Tách và xác định cấu trúc một số hợp chất từ lá cây dủ dẻ trâu (melodorum fruticosum lour ) ở việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH LÊ QUÝ THUẬN TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ LÁ CÂY DỦ DẺ TRÂU (MELODORUM FRUTICOSUM LOUR.) Ở VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ HOÁ HỌC Vinh - 2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ LÁ CÂY DỦ DẺ TRÂU (MELODORUM FRUTICOSUM LOUR.) Ở VIỆT NAM Chuyên ngành : HOÁ HỮU CƠ Mã số: 60.44.27 LUẬN VĂN THẠC SĨ HOÁ HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS TRẦN ĐÌNH THẮNG Học viên cao học: LÊ QUÝ THUẬN Vinh – 2011 LỜI CẢM ƠN Luận văn hoàn thành phịng thí nghiệm Hố hữu cơ- Trường Đại học Vinh, Viện hố học - Viện khoa học Cơng nghệ Việt Nam Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc TS.Trần Đình Thắng - Khoa Hố học - Trường Đại học Vinh giao đề tài tận tình hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi suốt trình làm luận văn Bên cạnh tơi nhận giúp đỡ nhiệt tình thầy giáo: - PGS TS Hồng Văn Lựu nghiên cứu đóng góp ý kiến giúp tơi hồn thành luận văn - TS Lê Đức Giang nghiên cứu đóng góp ý kiến giúp tơi hồn thành luận văn Cũng tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến thầy giáo Khoa Hố, Khoa sau đại học – Trường Đại học Vinh, người thân bạn bè tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Vinh, ngày 18 tháng 12 năm 2011 Lê Quý Thuận MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Hợp chất thiên nhiên tiếp tục đóng vai trị quan trọng chương trình tìm kiếm thuốc ngành công nghiệp dược ngành nghiên cứu khác Một lý quan trọng cho sử dụng sản phẩm thiên nhiên nguồn hợp chất dẫn dường phong phú đa dạng cấu trúc hợp chất phân lập từ thiên nhiên Hơn nữa, hợp chất có hoạt tính sinh học tìm thấy từ thiên nhiên dùng trực tiếp y học, nhiều hợp chất khác dùng chất dẫn đường phân tử hiên đại (mẫu) cho tổng hợp bán tổng hợp thuốc Ngày nay, hợp chất thiên nhiên, dẫn xuất chúng chiếm 50% lượng thuốc điều trị lâm sàng, hợp chất thiên nhiên có nguồn gốc từ thực vật bậc cao chiếm 25% Theo nghiên cứu gần Tổ chức Y tế giới (WHO) khoảng 80% dân số giới tin vào y học cổ truyền cho chăm sóc sức khoẻ [1] Họ Na (Annonaceae) họ lớn Mộc lan (Magnoliales) Bên cạnh đó, số lồi Hồng lan (Cananga odorata) chứa tinh dầu thơm sử dụng sản xuất nước hoa hay đồ gia vị Vỏ cây, rễ số loài sử dụng y học dân gian chữa bệnh nhiễm trùng, bệnh ho, bệnh gan, bệnh vàng da gan, bệnh tiêu chảy… Các nghiên cứu dược lý tìm thấy khả kháng nấm, kháng khuẩn đặc biệt khả sử dụng hóa học trị liệu số thành phần hóa học vỏ [2] Chi Melodorum chi quan trọng họ Na (Annonaceae), với khoảng 80 loài, phân bố rộng rãi châu Á Australia, đặc biệt Đông Nam Á Malaysia, Indonesia, Thái Lan, Campuchia, Lào Việt Nam Một số loài thuộc chi dùng để làm thuốc chữa bệnh cơ, chấn thương, thần kinh toạ, viêm khớp, kháng viêm khả chống khối u ` Chính chúng tơi chọn đề tài: “Tách xác định cấu trúc số hợp chât từ dủ dẻ trâu (Melodorum fruticosum Lour.) Việt Nam” từ C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an góp phần xác định thành phần hố học hợp chất tìm nguồn nguyên liệu cho ngành hoá dược Nhiệm vụ nghiên cứu Trong luận văn này, chúng tơi có nhiệm vụ: - Chiết chọn lọc với dung mơi thích hợp để thu hỗn hợp hợp chất từ dủ dẻ trâu (Melodorum fruticosum Lour.) - Phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ dủ dẻ trâu Đối tƣợng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu dịch chiết dủ dẻ trâu (Melodorum fruticosum Lour.) thuộc họ Na (Annonaceae) Việt Nam Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan họ Na (Annonaceae) 1.1.1 Đặc điểm thực vật Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Rất nhiều dược phẩm chuyển hóa từ loại thực vật bậc cao cách trực tiếp gián tiếp Một số nghiên cứu sản phẩm thiên nhiên tìm nhiều hợp chất đưa vào thành phần nhiều loại thuốc lưu hành thị trường Ngồi loại thuốc có thành phần từ chất tinh khiết chuyển hóa từ lồi thực vật bậc cao, ngày có số lượng khổng lồ dược thảo lưu hành rộng rãi thị trường [4] Họ Na (Annonaceae) gọi họ Mãng cầu Đây họ lớn Mộc lan (Magnoliales), có khoảng 130 chi 2.300 loài Những họ Na loại thực vật có hoa, bao gồm thân gỗ, thân bụi số dạng dây leo [6] tìm thấy chủ yếu vùng nhiệt đới [14] Chi dủ dẻ (Medolorum) chi thuộc Họ Na (Annonaceae) gần có cơng trình nghiên cứu dủ dẻ trâu (Melodorum siamensis Scheff.) cho thấy rằng, chúng có số thành phần hóa học có khả chống lại số dạng ung thư thể người [15] Ở Việt Nam, theo Nguyễn Tiến Bân [1, 2] xác định họ Na có 26 chi, 201 lồi 1.1.2 Thành phần hố học [26] Trong thập kỉ trước đây, 18 loài họ Na (Chi Annona (8 loài): Annona cherimola, A glabra, A montana, A muricata, A reticulata, A squamosa, A artemoya (A cherimola x squamosa), A purpurea; chi Artabotrys (2 loài): Artabotrys hexaptalus, A uncinatus; chi Cananga (1 loài): Cananga odorata; chi Fissistigma (2 loài): Fissistigma glaucescens, F oldhamii; chi Goniothalamus (1 loài): Goniothalamus amuyon; chi Polyalthia (2 loài): Polyalthia longifolia, P longifolia “Pendula”; chi Rollinia (1 loài): Rollinia mucosa chi Uvaria (1 loài): Uvariarufa) nghiên cứu kĩ lưỡng Các nhà khoa học xác định cấu tạo hoá học thử tác dụng sinh học chúng (về tim mạch, độc tính hoạt tính dược lý khác) Một số hợp chất có tiềm ứng dụng lớn để sản xuất thuốc chữa bệnh [24] Mặc dù họ Na (Annonaceae) khảo sát lần Stehous năm 1855, thập kỉ trước tiến hành nghiên Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an cứu; đến năm 1970, họ Na (Annonaceae) bắt đầu nghiên cứu kỹ Trong đó, phần lớn đề tài nghiên cứu alkaloit họ Na (Annonaceae) chứa lượng lớn non- alkaloidal (khơng phải alkaloit) có nhiều hoạt tính kháng tế bào ung thư chữa bệnh tim mạch quan trọng Các chất alkaloit họ Na (Annonaceae) bao gồm kauran, lignan, acetogenin, steroit hợp chất thơm 1.1.2.1 Các hợp chất diterpenoit kauran Bộ khung hợp chất diterpenoit kauran gồm 20 cacbon Một số hợp chất tách gồm 19 cacbon gọi tên nor-kauran diterpenoit Trong nghiên cứu Wu cộng [27] tách 37 hợp chất kauran từ loài khác bao gồm: A cherimola, A glabra, A squamosa R mucosa chất số chúng chất phát Cấu trúc tìm thấy hợp chất nêu bảng 1.1 [27] Bảng 1.1: Các hợp chất diterpenoit kauran TT Hợp chất R1 R2 R3 C=C COOH C=C CH2OH A squamosa H COOH A cherimola axit ent-kaur-16-en-19-oic A squamosa Loài ent-kaur-16-en-19-ol A glabra axit 17-acetoxy-16α-hydro-kauran3 19-oic CH2OAc axit 17-hydroxy-16α-hydro-ent4 kauran-19-oic A cherimola CH2OH H COOH axit 16α,17-dihydroxy-ent-kauran19-oic A squamosa A cherimola CH2OH OH COOH A glabra A squamosa 16α-hydro-ent-kauran-17-ol-19-al A cherimola CH2OH H CHO CH3 OH COOH CH3 OCH3 COOH A glabra 17-oat COOCH3 H CHO A glabra annoglabasin C * COOCH3 Oac COOH A glabra axit 16α-hydroxy-ent-kauran-19-oic A glabra A squamosa axit 16α–methoxy-ent-kauran-198 oic methyl-16α-hydro-19-al-ent-kauran- 10 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 11 annoglabasin D * COOCH3 Oac CHO A glabra 12 annoglabasin F * COOCH3 Oac OH A glabra COOCH3 H COOCH3 A glabra este 16α-hydro-ent-kauran-17,1913 dimethyl axit 16α-hydro-19-acetoxy-ent- 14 kauran-17-oic A cherimola COOH H CH2OAc A glabra R mucosa axit 16α-hydro-ent-kauran-17-oic 15 COOH H CH3 A glabra 17-oic COOH H CHO A glabra annoglabasin E * COOH H CH2OH A glabra COOH H COOH R mucosa COOH H OH A glabra axit 16α-hydro-19-al-ent-kauran17 18 axit 16α-hydro-ent-kauran-17,1919 dioic axit 16α-hydro-19-nor-ent-kauran- 20 4α-ol-17-oic axit 17-hydroxy-16β-hydro-ent- 21 A cherimola H CH2OH COOH H CH2OAc COOH H COOH CH3 A glabra H COOH CHO A squamosa H CH2OH CHO A cherimola H COOH OH A squamosa Oac COOCH3 CHO A glabra Oac CH2OAc COOH A glabra kauran-19-oic OCH3 CH2OH COOH R mucosa ent-kauran-16β,17,19-triol OH CH2OH CH2OH A squamosa OH CH2OH COOH A squamosa OH CH2OH COOCH3 A squamosa kauran-19-oic A squamosa axit 17-acetoxy-16β-hydro-kauran22 19-oic A squamosa axit 16β-hydro-ent-kauran-17-oic 23 axit 19-formyl-ent-kauran-17-oic 24 16β-hydro-ent-kauran-17-ol-19-al 25 axit 4α-hydroxy-19-nor-ent-kauran26 17-oic methyl-16β-acetoxy-19-al-ent- 27 kauran-17-oat axit 16β,17-diacetoxy-ent-kauran- 28 19-oic axit 16β–methoxy-17-hydroxy-ent- 29 30 axit 16β,17-dihydroxy-ent-kauran31 19-oic methyl-16β,17-dihydroxy-ent- 32 kauran-19-oat Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 16β,17-dihydroxy-ent-kauran-19-al 33 A squamosa OH CH2OH CHO OH CH2OAc COOH A glabra OH CH2OAc CHO A glabra OH CH2OAc CH2OAc A cherimola OH CH2OH OH A squamosa axit 16β-hydroxy-17-acetoxy-ent34 kauran-19-oic 16β-hydroxy-17-acetoxy-ent- 35 kauran-19-al * 16β-hydroxy-17,19-diacetoxy-ent- 36 kauran 19-nor-ent-kauran-4α,16β,17-triol * 37 * Chất 12 13 11 20 16 R1 CH2OH 14 10 R2 15 18 R3 CH2OH 19 16, ent-kaur-15-en-17,19-diol A glabra 1.1.2.2 Các hợp chất lignan Có chất lignan (38-47) họ Na (Annonaceae) Yang cộng sự; Wu cộng công bố [27] Các lignan tìm thấy lồi A montana, A cherimola R mucosa gồm: (+)-Syringaresinol (38), (+)-epi-syringaresinol (39), (+)-diasyringaresinol (40) liriodendrin (41) thu từ loài A cherimola, (-)-syringaresinol (42) tách từ loài A montana yangambin (43), magnolin (44), eudesmin (45), membrin (46) tách từ R mucosa Trong số chúng, 38, 39, 40 42 chất đồng phân lập thể 39, 40 chất Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 6' O H CH3O 2'' 3'' RO 5'' 2' 3' OMe OH O OMe OMe H 1'' 4'' 1' OMe 5' OR 4' H H O CH3O O 6'' HO OMe OMe 38, R=H 39 42, R=Glc OMe OMe OH OH O O OMe OMe H H H CH3O CH3O O O HO H HO 40 OMe OMe 41 R1 OMe O R2 H R3 H O CH3O 43, R1=R2=R3=OCH3 44, R1=H, R2=R3=OCH3 45, R1=R3=H, R2=OCH3 46, R1=R2=R3=H OMe 1.1.2.3 Các hợp chất acetogenin Một dãy hợp chất acetogenin (47-103) tách từ chi họ Na (Annonaceae) Annona Rollinia, có 24 chất Phần lớn acetogenin gồm hai vòng tetrahydrofuran, α, β-unsaturated-γlacton epoxit mạch với nhóm chức –OH, =O, C=C diol kề mạch dài [12] Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.16 Phổ HMBC hợp chất 183 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.17 Phổ HMBC hợp chất 183 3.4 Hợp chất 184 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Chất rắn vô định hình, khơng màu khơng tan cloroform, axeton, dễ tan metanol, điểm nóng chảy 283-285oC Phổ IR hợp chất 184 có bƣớc sóng cực đại 3460, 3050, 1650 815 cm-1 Phổ khối lượng EI-MS cho cho pic ion m/z 414 [M-glc]+ suy công thức phân tử tương ứng C35H60O6 Phổ 1H-NMR xác nhận có mặt proton liên kết đơi 5,32 ppm; nhóm hydroxy vùng 3,46 ppm đến 4,00 ppm; nhóm CH tương đương C6, gốc đường có tín hiệu 3,66 ppm đến 4,25 ppm Tín hiệu cộng hưởng từ 2,20 đến 2,40 ppm đặc trưng cho proton cacbon số 4, vùng từ đến ppm vùng xen phủ dày đặc tín hiệu nhóm -CH- -CH2- vịng no Các nhóm metyl nhánh vịng có tín hiệu vùng 0,65-1,0ppm Phổ 13 C-NMR DEPT quan sát thấy 35 tín hiệu nguyên tử C, nguyên tử cacbon gắn với oxy (nằm vùng 61,1 đến 100,8 ppm) Có hai tín hiệu 140,5 121,2 ppm thuộc liên kết olefin Bảng 3.3: Số liệu phổ 13C- NMR hợp chất 184 Cacbon DEPT Độ dịch chuyển hoá học (ppm) CH2 38,2 CH2 31,3 CH 77,0 CH2 40,1 C 140,4 CH 121,1 CH2 33,3 CH 31,4 CH 49,6 10 C 36,2 11 CH2 22,6 12 CH2 40,0 13 C 41,8 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 14 CH 56,2 15 CH2 25,5 16 CH2 28,7 17 CH 55,4 18 CH3 11,7 19 CH3 19,7 20 CH 36,8 21 CH3 19,0 22 CH2 35,4 23 CH2 29,2 24 CH 45,1 25 CH 27,7 26 CH3 18,9 27 CH3 20,6 28 CH2 23,8 29 CH3 11,7 1’ CH 100,8 2’ CH 73,4 3’ CH 76,6 4’ CH 70,1 5’ CH 76,7 6' CH2 61,1 Số liệu từ phổ EI-MS, 1H- 13C-NMR so với [28] cho phép xác định hợp chất -sitosterol-3-O--D-glucopyranosit Hợp chất tồn phổ biến thực vật Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 29 28 21 18 22 23 12 11 13 H 4' HO OH 6' 5' HO 3' H H 24 17 19 27 20 16 14 10 15 O O ' 2' OH H 25 26 H -sitosterol-3-O--D-glucopyranosit (184) Hình 3.18: Phổ IR hợp chất 184 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.19 Phổ EI-MS hợp chất 184 Hình 3.20 Phổ 1H-NMR hợp chất 184 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.21: Phổ 1H-NMR hợp chất 184 Hình 3.22: Phổ 1H-NMR hợp chất 184 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.23: Phổ 13C-NMR hợp chất 184 Hình 3.24: Phổ 13C-NMR hợp chất 184 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.25: Phổ 13C-NMR hợp chất 184 Hì nh 3.26: Phổ DEPT hợp chất 184 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.27: Phổ DEPT hợp chất 184 KẾT LUẬN Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Nghiên cứu thành phần hoá học dịch chiết dủ dẻ trâu (Melodorum fruticosum Lour.) thuộc họ Na (Annonaceae) Việt Nam thu số kết sau: - Lá dủ dẻ trâu chiết với dung môi metanol 10 ngày, cất thu hồi dung môi thu cao metanol (716g) - Bằng phương pháp phân bố cao metanol nước chiết với dung môi chọn lọc cất thu hồi dung môi thu cao tương ứng cao hexan (38g), cao etylaxetat (267g), cao butanol (192g) - Phân lập hợp chất từ cao butanol phương pháp sắc ký thu hợp chất 182 (32 mg), hợp chất 183 (45 mg) hợp chất 184 (24 mg) - Sử dụng phương pháp phổ đại: phổ hồng ngoại IR, phổ khối lượng phun mù (ESI-MS), phổ khối lượng (EI-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HMBC HSQC để xác định cấu trúc hợp chất tách Các kết phổ xác định: hợp chất 182 naringenin-4',7đimetyl-ete, hợp chất 183 oxoanolobin hợp chất 184 -sitosterol-3-O-D-glucopyranosit TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Nguyễn Tiến Bân (Chủ biên) (2003), Danh lục loài thực vật Việt Nam, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Tiến Bân (2000), Họ Na (Annonaceae), Thực vật chí Việt Nam, Flora of Vietnam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Vũ Văn Chuyên, Lê Trần Chấn, Trần Hợp (1987), Địa lý họ Việt Nam, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Thượng Dong người khác (2006), Nghiên cứu thuốc từ thảo dược, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Trần Đình Đại (1998), Khái quát hệ thực vật Việt Nam Hội thảo Việt-Đức Hoá học hợp chất thiên nhiên, Hà Nội, 16-18 April, tr 17-27 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hoá học thuốc, Nhà xuất Y học, Hà Nội Phạm Hoàng Hộ (1992), Cây cỏ Việt Nam, Montreal Phùng Thanh Hương, Nguyễn Xuân Thắng, Đỗ Ngọc Liên, Nguyễn Xuân Cường, Phan Văn Kiệm (2008), Các hợp chất Flavonoit Glycosit Triterpenoit từ lăng nước (Lagerstroemia Speciosa (L.) Pers), Tạp chí hố học, tập 46 (5A) 160-166 Bùi Thị Minh Nguyệt, Nguyễn Thị Lương Thiện, Nguyễn Phan Chung, Trần Đình Thắng (2011), Các hợp chất flavonoit từ dủ dẻ trâu (Melodorum fruticosum L.) Việt Nam, Tạp chí Khoa học Công nghệ, tập 49 (3A), 7-12 10 Trần Văn Sung (2002), Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hoá hữu cơ, Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội 11 Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng, Trần Thị Mỹ Linh, Phạm Hùng Việt (1985), Các phương pháp sắc ký, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Tiếng Anh Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 12 Ahammadsahib K I., Hollingworth R M., McGovren J P., Hui Y H., McLaughlin J L (1993), Mode of action of bullatacin a potent antitumor and pesticidal Annonaceous acetogenin, Life Sci., 53, pp 1113-1120 13 Anna L P., Attilio V., Siro P., Francesco D S., Luca R (2007), Flavonol glycosides from whole cottonseed by-product, Food chemistry, 100, pp 344–349 14 Buckingham J (2005), Dictionary of Natural Products Vol 3, Chapman & HallInc, London, pp 53660 15 Chaichantipyuth C., Tiyaworanan S., Mekaroonreung S., Ngamrojnavanich N., Roengsumran S., Puthong S., Petsom A and Ishikawa T (2001) Oxidized heptenes from flower of Melodorum fruticosum, Phytochemistry, 58(8), pp 1311-1315 16 Charoenpanich J., Chulalaksananukul W and Yongvanich T (2005), Synthesis of amyl acetate by immobilized lipases from mucor miehei and Aspergillus niger in n-hexane, Journal of Scientific Research of Chulalongkorn University, 30(2), pp 153-159 17 Chulalaksananukul W., Buaboocha T., Wongkasemsombat A and Yongvanich T (1998), Synthesis of amyl acetate by lipases from various microorganisms, Thai J Agri Sci., 31(4), pp 594-600 18 De Smet AGM Peter (1997), The role of plant derived drugs and herbal medicines in healthcare, Drugs, 54(6), pp 801-840 19 Dictionary of Natural product on CD-Rom (2005), Chapman and HallCRC 20 Fernanda R G., Walmir S G., Andresa L B D S., Milene M A., Maria D F C M., Anne D M S (2006), Bioactive flavonoids and triterpenes from Terminalia fagifolia (Combretaceae) Journal of Brazilian Chemical Society, Vol.17, n.7, pp 1223-1228 21 George I., Ndukwe C and Yimin Z., Pharmacological activity of 2,3,8tri-O-methyl ellagic acid isolated from the stem bark of Irvingia Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an gabonensis, African Journal of Biotechnology, (16), pp 1910-1912 22 George I., Ndukwe C., Amupitan J O and Yimin Z (2008), Isolation and characterization of 2, 3, 8-tri-me ether ellagic acid from the stem bark of Irvingia gabonensis (Baill), Journal of Medicinal Plants Research, 2(9), pp 234-236 23 Gerald D C (2006), Annonaceae, [Online], Botany department, University of Hawaii Available from: www.botany.hawaii.edu/faculty/carr/annon.htm.[Accessed 2006 April 27] 24 Jung J H., Chang C J., McLaughlin J L., Pummangura S., Chaichantipyuth C and Patarapanich C (1991), Additional bioactive heptenes from Melodorum fruticosum, J Nat Prod., 54(2), pp 500-505 25 Jung J H., Pummangura S., Chaichantipyuth C., Patarapanich C and McLaughlin J L (1990), Bioactive constituents of Melodorum fruticosum, Phytochemistry, 29(5), pp 1667-1670 26 Jung J H., Pummangura S., Chaichantipyuth C., Patarapanich C., Fanwick P E., Chang C J and McLaughlin J L (1990), New bioactive heptenes from Melodorum fruticosum (Annonaceae), Tetrahedron, 46(15), pp 5043-5054 27 Kuo R Y., Chang F C and Wu Y C (2002), Chemical constituents and their pharmacological activities from formosan Annonaceous plants, The Chinese Pharmaceutical Journal, 54, pp 155-173 28 Kuo H Y., Yeh M H (1997), Chemical constituents of heartwood of Bauhinia purpurea, J Chin Chem Soc., 44, pp 379-383 29 Lee J H., Ku C H., Baek N I., Kim S H., Park H W and Kim D K (2004), Phytochemical constituents from Diodia teres, Arch Pharm Res., 27(1), pp 40-43 30 Ng S L., Razak I A., Fun H K., Boonsri S., Chantrapromma S and Prawat U (2005), A second monoclinic polymorph of 1-(2,4dihydroxy-6-methoxyphenyl)-3-(4-methoxy-phenyl) propan-1-one, Acta Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn