Cao đặc cần tây có thể chất mềm, đồng nhất, màu nâu sẫm, mùi thơm đặc trưng, vị đắng, hơi cay.
Định tính
Cân chính xác khoảng 0,1 g cao chiết từ hạt cần tây cho vào cốc có mỏ, thêm 20ml ethanol 96% (TT). Chiết siêu âm 10 phút, lọc qua giấy lọc. Phần dịch lọc được dùng để làm các phản ứng sau:
A. Lấy 2 ml dịch lọc cho vào ống nghiệm, thêm 0,1g bột magnesi (TT) và 2 ml
acid hydrocloric (TT), lắc đều, để yên một vài phút, dung dịch sẽ chuyển dần
từ vàng sang đỏ.
B. Nhỏ hai đến ba giọt dịch lọc lên tờ giấy lọc, sấy cho bay hết dung mơi. Hơ tờ giấy lọc trên miệng bình amoniac đậm đặc (TT) thấy màu vàng của vết dịch chiết tăng lên.
C. Lấy 1 ml dịch lọc cho vào ống nghiệm, thêm vài giọt natri hydroxyd 10% (AT) thấy xuất hiện tủa vàng, thêm 1 ml nước cất thấy tủa tan và màu vàng của dung dịch trong ống nghiệm tăng lên.
D.Lấy 1 ml dịch lọc cho vào ống nghiệm, .5% (TT) thấy xuất hiện tủa màu xanh đen.
E. Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4)
Bản mỏng: Silicagel F254
Dung môi khai triển: Toluen - Ethyl acetat - Acid formic (5 : 4 : 1)
Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 0,1 g cao chiết từ hạt cần tây cho vào cốc
có mỏ, thêm 20 ml methanol (TT), chiết siêu âm trong 10 phút, khuấy đều, lọc qua giấy lọc. Phần dịch lọc đem cô cách thủy ở 60oC đến khi thu được khoảng 1 ml dịch chiết đặc dùng làm dịch chấm sắc ký.
Dung dịch chuẩn: Hòa tan 1 mg apigenin chuẩn trong 10 ml methanol (TT),
khuấy đều thu được dung dịch có nồng độ 0,1 mg/ml.
Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên cùng bản mỏng khoảng 10 μl dung dịch thử
và 10 μl dung dịch chuẩn. Sau khi khai triển xong, lấy bản mỏng ra để khơ ở nhiệt độ phịng, phun thuốc thử NP, quan sát các vết dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 365nm. Trên sắc ký đồ của dung dịch thử phải có vết (giá trị Rf
khoảng 0,58) tương đương với vết apigenin chuẩn trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu.
Mất khối lượng do làm khô
Không quá 20,0 %. Dùng 0,5 g chế phẩm sấy ở 105oC đến khối lượng không đổi (Phụ lục 9.6).
pH
Dung dịch cao chiết từ hạt cần tây 1% trong nước (kl/tt) phải có pH từ 5,0 đến 7,0 (Phụ lục 6.2).
Độ đồng nhất
Đồng nhất, khơng được có váng mốc, bã dược liệu hoặc vật lạ (Phụ lục 1.1).
Định lượng
Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 1,5 mg apigenin chuẩn đã sấy khô đến
khối lượng khơng đổi, cho vào bình định mức 100 ml, thêm 60 ml methanol (TT), siêu âm cho đến khi apigenin tan hết. Bổ sung methanol (TT) đến vạch,
lắc kỹ (mỗi ml chứa 15µg apigenin khan).
Xây dựng đường chuẩn: Lấy chính xác 1, 2, 3, 4, 5 ml dung dịch chuẩn cho vào
lần lượt 5 bình định mức 10 ml riêng biệt, thêm vào mỗi bình 5 ml triethylamin 1% trong methanol (TT). Bổ sung methanol (TT) tới vạch, trộn kỹ. Đo độ hấp thụ (Phụ lục 4.1) ở bước sóng 380,5 nm. Vẽ đường chuẩn, lấy độ hấp thụ là trục tung, nồng độ là trục hồnh.
Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 0,1500 g cao đặc cần tây vào cốc có mỏ,
thêm 20 ml methanol (TT), chiết siêu âm trong 10 phút. Dịch chiết siêu âm được đem ly tâm 10 phút, tốc độ quay 3000 vòng/phút thu được phần dịch
trong suốt và phần cắn. Phần cắn được chiết siêu âm rồi ly tâm tiếp với các thông số như trên 3 lần nữa. Gộp tất cả phần dịch sau ly tâm vào bình định mức 100 ml, bổ sung methanol (TT) tới vạch, lắc đều thu được dung dịch thử. Lấy chính xác 0,5 ml dung dịch thử vào bình định mức 10 ml, thêm 5 ml triethylamin 1% trong methanol, bổ sung methanol (TT) tới vạch. Đo độ hấp thụ ở bước sóng 380,5 nm (Phụ lục 4.1). Tính khối lượng flavonoid tồn phần (µg) trong dung dịch thử từ nồng độ đọc được trên đường chuẩn và hàm lượng phần trăm flavonoid toàn phần trong cao chiết từ hạt cần tây theo apigenin.
Cao chiết từ hạt cần tây phải chứa ít nhất 6,5% flavonoid tồn phần tính theo apigenin.