Xây dựng quy trình định lượng đồng thời một số glucocorticoid ngụy tạo trong kem bôi da bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LƯU NGUYỄN ANH THƯ XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI MỘT SỐ GLUCOCORTICOID NGỤY TẠO TRONG KEM BÔI DA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Cần Thơ – 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LƯU NGUYỄN ANH THƯ XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI MỘT SỐ GLUCOCORTICOID NGỤY TẠO TRONG KEM BÔI DA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất Mã số: 60.72.04.10 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Thu Trâm PGS.TS Dương Xuân Chữ Cần Thơ – 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu hướng dẫn Cô TS Nguyễn Thị Thu Trâm Thầy PGS.TS Dương Xuân Chữ Các số liệu kết nêu luận văn trung thực, chưa công bố cơng trình nghiên cứu khác Cần Thơ, ngày 30 tháng năm 2020 Học viên Lưu Nguyễn Anh Thư LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Cô TS Nguyễn Thị Thu Trâm Thầy PGS.TS Dương Xuân Chữ tận tình hướng dẫn, giúp đỡ cho tơi hồn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu trường Đại học Y Dược Cần Thơ, q Thầy Cơ phịng đào tạo sau đại học, Chủ nhiệm khoa Dược tạo điều kiện tốt cho học tập trường Cảm ơn quý Thầy Cô liên mơn kiểm nghiệm hóa phân tích trường Đại học Y Dược Cần Thơ quý Thầy Cô trường Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh tận tình giảng dạy, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm q báo cho tơi q trình học tập Gửi lời cảm ơn đến Ban giám đốc đồng nghiệp trung tâm Kiểm nghiệm Trà Vinh hỗ trợ tạo điều kiện để thực hoàn thành luận văn MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan glucocorticoid 1.2 Thực trạng sử dụng mỹ phẩm dạng kem bôi da 1.3 Một số phương pháp phân tích glucocorticoid 11 1.4 Một số nghiên cứu phân tích, phát glucocorticoid mỹ phẩm, chế phẩm khác nước 14 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.2 Tiêu chuẩn chọn mẫu 18 2.1.3 Tiêu chuẩn loại trừ 18 2.1.4 Địa điểm nghiên cứu 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 18 2.2.2 Cỡ mẫu 18 2.2.3 Phương pháp chọn mẫu 20 2.2.4 Nội dung nghiên cứu 20 2.2.5 Tính thích hợp hệ thống 25 2.2.6 Thẩm định phương pháp 25 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 29 3.1 Kết khảo sát điều kiện sắc ký 29 3.2 Kết khảo sát quy trình xử lý mẫu 34 3.3 Tính tương thích hệ thống 38 3.4 Kết thẩm định qui trình phân tích 41 3.4.1 Tính đặc hiệu 41 3.4.2 Tính tuyến tính 44 3.4.3 Độ xác 45 3.4.4 Độ 47 3.4.5 Giới hạn phát giới hạn định lượng 48 3.5 Kết ứng dụng quy trình phân tích số mẫu mỹ phẩm lấy tỉnh Trà Vinh 48 Chương BÀN LUẬN 53 4.1 Khảo sát điều kiện sắc ký tối ưu 53 4.1.1 Khảo sát pha tĩnh 53 4.1.2 Khảo sát bước sóng phân tích thành phần pha động 54 4.1.3 Khảo sát ảnh hưởng pH pha động 55 4.1.4 Khảo sát tỷ lệ pha động 55 4.1.5 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ cột 56 4.2 Qui trình xử lý mẫu 57 4.2.1 Khảo sát dung môi chiết phương pháp chiết 57 4.2.2 Khảo sát phương pháp loại tạp 58 4.2.3 Khảo sát chiết kiệt 58 4.3 Thẩm định quy trình phân tích 59 4.3.1 Tính đặc hiệu 59 4.3.2 Tính tuyến tính 62 4.3.3 Độ xác 62 4.3.4 Độ 62 4.3.5 Giới hạn phát giới hạn định lượng 63 4.4 Ứng dụng quy trình phân tích số mẫu mỹ phẩm lấy tỉnh Trà Vinh 63 KẾT LUẬN 66 KIẾN NGHỊ 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nguyên văn ACN Acetonitrile AS Asymmetric factor hệ số bất đối xứng AOAC Association of Official hiệp hội nhà hóa Analytical Chemists phân tích quốc tế BM Betamethason CTPT Cơng thức phân tử DX Dexamethason DXA Dexamethason acetat DĐVN Dược Điển Việt Nam dSPE Dispersive Solid Phase Tiếng việt chiết pha rắn phân tán Extraction GC Glucocorticoid HCA Hydrocortison acetat HPLC High Performance Liquid sắc ký lỏng hiệu Chromatography cao IR Infrared hồng ngoại KTCL Kiểm tra chất lượng LC-MS Liquid Chromatography- sắc ký lỏng ghép Mass Spectrometry khối phổ LOD Limit Of Detection giới hạn phát LOQ Limit Of Quantitation giới hạn định lượng MeOH Methanol MS Mass Spectrometry khối phổ N Number of theoretical plate số đĩa lý thuyết PDA Photodiode Array dãy diod quang PR Prednisolone RS Resolution độ phân giải RSD Relative standard deviation độ lệch chuẩn tươngđối SPE Solid phase extraction chiết pha rắn SKĐ Sắc ký đồ SKLM Sắc ký lớp mỏng tR Retention time TCCL Tiêu chuẩn chất lượng TTKN Trung tâm Kiểm nghiệm VKNT Viện Kiểm nghiệm thuốc UV-Vis Ultra Violet – Visible thời gian lưu tử ngoại – khả kiến DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Thống kê tỷ lệ mỹ phẩm không đạt chất lượng giai đoạn 2014 – 2018 VKNT Trung Ương 10 Bảng 1.2 Chương trình rữa giải gradient phương pháp Asean 13 Bảng 1.3 Giới hạn phát giới hạn định lượng chất Glucocorticoid 13 Bảng 1.4 Các điều kiện sắc ký số qui trình nghiên cứu phân tích, phát glucocorticoid mỹ phẩm trị mụn, trắng da sản phẩm khác 14 Bảng 1.5 Các phương pháp xử lý mẫu số qui trình nghiên cứu 15 Bảng 2.1 Cơng thức mẫu trắng giả lập 17 Bảng 2.2 Các chế phẩm ứng dụng lấy thị tường 18 Bảng 2.3 Chất chuẩn đối chiếu glucocorticoid nghiên cứu 21 Bảng 3.1 Khảo sát tỷ lệ dung môi pha động 32 Bảng 3.2 Chương trình rữa giải gradient 34 Bảng 3.3 Kết kiểm tra tính tương thích hệ thống mẫu thử giả lập 38 Bảng 3.4 Kết kiểm tra tính tương thích hệ thống mẫu hỗn hợp chuẩn 39 Bảng 3.5 Độ tinh khiết pic GC mẫu thử giả lập tương thích phổ UV-Vis GC mẫu thử giả lập so với mẫu chuẩn 43 Bảng 3.6 Kết khảo sát tính tuyến tính 44 8/13/2019 3:21:22 PM Page / PL-11 Analysis Report Data Filename Method Filename Batch Filename Sample Type Injection Volume Date Acquired Acquired by Processed by : NGAY 2_1.lcd : GRADIENT.lcm : BATCH.lcb : Unknown : 20 uL : 8/1/2019 12:52:43 PM : System Administrator : System Administrator mAU 100 PDA Multi 240nm,4nm 75 HCA BT DX PR 25 DXA 50 0 10 12 14 16 18 20 22 24 26 PDA Ch1 240nm Name Ret Time PR 6.932 BT 13.645 DX 14.428 HCA 19.048 DXA 22.687 Area Tailing Factor Resolution(USP) Capacity Factor(k') Number of Theoretical Plate(USP) 241382 1.094 3.965 2.830 9135 230805 1.059 17.328 6.540 12677 220017 1.087 1.571 6.972 12756 245032 1.177 11.941 9.525 83991 233660 1.278 15.370 11.536 185675 D:\DATA\THU\CORTICOID TRONG MY PHAM\THAM DINH\DO CHINH XAC\NGAY 2\NGAY 2_1.lcd 8/13/2019 3:26:14 PM Page / PL-12 Analysis Report Data Filename Method Filename Batch Filename Sample Type Injection Volume Date Acquired Acquired by Processed by : NGAY 3_1.lcd : GRADIENT.lcm : BATCH.lcb : Unknown : 20 uL : 8/2/2019 10:05:38 AM : System Administrator : System Administrator mAU 100 PDA Multi 240nm,4nm 75 HCA BT DX PR 25 DXA 50 0 10 12 14 16 18 20 22 24 26 PDA Ch1 240nm Name Ret Time PR 6.927 BT 13.662 DX 14.446 HCA 19.061 DXA 22.694 Area Tailing Factor Resolution(USP) Capacity Factor(k') Number of Theoretical Plate(USP) 238041 1.062 4.081 2.831 9550 224216 1.051 17.746 6.556 13211 213545 1.072 1.610 6.990 13419 243096 1.078 12.334 9.542 93406 231695 1.162 16.195 11.551 207466 D:\DATA\THU\CORTICOID TRONG MY PHAM\THAM DINH\DO CHINH XAC\NGAY 3\NGAY 3_1.lcd 8/13/2019 3:41:29 PM Page / PL-13 Analysis Report Data Filename Method Filename Batch Filename Sample Type Injection Volume Date Acquired Acquired by Processed by : THU GIA LAP_80%_1.lcd : GRADIENT.lcm : BATCH.lcb : Unknown : 20 uL : 8/3/2019 12:54:45 PM : System Administrator : System Administrator mAU 100 BT 50 25 DX PR HCA 75 DXA PDA Multi 240nm,4nm 0 10 12 14 16 18 20 22 24 26 PDA Ch1 240nm Name Ret Time PR 6.922 BT 13.639 DX 14.423 HCA 19.052 DXA 22.694 Area Tailing Factor Resolution(USP) Capacity Factor(k') Number of Theoretical Plate(USP) 417673 1.015 4.389 2.838 10802 405367 0.990 18.264 6.562 13524 395849 1.033 1.629 6.997 13674 427219 1.076 12.903 9.563 115672 396430 1.172 17.547 11.582 225605 D:\DATA\THU\CORTICOID TRONG MY PHAM\THAM DINH\DO DUNG\THU GIA LAP_80%_1.lcd 8/13/2019 3:47:01 PM Page / PL-14 Analysis Report Data Filename Method Filename Batch Filename Sample Type Injection Volume Date Acquired Acquired by Processed by : THU GIA LAP_100%_1.lcd : GRADIENT.lcm : BATCH.lcb : Unknown : 20 uL : 8/3/2019 2:26:04 PM : System Administrator : System Administrator mAU 100 PDA Multi 240nm,4nm BT 50 25 DX PR HCA DXA 75 0 10 12 14 16 18 20 22 24 26 PDA Ch1 240nm Name Ret Time PR 6.912 BT 13.634 DX 14.418 HCA 19.059 DXA 22.692 Area Tailing Factor Resolution(USP) Capacity Factor(k') Number of Theoretical Plate(USP) 462869 1.028 4.085 2.829 9872 435813 0.993 17.889 6.553 13281 428601 1.020 1.625 6.987 13754 467372 1.075 12.635 9.558 98483 426758 1.186 16.661 11.571 220880 D:\DATA\THU\CORTICOID TRONG MY PHAM\THAM DINH\DO DUNG\THU GIA LAP_100%_1.lcd 8/13/2019 3:51:18 PM Page / PL-15 Analysis Report Data Filename Method Filename Batch Filename Sample Type Injection Volume Date Acquired Acquired by Processed by : THU GIA LAP_120%_1.lcd : GRADIENT.lcm : BATCH.lcb : Unknown : 20 uL : 8/3/2019 3:57:22 PM : System Administrator : System Administrator mAU 100 DXA PDA Multi 240nm,4nm PR HCA 75 BT DX 50 25 0 10 12 14 16 18 20 22 24 26 PDA Ch1 240nm Name Ret Time PR 6.915 BT 13.628 DX 14.413 HCA 19.051 DXA 22.692 Area Tailing Factor Resolution(USP) Capacity Factor(k') Number of Theoretical Plate(USP) 510780 1.033 4.214 2.845 10007 486342 0.992 17.929 6.577 13320 474490 1.007 1.630 7.013 13794 518711 1.071 12.664 9.592 99470 474085 1.177 16.780 11.616 222709 D:\DATA\THU\CORTICOID TRONG MY PHAM\THAM DINH\DO DUNG\THU GIA LAP_120%_1.lcd 8/10/2019 10:24:42 AM Page / PL-16 Analysis Report Data Filename Method Filename Batch Filename Sample Type Injection Volume Date Acquired Acquired by Processed by : LOD_0.1 ppm.lcd : GRADIENT.lcm : : Unknown : 40 uL : 7/22/2019 3:57:10 PM : System Administrator : System Administrator mAU 2.0 DXA PDA Multi 240nm,4nm HCA 1.5 1.0 BT DX PR 0.5 0.0 10 12 14 16 18 20 22 24 26 PDA Ch1 240nm Name Ret Time PR 6.851 BT 13.432 DX 14.216 HCA 18.977 DXA 22.638 Area Height Tailing Factor Resolution(USP) CapacityNumber Factor(k') of Theoretical Plate(USP) 2726 242 1.121 22.974 2.689 7875 2631 145 1.148 16.361 6.233 11748 2219 121 1.134 1.543 6.655 11985 3076 342 1.139 12.242 9.219 86200 2723 421 1.217 16.199 11.191 219185 D:\DATA\THU\CORTICOID TRONG MY PHAM\THAM DINH\LOD_LOQ\LOD_0.1 ppm.lcd 8/10/2019 10:26:16 AM Page / PL-17 Analysis Report Data Filename Method Filename Batch Filename Sample Type Injection Volume Date Acquired Acquired by Processed by : LOD_0.05ppm.lcd : GRADIENT.lcm : BATCH.lcb : Unknown : 20 uL : 7/22/2019 12:43:11 PM : System Administrator : System Administrator mAU 2.0 PDA Multi 240nm,4nm DXA 1.5 HCA 1.0 DX BT PR 0.5 0.0 10 12 14 16 18 20 22 24 26 PDA Ch1 240nm Name Ret Time PR 6.878 BT 13.503 DX 14.305 HCA 19.014 DXA 22.663 Area Height Tailing Factor Resolution(USP) CapacityNumber Factor(k') of Theoretical Plate(USP) 1403 127 1.280 8.750 2.823 8507 1014 66 1.154 18.303 6.505 16103 1016 59 0.993 1.811 6.950 15540 1460 171 1.132 13.363 9.568 95705 1540 229 1.265 16.402 11.596 207376 D:\DATA\THU\CORTICOID TRONG MY PHAM\THAM DINH\LOD_LOQ\LOD_0.05ppm.lcd 8/10/2019 10:29:07 AM Page / PL-18 Analysis Report Data Filename Method Filename Batch Filename Sample Type Injection Volume Date Acquired Acquired by Processed by : LOD_0.025ppm.lcd : GRADIENT.lcm : BATCH.lcb : Unknown : 10 uL : 7/22/2019 1:13:32 PM : System Administrator : System Administrator mAU 1.00 DXA PDA Multi 240nm,4nm HCA 0.75 PR BT 0.25 DX 0.50 0.00 10 12 14 16 18 20 22 24 26 PDA Ch1 240nm Name Ret Time PR 6.876 BT 13.502 DX 14.305 HCA 19.009 DXA 22.660 Area Height Tailing Factor Resolution(USP) CapacityNumber Factor(k') of Theoretical Plate(USP) 665 61 1.246 8.198 2.722 9108 556 36 1.108 18.548 6.310 16048 620 32 1.243 1.700 6.744 12229 783 90 1.153 12.247 9.291 91891 936 121 1.798 15.915 11.268 189927 D:\DATA\THU\CORTICOID TRONG MY PHAM\THAM DINH\LOD_LOQ\LOD_0.025ppm.lcd PL-19 PHỤ LỤC SẮC KÝ ĐỒ KẾT QUẢ PHÂN TÍCH CÁC CHẾ PHẨM Phụ lục 2.1 Sắc ký đồ đại diện mẫu chế phẩm thị trường Hình PL 2.1 SKĐ hỗn hợp chuẩn (1), Mẫu 002L (2) Hình PL 2.2 SKĐ hỗn hợp chuẩn (1), Mẫu 104L (2) Hình PL 2.3 SKĐ hỗn hợp chuẩn (1), Mẫu 330G (2) PL-20 Hình PL 2.4 SKĐ hỗn hợp chuẩn (1), Mẫu 001M (2) Hình PL 2.5 SKĐ hỗn hợp chuẩn (1), Mẫu 005M (2) Hình PL 2.6 SKĐ hỗn hợp chuẩn (1), mẫu 009M (2) PL-21 Phụ lục 2.2 Kết SKLM Hình PL 2.7 SKLM mẫu 006M, 008M, 011M chuẩn DX DXA Hình PL 2.8 SKLM mẫu giả lập hỗn hợp chuẩn GC PL-22 Phụ lục DỮ LIỆU KẾT QUẢ MẪU CHẾ PHẨM DƯƠNG TÍNH VỚI GLUCOCORTICOID Phụ lục bao gồm: - Dữ liệu mẫu chế phẩm dương tính với glucocorticoid: mẫu 006M, 008M, 011M PL-23 9/1/2019 7:26:11 PM Page / ==TRUNG TAM KIEM NGHIEM TRA VINH== XAC DINH CORTICOID TRONG MY PHAM Summary(Compound) PDA mAU 006M_001.lcd - Ch1 006M_002.lcd - Ch1 150 125 100 75 DXA 50 25 0 > ID#1 Compound Name: DXA Title Ret Time 006M_001.lcd 22.702 006M_002.lcd 22.708 Average 22.705 %RSD 0.016 Maximum 22.708 Minimum 22.702 Standard Deviation 0.004 Area 67014 66501 66757 0.544 67014 66501 363 10 12 14 16 18 20 22 24 26 Height Tailing Factor Resolution(USP) Capacity Factor(k') Number of Theoretical Plate(USP) 11024 1.111 252828 11014 1.113 253413 11019 1.112 253121 0.064 0.128 0.000 0.000 0.163 11024 1.113 253413 11014 1.111 252828 0.001 414 PL-24 9/3/2019 2:43:44 PM Page / ==TRUNG TAM KIEM NGHIEM TRA VINH== XAC DINH CORTICOID TRONG MY PHAM Summary(Compound) PDA mAU 008M_001.lcd - Ch1 008M_002.lcd - Ch1 150 125 DXA 100 75 50 DX 25 0 10 12 14 16 18 20 22 24 26 > ID#1 Compound Name: DX Title Ret Time 008M_001.lcd 14.479 008M_002.lcd 14.491 Average 14.485 %RSD 0.059 Maximum 14.491 Minimum 14.479 Standard Deviation 0.009 Area 99383 97182 98282 1.584 99383 97182 1557 Height Tailing Factor Resolution(USP) Capacity Factor(k') Number of Theoretical Plate(USP) 4439 1.011 9291 4320 1.016 9148 4380 1.014 9219 1.920 0.350 0.000 0.000 1.096 4439 1.016 9291 4320 1.011 9148 84 0.004 101 ID#2 Compound Name: DXA Title Ret Time 008M_001.lcd 22.709 008M_002.lcd 22.726 Average 22.717 %RSD 0.054 Maximum 22.726 Minimum 22.709 Standard Deviation 0.012 Area 518234 527822 523028 1.296 527822 518234 6780 Height Tailing Factor Resolution(USP) Capacity Factor(k') Number of Theoretical Plate(USP) 73468 1.140 20.452 0.568 198459 73137 1.107 20.284 0.568 194922 73303 1.124 20.368 0.568 196690 0.320 2.089 0.583 0.014 1.272 73468 1.140 20.452 0.568 198459 73137 1.107 20.284 0.568 194922 234 0.023 0.119 -2501 PL-25 9/1/2019 7:38:22 PM Page / ==TRUNG TAM KIEM NGHIEM TRA VINH== XAC DINH CORTICOID TRONG MY PHAM Summary(Compound) PDA mAU 011M_001.lcd - Ch1 011M_002.lcd - Ch1 150 125 DXA 100 75 50 25 0 > ID#1 Compound Name: DXA Title Ret Time 011M_001.lcd 22.703 011M_002.lcd 22.703 Average 22.703 %RSD 0.000 Maximum 22.703 Minimum 22.703 Standard Deviation 0.000 Area 306450 309988 308219 0.812 309988 306450 2501 10 12 14 16 18 20 22 24 26 Height Tailing Factor Resolution(USP) Capacity Factor(k') Number of Theoretical Plate(USP) 43577 1.173 199399 43729 1.184 198001 43653 1.178 198700 0.245 0.660 0.000 0.000 0.497 43729 1.184 199399 43577 1.173 198001 107 0.008 989 ... ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LƯU NGUYỄN ANH THƯ XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI MỘT SỐ GLUCOCORTICOID NGỤY TẠO TRONG KEM BÔI DA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO. .. chính: Xây dựng quy trình định lượng đồng thời dexamethason, dexamethason acetat, betamethason, prednisolon, hydrocortison acetat ngụy tạo kem bôi da phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dò PDA... thời số glucocorticoid ngụy tạo kem bôi da phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao? ?? nhằm góp phần kiểm sốt chất cấm mỹ phẩm lưu hành địa phương, nâng cao hiệu quả, khắc phục nhược điểm phương pháp phân