HẠT CẦN TÂY
Tên gọi
Là quả chín đã phơi hay sấy khô của cây cần tây (Apium graveolens L.), họ Cần (Apiaceae).
Thành phần hóa học
Có 90 chất đã được phát hiện có trong hạt cần tây (Apium graveolens L.) Các hợp chất được phân nhóm dựa theo cấu trúc hóa học như sau:
- Các nhóm hợp chất khác: 13 chất
Các flavonoid có trong hạt cần tây gồm 10 chất có khung cấu trúc được trình bày ở hình 2.1 và được tổng kết ở bảng 2.1.
Hình 2.1 Khung cấu trúc của các hợp chất flavonoid có trong hạt cần tây
Bảng 2.1 Các hợp chất flavonoid có trong hạt cần tây
Các flavo noid có trong hạt cần tây chủ yếu có khun g flavo n, là dẫn xuất của apige nin hoặc luteol in Apig enin và dẫn chất có tác dụng chống viêm, chống ngưng tập tiểu cầu, chống ung thư Luteolin có tác dụng sinh học như chống oxy hóa, chống viêm, chống dị ứng, chống ung thư, phòng bệnh thận do đái tháo đường.
Hạt cần tây chứa 2-3% tinh dầu gồm:
Bảng 2.2 Các hợp chất phthalid có trong tinh dầu hạt cần tây
Bảng 2.3 Các hợp chất monoterpenoid có trong tinh dầu hạt cần tây
4 C ác hợ p chất sesquiterpenoid có trong tinh dầu hạt cần tây
Bảng 2.5 Các hợp chất khác có trong tinh dầu hạt cần tây
Nhận xét: Thành phần chính của tinh dầu hạt cần tây là Limonen và β-Senilen,
Sedanolid, Sedanenolid, 3nB Limonen có tác dụng chống oxy hóa, chống viêm, chống ung thư, làm tan sỏi mật, và an thần 3nB có tác dụng hạ huyết áp, chống viêm, bảo vệ gan, chống ung thư và làm giảm độc tính của acynamid Sedanolid có tác dụng giải độc ở gan, chống loét dạ dày, chống oxy hóa.
Các coumarin có trong hạt cần tây gồm 11 hợp chất furanocoumarin, 6 hợp chất furanocoumarin glycosid, ngoài ra còn có 4 hợp chất coumarin đơn giản và 1 hợp chất pyranocoumarin. a) Furanocoumarin
Furanocoumarin có khung cấu trúc được trình bày ở hình 2.2 và được tổng kết ở bảng 2.6 và bảng 2.7.
Hình 2.2 Khung cấu trúc các hợp chất furanocoumarin có trong hạt cần tây Bảng 2.6 Các hợp chất furanocoumarin có trong hạt cần tây
Bảng 2.7 Các hợp chất furanocoumarin glycosid có trong hạt cần tây
D-glucosyloxy-1- methylethyl]-7H- furo[3,2g] [l]- benzopyran-7-on
9-O-β-D- glucosyloxy-2- isopropenyl-7H- furo[3,2g] [1]- benzopyran-7-on
Bảng 2.8 Các hợp chất coumarin đơn giản có trong hạt cần tây
Tên chất Cấu trúc hóa học
Ngoài ra, trong hạt cần tây còn có 1 hợp chất pyranocoumarin là seselin có cấu trúc:
- Celeriosid B (1b, 11-dihydroxy-eudesman-4, 14-oxid-11-O-β-D-glucopyranosid)
- Celeriosid C (eudesman-4(15)-en-1β, 11, 14-triol-11-O-β-D-glucopyranosid)
- Celeriosid D (eudesman-4(15)-en-1β, 2α, 11-triol-11-O-β-D-glucopyranosid)
- Celephthalid A ((30S)-30-hydroxy-3-butyl phthalid β-D-glucopyranosid)
- Celephthalid B ((30S)-30-hydroxy-3-butyl phthalid β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β- D-glucopyranosid)
Ngoài các nhóm hợp chất chính là flavonoid, tinh dầu và coumarin, trong hạt cần tây còn có 13 hợp chất thuộc các nhóm lignan, phospholipid, acid hữu cơ,sterol và triglyerid.
Công dụng
Hạt cần tây được dùng để chữa bệnh gút và các bệnh về khớp, cao huyết áp, kích thích tiêu hóa, chữa viêm bàng quang, giúp khử trùng bàng quang và ống dẫn nước tiểu Ngoài ra, hạt cần tây còn làm giảm các triệu chứng các bệnh phổi như bệnh suyễn, viêm phế quản.
Các chỉ tiêu và phương pháp kiểm nghiệm dược liệu quy định trong dược điển VN V
- Dược liệu Cần tây (Toàn cây) và Cần tây (Quả) đã được tiêu chuẩn hóa trong DĐVN V.
- Chỉ tiêu và phương pháp kiểm nghiệm dược liệu quy định trong dược điển
Quả nhỏ, màu nâu, hình cầu, dài khoảng 1 mm đến 1,5 mm, rộng khoảng 0,5 mm đến 1mm, có 6 cánh, mép ngoài mỗi cánh màu vàng nhạt Thường bị tách làm 2 nửa, hình bầu dục hoặc hình thận Mùi thơm đặc trưng, vị đắng, hơi cay.
Bột màu nâu, mùi thơm, vị đắng, hơi cay Soi dưới kính hiển vi thấy: Mảnh biểu bì gồm những tế bào ngoằn ngoèo thành mỏng Mảnh mô mềm gồm những tế bào tròn, thành mỏng Mảnh nội nhũ gồm các tế bào hình chữ nhật, thành dày bên trong chứa nội nhũ Mảnh vỏ quả gồm các tế bào dài thành mỏng Sợi dài đứng
19 riêng lẻ Các mảnh mạch thường là mạch điểm Hạt tinh bột tròn, rốn hạt hình sao rõ có đường kính 12 pm đến 15 pm, nằm rải rác.
A* Cân khoảng 10g bột dược liệu cho vào bình nón, thêm 30ml ethanol 90 % (TT), đun sôi trong cách thủy 10 min, lọc nóng Dùng dịch lọc làm các phản ứng sau:
Lấy 1 ml dịch lọc, thêm một ít bột magnesi (TT) Nhỏ từ từ 3 – 5 giọt acid hydrocloric (TT) Để yên vài phút, dung dịch phải chuyển từ màu vàng sang màu đỏ.
Nhỏ 2 – 3 giọt dịch lọc lên một tờ giấy lọc Hơ khô rồi để lên miệng lọ amoniac (TT) vừa mở nắp đậy, màu vàng của vết dịch chiết phải đậm lên.
Cho vào hai ống nghiệm, mỗi ống 1ml dịch lọc Ống 1: Thêm 0,5 ml dung dịch natri hydroxyd 10 % (TT), Ống 2: giữ nguyên Đun cả hai ống đến sôi, để nguội, thấy ống 1 xuất hiện tủa vàng, ống 2 trong.
Thêm vào mỗi ống 2ml nước cất Lắc đều, ống 1 phải trong suốt, ống 2 phải có tủa đục Acid hóa ống 1 bằng vài giọt acid hydrocloric (TT), ống 1 trở lại tủa đục như ống 2.
B Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4).
Dung môi khai triển: Toluen – ethyl acetat – acid fomic – methanol (4 : 4 : 0,5 : 1).
Dung dịch thử: Lấy 5 g bột thô dược liệu cho vào bình Soxhlet, thêm 100 ml ether dầu hỏa (40 °c đến 60 °c.) (TT), chiết trong 2 h, lấy bã dược liệu để bay hết hơi ether, chiết tiếp như trên bằng 100 ml methanol (TT) trong 6 h Lấy 20ml dịch chiết methanol, cất thu hồi dung môi đến còn khoảng 2ml, dùng làm dung dịch chấm sắc ký.
Dung dịch chất đối chiếu: Hòa tan apigenin chuẩn trong methanol (TT) để thu được dung dịch có nồng độ 0,1 mg/ml.
Dung dịch dược liệu đối chiếu: Nếu không có apigenin chuẩn thì dùng 5 g bột quả cần tây (mẫu chuẩn), tiến hành chiết như mô tả ở phần Dung dịch thử.
Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản mỏng 10 pl mỗi dung dịch trên Triển khai sắc ký đến khi dung môi đi được 12cm đến 15cm, lấy bản mỏng ra để khô ở nhiệt độ phòng Quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 254 nm sau đó phun dung dịch 2- aminoethyldiphenylborinat 1 % trong methanol Sấy bản mỏng ở 105 °c khoảng 2 min, phun tiếp dung dịch polyethylen glycol 400 (dung dịch PEG 400) 5
% trong methanol, sấy bản mỏng ở 105 °c trong 5 min Quan sát bản mỏng dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 366nm.
Trên sắc ký đồ của dung dịch thử phải có vết có cùng giá trị Rf (khoảng 0,53) và màu sắc tương đương với vết của apigenin chuẩn trên sắc ký đồ của dung dịch chất đối chiếu hoặc trên sắc ký đồ của dung dịch thử phải có các vết cùng màu sắc và giá trị Rf với các vết trên sắc ký đồ của dung dịch dược liệu đối chiếu.
Không được quá 12,0 % (Phụ lục 12.13).
Dụng cụ xác định hàm lượng nước (Hình 12.13) gồm Có bình cầu (A) nối qua ống
(D) với ống hình trụ (B), ống này gắn với ống hứng chia độ (E) ở phía dưới và lắp với ống sinh hàn ngược (C) ở phía trên, ống hứng (E) được chia độ đến 0,1 ml để cho sai số của phép đọc thể tích không vượt quá 0,05ml Nguồn nhiệt thích hợp là bếp điện có biến trở hoặc đun cách dầu.
Rửa sạch ống hứng và ống sinh hàn với nước rồi làm khô.Thêm 200 ml toluen(TT) và khoảng 2 ml nước vào bình cầu khô Cất khoảng 2 h, để nguội trong
30 min rồi đọc thể tích nước cất được ở ống hứng (V), chính xác đến 0,05 ml.
Thêm vào bình cầu một lượng mẫu thử đã cân chính xác tới 0,01 g có chứa khoảng 2ml đến 3 ml nước Thêm vài mảnh đá bọt Đun nóng nhẹ trong 15 min; khi toluen bắt đầu sôi thì điều chỉnh nguồn cấp nhiệt để cất với tốc độ khoảng 2 giọt dịch cất trong 1s Khi đã cất được phần lớn nước sang ống hứng thì nâng tốc độ cất lên 4 giọt dịch cất trong 1s Tiếp lục cất cho đến khi mực nước cất được trong ổng hứng không tăng lên nữa, dùng 5ml đến 10 ml toluen (TT) rửa thành trong ống sinh hàn rồi cất thêm 5 min nữa Sau đó, tách bộ cất khỏi nguồn cấp nhiệt, để cho ống hứng nguội đến nhiệt độ phòng Nếu có những giọt nước còn đọng trên thành ống sinh hàn thì dùng 5ml toluen (TT) để rửa kéo xuống Khi lớp nước và lớp toluen đã
22 được phân tách hoàn toàn, đọc thể tích nước trong ống hứng (V2) Tính tỷ lệ phần trăm nước trong mẫu thử theo công thức sau:
V1 là số ml nước cất được sau lần cất đẩu; V2 là số ml nước cất được sau hai lần cất; m là số g mẫu đã cân đem thử
Không được quá 15,0 % (Phụ lục 9.8),
Với mẫu thử là dược liệu, thuốc từ dược liệu: Cho 2g đến 3g bột mẫu thử vào một chén sứ hoặc chén platin đã nung và cân bì Nung ở nhiệt độ không quá 450 °c tới khi không còn carbon, làm nguội rồi cân Bằng cách này mà tro chưa loại được hết carbon thì dùng một ít nước nóng cho vào khối chất đã than hóa, dùng đũa thủy tinh khuấy đều, lọc qua giấy lọc không tro Rửa đũa thủy tinh và giấy lọc, tập trung nước rửa vào dịch lọc Cho giấy lọc và cắn vào chén nung rồi nung đến khi thu được tro màu trắng hoặc gần như trắng Tập trung dịch lọc vào cắn trong chén nung, đem bốc hơi đến khô rồi nung ở nhiệt độ không quá 450 °c đến khi khối lượng không đôi Tính tỷ lệ phần trăm của tro toàn phần theo dược liệu đã làm khô trong không khí.
Không được quá 5 % (Phụ lục 12.11).
-Tạp chất lẫn trong dược liệu bao gồm tất cả các chất ngoài quy định của dược liệu đó như: Đất, đá, rơm rạ, cây cỏ khác, các bộ phận khác của cây không quy định làm dược liệu, xác côn trùng
Cân một lượng mẫu vừa đủ theo chỉ dẫn trong chuyên luận riêng hoặc trong ghi chú dưới đây, dàn mỏng trên tờ giấy, quan sát bằng mắt thường hoặc kính lúp, khi cần có thể dùng rây để phân tách tạp chất và dược liệu.
Cân phần tạp chất và tính phần trăm như sau: x% = (a/p)*100
Trong đỏ: a là khối lượng tạp chất tính bằng gam; p là khối lượng mẫu thử tính bằng gam.
CAO ĐẶC CẦN TÂY
Tiêu chuẩn kiểm nghiệm (theo dự thảo tiêu chuẩn)
Cao đặc cần tây có thể chất mềm, đồng nhất, màu nâu sẫm, mùi thơm đặc trưng, vị đắng, hơi cay. Định tính
Cân chính xác khoảng 0,1 g cao chiết từ hạt cần tây cho vào cốc có mỏ, thêm 20ml ethanol 96% (TT) Chiết siêu âm 10 phút, lọc qua giấy lọc Phần dịch lọc được dùng để làm các phản ứng sau:
A Lấy 2 ml dịch lọc cho vào ống nghiệm, thêm 0,1g bột magnesi (TT) và 2 ml acid hydrocloric (TT), lắc đều, để yên một vài phút, dung dịch sẽ chuyển dần từ vàng sang đỏ.
B Nhỏ hai đến ba giọt dịch lọc lên tờ giấy lọc, sấy cho bay hết dung môi Hơ tờ giấy lọc trên miệng bình amoniac đậm đặc (TT) thấy màu vàng của vết dịch chiết tăng lên.
C Lấy 1 ml dịch lọc cho vào ống nghiệm, thêm vài giọt natri hydroxyd 10%
(AT) thấy xuất hiện tủa vàng, thêm 1 ml nước cất thấy tủa tan và màu vàng của dung dịch trong ống nghiệm tăng lên.
D.Lấy 1 ml dịch lọc cho vào ống nghiệm, 5% (TT) thấy xuất hiện tủa màu xanh đen.
E Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4)
Dung môi khai triển: Toluen - Ethyl acetat - Acid formic (5 : 4 : 1)
Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 0,1 g cao chiết từ hạt cần tây cho vào cốc có mỏ, thêm 20 ml methanol (TT), chiết siêu âm trong 10 phút, khuấy đều, lọc qua giấy lọc Phần dịch lọc đem cô cách thủy ở 60 o C đến khi thu được khoảng
1 ml dịch chiết đặc dùng làm dịch chấm sắc ký.
Dung dịch chuẩn: Hòa tan 1 mg apigenin chuẩn trong 10 ml methanol (TT), khuấy đều thu được dung dịch có nồng độ 0,1 mg/ml.
Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên cùng bản mỏng khoảng 10 μl dung dịch thử và 10 μl dung dịch chuẩn Sau khi khai triển xong, lấy bản mỏng ra để khô ở nhiệt độ phòng, phun thuốc thử NP, quan sát các vết dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 365nm Trên sắc ký đồ của dung dịch thử phải có vết (giá trị R f khoảng 0,58) tương đương với vết apigenin chuẩn trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu.
Mất khối lượng do làm khô
Không quá 20,0 % Dùng 0,5 g chế phẩm sấy ở 105 o C đến khối lượng không đổi (Phụ lục 9.6). pH
Dung dịch cao chiết từ hạt cần tây 1% trong nước (kl/tt) phải có pH từ 5,0 đến 7,0 (Phụ lục 6.2). Độ đồng nhất Đồng nhất, không được có váng mốc, bã dược liệu hoặc vật lạ (Phụ lục 1.1). Định lượng
Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 1,5 mg apigenin chuẩn đã sấy khô đến khối lượng không đổi, cho vào bình định mức 100 ml, thêm 60 ml methanol (TT), siêu âm cho đến khi apigenin tan hết Bổ sung methanol (TT) đến vạch, lắc kỹ (mỗi ml chứa 15àg apigenin khan).
Xây dựng đường chuẩn: Lấy chính xác 1, 2, 3, 4, 5 ml dung dịch chuẩn cho vào lần lượt 5 bình định mức 10 ml riêng biệt, thêm vào mỗi bình 5 ml triethylamin 1% trong methanol (TT) Bổ sung methanol (TT) tới vạch, trộn kỹ Đo độ hấp thụ (Phụ lục 4.1) ở bước sóng 380,5 nm Vẽ đường chuẩn, lấy độ hấp thụ là trục tung, nồng độ là trục hoành.
Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 0,1500 g cao đặc cần tây vào cốc có mỏ, thêm 20 ml methanol (TT), chiết siêu âm trong 10 phút Dịch chiết siêu âm được đem ly tâm 10 phút, tốc độ quay 3000 vòng/phút thu được phần dịch
27 trong suốt và phần cắn Phần cắn được chiết siêu âm rồi ly tâm tiếp với các thông số như trên 3 lần nữa Gộp tất cả phần dịch sau ly tâm vào bình định mức 100 ml, bổ sung methanol (TT) tới vạch, lắc đều thu được dung dịch thử. Lấy chính xác 0,5 ml dung dịch thử vào bình định mức 10 ml, thêm 5 ml triethylamin 1% trong methanol, bổ sung methanol (TT) tới vạch Đo độ hấp thụ ở bước sóng 380,5 nm (Phụ lục 4.1) Tính khối lượng flavonoid toàn phần (àg) trong dung dịch thử từ nồng độ đọc được trờn đường chuẩn và hàm lượng phần trăm flavonoid toàn phần trong cao chiết từ hạt cần tây theo apigenin.
Cao chiết từ hạt cần tây phải chứa ít nhất 6,5% flavonoid toàn phần tính theo apigenin.
THỰC HÀNH
1 Kiểm nghiệm bằng phương pháp cảm quan (mô tả)
- Mô tả dược liệu: Quan sát mẫu ở ánh sáng thường Mô tả hình dạng, kích thước, màu sắc, mùi, vị và thể chất của dược liệu.
- Yêu cầu: Quả nhỏ, màu nâu, hình cầu, dài khoảng 1 mm đến 1,5 mm, rộng khoảng 0,5 mm đến 1 mm, có 6 cánh, mép ngoài mỗi cánh màu vàng nhạt Thường bị tách làm 2 nửa, hình bầu dục hoặc hình thận Mùi thơm đặc trưng, vị đắng, hơi cay.
- Tiến hành: Sấy khô dược liệu hạt trong tủ sấy ở nhiệt độ 60 o C sau đó dùng thuyền tán và chày cối sứ hoặc máy xay nghiền nhỏ Rây lấy bột mịn, dùng kim mũi mác lấy bột dược liệu cho lên phiến kính đã nhỏ sẵn một giọt nước cất, đặt lamen lên và quan sát dưới kính hiển vi để xác định đặc điểm của bột dược liệu.
+ Mảnh biểu bì gồm những tế bào hình chữ nhật, có thành dày.
+ Mảnh mô mềm gồm những tế bào hình tròn, thành mỏng.
+ Mảnh nội nhũ gồm các tế bào dài, thành mỏng.
+ Sợi dài đứng riêng lẻ.
+ Hạt1 tinh bột hỡnh trũn, rốn hạt hỡnh sao3 rừ, cú đường kớnh 12-15 àm, nằm rải rác.
4 Ảnh chụp các đặc điểm bột hạt 6 cần tây dưới kính hiển vi
Phương pháp: chiết nóng bằng ethanol tuyệt đối (Phụ lục 12.10)
Yêu cầu: Không nhỏ hơn 7 %
Cân chính xác khoảng 2,000g đến 4,000 g bột dược liệu có cỡ bột nửa thô cho vào bình nón 100ml hoặc 250 ml.
Thêm chính xác 50,0 ml hoặc 100,0 ml nước, đậy kín, cân xác định khối lượng, để yên 1h, sau đó đun sôi nhẹ dưới hồi lưu 1h, đề nguội, lẩy bình nón ra, đậy kín, cân để xác định lại khối lượng, dùng nước để bổ sung phần khối lượng bị giảm, lọc qua phễu lọc khô vào một bình hứng khô thích hợp.
Lấy chính xác 25 ml dịch lọc vào cốc thủy tinh đã cân bì trước, cô trong cách thủy đến cắn khô, cắn thu được sấy ở
105 °c trong 3 h, lấy ra để nguội trong bình hút ẩm 30 min, cân nhanh để xác định khối lượng cân
Tính phần trăm lượng chất chiết được bằng nước theo dược liệu khô.
Không quá 5 % (Phụ lục 12.11, rây qua rây số 300)
12.11 XÁC ĐỊNH TẠP CHẤT LẪN TRONG DƯỢC LIỆU
Tạp chất lẫn trong dược liệu bao gồm tất cả các chất ngoài quy định của dược liệu đó như: Đất, đá, rơm rạ, cây cỏ khác, các bộ phận khác của cây không quy định làm dược liệu, xác côn trùng
Cân một lượng mẫu vừa đủ theo chỉ dẫn trong chuyên luận riêng hoặc trong ghi chú dưới đây, dàn mỏng trên tờ giấy, quan sát bằng mắt thường hoặc kính lúp, khi cần có thể dùng rây để phân tách tạp chất và dược liệu.
Cân phần tạp chất và tính phần trăm như sau: x% = a:p* 100
Trong đó: a là khối lượng tạp chất tính bằng gam; p là khối lượng mẫu thử tính bằng gam.
1 Trong một số trường hợp nếu tạp chất rất giống với thuốc, có thể phái làm các phản ứng định tính hoá học, phương pháp vật lý hoặc dùng kính hiển vi để phát hiện tạp chất Tỷ ]ệ tạp chất được tính bao gồm cả tạp chất được phát hiện bằng phương pháp này.
2 Lượng mẫu lấy để thử nếu chuyên luận riêng không quy định thì lấy nhu sau: Hạt và quả rất nhỏ (như hạt Mã đề): 10 g.
Dược liệu thái thành lát: 50 g
Cân khoảng 20g (p) hạt cần tây
Dàn mỏng trên tờ giấy, quan sát bằng mắt thường và nhặt tạp, rây qua rây 350 để phân tách tạp chất và dược liệu.
Cân phần tạp chất: tạp nhặt được và lượng đi qua rây(a gam)
Không quá 6 % (Phụ lục 12.12, rây qua rây số 500).
12.12 XÁC ĐỊNH TỶ LỆ VỤN NÁT CỦA DƯỢC LIỆU
Cân một lượng dược liệu nhất định (p gam) đã được loại tạp chất Rây bằng rây có sổ rây quy định theo chuyên luận riêng hoặc chọn bằng tay nhũng phần vụn đối với các bộ phận cây không thái nhỏ Cân toàn bộ phần đã lọt qua rây và phân vụn đã chọn (a gam) Tính tỷ lệ vụn nát (X %) (từ kết quả trung bình của ba lần thực hiện) theo công thức: X% = a:p* 100
Lượng dược liệu lấy để thử (tùy theo bản chất của dược liệu) từ 100g đến 200g. Đối với dược liệu mỏng manh thì chỉ lắc nhẹ, tránh làm vụn nát thêm.
Phần bụi và bột vụn không phân biệt được bằng mắt thường được tính vào mục tạp chất.
Cân một lượng hạt cần tây nhặt bỏ tạp chất, rây qua rây 350 Cân khoảng 100g hạt đã rây bên trên rây qua rây 500.
Cân toàn bộ phần đã lọt qua rây(a gam)
Lấy một chén sứ hoặc chén platin nung tới đỏ trong
30 min Để nguội trong bình hút ẩm rồi cân.
Cân chính xác khoảng 1g mẫu thử rải đều vào chén nung.
Sấy 1h ở 100 °C đến 105 °C rồi đem nung trong lò nung ở 600 °C ± 25 °C Sau mỗi lần nung, lấy chén nung cùng cắn tro đem làm nguội trong bình hút ẩm rồi cân Trong quá trình thao tác không được để tạo thành ngọn lửa Nếu sau khi đã nung lâu mà vẫn chưa loại hết carbon của tro thì dùng nước nóng để lấy cắn ra, lọc qua giấy lọc không tro rồi lại nung cắn và giấy lọc trong chén nung.
Tập trung dịch lọc vào tro ở trong chén, làm bốc hơi cẩn thận tới khô rồi nung đến khối lượng không đổi.
Hàm lượng tro tính bằng % theo công thức:
❖ Tiêu chuẩn cơ sở: Phương pháp xác định mất khối lượng do làm khô
● Cách tiến hành: tiến hành làm khô trong tủ sấy ở nhiệt độ 105 o C, áp suất thường.
Xử lý nguyên liệu: Nghiền nhỏ hạt cần tây thành bột Cần thực hiện nhanh, nghiền xong đem đựng trong hộp kín.
Dùng dụng cụ dùng để sấy bằng thủy tinh, rộng miệng, đáy bằng, có nắp mài làm bì đựng mẫu thử; sấy bì trong thời gian 30 min ở 105 o C rồi cân để xác định khối lượng bì.
Cân ngay vào bì một lượng chính xác khoảng 1g mẫu thử
(với sai số % khối lượng mất khi làm khô:
Định tính
Cân chính xác khoảng 0,1 g cao chiết từ hạt cần tây cho vào cốc có mỏ, thêm 20ml ethanol
96% (TT) Chiết siêu âm 10 phút, lọc qua giấy lọc Phần dịch lọc được dùng để làm các phản ứng sau:
44 được khoảng 1 ml dịch chiết đặc dùng làm dịch chấm sắc ký.
Dung dịch chuẩn: Hòa tan 1 mg apigenin chuẩn trong 10 ml methanol (TT), khuấy đều thu được dung dịch có nồng độ 0,1 mg/ml.
Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên cùng bản mỏng khoảng 10 μl dung dịch thử và 10 μl dung dịch chuẩn.
Sau khi khai triển xong, lấy bản mỏng ra để khô ở nhiệt độ phòng, quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng
254 nm, sau đó phun thuốc thử NP, quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng
366 nm Trên sắc ký đồ của dung dịch thử phải có vết (giá trị R f khoảng 0,58) tương đương với vết apigenin chuẩn trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu.
=> Trên sắc ký đồ của dung dịch thử có vết tương đương với vết apigenin chuẩn trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu với R f = 0,66
Định lượng
Phương pháp xây dựng đường chuẩn
1,5mg apigenin chuẩn đã sấy khô
↓ Siêu âm đến khi apigenin tan hết
↓ Thêm methanol đến vạch, lắc kỹ
Dd chuẩn nồng độ 15 àg/ml
❖ Xây dựng đường cong chuẩn:
Lấy chính xác 1, 2, 3, 4, 5 ml dung dịch chuẩn cho vào lần lượt 5 bình định mức 10 ml riêng biệt
Thêm vào mỗi bình 5 ml triethylamin 1% trong methanol
Bổ sung methanol đến vạch, trộn kỹ
↓ Đo độ hấp thụ ở bước sóng 380,5 nm
Vẽ đường cong chuẩn: trục tung là độ hấp thụ, trục hoành là nồng độ
C chuẩn = 15àg/ml Nồng Độ hấp độ thụ
pH
- Vận hành và hiệu chỉnh máy đo pH tùy theo hướng dẫn của nhà sản xuất
- Chuẩn bị mẫu và đo:
Cân chính xác khoảng 0,2g hòa tan vừa đủ trong
20ml nước cất để tạo dung dịch cao chiết từ hạt cần tây 1% trong nước
* Yêu cầu : Dung dịch cao chiết từ hạt cần tây 1% trong nước (kl/tt) phải có pH từ 5,0 đến 7,0
Độ đồng nhất
Lấy một ít cao cần tây lên bề mặt phiến kính, dàn mỏng đều và quan sát dưới kính hiển vi
* Yêu cầu: Đồng nhất, không được có váng mốc, bã dược liệu hoặc vật lạ.
Quan sát thấy mẫu cao chưa đồng nhất
