Chuong 3 cnsh phan tu

Chương Kỹ thuật DNA tái tổ hợp Hệ gen học Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Nội dung  3.1 Giới thiệu công nghệ DNA tái tổ hợp tạo dòng DNA  3.2 Vector ?  3.3 Xác định tạo dòng gen ?  3.4 Ứng dụng kỹ thuật DNA tái tổ hợp?  3.5 Hệ gen học Tin sinh học Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Giới thiệu cơng nghệ DNA tái tổ hợp tạo dịng DNA • 1970s tạo dòng gen thành thực – Clone – phân tử, tế bào, sinh vật nhân từ thực thể khác • Nhờ phát – Restriction Enzymes – enzymes cắt – Plasmid DNA Vectors – – Có thể thao tác tạo dịng đoạn DNA Copyright ©2009 Pearson Education, Inc Giới thiệu công nghệ DNA tái tổ hợp tạo dịng DNA Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Giới thiệu công nghệ DNA tái tổ hợp tạo dịng DNA • Restriction Enzymes – Tìm thấy vi khuẩn – Cắt cầu nối phosphodiester sợi DNA – Bám, nhận biết cắt DNA trình tự đặc biệt gọi trình tự nhận biết vùng giới hạn Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Giới thiệu công nghệ DNA tái tổ hợp tạo dịng DNA • Restriction Enzymes – Trình tự nhận biết đối xứng đảo ngược palindromes – Đầu cố kết (sticky ends) – đầu so le – Đầu Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Giới thiệu công nghệ DNA tái tổ hợp tạo dịng DNA • Plasmid DNA – DNA sợi đơi dạng vịng tìm thấy vi khuẩn • Có thể dùng vectors – phân tử DNA chấp nhận, mang nhân đơi đoạn DNA khác Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Nối đoạn có đầu so le Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Xác định tạo dòng gen • Tạo dòng PCR – Nhanh hiệu – Disadvantage • Biết thơng tin gene để thiết kế primer – Bổ sung trình tự nhận biết enzyme cắt vào primer – Sử dụng TA vector • Taq polymerase thêm 01 adenine vào đầu 3’ sản phẩm PCR Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Tạo dịng Gene PCR rson Education, Inc Copyright © 2009 Pea Ứng dụng DNA tái tổ hợp 009 Pearson Education, Inc Copyright © Ứng dụng DNA tái tổ hợp • Điện di tạo đồ gen - Điện di Gel Electrophoresis Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Ứng dụng DNA tái tổ hợp Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Cathode Anode + Buffer Power Supply Dyes Agarose gel Thiết bị điện di Power Supplies Precast Ready Agarose Gel Agarose Gel • Vật liệu xốp từ rong biển đỏ • Hoạt động sàng để tách đoạn DNA; mảnh nhỏ di chuyển nhanh mảnh lớn 1% agarose • Nồng độ ảnh hưởng đến tốc độ di chuyển – Nồng độ thấp: lổ lớn thuận lợi cho DNA kích thước lớn di chuyển – Nồng độ cao: lổ nhỏ, thuận lợi cho DNA kích thước nhỏ 2% agarose Thuốc nhuộm giữ mẫu • Mẫu DNA nạp vào gel SAU KHI bể chứa đầy dung dịch đệm, phủ kín gel • Chứa chất đậm đặc, chẳng hạn glycerol, phép mẫu “ổn định" giếng • Chứa hai thuốc nhuộm theo dõi, di chuyển gel cho phép theo dõi trình điện di tiến hành đến đâu Ứng dụng • DNA Sequencing – Quan trọng để xác định trình tự nucleotide gen nhân – Phương pháp Sanger – Giải trình tự tự động máy tính Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Fluorescence in situ hybridization (FISH) on Education, Inc Copyright © 2009 Pears Southern blotting Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Gene microarrays Copyright © 2009 Pearson Education, Inc Gene Microarrays Analysis