0125 nghiên cứu xây dựng quy trình định lượng caffein trong nước tăng lực bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với đầu dò dãy doid quang

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ HỒ NHẬT BẢO HUÂN NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CAFFEIN TRONG NƯỚC TĂNG LỰC BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO VỚI ĐẦU DÒ DÃY DIOD QUANG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: DS NGUYỄN THỊ TƯỜNG VI Cần Thơ - 2014 LỜI CÁM ƠN Lời em xin gửi lời cám ơn chân thành sâu sắc đến cô hướng dẫn khoa học – Ds Nguyễn Thị Tường Vi Cơ truyền đạt nhiều kiến thức hữu ích hướng dẫn, động viên tận tình chia sẻ, định hướng giải khó khăn cho em suốt khoảng thời gian thực đề tài Em xin gửi lời cám ơn đến quý thầy cô liên mơn Hóa phân tích – Kiểm nghiệm – Độc chất, đặc biệt thầy Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ, thầy Lữ Thiện Phúc, cô Dương Thị Trúc Ly, Nguyễn Thị Bích Thủy Nguyễn Thị Đặng hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi giúp em hồn thành tốt đề tài Mình xin cám ơn bạn lớp Dược K35 giúp đỡ nhiều trình thực đề tài Con xin cám ơn ba mẹ quan tâm ủng hộ, làm chỗ dựa tinh thần vững cho LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết thực luận văn trung thực, hồn tồn riêng tơi thực chưa đăng công trình Sinh viên Hồ Nhật Bảo Huân i MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cám ơn Lời cam đoan Mục lục i Danh mục ký hiệu chữ viết tắt iv Danh mục bảng vi Danh mục hình, sơ đồ đồ thị viii Đặt vấn đề .1 Chương – TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Tổng quan caffein 1.1.1 Công thức cấu tạo .3 1.1.2 Tính chất lý hóa 1.1.3 Định tính, định lượng caffein quy định DĐVN .3 1.2 Vai trò caffein nước tăng lực 1.3 Tác dụng caffein lên sức khỏe người 1.3.1 Cơ chế tác động caffein .4 1.3.2 Sự chuyển hóa caffein 1.3.3 Tác động caffein 1.3.4 Ngộ độc caffein 1.3.5 Nghiện caffein 1.4 Một số quy định caffein nước tăng lực giới 1.5 Một số nghiên cứu định lượng caffein nước tăng lực 1.6 Phương pháp HPLC 10 1.7 Thẩm định quy trình phương pháp HPLC 10 1.7.1 Tính đặc hiệu 11 ii 1.7.2 Tính tuyến tính miền giá trị 11 1.7.3 Độ xác 12 1.7.4 Độ 12 Chương – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.2 Địa điểm, thiết bị dung mơi hóa chất nghiên cứu 15 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu 15 2.2.2 Chất chuẩn 15 2.2.3 Dung môi thiết bị 15 2.3 Phương pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Xử lý mẫu 16 2.3.2 Thăm dò điều kiện sắc ký tối ưu 16 2.3.3 Xác định tính tương thích hệ thống quy trình định lượng 17 2.3.4 Thẩm định quy trình định lượng 18 2.3.5 Xác định hàm lượng caffein sản phẩm nước tăng lực .20 Chương – KẾT QUẢ .22 3.1 Kết khảo sát điều kiện sắc ký tối ưu 22 3.2 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống .24 3.3 Kết thẩm định quy trình 27 3.3.1 Kết tính đặc hiệu caffein mẫu thử Red Bull 27 3.3.2 Kết tính đặc hiệu caffein mẫu thử Number One 28 3.3.3 Tính tuyến tính miền giá trị 29 3.3.4 Độ xác 31 3.3.5 Độ 33 3.3.6 Kết thực giới hạn phát giới hạn định lượng 36 3.4 Áp dụng quy trình định lượng 37 3.4.1 Áp dụng quy trình vào lơ Red Bull Number One 37 3.4.2 Áp dụng quy trình vào lơ sản phẩm Sting dâu 247 38 Chương – BÀN LUẬN 43 iii 4.1 Điều kiện sắc ký tối ưu 43 4.2 Tính tương thích hệ thống .46 4.3 Thẩm định quy trình định lượng .46 4.3.1 Tính đặc hiệu 46 4.3.2 Tính tuyến tính 46 4.3.3 Độ xác 47 4.3.4 Độ 48 4.3.5 Giới hạn phát giới hạn định lượng 48 4.4 Áp dụng quy trình định lượng 49 KẾT LUẬN .53 KIẾN NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC PHỤ LỤC iv DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ tắt, ký hiệu Chữ nguyên Ý nghĩa ACN Acetonitril As Asymmetry Hệ số bất đối cAMP Adenosin Monophosphat Adenosin cyclic monophosphat vòng CĐ Chuẩn độ DSM Diagnostic and Statistical Hướng dẫn chẩn Manual of Mental Disorders đoán thống kê dạng rối loạn tâm thần FAO Food and Agriculture Tổ chức Lượng thực Organization Nông nghiệp Liên Hợp Quốc FDA Food and Drug Cục quản lý Dược Administration phẩm Thực phẩm Mỹ HPLC High Performance Liquyd Sắc ký lỏng hiệu Chromatography cao LOD Limit of Detection Giới hạn phát 10 LOQ Limit of Quantitation Giới hạn định lượng 11 N Number of theoretical plates Số đĩa lý thuyết 12 Ppm Parts per million Một phần triệu 13 RS Resolution Độ phân giải 14 S Area Diện tích đỉnh (đơn vị: mAU.phút) 15 SD Standard deviation Độ lệch chuẩn v 16 RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối 17 TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam 18 TR Retention time Thời gian lưu pic (đơn vị: phút) 19 TT Thuốc thử 20 TT/BYT Thông tư Bộ Y Tế 21 WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới vi DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng Một số nghiên cứu định lượng caffein nước uống phương pháp HPLC Bảng 2.1 Các sản phẩm để xây dựng thẩm định quy trình định lượng 14 Bảng 2.2 Các sản phẩm để áp dụng quy trình định lượng 14 Bảng 2.3 Các hóa chất, dung mơi dự kiến dùng 15 Bảng 2.4 Các thiết bị dự kiến dùng 15 Bảng 2.5 Các hệ pha động dự kiến thăm dò điều kiện sắc ký tối ưu 17 Bảng 3.1 Tỉ lệ dung môi ACN nước hệ pha động gradient (2) .23 Bảng 3.2 Kết tính tương thích hệ thống mẫu chuẩn 25 Bảng 3.3 Kết tính tương thích hệ thống mẫu thử Red Bull 25 Bảng 3.4 Kết tính tương thích hệ thống mẫu thử Number One 26 Bảng 3.5 Diện tích đỉnh trung bình caffein mẫu chuẩn nồng độ 30 Bảng 3.6 Kết độ xác caffein mẫu thử Red Bull 31 Bảng 3.7 Kết độ xác caffein mẫu thử Number One 32 Bảng 3.8 Kết độ caffein mẫu thử Red Bull .33 Bảng 3.9 Kết độ caffein mẫu thử Number One .35 Bảng 3.10 Hàm lượng caffein lô sản phẩm định lượng Red Bull Number One 38 Bảng 3.11 Hàm lượng caffein lô C1226K sản phẩm Sting dâu 40 Bảng 3.12 Hàm lượng caffein lô 11A sản phẩm 247 42 Bảng 4.1 Các thông số pic caffein với hệ gradient (1) mẫu thử Red Bull 44 Bảng 4.2 Hệ pha động điều kiện sắc ký tối ưu 45 Bảng 4.3 Các thơng số kiểm định phương trình hồi quy 47 Bảng 4.4 Hàm lượng caffeine sản phẩm định lượng 50 vii Bảng 4.5 Số lượng sản phẩm nước tăng lực tiêu thụ ngày theo khuyến cáo Bộ Y Tế Canada 51 Bảng 4.6 Số lượng sản phẩm nước tăng lực tiêu thụ ngày theo khuyến cáo FDA 52 53 KẾT LUẬN Sau thời gian thực đề tài chúng tơi hồn thành số mục tiêu đề luận văn, bao gồm: - Xây dựng thẩm định quy trình định lượng caffein sản phẩm nước tăng lực phổ biến lưu hành thị trường với đầu dò dãy diod quang - Áp dụng định lượng thành công hàm lượng caffein cho sản phẩm phổ biến khác lưu hành thị trường Góp phần kiểm sốt hàm lượng thành phần caffein có sản phẩm 54 KIẾN NGHỊ Áp dụng định lượng lô sản phẩm khác lưu hành thị trường Xây dựng tiêu dành cho hàm lượng caffein có nước tăng lực tài liệu quy chuẩn kĩ thuật quốc gia thực phẩm nước uống Đưa khuyến cáo sức khỏe lượng caffein sử dụng ngày dành cho đối tượng cụ thể người bình thường, trẻ em, phụ nữ mang thai cho bú phù hợp với thể trạng người Việt Nam Quy định dán nhãn phù hợp cho sản phẩm có hàm lượng caffein cao để khuyến cáo cho người sử dụng TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bộ Khoa học Công nghệ (2000), “Cà Phê – Xác định hàm lượng càphêin – Phương pháp dùng sắc ký lỏng cao áp”, Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6603:2000, tr – 10 Bộ Y Tế (2009), Dược Điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học Bộ Y Tế (2010), “Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia nước khoáng thiên nhiên nước uống”, Quy chuẩn quốc gia QCVN 6-1:2010/BYT, tr – Bộ Y Tế (2010), “Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia sản phẩm đồ uống không cồn”, Quy chuẩn quốc gia QCVN 6-2:2010/BYT, tr – 10 Bộ Y Tế (2011), “Hướng dẫn chung lấy mẫu thực phẩm phục vụ tra, kiểm tra chất lượng, vệ sinh an tồn thực phẩm”, Thơng tư 14/2011/TT-BYT, PL.1, tr – Liên Bộ mơn Hóa Phân Tích – Kiểm nghiệm – Độc chất (2010), Giáo trình lý thuyết Hóa phân tích 2, Khoa Dược – Đại học Y Dược Cần Thơ, tr 166 – 200 Liên Bộ mơn Hóa Phân Tích – Kiểm nghiệm – Độc chất (2010), Giáo trình lý thuyết Kiểm nghiệm Dược Phẩm 1, Khoa Dược – Đại học Y Dược Cần Thơ, tr.87 – 130 TÀI LIỆU TIẾNG ANH Arria Amelia M., Mary Claire O’Brien, Roland R Griffiths, Patrichcia B Crawford, etal (2013), “The Use of Cafein in Energy Drinks”, City Attorney Dennis Herrera News Release, pp.1 – 14 Bertil B Fredholm, Adriaan P Ijzerman, Kenneth A Jaconson (2001), “International Union of Pharmacology XXV Nomenclature and Classification of Adenosine Receptors”, Pharmacology Reviews, Vol.53, pp.528 10 Bolton S (1981), “Cafein: Psychological Effects, Use and Abuse”, Orthomolecular Psychiatry, 10(3), pp.202–211 11 Chad J Ressig, Eric C Strain, Roland R Griffiths (2009), “Caffeinated energy drinks - A growing problem”, Drug Alcohol Depend, 99(1-3), pp.1–10 12 Codex Alimentarius (1995), ”Codex general Standard for Food Additives”, Codex Stan 192 – 1995, Codex Alimentarius 13 David L Gabbers , N L First, J J Sulivan, Henry A Lardy (1972), Stimulation and Maintenance of Ejaculated Bovine Spermatozoan Respiration and Motility by Cafein, Bioloy of Reproduction, Vol.5, pp.336 – 399 14 Department of Health and Human services (2012), Guidelines for the Validation of Chemical Methods for the FDA Foods Program, Public Health Service Food and Drug Administration, pp.1 – 35 15 Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders (2013), DSM – 5, American Psychiatric Association, Section III, pp – 100 16 Drug Abuse Warning Network (2013), Update on emergency department visits involving energy drinks: A continuing public health concern, The DAWN Report, pp.1 – 17 Essayan, David M (2001), "Cyclic nucleotide phosphodiesterases", Journal of Allergy and Clinical Immunology, 108(5), pp.671-680 18 Fisone G., Borgkvlst A., Uslello A (2004), “Caffeine as a psychomotor stimulant: mechanism of action”, Cellular and Molecular Life Sciences, 61(78), pp 857 – 872 19 Griffiths RR., Vernotica EM(2000), “Is caffein a flavoring agent in cola soft drinks ?”, Family Medicine, 9(8), pp.727-773 20 Guerrero A , F S Fay, and J J Singer(1994), “Cafein activates a Ca(2+)permeable, nonselective cation channel in smooth muscle cells”, Journal of general Physiology, 104(2), pp.375-94 21 Health Canada (2010), “Caffeine and Carbonated Soft Drinks”, Food and Nutrition, pp – 22 Health Canada (2010), “Caffeine in Food”, Food and Nutrition, pp.1 – 23 Laura Juliano M., Roland R Griffiths(2004), "A critical review of cafein withdrawal: empirical validation of symptoms and signs, incidence, severity, and associated features”, Psychopharmcology, 176(1), pp.1-29 24 Maughan R J , Griffin J.(2003), “Caffeine ingestion and fluid balance: a review”, Journal Human Nutrient Dietet, 5(2), pp.97-102 25 Mei Musa Ali , Mawahib Eisa , Mohammed Idrees Taha, Badawi Ahmed Zakaria and Abdalla Ahmed Elbashir (2012), “Determination of Caffeine in Some Sudanese Beverages by High Performance Liquyd Chromatography”, Asian Network for Scientific Information, 11(4), pp.336-342 26 National Research Council (2001), Caffeine for the Sustainment of Mental Task Performance: Formulations for Military Operations, The National Academies Press, pp 25 – 27 27 Nehlig A (2002), “Pharmacological properties and neurophysiological effects of caffeine”, Pharmacopsychoecologia, 15, pp.35-70 28 Noor Alam, Ronald Szymusiak, Dennis McGinty (2006), ”Adenosinergic Regulation of Sleep: Multiple Sites of Action in the Brain”, SLEEP, Vol 29, No 11, pp 1384 29 Nurminen M L , Niittynen L, Korpela R, Vapaatalo H(1999), “Coffee, cafein and blood pressure: a critical review”, European Journal of Clinical Nutrition, 53(11), pp.831-839 30 Paul Sadek (2002), The HPLC Solvent Guide, Wiley-Interscience, pp.47 31 Sigma-Aldrich (1999), Caffeine (anhydrous), Product information, pp.1 32 Smith B.D., Gupta U, Gupta BS (2006), Cafein and activation theory: effects on health and behavior, Taylor and Francis Group, p.331-344 33 The European Paliament and the Council of the European Union (2011), “Regulation (EU) No 1169/2011 Of The European Parliament And Of The Council of 25 October 2011”, Official Journal of the European Union, 304, pp.18 – 63 34 Thomas V Dunwiddie, Susan A Masimo (2001), “The Role And Regulation of Adenosine In The Central Nervous System”, Annual Reviews, 24:31–55 35 U.S Food and Drug Administration (2013), ”FDA to Investigate Added Caffeine”, FDA Consumer Health Information, pp.1 – 36 Violeta Nour, Ion Trandafir, Mira Elena Ionică(2010), “Chromatographic determination of caffeine contents in soft and energy drinks available on the Romanian market”, Scientific Study & Research, 11 (3), pp 351 – 358 37 Wald A., Back C, Bayless T.M.(1976), “Effect of cafein on the human small intestine”, Gastroenterology¸ 71(5), pp.738-742 DANH MỤC PHỤ LỤC Trang PHỤ LỤC KẾT QUẢ TÍNH TƯƠNG THÍCH HỆ THỐNG PL-1 PHỤ LỤC KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH TÍNH TUYẾN TÍNH PL-3 PHỤ LỤC KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH ĐỘ CHÍNH XÁC PL-5 PHỤ LỤC KẾT QUẢ ÁP DỤNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG PL-7 PHỤ LỤC CÁC SẮC KÝ ĐỒ TÍNH TƯƠNG THÍCH HỆ THỐNG PL-9 PHỤ LỤC CÁC SẮC KÝ ĐỒ TÍNH ĐẶC HIỆU PL-12 PHỤ LỤC CÁC SẮC KÝ ĐỒ TÍNH TUYẾN TÍNH PL-19 PHỤ LỤC CÁC SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ CHÍNH XÁC PL-24 PHỤ LỤC CÁC SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ ĐÚNG PL-26 PHỤ LỤC 10 CÁC SẮC KÝ ĐỒ XÁC ĐỊNH GIỚI HẠN PHÁT HIỆN PL-32 PHỤ LỤC 11 CÁC SẮC KÝ ĐỒ ÁP DỤNG QUY TRÌNH PL-33 PL-1 PHỤ LỤC PL.1.1 Tính tương thích hệ thống mẫu chuẩn Caffein TR (phút) S RS N AS Lần 4,83 4471234 14027 3,83 1,04 Lần 4,85 4400380 14272 3,85 1,07 Lần 4,85 4311275 14147 3,85 1,04 Lần 4,83 4428158 14098 3,83 1,08 Lần 4,83 4407260 14138 3,83 1,04 Lần 4,83 4453097 13984 3,83 1,07 Trung bình 4,84 4411900,67 14111 3,84 1,06 RSD% 0,21 1,27 0,72 0,27 1,76 PL.1.2 Tính tương thích hệ thống mẫu thử Red Bull Caffein TR (phút) S RS N K’ AS Lần 4,87 6055818 6,45 19392 3,87 1,11 Lần 4,87 6104807 6,58 19067 3,87 1,12 Lần 4,88 6024457 6,53 19333 3,88 1,09 Lần 4,87 6127754 6,48 19355 3,87 1,11 Lần 4,87 6135479 6,46 19336 3,87 1,13 Lần 4,87 6000040 6,47 19323 3,87 1,12 Trung 4,87 6074725,83 6,50 19301 3,87 1,11 0,09 0,93 0,61 0,11 1,23 bình RSD% 0,77 PL-2 PL.1.3 Tính tương thích hệ thống mẫu thử Number One Caffein TR (phút) S RS N K’ AS Lần 4,91 3673544 2,82 19119 3,91 1,14 Lần 4,91 3646328 2,83 19625 3,91 1,16 Lần 4,91 3646284 2,82 19429 3,91 1,15 Lần 4,91 3666346 2,8 19255 3,91 1,16 Lần 4,91 3658252 2,8 19161 3,91 1,12 Lần 4,9 3757093 2,72 18990 3,9 1,14 Trung 4,91 3674641,17 2,80 19263,17 3,91 1,15 0,08 1,14 1,44 1,19 1,33 bình RSD% 0,10 PL-3 PHỤ LỤC PL.2.1 Kết tính tuyến tính Nồng độ 10 ppm 50 ppm 100 ppm 150 ppm 200 ppm Lần chạy Diện tích đỉnh 935876 935361 938323 4878109 4867027 4861920 9342098 9342175 9432992 14456200 14437082 14514411 19903269 19916458 20012611 Diện tích đỉnh trung bình RSD% 936520 0,17 4869018,67 0,17 9372421,67 0,56 14469231 0,28 19944112,67 0,30 PL.2.2 Kết xử lý phần mềm Microsoft Excel 2013 dựa vào kết trung bình diện tích đỉnh Regression Statistics Multiple R 0,999362091 R Square 0,998724589 Adjusted R Square 0,998299452 Standard Error 311128,5125 Observations PL-4 ANOVA df SS MS Regression 23050,56351 23050,56351 2349,182356 Residual 29,43649323 9,812164409 Total 23080 Coefficient Standar s d Error F t Stat P- Lowe value r 95% Significance F 1,93388E-05 Upper Lowe Upper 95% r 95.0% 95.0% Intercept 2,21 2,5 -0,82 0,44 -5,72 10,13 -5,72 10,13 X 1E-05 2,1E-07 48,4 1,9E 9,4E- 1,07E 9,4E- 1,07E -05 06 -05 06 -05 Variable PL-5 PHỤ LỤC PL.3.1 Kết thực độ xác mẫu thử Red Bull Mẫu Diện Nồng độ tích (ppm) đỉnh tương ứng 6045378 314,92 6021777 313,73 6064223 315,87 6035698 314,43 6089127 317,12 6082852 316,80 6013489 313,31 5990556 312,15 5976736 311,46 5958748 310,55 5989685 312,11 6022104 313,74 6154551 320,42 6126184 318,99 6094838 317,41 6026639 313,97 6031993 314,24 6073330 316,32 Nồng độ (ppm) trung bình RSD% mẫu Hàm lượng Các thông số mg/lon 250 liên quan ml 314,84 0,34 78,71 316,12 0,47 79,03 X = 78,72 mg, SD = 0,63, RSD = 0,81%, 312,31 0,30 78,08 n = 6, f = 5, P = 95%, 312,14 0,51 78,03 e = ± 0,67, 78,05 ≤ µ≤ 79,38 318,94 0,47 79,73 314,85 0,41 78,71 PL-6 PL.3.1 Kết thực độ xác mẫu thử Number One Mẫu Diện Nồng độ Nồng độ RSD% Hàm lượng tích (ppm) (ppm) mg/chai đỉnh tương ứng trung mẫu 350 ml 196,81 0,79 68,88 198,88 0,75 69,61 Các thông số liên quan bình 3693011 196,42 3734605 198,52 3674648 195,50 3708241 197,19 3764149 200,01 3753225 199,46 SD = 0,86, 3649162 194,21 RSD = 1,24 %, 3672383 195,38 3624239 192,96 f = 5, 3757556 199,67 P = 95%, 3755376 199,56 3782535 200,93 68,37 ≤ µ≤ 3716027 197,58 70,17 3685356 196,04 3697775 196,66 3774939 200,55 3771194 200,36 3792053 201,41 194,18 200,06 0,62 0,38 67,96 70,02 196,76 0,39 68,87 200,77 0,28 70,27 X = 69,27 mg, n = 6, e = ± 0,90, PL-7 PHỤ LỤC PL.5.1 Kết định lượng hàm lượng caffein áp dụng quy trình lơ 049B0, 064B0 138B0 sản phẩm Red Bull Mẫu Diện tích đỉnh caffein Lô 049B0 Lô 064B0 Lô 138B0 5697172 5894540 6189862 5703164 5951114 6185568 5791914 5951736 6189285 RSD% 0,55 0,93 0,04 Trung bình 5932463,33 5730750 6188238,33 Hàm lượng trung bình caffein mẫu (mg) 74,77 77,31 80,53 PL.5.2 Kết định lượng hàm lượng caffein áp dụng quy trình lơ P38, P59 R50 sản phẩm Number One Mẫu Diện tích đỉnh caffein Lô P38 Lô P59 Lô R50 3718992 3722151 3777568 3748390 3704782 3811723 3710173 3703235 3823245 RSD% 0,54 0,28 0,62 Trung bình 3725851,67 3710056 3804178.667 Hàm lượng trung bình caffein mẫu (mg) 69,33 69,05 70,71 PL-8 PL.5.3 Kết định lượng hàm lượng caffein sản phẩm Sting dâu lơ C1226K Mẫu Diện tích đỉnh caffein 4045557 4030620 3994609 RSD% Trung bình 0,62% 4023595,33 Hàm lượng trung bình caffein mẫu (mg) 70,31 PL.5.3 Kết định lượng hàm lượng caffein sản phẩm 247 lơ 11A Mẫu Diện tích đỉnh caffein 5411369 5355450 5410284 RSD% Trung bình 0,57% 5392367,67 Hàm lượng trung bình caffein mẫu (mg) 93,07