sơ đồ về quy trình cấy máu tìm tụ cầu vàng (Staphylococcus aureus) và phế cầu khuẩn (Streptococcus pneumoniae) cũng như kiến thức liên quan đến các phản ứng phân biệt 2 loại và các loài khác. tìm hiểu các kiến thức khái quát về tụ cầu vàng và phế cầu khuẩn
PHÂN TÍCH BỆNH PHẨM QUY TRÌNH TỔNG QT NHUỘM GRAM CẤY MÁU NHẬN MẪU ĐỊNH DANH NHẬN MẪU - Đầu sốt trước sử dụng kháng sinh - Lấy nhiều lần thời gian khác (có vi khuẩn xuát thời kì) - Pha lỗng máu theo tỉ lệ thể tích máu : 10 thể tích canh cấy - Chuẩn bị dụng cụ môi trường cấy máu - Mang găng tay - Sát khuẩn cồn iode 3,5 %, đợi khô lau lại lần cồn 700 - Buộc garo, xác định chỗ tiêm, sát khuẩn lần - Tiến hành rút máu – ml trẻ, – 10 ml hay nhiều người lớn - Tháo garo, rút kim, băng lại chỗ tiêm CẤY MÁU SƠ ĐỒ CẤY MÁU Ủ ấm 35 – 370C/ 24h Quan sát hàng ngày Bình cấy máu Máu Có VSV phát triển Khơng có VSV phát triển sau ủ ấm – ngày Nhuộm soi Cấy chuyển BA, Chrom (Ủ ấm 35 – 370C/ 24h ) Có VSV phát triển Cấy kiểm tra thạch máu Khơng có VSV phát triển Nhuộm soi Định danh Cấy chuyển CA (Ủ ấm 35 – 370C/ 24h ) SAB Kháng sinh đồ Có VSV phát triển Định danh, kháng sinh đồ Khơng có VSV phát triển Trả kết âm tính MƠI TRƯỜNG CẤY MÁU Vi khuẩn hiếu khí (tụ cầu): BHI, TSB, Columbia, Broth Vi khuẩn kị khí (streptococci): Thioglycolate, L - cystein MỘT SỐ VI KHUẨN GÂY NHIỄM KHUẨN HUYẾT THƯỜNG GẶP Vi khuẩn Gram âm: Vi khuẩn Gram dương: • Escherichia coli • Staphylococcus aureus • Klebsiella pneumoniae • Streptococcus viridans • Acinetobacter baumannii • Enterococcus spp • Burkholderia cepacia • Staphylococcus, coagulase negative • Pseudomonas aeruginosa • Streptococcus suis • Burkholderia pseudomallei • Streptococcus, Graup D (non-Enterococci) • Salmonella • Streptococcus pneumoniae SƠ ĐỒ ĐỊNH DANH TỤ CẦU VÀNG Nuôi cấy (quan sát) Ủ Nhuộm Gram Gr (+) Catalase (+) Tụ cầu MSA/Coagulase (+) Tụ cầu vàng Staphylococcus aureus Nuôi cấy TỤ CẦU VÀNG Môi trường nuôi cấy: BA, thạch thường, canh thang Hiếu khí kị khí tùy nghi, ủ 18–24h 37oC Khuẩn lạc hình tròn, biên đều, tâm lồi, màu trắng đục vàng chanh hay vàng kim Lật ngược đĩa soi đèn thấy vòng tan máu Nhuộm Gram Là cầu khuẩn Gram dương, đứng riêng lẻ, thành đôi hay chuỗi ngắn, chủ yếu hình chùm nho, khơng di động, khơng bào tử TỤ CẦU VÀNG MSA Mục đích: xác định khả tang trưởng lên men đường Mannitol MSA (chứa 7,5% NaCl) (+) đỏ vàng Staphylococcus aureus Coagulase Mục đích: định danh Tụ cầu vàng Nguyên tắc: S.aureus có chứa enzyme coagulase làm đơng huyết tương Có loại Coagula: Coagula kết dính xác định kỹ thuật lam kính Coagula tụ xác định kỹ thuật ống nghiệm Kết quả: Coagula lam kính: (+) có kết cụm bên giọt huyết tương không kết bên giọt nước muối Coagula ống nghiệm (+) có sợ fibrin, huyết tương bị đông đặc Kháng sinh đồ Kháng sinh TỤ CẦU VÀNG Giới hạn đường kính vùng ức chế (mm) Giới hạn nồng độ ức chế tối thiểu (g/ml) S I R S I R Penicillin 29 - 28 0.12 - 0.25 oxacillin - - - 2 - 4 Vancomycin - - - 2 4-8 16 Clindamicin 21 15-20 14 0,5 4 Kháng sinh đồ Cơ chế kháng biểu kháng: sinh men - lactamase TỤ CẦU VÀNG XN dựa Nitrocefin Nitrocefin chuyển từ vàng sang đỏ/hồng - lactamase (+) Test nhanh xác định - lactamase Kháng Penicillin, amino-, carboxy- ureidopenicillin Cephalosporin hệ SƠ ĐỒ ĐỊNH DANH PHẾ CẦU KHUẨN Nuôi cấy (quan sát) Ủ Nhuộm Gram Gr (+) Catalase (-) => Liên cầu, Pneumoniae Octochin ≥ 14 mm S.pneumoniae ≥ 14 mm Streptococci Ni cấy STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE Vi khuẩn hiếu khí, kị khí tùy nghi, mọc tốt 37o, 5–10% CO2 Khuẩn lạc phế cầu môi trường BA, màu xanh ve xung quanh khuẩn lạc, dạng S, kích thước 0,5 – 1mm, gây tan máu α, lõm tự ly giải Nhuộm Gram STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE Là cầu khuẩn Gram dương nhỏ, thon dài, hình mũi giáo hay hình nến, đứng thành đơi riêng lẻ chuỗi ngắn, không di động, không bào tử Taxo P STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE Tiêu huyết TAXO P TAXO A CAMP BE NaCl 6,5% SF + - - - - - - - S.Pneumoniae α S.Viridans α S.Pyogenes β + - - - - S.Agalactiae β - + - - - enterococci α, β, γ - - + + Taxo P STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE Kỹ thuật: Công dụng: xác định phế cầu khuẩn Cấy trải lên mặt BA gốc vi khuẩn nghi ngờ Nguyên tắc: phế cầu khuẩn nhạy với Optochin nên Đặt đĩa Optochin lên mặt thạch tạo vùng khơng có vi khuẩn mọc quanh đĩa giấy tẩm Ủ 18 – 24h 37o khí trường 5% CO2 thuốc (+) ≥ 15 mm (-) < 10mm 10 – 15 mm cần làm them thử nghiệm tan mật Tan mật STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE Từ chủng vi khuẩn nuôi cấy (16-24 giờ), tạo 0,5 ml canh khuẩn nước muối sinh lý tương đương độ đục > 0,5 Mc Farland Chia đôi canh khuẩn vào ống nghiệm (0,25ml/1 ống) Cho tiếp vào ống canh khuẩn 0,25ml NaCl 0,9%, Ống cho 0,25ml muối mật - 10% (deoxycholate) Lắc nhẹ, ủ 35-370C/ Theo dõi ly giải tế bào vi khuẩn ống có muối mật sau – ủ (Muối mật làm tang khả ly giải vi khuẩn) => ống có muối mật trở nên trong, hết đục dương tính Ống 1: muối mật 10% + VK Streptococcus Ống 2: muối mật 10% + VK Phế cầu Kháng sinh đồ Kháng sinh STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE Giới hạn đường kính vùng ức chế (mm) Giới hạn nồng độ ức chế tối thiểu (g/ml) S I R S I R Penicillin 20 - - - - - Erythromycin 21 16-20 15 0,25 0,5 1 Trimethoprim 19 16-18 15 0,5/9,5 1/19 – 2/38 4/76 ĐỊNH DANH SƠ ĐỒ ĐỊNH DANH Mẫu VK (quan sát) Nhuộm Gram Cầu khuẩn Gr (+) Catalase (-) => Liên cầu, Pneumoniae (+) => Tụ cầu Octochin MSA/Coagulase (+) Tụ cầu vàng S.aureus (-) Novobiocin ≥ 16mm S.epidermidis < 16mm S.saprophyticus ≥ 15 mm S.pneumoniae < 15 mm Streptococci Bile Esculin, Taxo A, P, NaCl 6,5%, CAMP test, THÀNH VIÊN NHÓM Phùng Thị Thùy Ngân - 201406 Trần Ngọc Quỳnh Anh - 200168 Kim Thị Hồng Hà - 201186 Lê Trương Ngọc Hân - 2010155 Trịnh Thúy Anh - 200488 Chung Đình Khơi - 200223 Nguyễn Thị Ngọc Hân - 200725