm Trong trình thực đề tài em nhận đƣợc nhiều giúp đỡ, tạo điều kiện nhà trƣờng, ban chủ nhiệm khoa, tập thể thầy cô, anh chị Liên môn Dƣợc liệu - Dƣợc cổ truyền - Thực vật: cô Nguyễn Ngọc Quỳnh, cô Thạch Trần Minh Uyên, thầy Lê Thanh Vĩnh Tuyên, cô Nguyễn Thị Trang Đài, chị Ngô Thị Kim Hƣơng, chị Nguyễn Vũ Phƣơng Lan Xin chân thành cảm ơn thầy Lê Thanh Vĩnh Tuyên cô Nguyễn Ngọc Quỳnh trực tiếp hƣớng dẫn tận tình truyền đạt kiến thức chuyên ngành Dƣợc liệu để em hồn thành tốt luận văn Xin chân thành cảm ơn chị Lê Hoài Bắc, bạn Võ Tuyết Hƣơng, Võ Thị Kiều Oanh, Đoàn Lê Thanh Tâm, Hồ Võ Thùy Anh bạn nhóm làm đề tài em lớp Dƣợc khoá 37 giúp đỡ, động viên, khích lệ tơi q trình thực luận văn LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan tất kết luận văn trung thực, hồn tồn riêng tơi chƣa đƣợc cơng bố cơng trình Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2015 Sinh viên ký tên Đặng Nguyễn Vân Anh MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ iii ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT HỌC 1.1.1 Họ Caricaceae 1.1.2 Chi Carica 1.1.3 Loài Đu đủ - Carica papaya L Caricaceae .5 1.2 TỔNG QUAN VỀ THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA LỒI ĐU ĐỦ 1.2.1 Thành phần hóa học Đu đủ 1.2.2 Thành phần hóa học Đu đủ 1.3 TÁC DỤNG CỦA LÁ ĐU ĐỦ 14 1.3.1 Tác dụng sinh học Đu đủ theo quan điểm đại 14 1.3.2 Tác dụng Đu đủ theo y học cổ truyền 16 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU .17 2.1.1 Nguyên liệu 17 2.1.2 Trang thiết bị nghiên cứu 17 2.1.3 Dung mơi, hóa chất 18 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.2.1 Khảo sát thực vật học 18 2.2.2.Xác định độ ẩm 19 2.2.3 Nghiên cứu hóa học 19 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 28 3.1 KHẢO SÁT THỰC VẬT HỌC .28 3.1.1 Đặc điểm hình thái 28 3.1.2 Đặc điểm vi học .29 3.1.3 Đặc điểm bột dược liệu 33 3.2.XÁC ĐỊNH ĐỘ ẨM .34 3.3 NGHIÊN CỨU HÓA HỌC 34 3.3.1.Phân tích sơ thành phần hóa học Đu đủ .34 3.3.2 Thăm dò điều kiện chiết xuất xử lý mẫu 35 3.3.3 Chiết xuất xử lý mẫu 36 3.3.4 Phân lập cao D2 37 3.3.5 Tinh chế A1 từ phân đoạn 38 3.3.6 Kiểm tra độ tinh khiết A1 39 3.3.7 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 40 Chƣơng BÀN LUẬN 43 4.1 THỰC VẬT HỌC 43 4.1.1 Hình thái thực vật 43 4.1.2 Đặc điểm vi học .43 4.2 ĐỘ ẨM 44 4.3 NGHIÊN CỨU HÓA HỌC 45 4.3.1 Phân tích sơ thành phần hóa học .45 4.3.2 Thăm dò điều kiện chiết xuất xử lý mẫu 45 4.3.3 Chiết xuất xử lý mẫu 46 4.3.4 Phân lập cao D2 46 4.3.5 Tinh chế A1 từ phân đoạn 46 4.3.6 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 47 4.4 HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CARPAIN 48 KẾT LUẬN 49 KIẾN NGHỊ .50 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Từ gốc Ac Acetone Cf Chloroform D Doublet DEPT Distortionless Enhancement Ý nghĩa Đỉnh kép by Polarization Transfer EA Ethyl acetate HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation IR Infrared Phổ hồng ngoại M Multiplet Nhiều đỉnh MeOH Methanol MS Mass Spectroscopy Phổ khối NMR Nuclear magnetic resonance Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân PE Petroleum ether Ether dầu hỏa S Singlet Đỉnh đơn TT Thuốc thử SKLM Sắc ký lớp mỏng UV Ultra violet Tử ngoại VS Vanillin - sulfuric acid Thuốc thử Vanillin Sulfuric ii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Số lƣợng phân bố loài họ Caricaceae Bảng 1.2 Thành phần hóa học phận Đu đủ Bảng 1.3 Tính chất hóa học số alkaloid Đu đủ Bảng 3.1 Độ ẩm dƣợc liệu Đu đủ 34 Bảng 3.2 Kết phân tích sơ thành phần hóa học Đu đủ 34 Bảng 3.3 Kết khảo sát độ cồn chiết phù hợp 35 Bảng 3.4 Kết khảo sát loại acid nồng độ acid chiết phù hợp 36 Bảng 3.5 Các hệ dung môi đƣợc khảo sát cho sắc ký cột 37 Bảng 3.6 Các nhóm chức đặc trƣng A4 phổ IR 40 Bảng 4.1 Bảng so sánh tín hiệu C A1 với tài liệu tham khảo 48 Bảng 4.2 Bảng so sánh tín hiệu H A1 với tài liệu tham khảo 49 Sơ đồ 2.1 Quy trình chiết xuất cho định tính sơ 20 Sơ đồ 2.2 Quy trình chung khảo sát dung dịch cồn 21 Sơ đồ 2.3 Quy trình chung khảo sát loại acid nồng độ acid chiết phù hợp 22 Sơ đồ 2.4 Quy trình chiết xuất, tách phân đoạn từ Đu Đủ 24 iii DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ SƠ ĐỒ Hình 1.1 Đặc điểm thực vật số lồi họ Caricaceae Hình 1.2 Bản đồ phân bố chi họ Caricaceae Hình 1.3 Carica papaya L Caricaceae Hình 1.4 Cơng thức cấu tạo alkaloid Đu đủ Hình 1.5 Cơng thức cấu tạo số flavonoid Đu đủ 10 Hình 1.6 Cơng thức cấu tạo số hợp chất khác đƣợc phân lập 12 Hình 1.7 Cơng thức cấu tạo số hợp chất khác đƣợc phân lập 13 Hình 3.1 Tổng quan hình thái Đu đủ 28 Hình 3.2 Tổng quan vi phẫu Đu đủ 29 Hình 3.3 Bóc tách biểu bì Đu đủ 30 Hình 3.4 Tổng quan vi phẫu thân Đu đủ 31 Hình 3.5 Bóc tách biểu bì thân Đu đủ 31 Hình 3.6 Tổng quan vi phẫu rễ Đu đủ 32 Hình 3.7 Cấu tạo chi tiết vi phẫu rễ Đu đủ 33 Hình 3.8 Sắc ký đồ định tính alkaloid Đu đủ TT Dragendorff 35 Hình 3.9 Sắc ký đồ phân đoạn sắc ký cột C1 38 Hình 3.10 Tinh thể phân đoạn trƣớc sau rửa PE 38 Hình 3.11 Tinh thể A1 39 Hình 3.12 Sắc ký đồ tinh thể thu đƣợc sắc ký lớp mỏng điều chế 40 Hình 3.13 Cấu trúc hóa học hợp chất carpain 41 Hình 3.14 Các tƣơng tác C - H hợp chất A1 HMBC 42 ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện tỉ lệ mắc bệnh ung thƣ giới ngày tăng, thuốc tân dƣợc đƣợc sử dụng có hiệu tốt nhƣng lại gây nhiều tác dụng phụ khơng mong muốn q trình sử dụng Vì thế, vấn đề tìm thuốc trị bệnh ung thƣ có nguồn gốc dƣợc liệu đƣợc quan tâm Trong đó, Đu đủ ( Carica papaya L Caricaceae) thuốc đƣợc ngƣời dân sử dụng để chữa bệnh có liên quan đến ung thƣ cho số hiệu khả quan Cao chiết với cồn từ đu đủ đƣợc nghiên cứu số mơ hình ung thƣ thực nghiệm đƣợc chứng minh có tác dụng ức chế phát triển khối u gây tế bào ung thƣ Sarcoma TG-180 chuột nhắt trắng [1], [19], tế bào ung thƣ vú (MCF7) [20], tế bào ung thƣ vú T47D [24],…Ngoài tác dụng ức chế phát triển tế bào ung thƣ, Đu đủ cịn có tác dụng kháng khuẩn, chống oxy hóa, hạ huyết áp, hạ đƣờng huyết,… Trên giới có nhiều cơng trình nghiên cứu Đu đủ, nhiên hầu hết tập trung nghiên cứu tác dụng sinh học dịch chiết từ cây, chƣa có nhiều cơng trình nghiên cứu phân lập hợp chất Vì vậy, việc tìm hiểu thành phần hóa học Đu đủ việc làm cần thiết, tạo sở khoa học cho việc ứng dụng nguồn nguyên liệu sẵn có Việt Nam dùng làm thuốc điều trị bệnh Do đó, đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học Đu đủ (Carica papaya L Caricaeae)” đƣợc thực với mục tiêu cụ thể: - Xác định đƣợc đặc điểm thực vật vi học Đu đủ - Phân lập xác định cấu trúc số phƣơng pháp sắc ký phổ học Ý nghĩa đề tài: - Xác định đƣợc đặc điểm vi học Đu đủ - Từ kết phân tích sơ thành phần hóa học Đu đủ định hƣớng chiết xuất, phân lập nhóm hợp chất hóa học cụ thể góp phần khẳng định thành phần hóa học Đu đủ - Phân lập xác định cấu trúc chất phân lập đƣợc, góp phần bổ sung thành phần hóa thực vật Đu đủ - Phân lập đƣợc hợp chất có hàm lƣợng cao để định hƣớng làm chất chuẩn làm việc xây dựng quy trình định tính điểm dƣợc liệu, quy trình định lƣợng nhƣ nghiên cứu tác dụng sinh học, nâng cao tiêu chuẩn dƣợc liệu đồng thời giúp việc sử dụng thuốc khoa học hiệu PL - Lá Thân Đu đủ Quả hoa Quả tạo hoa lƣỡng tính Cụm hoa Hoa Hoa bổ dọc PL - Cụm hoa lƣỡng tính Hoa lƣỡng tính Cụm hoa đực Hoa đực Hoa lƣỡng tính bổ dọc Phụ lục 01 Cấu tạo chi tiết Đu đủ Hoa đực bổ dọc PL - Biểu bì Hạ bì Mơ dày góc Bó libe cấp Bó gỗ cấp Mơ mềm đạo Cấu tạo chi tiết vi phẫu gân Biểu bì Mơ mềm giậu Bó gân phụ Mơ mềm khuyết Biểu bì dƣới Lỗ khí cắt ngang Cấu tạo chi tiết vi phẫu phiến Phụ lục 02 Cấu tạo chi tiết vi phẫu PL - Tinh thể Mơ dày góc calci oxalat hình cầu gai Bó gỗ cấp Bó libe cấp Mơ mềm đạo Bó gỗ cấp Phụ lục 02 Cấu tạo chi tiết vi phẫu Biểu bì Tinh thể calci oxalat hình Mơ dày góc Mơ mềm vỏ Nội bì đai caspary Trụ bì hóa mơ cứng Libe Mô mềm libe Gỗ Mô mềm tủy Phụ lục 03 Cấu tạo chi tiết vi phẫu thân cầu gai PL - Bột Mảnh biểu bì mang lỗ khí Bó sợi chứa tinh thể calci oxalat hình cầu gai Mạch xoắn Mạch vạch Tinh bột Tinh thể calci oxalat hình cầu gai Phụ lục 04 Các cấu tử bột Đu đủ Mạch mạng PL - Bột thân Đu đủ Mảnh bần Mạch mạng Mảnh mơ mềm Mảnh bần chứa lỗ khí Tinh thể calci oxalat hình cầu gai Phụ lục 05 Các cấu tử bột thân Đu đủ PL - Bột rễ Đu đủ Mạch mạng Tinh thể calci oxalat hình cầu gai Hạt tinh bột Mạch điểm Phụ lục 06 Các cấu tử bột rễ Đu đủ PL - 3500 D:\Data\DUOC LIEU 2015\va.10 3000 2500 2000 1500 Wavenumber cm-1 Phụ lục Sample 08 Phổ IR A1 Compartment Sample description Page 1/1 783.92 1233.25 1184.20 1375.24 1716.40 2356.56 2939.35 75 80 Transmittance [%] 85 90 95 100 Phụ lục 07 Phổ UV A1 1000 500 13/06/2015 PL - 10 Phụ lục 09 Phổ 1H - NMR A1 Phụ lục 10 Phổ 1H - NMRex A1 PL - 11 Phụ lục 11 Phổ 13C - NMR A1 Phụ lục 12 Phổ 13C - NMRex A1 PL - 12 Phụ lục 13 Phổ DEPT - NMR A1 Phụ lục 14 Phổ DEPT - NMRex A1 PL - 13 Phụ lục 15 Phổ HSQC - NMR A1 PL - 14 Phụ lục 16 Phổ HSQC - NMRex A1 PL - 15 Phụ lục 17 Phổ HMPC - NMR A1 PL - 16 Phụ lục 18 Phổ HMPC - NMRex A1