KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU CHỨA COUMARIN. Thường tồn tại dưới dạng aglycon, dễ kết tinh, không màu, có mùi thơm và đa số dễ thăng hoa. Ở dạng glycosid thì có thể tan trong nước, ở dạng aglycon thì dễ tan trong dung môi kém phân cực.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ KHOA DƯỢC – ĐIỀU DƯỠNG BÁO CÁO THỰC HÀNH DƯỢC LIỆU CHUYÊN NGÀNH DƯỢC HỌC MÃ NGÀNH: 7720201 Giảng viên hướng dẫn LỚP LTCĐ-ĐH DƯỢC 14B NHĨM TRẦN BÍCH HUỆ MSSV: 1952130085 NGUYỄN HỒNG KIM MSSV: 1952130076 LÝ THÚY DIỄM MSSV: 1952130083 TRẦN HUỲNH TUẤN MSSV: 1952130057 ĐINH THỊ NGỌC HÂN MSSV: 6CD720401140 NGÔ NGỌC QUẾ MSSV: 1952130084 Ths ĐỖ VĂN MÃI Cần Thơ, năm 2022 BUỔI KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU CHỨA COUMARIN A CƠ SỞ LÝ THUYẾT Coumarin hợp chất thuộc nhóm phenylpropanoid (C – C3) với khung benzo-α-pyron, với số tính chất sau:α-α-pyron, với số tính chất sau:pyron, với số tính chất sau: Thường tồn dạng aglycon, dễ kết tinh, khơng màu, có mùi thơm đa số dễ thăng hoa Ở dạng glycosid tan nước, dạng aglycon dễ tan dung môi phân cực Phát huỳnh quang UV 365 nm, cường độ huỳnh quang phụ thuộc vào nhóm oxy phân tử coumarin Ph dung dịch, mạnh coumarin có nhóm –OH C-α-pyron, với số tính chất sau:7 (nhiều coumarin có OH vị trí này) Do có vịng lacton nên coumarin dễ bị mở kiềm tạo thành muối tan nước, acid hóa thường có đóng vịng trở lại Sau mở vòng lacton dung dịch kiềm, coumarin đơn giản tạo thành dẫn chất hydroxy cinnamic dạng ci s, có huỳnh quang yếu UV 365 Dưới tác dụng tia UV 365nm, chất chuyển thành dạng trans, có huỳnh quang mạnh B NỘI DUNG THỰC HÀNH Chiết xuất 1.1 Dược liệu: Tiền Hồ 1.2 Phương pháp chiết: Bước 1: Cân 1g bột dược liệu Tiền Hồ cho vào bình nón 100ml Thêm 20ml cồn 960, bịt kín => đun cách thủy phút Lọc qua => thu dịch chiết => đem định tính Định tính coumarin phản ứng hóa học 2.1 Phản ứng với dung dịch FeCl3 1% Giấy lọc: đánh dấu vịng trịn lên tờ giấy lọc (kí hiệu C T) nhỏ từ từ giọt dịch chiết lên vịng trịn, chờ cho khơ: -α-pyron, với số tính chất sau: C: nhỏ dịch chiết chờ khơ -α-pyron, với số tính chất sau: T: nhỏ dịch chiết chờ khơ + 1-α-pyron, với số tính chất sau:2 giọt FeCl3 1% Kết luận: xuất màu xanh vịng trịn T => phản ứng dương tính => có OH phenol tự tạo phức với kim loại nặng 2.2 Phản ứng đóng mở vịng lacton Dùng ống nghiệm: -α-pyron, với số tính chất sau: Ống 0: cho nước cất vào -α-pyron, với số tính chất sau: Ống 1: 2ml dịch lọc + 4ml cho nước cất => đục (so với ống 0) -α-pyron, với số tính chất sau: Ống 2: 2ml dịch lọc + 0,5ml NaOH 10% (tăng màu vàng) đun cách thủy 2-α-pyron, với số tính chất sau:3 phút + nước cất = thể tích ống => so màu ống ống , dịch ống ống => tiếp tục ống + HCl đđ => ống ống có độ đục mhau Kết luận: phản ứng vịng lacton dương tính có hoạt động đóng mở vịng lacton phản ứng Dược liệu tiền hồ có coumarin 2.3 Phản ứng với thuốc thử Diazo Ống nghiệm: 2ml dịch lọc + 1ml NaOH 5% => đun cách thủy phút => để nguội => làm lạnh vòi nước => Xuất màu đỏ đỏ cam Kết luận: phản ứng dương tính => có coumarin 2.4 Sự tăng huỳnh quang môi trường kiềm tác dụng tia UV Ống nghiệm: 3ml dịch chiết + giọt NaOH 5% => đun cách thủy 3-α-pyron, với số tính chất sau:5 phút => để nguội Giấy lọc: vẻ hình trịn (ký hiệu C T) -α-pyron, với số tính chất sau: C: dịch chiết nhỏ lên -α-pyron, với số tính chất sau: T: dịch ống nghiệm vừa đun nhỏ lên Cả chờ khô, lặp lại lần => chờ khô Đem giấy lọc soi UV 365nm, dùng đồng xu che ½ vịng trịn => lần thấy vầng trăng khuyết vòng tròn T Lấy đồng xu => lần thấy không bị che phát quang sáng bì che vịng trịn T Lần 3: tiếp tục chiếu UV sau vài phút cường độ phát quang vòng tròn T Kết luận: phản ứng dương tính có tăng huỳnh quang môi trường kiềm tác dụng tia UV => Trong dược liệu Tiền hồ có coumarin Định tính sắc ký lớp mỏng coumarin 3.1 Chuẩn bị 3.1.1 Dụng cụ -α-pyron, với số tính chất sau: Bảng mỏng, Bút Chì, Thước kẻ, Kéo, Băng keo -α-pyron, với số tính chất sau: Bình sắc Ký -α-pyron, với số tính chất sau: Hệ dung mơi: Toluen –EtOac (20:2) -α-pyron, với số tính chất sau: Mẫu thử: dịch chiết Tiền Hồ -α-pyron, với số tính chất sau: Vi quản, Erlen, chén sứ mốt số dụng cụ khác -α-pyron, với số tính chất sau: Máy soi UV Bếp điện 3.1.2 Chuẩn bị mỏng, Bình sắc ký, hệ dung mơi mẫu thử a Bản mỏng: dùng tráng sẵn silicagel, cỡ 2,5 x10 cm, dùng bút chì kẻ đường thẳng cách mép 1cm Đánh dấu điểm, đánh dấu vạch b Bình sắc ký, hệ dung môi: Toluen –EtOAc (20:2) Hệ dung môi: dùng pipet bầu hút xác 20ml Toluen 2ml Ethyl acetat cho vào bình sắc ký chuẩn bị Bình sắc ký: bình phải thật khơ, lót miếng giấy lọc quanh bình phải khoảng trống để quan sát sắc ký Cho hệ dung mơi pha vào bình sắc ký đậy nắp, đặt nơi phẳng, để yên 30 phút cho bão hịa dung mơi c Mẫu thử Chén sứ + 2-α-pyron, với số tính chất sau:3ml dịch chiết => cô => cắn + CHCl3 => dịch chấm sắc ký Tiến hành *Chấm Dùng mao quản lấy dịch chiết chấm sắc ký chuẩn bị chén sứ => chấm lên mỏng lặp lại vài lần => vết chấm khô *Khai triển -α-pyron, với số tính chất sau: Đặt mỏng vào bình sắc ký có dung mơi => dung mơi cịn cách mép 0,5cm lấy mỏng => sấy khơ *Phát vết : +Soi UV 254nm, 365nm +Nhúng thuốc thử Chuẩn bị đĩa: -α-pyron, với số tính chất sau: Đĩa 1: 10ml KOH 5% cồn -α-pyron, với số tính chất sau: Đĩa 2: 10ml diazo Lần lượt nhúng mỏng vào đĩa => sấy khô => nhúng tiếp vào đĩa => sấy khô => mỏng xuất vết màu cam đến đỏ => có coumarin 10 Điểm Vạch UV 254nm 7 UV 365nm 6 TT(KOH ,DIAZO) 5 Nhận xét: Xuất vết có màu cam đến đỏ => Có coumarin Tiền Hồ Rf1=0,7/7,7=0,09 cm Rf2=2,2/7,7=0,28 cm Rf3=3,5/7,7=0,45 cm Rf4=4,5/7,7=0,60 cm Rf5=5,4/7,7=0,70 cm Bản vạch: *Hiện tượng : -α-pyron, với số tính chất sau:Nhiều đốm màu loang lổm -α-pyron, với số tính chất sau:Vết hình lửa -α-pyron, với số tính chất sau:Vết loang 11 *Nguyên nhân: -α-pyron, với số tính chất sau:Bộ phun hạt khơng mịn ,phun thuốc thử khơng đủ -α-pyron, với số tính chất sau:Chấm vết không trùng -α-pyron, với số tính chất sau:Vết khuếch tán bay để lâu nhúng thuốc thử lâu *Cách khắc phục : -α-pyron, với số tính chất sau:Chọn nhiều thuốc thử ,chọn phun hạt mịn -α-pyron, với số tính chất sau:Chấm kỹ lại mổng khác -α-pyron, với số tính chất sau:Vẽ chụp hình sau màu xong ,nhúng nhanh loại bỏ thuốc thử dư Bản điểm *Hiện tượng : -α-pyron, với số tính chất sau:Vết móng ngựa -α-pyron, với số tính chất sau:Vết trải dài không tách *Nguyên nhân -α-pyron, với số tính chất sau:Vết chấm hình trịn q lớn -α-pyron, với số tính chất sau:Chọn hệ dung mơi sắc ký chưa tốt dung môi chiết không chuyên biệt *Cách khắc phục -α-pyron, với số tính chất sau:Chấm nhỏ (với nồng độ đậm đặc ) chấm thành vạch -α-pyron, với số tính chất sau:Thăm dị lại hệ dung mơi sắc ký chọn dung môi chiết xuất chuyên biệt 12