1042 nghiên cứu thành phần hóa học dược liệu xuyên tâm liên andrographis paniculata (burmf) nees

i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ NGUYỄN HỒNG THỤC LINH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC DƢỢC LIỆU XUYÊN TÂM LIÊN Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC Th.S NGUYỄN THỊ TRANG ĐÀI CẦN THƠ - 2014 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan tất kết luận văn hoàn toàn riêng chƣa đƣợc công bố cơng trình Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 Sinh viên ký tên Nguyễn Hồng Thục Linh ii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT .v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH vii Đ T VẤN ĐỀ Chƣơng T NG QUAN TÀI LIỆU 1.1 T NG QUAN THỰC VẬT HỌC VỀ LOÀI 1.1.1 Đ c m thực vật học 1.1.2 Ph n ố sinh th i .4 1.2 T NG QUAN VỀ THÀNH PHẦN H A HỌC 1.2.1 T ng quan c c hợp chất nh m it rp n lacton 1.2.2 T ng quan c c hợp chất nh m lavonoi 1.2.3 T ng quan c c phƣơng ph p chiết xuất nghi n c u thành phần h a học Xuy n t m li n .6 1.3 T NG QUAN T C DỤNG DƢỢC L VÀ C NG DỤNG 1.3.1 Th o y học c truyền .7 1.3.2 Th o y học đ i .7 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PH P NGHI N C U .11 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHI N C U 11 2.2.1 Nguy n liệu 11 2.2.2 Dung môi, h a chất 11 iii 2.2.3 2.2 Dụng cụ, trang thiết ị nghi n c u 11 PHƢƠNG PH P NGHI N C U 12 2.2.1 Khảo s t thực vật học 12 2.2.2 X c định độ ẩm 12 2.2.3 Khảo s t h a học 13 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN C U .17 3.1 KHẢO SÁT THỰC VẬT HỌC 17 3.1.1 Đ c m hình thái thực vật học 17 3.1.2 Đ c m vi phẫu 18 3.1.3 Đ c m bột ƣợc liệu 21 3.2 X C ĐỊNH ĐỘ ẨM .23 3.3 KHẢO SÁT HÓA HỌC 23 3.3.1 Ph n tích sơ ộ thành phần hóa học ƣợc liệu Xuyên tâm liên 23 3.3.2 Chiết xuất xử lý sơ ộ cao ƣợc liệu Xuyên tâm liên 25 3.3.3 Phân lập hợp chất từ cao Xuyên tâm liên 25 3.3.4 Tinh chế hợp chất tinh khiết 28 3.3.5 X c định cấu trúc định danh chất phân lập đƣợc .35 Chƣơng BÀN LUẬN .37 4.1 KHẢO SÁT THỰC VẬT HỌC 37 4.2 KHẢO SÁT HÓA HỌC 37 4.2.1 X c định độ ẩm 37 4.2.2 Ph n tích sơ ộ thành phần hóa học 37 4.2.3 Chiết xuất xử lý sơ ộ cao ƣợc liệu 38 4.2.4 Phân lập tinh chế chất .38 iv 4.2.5 X c định cấu trúc định danh chất tinh khiết .39 4.2.6 Phân lập Andrographolid .46 KẾT LUẬN .48 KIẾN NGHỊ 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Ý nghĩa Từ gốc Cf Chloroform Chloroform d Doublet Đỉnh đôi kép DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer EA, EtOAc Ethyl acetate Ethyl acetat EtOH Ethanol Ethanol m Multiplet Nhiều đỉnh MeOH Methanol Methanol MS Mass Spectroscopy Ph khối NMR Nuclear magnetic resonance Cộng hƣởng từ h t nhân PE Petroleum ether Ether dầu hỏa q Quartet Đỉnh bốn s Singlet Đỉnh đơn SKLM Sắc ký lớp mỏng Thuốc thử VS Thuốc thử VanillinSulfuric vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Tỷ lệ th tích cao A khối lƣợng than ho t tính 14 Bảng 3.1 Kết thử độ ẩm bột ƣợc liệu Xuyên tâm liên 23 Bảng 3.2 Kết phân tích thành phần hóa học Xun tâm liên 23 Bảng 3.3 Các hệ ung môi đƣợc khảo sát cho sắc ký cột cao X .26 Bảng 3.4 Kết c c ph n đo n từ sắc ký cột cao X 27 Bảng 4.1 Kết so sánh ph Bảng 4.2 Kết so sánh ph 13 C-NMR DEPT X1 41 Bảng 4.3 Kết so sánh ph 13 C-NMR DEPT X3 43 Bảng 4.4 Kết so sánh ph H – NMR X1 40 H – NMR X3 44 vii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơng th c cấu t o diterpen lacton Hình 1.2 Cơng th c cấu t o số flavonoid Hình 3.1 Cây Xuyên tâm liên [33] 17 Hình 3.2 Các phận Xuyên tâm li n phơi khơ .18 Hình 3.3 Vi phẫu 19 Hình 3.4 Vi phẫu thân .20 Hình 3.5 Các cấu tử bột 21 Hình 3.6 Các cấu tử bột thân 22 Hình 3.7 Sắc ký đồ so sánh thành phần cao A sau đƣợc xử lý than ho t tính .25 Hình 3.8 Sắc ký đồ phân đo n - thuốc thử VS 28 Hình 3.9 Sắc ký đồ X1 với hệ dung môi 29 Hình 3.10 Sắc ký đồ X2 với hệ dung môi 31 Hình 3.11 Sắc ký đồ X3 với hệ dung môi 32 Hình 3.12 Sắc ký đồ X4 với hệ dung môi 33 Hình 3.13 Hình ảnh tinh th 34 Hình 3.14 Sắc ký đồ X1, X2, X3, X4 35 Hình 3.15 Sắc ký đồ so sánh X2 chuẩn Andrographolid 36 Hình 4.1 Cơng th c cấu t o X1 .42 Hình 4.2 Cơng th c cấu t o X2 .42 Hình 4.3 Cơng th c cấu t o X3 .45 ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay, ngành y tế n i chung ngành ƣợc phẩm n i ri ng ph t tri n nhanh số lƣợng c ng nhƣ chất lƣợng nhằm đ p chăm s c s c khỏ ngày tăng ngƣời ng nhu cầu n B n c nh việc t ng hợp h a học, tỷ lệ thuốc c nguồn gốc từ thảo ƣợc tăng nhanh nhờ vào quan t m ph t tri n c c công ty ƣợc phẩm Th o xu hƣớng đ , c y thuốc đƣợc sử ụng c c ài thuốc th o kinh nghiệm n gian đƣợc ý nghi n c u thành phần h a học đ chiết t ch, ph n lập c c hợp chất phục vụ cho việc nghi n c u ti u chuẩn h a nghi n c u ho t tính sinh học đ sử ụng y học đ i c ch khoa học, hiệu đảm ảo tính an tồn Việt Nam c khí hậu nhiệt đới gi m a, thích hợp cho ph t tri n nhiều lo i sinh vật; nhờ đ c đƣợc đa ng sinh học cao, nguồn tài nguy n c y thuốc ƣợc liệu vô c ng phong phú Đ y điều kiện thuận lợi đ nghi n c u ph t tri n c c thuốc c nguồn gốc từ thảo ƣợc Cây Xuyên tâm liên từ l u đ đƣợc sử ụng ph iến đƣợc x m thần ƣợc c c ài thuốc c truyền Việt Nam, c ng nhƣ nhiều nƣớc kh c tr n giới Tuy nhiên, năm gần đ y Việt Nam, Xuy n t m li n không c n đƣợc x m vị thuốc quan trọng, xuất m tốn số c c chế phẩm từ thảo ƣợc Trong đ , tr n giới, nhiều c c công tr nh nghi n c u đ ch ng minh nhiều t c ụng ƣợc lý ng ụng l m sàng Xuyên tâm liên nhƣ kh ng vi m, kh ng khuẩn, kh ng virus Theo Quyết định số 1976/QĐ-TTg an hành ngày 30 th ng 10 năm 2013 Thủ tƣớng phủ “Ph uyệt quy ho ch t ng th phát tri n ƣợc liệu đến năm 2020 định hƣớng đến năm 2030”, Xuy n t m li n nằm Danh mục loài ƣợc liệu tập trung phát tri n quy mô lớn [PL 16], đƣợc quy ho ch trồng t i Tây Nam Bộ Đông Nam Bộ Nhƣ vậy, xây dựng tiêu chuẩn ƣợc liệu cho Xuyên tâm li n đƣa vào Dƣợc n Việt Nam hết s c cần thiết cấp bách nhằm nâng cao hiệu việc sử dụng ƣợc liệu Xuyên tâm liên V vậy, đề tài Nghiên h nh hần h a họ ƣ i n i n Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees đƣợc chọn với mục ti u cụ th nhƣ sau:  Nghi n c u thực vật học ƣợc liệu Xuy n t m li n  Ph n tích sơ ộ thành phần h a học mẫu ƣợc liệu Xuyên tâm liên  Thăm  Ph n lập c c ho t chất x c định cấu trúc h a học Ý nghĩa ề , lựa chọn phƣơng ph p chiết ho t chất i  G p phần x y ựng ti u chuẩn thực vật học ƣợc liệu Xuy n t m li n  C đƣợc kết ph n tích sơ ộ thành phần h a học ƣợc liệu Xuyên tâm liên  T m đƣợc phƣơng ph p chiết xuất ho t chất từ tồn c y Xuy n t m li n  Ph n lập đƣợc số hợp chất chính, g p phần làm s ng tỏ thành phần h a học thực vật Xuy n t m li n PL-04 Ph Hex-NMR X1 PL-05 Ph Hex-NMR X1 PL-06 Ph 13 C-NMR X1 PL-07 Ph 13 C-DEPT X1 PL-08 Ph 13 Cex-DEPT X1 PL-09 Ph MS X3 10 PL-10 Ph H-NMR X3 11 PL-11 Ph Hex-NMR X3 12 PL-12 Ph Hex-NMR X3 13 PL-13 Ph 13 C-NMR X3 14 PL-14 Ph 13 C-DEPT X3 15 PL-15 Ph 13 Cex-DEPT X3 16 17 PL-16 Danh mục c c loài ƣợc liệu tập trung phát tri n quy mô lớn (Quyết đinh 1976/QĐ-TTg Thủ tƣớng) 18 PL-16 Danh mục c c loài ƣợc liệu tập trung phát tri n quy mô lớn (Quyết đinh 1976/QĐ-TTg Thủ tƣớng) – 19 PL-16 Danh mục c c loài ƣợc liệu tập trung phát tri n quy mô lớn (Quyết đinh 1976/QĐ-TTg Thủ tƣớng) –